专利名称：辅酶Q10 (CoQ10)的静脉内制剂及其使用方法辅酶Q10(CoQ10)的静脉内制剂及其使用方法相关申请本申请要求2010年3月12日提交的标题为“辅酶QlO (CoQlO)的静脉内制剂及其使用方法”的第61/313，632号临时申请和2010年9月21日提交的标题为“辅酶QlO (CoQlO)的静脉内制剂及其使用方法”的第61/385，107号临时申请的优先权。各上述申请的全部内容通过引用并入本文。癌症目前是发达国家中导致死亡的首要原因之一。虽然最近的研究已极大地增加了我们对许多肿瘤发生的分子机制的理解并且已提供了许多用于治疗癌症的新途径，但用于大多数恶性肿瘤的标准治疗仍然是全切除术(gross resection)、化学疗法和放射疗法。虽然不断获得成功，但此类疗法的每一种可引起许多不希望的副作用。例如，手术可导致疼 痛、对健康组织的外伤性损伤和结瘢。放射疗法和化学疗法可能会导致恶心、免疫抑制、胃溃疡和继发性肿瘤发生。仍需要治疗包括癌症在内的疾病的改进方法和能够递送生物活性剂以帮助治疗疾病和其他病症的组合物。在给住院患者施用的用于包括癌症的病症的所有药物中，有大约60%的药物是以注射剂的形式来给予的。现在静脉内制剂具有作为药物媒介的主要地位。因为它的可靠性、准确性、便利性、避免口服施用药物的胃刺激可能性以及连续和间断的药物治疗的重要性，静脉内注射剂在药物施用中有了更大的应用。在过去的十年间，提供静脉内施用的技术有了稳定的改进，且这类静脉注射剂的使用也在逐年增加。国际专利申请公开No.W0/2009/126764(2009年4月9日提交)公开了用辅酶CoQlO治疗癌症。该申请的全部内容通过引用并入本文。CoQlO具有10个类异戊二烯单元的长侧链，其导致此药物极度地亲脂和几乎不溶于水。经口施用的CoQlO的生物利用度一般极低和易变，且被发现与该制剂的溶解速度有关。由于低的经口生物利用度和其固有的高可变性，静脉内施用系统尤其在癌症患者的护理中得到了特别的关注。由于其亲脂性，CoQlO需要被引入用于静脉内施用的载体中，从而其药代动力学受到载体体系的影响。辅酶Q10，本文中也称为CoQIO、泛醌或泛癸利酮，是一种普遍的营养补充剂，且可在营养品店、保健食品店、药店等处作为通过泛醇(CoQlO的还原形式)的抗氧化特性帮助保护免疫系统的维生素样补充剂以胶囊形式找到。CoQlO在人体的大多数组织和其他哺乳类动物的组织中发现且集中在线粒体中。CoQlO非常亲脂，且对于其大部分而言，不溶于水。该不溶性与如下CoQlO的结构中所示的烃性质的50个碳原子的类异戊二烯侧链有关。 OCH3CH3CH3 H3G、0^V^CH3 Il O高度疏水的CoQlO在水性溶液中基本上不溶。为使CoQlO用于肠胃外施用，它必须包含在与例如静脉内注射相容的稳定制剂中。在水性介质中制备CoQlO的静脉内制剂的一种方法需要包含一种或多种表面活性剂和允许产生CoQlO微粒于水性介质中的分散体的其他实体。这种方法有许多相关的难题。主要的难题与CoQlO在低于约50°C的温度下为固体的事实有关。CoQlO的固体颗粒在水性介质中的分散涉及到制备稳定性最长达两年以用于临床应用的安全制剂的困难。已经对这种固体颗粒分散体进行了研究，但是在静置时，包含CoQlO的颗粒会落到容器的底部，且通过搅拌或振摇使其重分散不符合医学应用的要求。成功的制剂应该有最长约两年的化学和物理稳定性，并提供用于临床使用的精确剂量。第二个主要的困难是获得在静脉内施用时不会在血流中产生颗粒分离或者沉积的制剂。这样的分离危害血流并潜在地是威胁生命的。在专利文献中可找到许多以提高CoQlO的生物利用度为目的的不同制剂。在1981年2月4日的EP23349中，Taki和Takahira公开了通过共施用长链脂肪酸和单酸甘油酯提高口服施用的CoQlO的淋巴吸收。不同的专利如1986年8月14日的W08604503A1、1988年 8 月 4 日的 JP 63188623A2、1987 年 3 月 26 日的 JP 620667019A2、1984 年 8 月 25 日的 JP 59148735A2和1981年2月6日的JP 56012309公开了通过施用含有CoQlO的油性(表面活性剂)溶液的胶囊增加肠吸收。1993年I月13日的EP 522433A1、1988年5月5日的TO 8803019A1、1984年8月25日的JP 59148718A2描述了 CoQlO在胶束溶液中的增溶。Ueno等人(Acta Pharm. Nord. , I (1989) 99-104)报道了在与环糊精的复合物中包含CoQlO提高了经口生物利用度。1981年8月31日的JP 56109590A2公开了类似的制剂。另外，如在例如1992年7月15日的EP494654A2中Yano等所描述的，将CoQlO合并到乳液中被报道增强肠吸收。于2001年3月6日授权的美国专利No. 6，197，349和于2001年3月27日授权的No. 6，207，178描述了无定形物理状态的CoQlO颗粒，特别是超冷熔体。对于肠胃外的，特别是静脉内施用，CoQlO必须合并到载体媒介中，因为，由于CoQlO的亲脂性，不可能制造出具有治疗浓度的CoQlO的水溶液。Groke和Polzer (1987年I月 22 日的 DE 3524788Al)、Sugio等(1987年6 月 4 日的 JP 62123113A2)以及 Mizushima等(1985年10月9日的JP 60199814A2)公开了用于静脉内施用泛癸利酮的卵磷脂稳定的大豆油乳液。1988年12月27日的JP 63319046A2描述了由多糖包被的大豆油乳液媒介。但是，由于CoQlO在植物油中相对差的溶解度，可被包含在乳液中的CoQlO浓度是有限的。1983年I月12日的EP 69399A2公开了含泛癸利酮的鸡蛋卵磷脂和胆固醇的脂质体制剂。例如在1983年11月23日的EP 94692A1U985年I月7日的JP 60001124A2和1988年12月21日的JP 63313727A2描述了多糖改性的脂质体。但是，由于药物生物分布受载体的生物分布、其RES活性和药物从载体媒介的释放的影响，将药物并入到载体系统中的缺点可能是该物质的药代动力学会产生不希望的变化或显著的变异性。Bogentoft 等(Folkers K. , Littaru G. P. , Yamagami T.编辑，《辅酶 Q 的生物医学和临床特征(Biomedical and Clinical Aspects of Coenzyme Q)》，第六卷，Elsevier 1991年，第215到224页)观察到，当分别以混合的胶束体系或乳液媒介静脉内施用时泛癸利酮在RES器官中蓄积。