专利名称：应用多糖接枝耦联技术提高猪血浆蛋白肽抗氧化活性的方法蛋白类原料可以通过多糖接枝耦联技术进行改性，提高其功能性，例如溶解性、热稳定性、乳化性、起泡性等等。同时，美拉德反应产物(Maillard reaction products,MRPs)是食品加工和贮藏过程中自身产生的一类物质，而且MRPs中含有类黑精、还原酮及一系列含氮、硫的挥发性杂环化合物。许多研究表明，这些物质都具有很强的抗氧化能力。因此，可以将其应用于食品添加剂、保健品、药物载体等领域。但使用猪血浆蛋白肽进行多糖接枝耦联的研究比较少。猪血浆蛋白本身就具有一定的抗氧化作用，而经过水解以后的猪血浆蛋白肽抗氧化效果得到了一些提升，据有关研究报道，猪血浆蛋白肽可以在脂质氧化体系中体现出良好的抗氧化效果；同时，猪血浆蛋白肽具有良好的还原能力、自由基清除能力和金属离子螯合能力。以上的报道充分说明了猪血浆蛋白肽在食品抗氧化剂方面的应用前景。既然蛋白的多糖接枝耦联技术与蛋白的水解反应都具有提升抗氧化效果，那么将两者有机结合，就会制备出更高活性的抗氧化产品。
本发明的目的是提供一种应用多糖接枝耦联技术提高猪血浆蛋白肽抗氧化活性的方法，本方法制备得到的多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽抗氧化活性提高、稳定性强。本发明按照以下步骤制备多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽(I)将猪血浆蛋白溶液在90 100°C温度下处理2 IOmin ；(2)将预热处理、冷却后的猪血浆蛋白溶液加入碱性蛋白酶水解，其中酶与底物比为I 5mL 100g，水解反应温度为45 55°C，pH值为7. 5 8. 5，水解反应时间为3 8h ；(3)水解结束经灭酶，加入多糖，猪血浆蛋白肽与还原糖的质量之比为3 I I 3，在50 95°C温度下加热3 8h，进行多糖接枝耦联；(4)冷却，在离心力为1000 3000g的条件下离心10 20min取上清，浓缩，冷冻干燥，即得。本发明还提供了所述的多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽在制备抗氧化剂中的应用。 实验证明，本发明所述的多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽，其抗氧化活性稳定，在加热温度为50 95°C、pH值为4 8、光照以及防腐剂(苯甲酸钠)的作用下都能够保持非常稳定的抗氧化活性。与现有技术相比，本发明的制备方法操作简单，与其他合成抗氧化剂相比安全可靠，适合工业化生产，能够大幅度提高猪血浆蛋白资源的利用率，提高猪血液综合利用的水平。所制备的多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽抗氧化活性提高，稳定性强。一本实施方式的应用多糖接枝耦联技术提高猪血浆蛋白肽抗氧化活性的方法包括以下步骤(I)将猪血浆蛋白溶液进行预热处理；(2)将预热处理、冷却后的猪血浆蛋白溶液加入碱性蛋白酶水解；(3)水解结束经灭酶，加入多糖，加热，进行多糖接枝耦联； (4)冷却，离心取上清，浓缩，冷冻干燥，即得。在本实施方式中，步骤(I)中所述的猪血浆蛋白溶液的浓度为I 6% (w/w)，优选为4% (w/w);所述的预热处理为将猪血浆蛋白溶液在90 100°C温度下处理2 IOmin ;更优选的，将猪血浆蛋白溶液在95°C温度下处理5min，然后冷却。在本实施方式中，步骤(2)中酶与底物比为(I 5) 100，也就是相当于每IOOg的猪血浆蛋白底物所需要的碱性蛋白酶的体积为I 5mL，优选为2mL。在本实施方式中，步骤(2)中所述的水解反应是在以下条件下进行水解反应温度为45 55°C温度，pH值为7. 5 8. 5，水解反应时间为3 8h ;更优选的，在以下条件下进行水解反应水解反应温度为55°C，pH值为8. 0，水解反应时间5h。本发明通过试验发现，采用此水解条件进行水解反应，水解度(DH)可以达到17. 60%。在本实施方式中，步骤(3)中所述的多糖接枝耦联反应在以下条件下进行称取一定量的猪血浆蛋白肽分别和还原糖均匀混合，猪血浆蛋白肽(以蛋白含量计)与还原糖的质量之比为3 : 1、2 : 1、1 : 1、1 : 2、1 : 3(胃/^)，在50 951温度下加热3 811;更优选的，在以下条件下进行多糖接枝耦联，猪血浆蛋白肽与多糖质量之比为I : 3，95°C条件下加热6h，其中，所述的多糖为D-葡萄糖、果糖或D-半乳糖，优选D-半乳糖。在本实施方式中，步骤(4)中所述的离心步骤所采用的离心力为1000 3000g，时间为10 20min。

