专利名称：一种治疗HBV的siRNA的制作方法目前，全世界约有4. 2亿HBV携带者，HBV感染是严重影响人类健康的疾病之一。 慢性HBV感染与肝纤维化、肝癌的发生密切相关。但是，大部分的慢性HBV患者并没有在常规的治疗方式下获得预期的结果。尽管干扰素能够抑制HBV的复制，但是HBV能够通过抑制干扰素的分泌和功能，从而对抗机体的抗病毒机制，而最终导致机体处于免疫耐受状态。比如，在慢性感染的病人的外周血和肝浸润细胞中，调节性T细胞的比例有明显增加。另外， HBsAg, HBeAg以及其他的病毒因子能够直接抑制TLR介导的固有免疫应答。HBV聚合酶能够阻断RIG-I和TLR3介导的IFN-β分泌。目前，RNAi技术已经广泛应用于抗HBV研究。无论是细胞水平，还是HBV动物模型，siRNA分子均取得明显的抗HBV效果。RNAi干扰药物必将成为今后研究的重点。能否设计一种分子，既能特异性的沉默HBV相关基因，同时能够诱导IFN的产生， 从而能够改善HBV导致的免疫耐受状态。HBx特异的3p-siRNA的出现，使得这样的假想成为可能，为HBV的治疗提供了很好的指导意义。
针对上述现有技术，针对HBV治疗现状的不足，本发明提供了一种用于治疗HBV的 SiRNA0本发明是通过以下技术方案实现的一种用于治疗HBV的siRNA，其序列如SEQ ID NO. 1所示SEQ ID NO. 1 :G⑶CUUACAUAAGAGGACU。或如SEQ ID NO. 2 所示SEQ ID NO. 2 :GGAC⑶CCUUUGUUUACGU。或如SEQ ID NO. 3 所示SEQ ID NO. 3 CCGACCUUGAGGCAUACUU。本发明的用于治疗HBV的siRNA，是通过以下方法制备得到的LsiRNA 的设计(1)首先分析所研究的HBV亚型为ayw型，其序列如SEQ ID N0. 4所示。(2)针对HBV χ基因的序列，设计针对HBV χ基因的特异性沉默RNA，用siRNA设计软件，设定相关参数包括siRNA的长度为19个碱基序列；GC比例在35-50之间。将潜在的序列利用BLAST进行基因数据库的比较，排除和其他编码序列同源的序列。(3)化学合成siRNA由广州锐博公司直接合成，其靶点和3p_siRNA相同，序列见表 1，以及序列表 SEQ ID NO. I-SEQ ID NO. 3。表1化学合成siRNA序列本发明公开了一种治疗HBV的siRNA，其序列如SEQ ID NO.3所示。可人工合成，也可通过体内转录合成。将本发明的siRNA转染HepG2.2.15细胞24h和48h后，发现均能够下调HBx基因的表达，细胞内以及上清中HBsAg和HBeAg的含量也明显下降，并且3p-siRNA的作用效果比化学合成的更加显著。可以作为抗HBV的药物应用。