生物活性物质在载体中的溶解度通常过低而不能在可接受的制剂体积中获得治疗剂量。另外，载体颗粒本身的毒性副作用已在文献中特别地对于肠胃外脂质乳液进行了讨论(见Hajri T.等，Biochem. Biophys. Acta1047(1990) 121-130 ；Connelly P. ff.等，Biochim. Biophys. Acta 666(1981)80-89 ；AviramM.等，Biochem. Biophys. Res. Commun. 155 (1988) 709-713 ;Singh M. J. Parenter. Sci.Technol. 40(1986) 34-40 ；Cotter R.等，Am J. Clin. Nutr. 41(1985)994-1001 ；UntrachtS.，Biochim. Biophys. Acta711(1982) 176-192)。CoQlO就该药物的药物制剂而言是有问题的物质。对于CoQlO药用IV制剂(其中有必要减小颗粒尺寸)，传统的方法没有得到成功。例如使用球磨机、锤磨机、喷磨机或低温粉碎机等不可能粉碎该物质，这是由于辅酶QlO的不易碎的性质和低熔点。发明概要本发明包括适用于静脉内施用于受试者以产生具有临床有效的辅酶Q10(本文中也称为CoQlO或Q10)血液水平的稳定和非毒性的CoQlO制剂。本发明也包括用于制备适用于静脉内施用于受试者以产生临床有效的CoQlO血·液水平的稳定和非毒性的CoQlO制剂的方法。在本文所述的某些本发明非限制性的实施方案中，提供了适用于静脉内施用于受试者的治疗制剂。在某些实施方案中，治疗制剂包含水性溶液、被分散以形成颗粒的胶体状纳米分散体的疏水活性剂及分散稳定剂和调理素作用缩减剂(opsonization reducer)中的至少一种。活性剂的胶体纳米分散体物质被分散成尺寸小于200纳米的纳米分散体颗粒。在某些实施方案中，分散稳定剂选自天然或者半合成的磷脂。例如，合适的稳定剂包括聚乙氧基化(也称为聚乙二醇化)的蓖麻油(Cremophor EL)、聚乙氧基化的氢化蓖麻油(Crem0phor RH 40)、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(聚乙二醇化的维生素E，维生素E TPGS)、山梨聚糖脂肪酸酯(Spans )、胆汁酸和胆汁酸盐或者二肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱(DMPC)。在某些实施方案中，稳定剂为DMPC。在某些实施方案中，调理素作用缩减剂选自poloxamine (聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物)和泊洛沙姆。合适的泊洛沙姆包括泊洛沙姆188。在某些实施方案中，调理素作用缩减剂是泊洛沙姆188。在一些实施方案中，疏水活性剂是辅酶QlO (即，CoQIO、泛癸利酮、泛醌等)。在一些实施方案中，疏水活性剂是CoQIO。调理素作用缩减剂是泊洛沙姆188和分散稳定剂是DMPC。在某些实施方案中，胶体状纳米分散体是悬浮液；在某些实施方案中，胶体状纳米分散体是乳液；在一些实施方案中，胶体状纳米分散体的活性剂是晶体形式。在一些实施方案中，胶体状纳米分散体的活性剂是超冷熔体形式。还提供了其中制剂分别具有4%、3%和I. 5%重量/体积比的CoQ10、DMPC和泊洛沙姆的实施方案。在其它实施方案中，CoQ10、DMPC和泊洛沙姆的重量/体积比分别为8%、6%和 3. 0%。在一些实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约10纳米至大约200纳米之间。在一些实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约10纳米至大约100纳米之间。
在一些实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约30纳米至大约80纳米之间。在一些实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约35纳米至大约40纳米之间。
在一些实施方案中，纳米分散颗粒的平均尺寸小于约45纳米。在某些实施方案中，制剂包含水性溶液、分散以形成颗粒的胶体状纳米分散体的疏水活性剂及分散稳定剂和调理素作用缩减剂中的至少一种。活性剂的胶体状纳米分散体分散成尺寸小于200纳米的脂质体。在一些实施方案中，分散稳定剂形成为单层的脂质体。在其它实施方案中，脂质体是双层的复层脂质体，其具有该双层之间的水性空间和双层内的亲脂性空间。在其它实施方案中，疏水活性剂封闭在双层的亲脂性空间内。在其它实施方案中，复层脂质体还包括封闭在双层之间的水性空间中的亲水试剂。在某些实施方案中，制剂包含水性溶液、分散以形成颗粒的胶体状纳米分散体的疏水活性剂及DMPC和调理素作用缩减剂。在一些实施方案中，调理素作用缩减剂选自poloxamine和泊洛沙姆。在一些实施方案中，调理素作用缩减剂是泊洛沙姆188。在一些实施方案中，疏水活性剂是辅酶QlO (CoQlO)。在一些实施方案中，疏水活性剂是辅酶QIO(CoQIO)和调理素作用缩减剂是泊洛沙姆188。在一些实施方案中，制剂具有重量/体积比分别为4%、3%和I. 5%的CoQ10、DMPC和泊洛沙姆188。在其它实施方案中，制剂具有重量/体积比分别为8%、6%和3%的CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188。在一些实施方案中，胶体状纳米分散体是悬浮液。在其它实施方案中，胶体状纳米分散体是乳液。在一些实施方案中，胶体状纳米分散体的活性剂是晶体形式。在其它实施方案中，胶体状纳米分散体的活性剂是超冷熔体形式。在一些实施方案中，制剂包含水性溶液、分散以形成颗粒的胶体状纳米分散体的疏水活性剂和DMPC。活性剂的胶体状纳米分散体分散成平均尺寸小于200纳米的纳米分散体颗粒。在一些实施方案中，疏水活性剂是辅酶QlO(C0QlO)。在一些实施方案中，胶体状纳米分散体是悬浮液。在其它实施方案中，胶体状纳米分散体是乳液。在一些实施方案中，胶体状纳米分散体的活性剂是晶体形式。在其它实施方案中，胶体状纳米分散体的活性剂是超冷熔体形式。在一些实施方案中，制剂具有重量/体积比分别为4 %和3 %的CoQlO和DMPC0在其它实施方案中，制剂具有重量/体积比分别为8%和6%的CoQlO和DMPC。在一些实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约10纳米至大约200纳米之间。在其它实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约10纳米至大约100纳米之间。在其它实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约30纳米至大约80纳米之间。在其它实施方案中，纳米分散体颗粒的平均尺寸在大约35纳米至大约40纳米之间。在其它实施方案中，纳米分散颗粒的平均尺寸小于约45纳米。在某些实施方案中，制剂包含水性溶液、分散以形成颗粒的胶体状纳米分散体的CoQIO、选自聚乙二醇化的蓖麻油、Cremophor EL、CremophorRH40、聚乙二醇化的维生素ETPGS和二肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱(DMPC)的分散稳定剂及选自泊洛沙姆和poloxamine的调理素作用缩减剂。CoQlO的胶体状纳米分散体分散成平均尺寸在约10纳米至约100纳米之间的纳米分散体颗粒。
