专利名称：一种药物粘膜局部使用的安全性评价方法性传播疾病一直以来都严重威胁着人类的健康，人们为此做出了不懈的努力，研 制了包括杀微生物剂在内的各种预防治疗保健药物来对抗这些经生殖道粘膜感染的病毒 或其他病原体。对于这些药物，除了考虑有效性外，其安全性也是必须关注的问题。任何包括杀微生物剂在内的生殖道用药候选药物在正式进入临床试验前，必须在 动物身上进行安全性试验的测试。虽然存在动物资源受限，费用昂贵，工作量大等缺点，但 是动物模型可以对完整的药物剂型进行评价，可以从器官整体水平来观察对外界刺激的反 应，可以动态系统地观察所诱导的炎症和免疫反应。因此动物模型评价往往被研究者们视 做进入临床前必做的步骤。目前评价包括杀微生物剂在内生殖道或直肠用药的动物模型主要有三类兔子阴 道激惹模型(Rabbit vaginal irritation，RVI)、小鼠模型和非人灵长类模型。检测指标 主要集中在组织病理学观察以及菌群检测方面。非人灵长类虽然也做为安全性评价的模型 之一，但由于资源稀少、价格昂贵，再加上由于能够被SIV或SHIV感染，因此非人灵长类模 型更多地被用于杀微生物剂候选药物的效果评价而较少被用于安全性评价。兔子模型是用于评价阴道用药物安全性的经典模型。兔子的阴道上皮由简单的柱 状上皮细胞组成，因此对外界刺激具有较高的敏感性，更利于对药物进行安全性评价。标准 的RVI模型是用候选药物对宫颈阴道粘膜进行刺激(每天一次，连续10天)之后，进行解 剖学和组织病理学两方面的定性评估，用轻微(minimal)、温和(mild)、中等(moderate)、 严重(severe)四个等级来表示刺激的严重程度，从而评估该药物是否可以用于人体。但是 近些年来，人们却发现传统的RVI模型不能灵敏反映出药物安全性的准确情况。例如，第一 代微生物杀菌剂N-9在用RVI模型中以4%的浓度给药时，测评结果显示安全，但是在人体 临床试验中却证明它引起了明显的粘膜损伤，增加了 HIV等病原体的感染机率。这是因为 传统RVI模型不能灵敏地反映出粘膜给药后可能给粘膜组织造成的病理损伤程度，而这些 不同程度的粘膜损伤对于增强HIV等病原微生物的粘膜感染至关重要。因此需要在传统的 RVI模型的基础上进行改进，不仅要对药物投递的局部粘膜进行组织病理学的观察，同时还 要发现可预测粘膜组织病理损伤的生物学标志物，提高粘膜用药安全性评价的灵敏度。由于兔子较少地被用于免疫病理学研究，因此缺乏相关的抗体和免疫检测试剂， 因此兔子模型在评价粘膜用药特的安全性方面存在很大的局限性。相比之下小鼠模型具有 其本身的一些独特优势价格便宜、来源和数量不受限制、可用于统计分析的样本量大、相 关抗体和免疫学试剂丰富、实验数据检测方便等优势，因此做为RVI模型的补充也得到了 一定的应用。有人曾尝试采用一些基于检测炎症因子的小鼠模型来评价抗HIV杀微生物剂的安全性，但是这些模型所检测的炎症细胞因子较为单一，未能考虑到免疫活化和细胞因 子调控网络的复杂性，到目前为止还没有建立任何一种动物模型能够准确地衡量粘膜用药 的安全性。
本发明所要解决的技术问题包括(1)粘膜组织病理损伤定量分析技术；(2)通过 筛选预测粘膜病理损伤的生物学标志物或其组合，建立非侵入性粘膜用药安全性评价技 术。本发明的目的是建立一种药物粘膜局部使用的安全性评价技术。采用实验动物作 为模型，通过粘膜给药，观察组织病理损伤，并加以量化；同时测定粘膜局部炎症因子的表 达水平，分析其与病理损伤的相关性，从而筛选出可灵敏反应粘膜损伤的生物学标志物，最 终建立非侵入性粘膜用药的安全性评价技术。本发明能够快速灵敏地反映粘膜用药物诱导 粘膜产生炎症的情况，并能够反映粘膜局部的免疫异常活化，特别是可对潜在的组织病理 损伤进行预测。所述的实验动物为小鼠粘膜给药时要将小鼠分为对照组、安慰组和用药组等，每 组小鼠的品系和周龄应当一致。所述的粘膜局部使用药物包括但不限于化学合成药物、生 物药物、微生物杀菌剂与粘膜疫苗等。所述的粘膜组织病理损伤定量分析技术包括根据是否出现水肿、淋巴细胞浸润、 上皮破损和充血情况(具体如表1所示)，粘膜用药所造成的各项病理损伤的评分值累计 后，形成评分的总值，用以定量标定粘膜用药的组织病理损伤(表2)。表1.粘膜组织病理损伤评分标准本发明属于传染病预防和粘膜用药安全性评价领域，涉及一种药物粘膜局部使用的安全性评价方法，尤其是一种基于细胞因子的粘膜使用的药物安全性评价方法。该评价方法通过测定给药部位粘膜的灌洗液中细胞因子的表达水平，以判断所用药物粘膜使用的安全性。本发明基于免疫活化和细胞因子调控网络的复杂性，使用了一系列细胞因子作为测定分析指标，能够准确地衡量粘膜用药物的粘膜毒性，可以快速灵敏地反映药物诱导粘膜产生炎症的情况，并能够反映粘膜局部的免疫异常活化。本发明的评价方法可以用于粘膜用候选药物的临床前安全性评价。