二猪血浆蛋白溶液浓度为4% (w/w)，在95°C热处理5min后，降到55°C温度，加入碱性蛋白酶进行水解，酶与底物比为2 100，也就是相当于每IOOg的猪血浆蛋白所需要的碱性蛋白酶的体积为2mL，在温度为55°C、pH值为8. 0的条件下，水解5h(经检测，水解度(DH)达到了 17.60% );将水解产物经煮沸灭酶，再加入D-半乳糖进行多糖接枝耦联，猪血浆蛋白肽与多糖质量之比为I : 3，在95°C条件下加热6h，反应后迅速降温，经离心，除去沉淀，上清液浓缩，冷冻干燥，即得。碱性蛋白酶购自诺维信(中国)生物技术有限公司；产品编号PLN05366，酶活力I 20万u/g ;猪血浆蛋白购买自黑龙江宝迪肉类食品有限公司；产品编号NPJ01117猪血浆蛋白粉，蛋白含量70.0%。

三猪血浆蛋白溶液浓度为2% (w/w)，在90°C热处理8min之后，降到50°C，加入碱性蛋白酶进行水解，酶与底物比为2 100，也就是相当于每IOOg的猪血浆蛋白所需要的碱性蛋白酶的体积为2mL，在温度为50°C、pH值为7. 5的条件下，水解4h ;将水解产物经煮沸灭酶，再加入D-半乳糖进行多糖接枝耦联，猪血浆蛋白肽与多糖质量之比为I : 2，在80°C条件下加热4h，反应后迅速降温，经离心，除去沉淀，上清液浓缩，冷冻干燥，即得。

四本实施方式按照如下方法进行多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽的抗氧化活性试验I、供试样品
二和三所制备的多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽；2、试验方法及结果抗氧化活性以还原能力、自由基清除能力来评价。将样品配制成2mg/ml的浓度，其还原能力(700nm处吸光度)0. 71，与水解后未进行多糖接枝耦联的猪血浆蛋白肽相比提高了 3 4倍；对ABTS自由基的清除率60. 82%，与水解后未进行多糖接枝耦联的猪血浆蛋白肽相比提高了 3 4倍；羟基清除率91. 25%，与水解后未进行多糖接枝耦联的猪血浆蛋白肽相比提高了 2 3倍。

五本实施方式按照如下方法进行多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽的抗氧化活性稳定试验I、供试样品
二和三所制备的多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽；2、试验方法及结果在加热温度为40 100°C、pH值为2 10、光照以及防腐剂(苯甲酸钠)的作用下测定抗氧化活性。经测定，还原能力、ABTS和羟基自由基的清除率变化差异不显著(P>0. 05)。结果表明多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽在以上条件变化下，抗氧化活性变化极小，仍然具有较强的抗氧化活性。


应用多糖接枝耦联技术提高猪血浆蛋白肽抗氧化活性的方法，属于食品添加剂领域。本发明的应用多糖接枝耦联技术提高猪血浆蛋白肽抗氧化活性的方法包括以下步骤将猪血浆蛋白溶液进行预热处理；冷却后加入碱性蛋白酶水解；水解结束经灭酶，加入多糖，加热，进行多糖接枝耦联；冷却，离心取上清，浓缩，冷冻干燥，即得。本发明的制备方法操作简单，与其他合成抗氧化剂相比安全可靠，适合工业化生产，能够大幅度提高猪血浆蛋白资源的利用率，提高猪血液综合利用的水平。所制备的多糖接枝耦联猪血浆蛋白肽抗氧化活性提高，稳定性强。