在某些实施方案中，制剂包含水性溶液、分散以形成颗粒的胶体状纳米分散体的CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188。CoQlO的胶体状纳米分散体分散成平均尺寸在约30纳米至约80纳米之间的纳米分散体颗粒。在某些实施方案中，提供了制备适用于静脉内施用的CoQlO纳米分散体的方法。在一些实施方案中，该方法包括通过(I)将疏水活性剂加入65°C的水浴中并混合以形成疏水活性剂/水混合物；(2)向疏水活性剂/水混合物中加入分散稳定剂并在65°C下混合以形成疏水活性剂/水/稳定剂混合物；(3)加入调理素作用缩减剂以形成疏水活性剂/水/稳定剂/缩减剂混合物；(4)预热微射流均质机到65°C ;和(5)通过在65°C的微射流均质机中混合疏水活性剂/水/稳定剂/缩减剂混合物进行加工以形成平均粒径小于200纳米的疏水活性剂胶体状纳米分散体而利用高压匀质化来分散疏水活性剂。在一些实施方案中，该方法进一步包括冻干胶体状纳米分散体以使CoQlO胶体状纳米分散体颗粒结晶的步骤。在一些实施方案中，该方法进一步包括添加冻干保护剂的步骤。在一些实施方案中，冻干保护剂是营养糖。在一些实施方案中，营养糖选自乳糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、神经氨酸、葡糖胺、半乳糖胺、N-甲基葡糖胺、甘露醇、山梨糖醇、精氨酸、甘氨酸和蔗糖。 在一些实施方案中，该方法包括选自聚乙二醇化蓖麻油、Cremophor EL、Cremophor RH40、聚乙二醇化维生素E、维生素E TPGS和二肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱(DMPC)的分散稳定剂。在一些实施方案中，分散稳定剂是DMPC。在一些实施方案中，调理素作用缩减剂是选自泊洛沙姆和poloxamine。在一些实施方案中，调理素作用缩减剂是泊洛沙姆188。在一些实施方案中，调理素作用缩减剂是泊洛沙姆188和分散稳定剂是DMPC。在一些实施方案中，疏水活性剂是CoQIO。在一些实施方案中，疏水活性剂是CoQIO，调理素作用缩减剂是泊洛沙姆188和分散稳定剂是DMPC。在一些实施方案中，胶体状纳米分散体的CoQlO是超冷熔体的形式。在其它实施方案中，胶体状纳米分散体的CoQlO是晶体形式。在一些实施方案中，由本方法得到的制剂包含水性溶液、分散以形成颗粒的胶体状纳米分散体的疏水活性剂及分散稳定剂和调理素作用缩减剂中的至少一种。活性剂的胶体状纳米分散体分散成平均粒径小于200纳米的纳米分散体颗粒。在一些实施方案中，CoQ10、DMPC和泊洛沙姆188的重量/体积比分别为4%、3%和I. 5%0在其它实施方案中，CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188的重量/体积比分别为8%、6%和3%。在一些实施方案中，疏水活性剂胶体状纳米分散体的平均粒径在约10纳米至100纳米之间。在其它实施方案中，疏水活性剂胶体状纳米分散体的平均粒径在约35纳米至40纳米之间。在其它实施方案中，疏水活性剂胶体状纳米分散体的平均粒径小于45纳米。在一个实施方案中，制剂在使用前用与血液等渗的标准医用肠胃外稀释剂来稀释。合适的肠胃外稀释剂的非限制性实施包括N盐水、5%葡萄糖、乳酸化林格氏溶液和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。稀释的制剂，即输注液，可以经4小时或者更短的时间施用。输注液可以作为慢滴或通过计量泵送系统间断地或连续地施用。这种输注液可以在使用前用过滤器如1-5微米的过滤器在线过滤。在一些实施方案中，制剂制备成用来输注的无菌产品，其中灭菌通过过滤、热压、辐射或类似的方法实现。灭菌的各种方法是本领域中已知的。在一个实施方案中，制备制剂以使得其为无内毒素的。在一个实施方案中，制备制剂以使得其不含可能引起传染性海绵状脑病(BSE/TSE)的有机体。本文也提供了用于治疗或者预防受试者中的肿瘤疾病的方法。在一些实施方案中，治疗或者预防受试者中的肿瘤疾病的方法包括向受试者静脉内施用如本文所述的治疗制剂从而实现肿瘤疾病的治疗或预防。在一些实施方案中，静脉内施用是通过经选择以在受试者中提供对于待治疗的肿瘤疾病的效力的剂量。在一些实施方案中，肿瘤疾病是侵袭性的或转移性的肿瘤疾病。在一些实施方案中，侵袭性的或转移性的肿瘤疾病选自胰腺癌、肝细胞癌、尤文氏肉瘤、转移性乳腺癌、转移性黑色素瘤、脑癌(星形细胞瘤、胶质母细胞瘤)、神经内分泌癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、雄激素依赖性前列腺癌、卵巢癌和非霍奇金氏淋巴瘤。在其它实施方案中，肿瘤疾病是非侵袭性肿瘤疾病。在一些实施方案中，非侵袭性肿瘤疾病选自非转移性乳腺癌、雄激素依赖性前列腺癌、小细胞肺癌和急性淋巴细胞性白血病。
在治疗方法的一些实施方案中，该制剂包含约4%的辅酶Q10、约3%的DMPC和约I. 5%的泊洛沙姆188。在某些实施方案中，提供了用于抑制受试者中的肿瘤细胞生长的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者静脉内施用如本文所述的治疗制剂，从而肿瘤细胞的生长受到抑制。在一些实施方案中，静脉内施用是通过经选择以在受试者中提供抑制肿瘤细胞生长的效力的剂量。在一些实施方案中，制剂包含约4%的辅酶Q10、约3%的DMPC和约I. 5%的泊洛沙姆188。在一些实施方案中，肿瘤疾病是涉及Bcl-2蛋白家族的失调或与之相关的肿瘤性病症。附图简要说明本发明的各种实施方案将在以下参照附图进行描述，附图中图I描绘了 CoQlO纳米颗粒的冻干样品，其如从左至右显示的标记为R、A、O和C型，其中R、O和C型各经受20轮的均质化处理，而A型经受40轮的均质化处理。图2描绘了 CoQlO纳米颗粒的冻干样品，其如从左至右显示的标记为G、Q、S和T型，其中G、Q、S和T型各经受20轮的均质化处理。图3描绘了 CoQlO纳米颗粒的冻干样品，其如从左至右显示的标记为U和V型，其中U和V型各经受20轮的均质化处理。图4描绘了与得自CoQlO整体物质(bulk substance)的图谱叠加的A型冻干样品的XRDP图谱。图5描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的C型冻干样品的XRDP图谱。图6描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的G型冻干样品的XRDP图谱。图7描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的O型冻干样品的XRDP图谱。图8描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的Q型冻干样品的XRDP图谱。图9描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的R型冻干样品的XRDP图谱。

图10描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的S型冻干样品的XRDP图谱。图11描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的T型冻干样品的XRDP图谱。图12描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的U型冻干样品的XRDP图谱。图13描绘了与得自CoQlO整体物质的图谱叠加的V型冻干样品的XRDP图谱。
图14描绘了处理时间对于其中CoQlO为2. 5g、DMPC为I. 5g的胶体状纳米颗粒在46mL水中均质化的效应。图15描绘了由本文公开的方法形成的脂质体，其中该脂质体是双层的复层脂质体。图16描绘了由本文公开的方法形成的脂质体，其中该脂质体是双层的复层脂质体。图17描绘了处理轮数对胶体纳米颗粒尺寸的效应，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制剂比例为4 : I : 0、4 : 2 : O和4 : 3 : O。图18描绘了处理轮数对胶体纳米颗粒尺寸的效应，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制剂比例为4 : I : 1、4 : 2 : I和4 : 3 : I。 图19描绘了处理轮数对胶体纳米颗粒尺寸的效应，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制剂比例为4 : 3 : O. 5、4 : 3 : I和4 : 3 : 1.5。图20描绘了处理轮数对胶体纳米颗粒的尺寸的效应，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制剂比例为4 : 2 : O. 5、4 : 2 : I和4 : 2 : 1.5。图21以图形的形式描绘了基于制剂I (其不包含泊洛沙姆)的施用，随时间(min)的CoQlO平均血浆浓度。图22以图形的形式描绘了基于制剂II (其包含泊洛沙姆)的施用，随时间(min)的CoQlO平均血浆浓度。图23以图形的形式描绘了与单独化疗和与化疗结合相比，CoQlO纳米颗粒的IV制剂以4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188比率治疗恶性绿色瘤的肝克隆的效力。图24以图形的形式描绘了与单独化疗和与化疗结合相比，CoQlO纳米颗粒的IV制剂以4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188比率治疗恶性绿色瘤的肺克隆的效力。图25使用以OCR作为读出装置的图形形式描绘了两种CoQlO IV制剂对于!fepG2细胞的效应。制剂I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制剂II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。图26使用以OCR作为读出装置的图形形式描绘了两种CoQIOIV制剂对于MCF-7细胞的效应。制剂I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制剂II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。图27使用以OCR作为读出装置的图形形式描绘了两种C0QlOIV制剂对于PC-3细胞的效应。制剂I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制剂II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。图28使用以OCR作为读出装置的图形形式描绘了两种CoQlO IV制剂对于PaCa2细胞的效应。制剂I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制剂II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。图29描绘了用以测定处理后24小时凝胶I中的半胱天冬酶水平的蛋白质印迹。图30描绘了用以测定处理后24小时凝胶I中的肌动蛋白水平的蛋白质印迹。图31描绘了用以测定处理后24小时凝胶2中的半胱天冬酶水平的蛋白质印迹。图32描绘了用以测定处理后24小时凝胶2中的肌动蛋白水平的蛋白质印迹。图33描绘了在PC3中观察到的标准化的半胱天冬酶3蛋白质水平。
图34描绘了在PaCa2中观察到的标准化的半胱天冬酶3蛋白质水平。图35描绘了在H印G2细胞中观察到的未标准化的半胱天冬酶3蛋白质水平。图36描绘了在HDfa细胞中观察到的标准化的半胱天冬酶3蛋白质水平。图37描绘了在MiaPACA2研究中未处理的NSG小鼠的结果。图38描绘了在MiaPACA2研究中未处理的NSG小鼠的结果。图39描绘了在MiaPACA2研究中用赋形剂对照处理的NSG小鼠的结果。图40描绘了在MiaPACA2研究中经约4小时通过静脉内输注施用O. 5mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制剂处理的NSG小鼠的结果。图41描绘了在MiaPACA2研究中经约4小时通过静脉内输注施用5mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制剂处理的NSG小鼠的结果。图42描绘了在MiaPACA2研究中经约4小时通过静脉内输注施用10mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制剂处理的NSG小鼠的结果。图43描绘了在MiaPACA2研究中经约4小时通过静脉内输注施用25mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制剂处理的NSG小鼠的结果。图44描绘了在MiaPACA2研究中经约4小时通过静脉内输注施用50mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制剂处理的NSG小鼠的结果。图45描绘了用单一阿霉素疗法治疗的小鼠的存活率结果。图46描绘了用阿霉素和4 3 1.5CoQ10IV制剂联合疗法治疗的小鼠的存活率结果。图47描绘了相对于用于雄性和雌性大鼠和狗的剂量，CoQlO的平均肝浓度。本发明的详细说明本发明涉及水溶性差的活性药剂如CoQlO的静脉内制剂。本发明的静脉内制剂允许递送精确量的活性治疗剂如CoQlO到血流中以输送到器官如肝脏和心脏及其它组织(包括肿瘤)中。本发明提供了临床和治疗有效的且可用的例如CoQlO的静脉内制剂，其在通常的环境温度下是稳定的且在至少12个月的时期内保持基本不变的分散特性。为了优化可读性的目的和帮助理解本文所述的本发明，可能有益的是考虑以下本文中所用的术语和短语的定义。按照本公开及如本文中所使用的，以下术语定义为具有以下含义，除非明确表明为其它情况。如本文中所用的，“一”、“一个”和“该”包括复数指代，除非上下文清楚地指示为其它的情况。如本文中所用的，“药学上可接受的”成分是适合用于人和/或动物而无过度的副作用(如毒性、刺激性和变态反应)、与合理的利益/风险比相称的成分。如本文中所用的，术语“安全和治疗有效量”是指当以本公开的方式使用时，足以产生与合理的利益/风险比相称的希望的治疗反应而无过度副作用(如毒性、刺激性和变态反应)的成分量。“治疗有效量”是指足以产生希望的治疗反应的本公开化合物的量。例如，加速的伤口愈合、疼痛和疲劳的减轻。具体的安全和有效量或治疗有效量随着如待治疗的特定病症、患者的生理状况、待治疗的哺乳动物或动物的类型、治疗的持续时间、同时治疗(如果有的话)的特性及采用的具体制剂和化合物或其衍生物的结构的因素而变化。“治疗”是以防止疾病的发生或改变疾病的病理或症状为目的的干预。因此，“治疗”是指治疗性的处理和预防性或防止性的措施。需要治疗的那些是指已经患有病症诉那些以及将发生病症的那些。如本文中所用的，“改善”或“治疗”指的是接近于标准化值(例如在健康患者或个体中获得的值)的症状，例如，如使用常 规统计检验测定的，与标准化值的差异小于50%，在一些实施方案中与标准化值的差异小于约25%，在其它实施方案中与标准化值的差异小于10%，和在再其它的实施方案中存在与标准化值无明显差异的症状。如本文中所用的，“改善的症状”或“治疗的症状”是指接近于标准化值的症状，例如，如使用常规统计检验测定的，与标准化值的差异小于50%，在一些实施方案中与标准化值的差异小于约25%，在其它实施方案中与标准化值的差异小于10%，和在再其它的实施方案中存在与标准化值无明显差异的症状。如本文中所用的，“调理素作用(opsonization) ”是指本文所述的亲脂性生物活性剂经标记以被吞噬细胞摄取和破坏的过程。调理素作用包括调理素与生物活性剂的结合。在调理素结合到膜上后，吞噬细胞被吸引至活性剂。调理剂是用作吞噬作用过程的结合增强剂的任何分子。如本文中所用的，术语“调理素作用缩减剂”是指与活性剂一起起到降低调理素用作吞噬作用过程的结合增强剂的能力的任何试剂。按照本公开，提供了用于改善亲脂性生物活性剂(其在本文中也可称为疏水性生物活性剂)的施用的制剂。如本文中所用的，“亲脂性生物活性剂”或“疏水性生物活性剂”包括不溶于或基本上不溶于水的试剂。特别地，如本文中所用的亲脂性生物活性剂在水中具有低于约1000份的水中约I份生物活性药物的溶解度。如本文中所用的，术语“胶体状”是指细分的状态，暗示分散于介质中的分子或多分子颗粒在至少一个方向上具有粗略地在Inm至I μπι之间的尺寸。如本文中所用的，“分散体”或“胶体状分散体”是指其中任何特性(如固体、液体或气体)的胶体大小的颗粒分散于不同组成或状态的连续相中。在静脉内药物递送中，该连续相基本上是水且分散的颗粒可以是固体(悬浮液)或不混溶的液体(乳液)。如本文中所用的，“超冷熔体”是指均质化后活性剂的状态，其中在低于活性剂整体物质的熔点的温度下，胶体颗粒不是处于固体或晶体形式而是处于无定形状态。如本文中所用的，“冻干保护剂”是指药学可接受的赋形剂，其在冻干处理、后续的储存和重构过程中保护分散的活性剂对抗去稳定化的条件。术语“胶体颗粒”、“分散体颗粒”、“纳米分散体颗粒”和“胶体状分散体颗粒”在本文中都可互换使用，且是指活性剂分散成整块状态或熔融状态的纳米颗粒的分散形式。如本文中用于指称CoQlO的术语“制剂”包括泊洛沙姆，除非另外地指明。通过本发明的方法治疗的“患者”或“受试者”可以指人或非人类动物，优选哺乳动物。应注意，本文描述的临床观察是对于人类受试者进行的，且在至少一些实施方案中，受:试者是人。“治疗有效量”意思是当施用于患者以治疗疾病时，足以实现这种对疾病的治疗的化合物量。当施用以预防疾病时，该量足以避免或延迟疾病的发作。“治疗有效量”随化合物、疾病及其严重性和待治疗的患者的年龄、体重等等而变化。“预防”或“防止”是指获致疾病或障碍的风险的降低(即使得疾病的至少一种临床症状不在可能暴露于或易患疾病但还未发生或显示该疾病的症状的患者中发生)。术语“预防性的”或“治疗性的”治疗是指向受试者施用一种或多种所述的组合物。如果在不希望的病症(例如，疾病或主体动物的其它不希望的状态)的临床表现之前施用，则治疗是预防性的，即保护主体免于发生不希望的病症，而如果在不希望的病症表现出来之后施用，该治疗是治疗性的(即，意图消除、改善或维持现有的不希望的病症或其副作用)。术语“治疗效果”是指在动物，特别是哺乳动物和更特别是人类中由药理活性物质引起的局部或系统效应。因此该术语意思是任何意图用于诊断、治愈、缓解、治疗或预防疾病或用于在动物或人中增强希望的生理或精神进展或状态的物质。短语“治疗有效量”意思是以可应用于任何治疗的合理效益/风险比产生一些希望的局部或系统效应的这种物 质的量。在某些实施方案中，化合物的治疗有效量取决于其治疗指数、溶解性等等。例如，本发明的方法公开的某些化合物可以以产生适用于这种治疗的合理效益/风险比的足够量施用。术语“障碍”和“疾病”包含性地使用，且是指与身体任何部分、器官或系统(或其任何组合)的正常结构或功能的任何偏离。特定的疾病通过特征性的症状和征兆表现，包括生物的、化学的和物理的变化，且通常与多种其它的因素(包括，但不限于人口统计学的、环境的、职业的、遗传的和病史的因素)相关。某些特征性的征兆、症状和相关因素可以通过多种方法量化以产生重要的诊断信息。术语“表达”在本文中用于指从DNA产生多肽的过程。该过程涉及基因转录成mRNA和该mRNA翻译成多肽。取决于其使用的语境，“表达”可以指RNA、蛋白质或这两者的产生。术语“基因的表达水平”或“基因表达水平”是指细胞中由基因编码的mRNA以及前mRNA新生转录本、转录本加工中间体、成熟mRNA和降解产物的水平，或者蛋白质的水平。将详细地参照本发明的优选实施方案进行说明。尽管本发明结合优选的实施方案进行描述，但应理解，这并非意图将本发明限制于这些优选实施方案。相反，意图的是覆盖可以包括在如所附权利要求限定的本发明精神和范围内的替代、改进和等同方式。在本申请中，在其中存在一系列述及的数值的所有情况中，应理解任何所述及的数值可以是数值范围的上限或下限。还应理解，本发明包括所有的这些数值范围，即具有该数值上限和数值下限的组合的范围，其中各该上限和下限的数值可以是本文中述及的任何数值。II.组合物本公开提供了用于治疗和预防癌症的CoQlO组合物。本发明的组合物可以以其本身或以其中本发明的组合物与适宜的载体或赋形剂混合的药物组合物的形式施用。在治疗表现出目标障碍的患者时，施用治疗有效量的一种或多种药剂如这些药剂。治疗有效的剂量是指导致患者的症状缓解或生存延长的化合物的量。来自许多不同物种的受试者可以用本发明的组合物治疗。这些动物的非穷尽的示例性列表包括哺乳动物如小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、猪、马、牛、狗、猫和灵长类(如猴、猿和人类)。已知患有肌肉疲劳、疼痛、创伤等等的那些动物受试者可能适合用于本公开的应用。特别地，具有损伤、手术、关节炎、肌肉疲劳、癌症等等的人类患者是适合用于本文公开的本发明用途的动物受试者。通过使本文教导的方法适应于医学或兽医学中已知的其它方法(例如，根据受试动物的体重调整所施用物质的剂量)，本发明中使用的组合物可以方便地为用于其它动物中而进行优化。本发明的适宜施用途径可以包括肠胃外递送，包括，举例来说，静脉内、肌肉内、皮下、髓内注射以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。在一个实施方案中，本文提供的组合物可以通过直接注射到肿瘤而施用。在一些实施方案中，本发明的制剂可以通过静脉内注射或静脉内输注施用。在一个实施方案中，本发明的组合物通过静脉内注射施用。在一个实施方案中，本发明的组合物通过静脉内输注施用。在施用途径为例如静脉 内输注的情况下，本文提供了其中IV输注液包含约40mg/mL浓度的活性剂(例如辅酶Q10)的实施方案。在组合物通过IV输注施用的情况下，其在磷酸盐缓冲盐水中稀释。在一些实施方案中，可以组合一种或多种施用途径，例如，静脉内和肿瘤内，或者静脉内和经口，或者静脉内和口服，或者静脉内和透皮或透粘膜。本文描述的组合物可以以任何合适的制剂施用于受试者。例如，CoQlO可以配制用于肠胃外递送，例如用于皮下、静脉内、肌肉内或肿瘤内注射。组合物可以以单次浓注、多次注射或通过连续输注(例如，静脉内或通过腹膜透析)施用。对于肠胃外施用，组合物可以配制成灭菌的无热原形式。本发明的组合物也可以通过简单地将该组合物添加到包含细胞的流体中而体外施用于细胞(例如应用于细胞中或体外培养物中的Bcl-2产生)。为实施本发明而使用药学可接受的载体将本文公开的化合物配制成适合全身施用的剂量是在本公开的范围内。通过适当的载体选择和适宜的制备实践，本发明的组合物，特别是配制为溶液的那些，可以肠胃外施用，如通过静脉内注射。这些化合物的毒性和治疗效力可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学过程测定，例如测定LD50(50%群体致死的剂量)和ED50(50%群体中治疗有效的剂量)。毒性和治疗效应之间的剂量比率为治疗指数，且其可表示为LD50/ED50比。表现出大的治疗指数的化合物可能是理想的。从这些细胞培养物试验和动物研究获得的数据可以用于确定在人体中使用的剂量范围。这些化合物的剂量可以在具有很少或没有毒性而包括ED50的循环浓度范围内。剂量可以根据采用的剂型和利用的施用途径在该范围内变化。适用于本发明中的药物组合物包括其中以有效量包含活性成分以实现预期的目的的组合物。有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内，特别是按照本文提供的详细公开内容。除了活性成分外，这些药物组合物可以包含适宜的药学可接受的载体，包括有助于将活性化合物加工成可以作为药物使用的制剂的赋形剂和辅剂。配制用于静脉内施用的制剂可以为胶体状分散体的溶液的形式。用于肠胃外施用的药物组合物包括水溶性形式的活性化合物的水性溶液。另外，活性化合物的悬浮液可以制备为适当的油性注射悬浮液。适合的亲脂性溶剂或媒介包括脂肪油如芝麻油或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酸酯，或者脂质体。水性注射悬浮液可以包含提高悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，悬浮液还可以包含合适的稳定剂或提高化合物的溶解性的试剂以允许制备高度浓缩的溶液。III.制剂本发明提供了如上所述适合静脉内施用于受试者的包含疏水活性剂如辅酶QIO(CoQIO)的治疗制剂。通过高压均质化，活性剂(例如，CoQlO)颗粒被减小从而产生足够小以通过200nm无菌滤器的颗粒。足够小以通过200nm无菌滤器的颗粒可以静脉内注射。这些颗粒比血细胞小得多而因此不会栓塞毛细管。例如红细胞为6mm X 2mm的圆盘。该颗粒分散并被稳定剂包装或包围。尽管不希望限制于任何理论，据认为稳定剂被吸引到疏水活性剂上以使得分散的疏水活性剂颗粒被稳定剂包围从而形成悬浮液或乳液。悬浮液或乳液中的分散颗粒包括稳定剂表面和由固体颗粒形式(悬浮液)或不可混溶的液体形式(乳液)的疏水活性剂组成的核心。在某些方面，分散的颗粒占据在脂质体的亲水性区域中。本文提供的分散的胶体体系提供了优于现有技术的特定性能优势。例如，本发明允许制剂中的高药物载量而无需使用共溶剂。另外，获得了高的和相对可再现的血浆水平而不依赖于内源的低密度脂蛋白载体。更重要的是，由于疏水活性剂的胶体颗粒的被动累积，本发明允许在实体肿瘤中维持高药物水平。本静脉内制剂主要包含连续的水相和分散的固体物质(悬浮液)或分散的不混溶的液体(乳液)。分散的胶体体系(其中颗粒大部分由活性剂(药物)本身组成)通常可 以比连续的增溶体系每单位体积递送更多的药物，如果可以使得该体系足够稳定。本发明提供了水溶性差的活性剂如CoQlO的胶体状分散体。通过利用机械装置如微射流均质机，颗粒尺寸通过高压连续均质化而减小，从而在喷射系统中形成胶体尺寸的小滴，或者通过在受限制的和曲折的通道中以高速率流动的液体中剪切颗粒而减小。需要大量的能量以切割整体颗粒本身。较小的颗粒增加了活性剂的界面面积。表面活性剂用于降低界面能从而稳定该分散体。颗粒尺寸决定着总界面面积和必须适应于获得稳定体系的界面能。随着颗粒尺寸下降，需要更多的能量来产生该颗粒，且由于总表面积上升，表面活性剂必须适应于更高的界面能。通过如本文中所例示的高压均质化，活性剂例如CoQlO的颗粒尺寸减小到低于200nm。在一些实施方案中，颗粒尺寸减小到IOnm至200nm或IOnm至IOOnm或更优选30nm至80nm。在一些实施方案中，所获得的胶体状活性剂(例如CoQlO)颗粒为如本文中定义的无定形超冷状态。在某些实施方案中，分散的CoQlO颗粒通过冻干过程结晶以产生其中活性剂核心为晶体形式的纳米分散体颗粒(参见图1-3)。偏振光学显微术(PLM)或X-射线粉末衍射(XRDP)用于确认CoQlO胶体状分散体的晶体性并与整体CoQlO的XRDP进行比较(参见图4-13)。在R型中，如图I所示，包含5. Owt % ^ CoQIO,3. 3wt%的泊洛沙姆和91wt%的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图I中左侧第一个小瓶中所示的颗粒。如图9中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在A型中，如图I中左侧第二个小瓶所示，包含3被％的CoQlOU. 8wt%的类脂SPC-3和95. 2wt %的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环以减小颗粒尺寸。然后颗粒冻干以产生图I中左侧第二个小瓶中所示的颗粒。如以下图4中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在O型中，如图I中所示，包含5. 0 丨％的CoQ10、3. 0 丨％的DMPC和92wt%的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图I中左侧第三个小瓶中所示的颗粒。如以下图7中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在C型中，如图I中所示，包含5. Owt%的CoQ10、3. 3wt%的泊洛沙姆和91wt%的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图I中左侧第四个小瓶中所示的颗粒。如图5中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在G型中，如图2中所示，包含5. Owt%的CoQIO、3. Owt%的类脂SPC-3和92wt%的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图2中左侧第一个小瓶中所示的颗粒。如图6中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在Q型中，如图2中所示，包含5. Owt%的CoQ10、2. 5被％的DMPC、0. 5被％的去氧胆酸钠和92wt %的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图2中左侧第二个小瓶中所示的颗粒。如图8中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在S型中，如图2中所示，包含7. 5wt%的CoQ10、4. 5wt%的DMPC和88wt%的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图2中左侧第三个小瓶中所示的颗粒。如图10中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在T型中，如图2中所示，包含7. 5 七％的CoQ10、5. Owt%的泊洛沙姆和87. 5wt%的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图2中左侧第四个小瓶中所示的颗粒。如图11中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在U型中，如图3中所示，包含7. 5wt%的CoQ10、4. Owt %的DMPC、1. Owt %的泊洛沙姆188和87. 5wt%的水的制剂在微射流均质
机中经过20次循环，且然后冻干以产生图3中左侧第一个小瓶中所示的颗粒。如图12中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在V型中，如图3中所示，包含3. Owt%的CoQIO、I. 5wt %的DMPC和95. 5wt %的水的制剂在微射流均质机中经过20次循环，且然后冻干以产生图3中左侧第二个小瓶中所示的颗粒。如图13中所示的XRDP表明，该CoQlO颗粒是晶体。在冻干颗粒的过程中，干燥器冷却至_35°C。3毫升的上述各种制剂一式两份地加入5mL的血清小瓶中。血清瓶塞置于顶上但留出水蒸汽逸出的空隙。制剂置于_78°C的冷冻箱中I小时以快速冷冻。在这一时间后，全部转移到干燥器的中间架子上。立即启动真空。16小时后，温度从_35°C调整到-30°C。在24小时后，温度从_30°C调整到_28°C。在2小时后，温度从-28 V调整到-26°C。在4小时后，温度进一步调整到_26°C至-25°C之间。在达到-25°C后，小瓶加塞并释放真空到环境空气中。小瓶被绑扎并如图1-3中所示对干燥的产物照相。在减小分散体颗粒尺寸的过程中，可能希望的是CoQlO混合物通过微射流均质机数轮以获得希望的颗粒尺寸。在通过具有75 μ m通道的F12Y相互作用室的Ml IOP微射流均质机一轮后，产生小于200nm平均直径的颗粒。在20轮后，颗粒的平均直径小于50nm(参见图14)。制剂包含5g CoQIO,3g DMPC和92mL水。本领域普通技术人员可以理解，CoQIO、DMPC和水的量可以根据希望的治疗用途而调节。微射流均质机在25，OOOPSI的最大压力下操作。在某些实施方案中，优选的是添加分散稳定剂和调理素作用缩减剂中的至少一种。在某些实施方案中，胶体颗粒使用分散稳定剂和调理素作用缩减剂两者来制备。优选的分散稳定剂包括聚乙氧基化的(即聚乙二醇化的)蓖麻油(Cremophor EL)、聚乙氧基化的氢化蓖麻油(Cremophor RH 40)、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(聚乙二醇维生素E、维生素E TPGS)、聚山梨醇酯(Tweens )、山梨聚糖脂肪酸酯(Spans )、胆汁酸和胆汁酸盐及DMPC，而优选的调理素作用缩减剂包括各种链长的聚乙二醇、多糖、其它含PEG的共聚物、poloxamine或泊洛沙姆如泊洛沙姆188。在某些实施方案中，肝素也构成合适的调理素作用缩减剂。泊洛沙姆提供了亲水表面以在施用后降低颗粒调理素作用。泊洛沙姆也起到颗粒表面改性剂的作用以添加大体积链而通过空间相互作用降低调理素作用。泊洛沙姆188 (Pluronic F68，Lutrol F68)大约在中央嵌段具有28个PPG单元和在末端嵌段具有79个PEG单元。疏水的中央嵌段将分子锚定至颗粒上，且PEG末端嵌段从颗粒延伸。调理素作用通过PEG链的亲水性和通过链的空间(空间填充)效应(即蛋白质不能达到表面)而降低。通过本文中进一步描述的方法，本发明提供了适合静脉内施用于受试者的治疗制齐U。该治疗制剂包含水性溶液。在本发明的某些实施方案中，水性溶液是水。该水性溶液可以起到胶体体系的分散介质或用于肠胃外施用和胶体颗粒递送的制剂介质中的任一种或这两者的作用。作为分散介质，水性溶液可以包含其它水溶性的或水可分散的稳定剂，等渗剂如甘油或木糖醇，冻干保护剂如蔗糖、葡萄糖、海藻糖等，电解质，缓 冲剂，抗絮凝剂如柠檬酸钠、焦磷酸钠或十二烷基硫酸钠或防腐剂。冻干保护剂包括，但不限于，由糖、多元醇(例如，糖醇)和氨基酸组成的组。优选的冻干保护剂包括糖如蔗糖、海藻糖和葡萄糖。其它合适的糖包括乳糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、神经氨酸、氨基糖(如葡糖胺、半乳糖胺、N-甲基葡糖胺(“甲葡胺”))、多元醇(如甘露醇和山梨糖醇)及氨基酸(如精氨酸和甘氨酸)。作为制剂介质，水性溶液可以包括Hank’ s溶液、林格氏液、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、生理盐水缓冲液或其它合适的盐或组合以获得用于肠胃外递送制剂的适宜pH和摩尔渗透压浓度。水性溶液可以包含提高溶液的粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。本发明的治疗制剂包含疏水的或另外地水溶性差的活性剂。疏水活性剂分散于水性溶液中从而形成其中疏水活性剂的纳米分散体颗粒被分散稳定剂覆盖或包装或环绕的胶体状分散体，以形成活性剂(例如，CoQlO)颗粒的纳米分散体。纳米分散的活性剂(例如，CoQlO)颗粒具有由所述稳定剂包围的疏水活性剂形成的核心。类似地，在某些方面中，稳定剂是同时具有亲水性和疏水性部分的磷脂。磷脂在均质化时形成脂质体或其它纳米颗粒。在某些方面中，这些脂质体是双层的单层脂质体，而在其它方面中，脂质体是双层的复层脂质体。分散的活性剂(例如，CoQlO)颗粒分散于由磷脂形成的脂质体的双层结构的亲脂性部分中。在其它的某些方面中，脂质体的核心，如活性剂(例如，CoQlO)颗粒的纳米分散体的核心由疏水活性剂形成，而外层由磷脂的双层结构形成。在某些实施方案中，胶体状分散体通过冻干过程处理，从而纳米颗粒分散体转化成干粉。在本发明的某些实施方案中，疏水活性剂是辅酶QlO (CoQIO)。辅酶QlO，在本文中也称为CoQIO，也以泛醌或泛癸利酮为人所知。CoQlO是本领域公知的且在国际公开No. WO2005/069916中进一步描述，其全部公开内容通过引用并入本文。CoQlO是存在于真核细胞的线粒体电子传递系统中的一系列聚异戊二烯基2，3_ 二甲氧基-5-甲基苯醌(泛醌)之一。人体细胞专门地产生CoQlO且其存在于细胞中和所有人体细胞的线粒体膜中，在具有高能量需求的器官如肝脏和心脏中以最高水平存在。CoQlO的身体池(body pool)据估计为约2克，其中超过50%是内源的。每天需要大约O. 5克的CoQlO来自于饮食或生物合成。CoQlO以吨的数量由全世界的补充剂市场产生出来且可以从Kaneka(具有位于帕萨迪纳，德克萨斯的工厂)和Takasagoshi,日本获得。CoQlO在人体中的组织分布和氧化还原状态已经被表征。典型地，具有高能量需求或代谢活性的组织如心脏、肾脏、肝脏和肌肉具有相对高的CoQlO浓度。血浆中的大部分CoQlO作为还原的泛醇存在。组织中CoQlO的主要部分作为氢醌或泛醇以还原形式存在。例外的是脑和肺。氧化状态推测是组织中氧化应激增加的反映。更具体地，在心脏、肾脏、肝脏、肌肉、肠和血液(血浆)中，分别约61%、75%、95%、65%、95%和96%的CoQlO是还
原形式。CoQlO 是高度亲脂的且很大程度上是不溶于水的。由于其在水中的不溶性、在脂质中的有限溶解性和相对大的分子量，口服施用CoQlO的吸收效率是差的。Bhagavan等Free Rad. Res. 40 :445-453(2006))报道，在大鼠中，仅约2_3%的口服施用的CoQlO被吸收且在肠的吸收过程中或者在肠吸收之后CoQlO被还原成泛醇。在Matthews等进行的研究(Proc. Natl. Acad. Sci. USA95 :8892-8897(1998))中，发现 CoQlO 摄取在一些组织中是年龄依赖的。例如，在幼年大鼠中，血浆、肝和脾浓度在给药四天后提高，但在心脏和肾中没有观察到提高。类似地，在1-2月大的动物中口服施用不提高脑中的CoQlO浓度。但是，CoQlO施用于12个月大和24个月大的大鼠导致CoQlO在脑组织中以氧化和还原形式蓄积。有趣的是，在局部缺血-再灌注损伤后，CoQlO的产生在幼年大鼠而不在老年大鼠中受到刺激。在本发明的一个实施方案中，疏水活性剂是CoQ10、CoQ10的代谢物、CoQlO的结构块、CoQlO的类似物或CoQlO的衍生物。CoQlO的类似物包括不具有或具有至少一个异戊二烯重复单元的类似物。CoQlO具有以下结构
O
3 T TV π
OCH,
L3Jx其中X是10。在本发明中，CoQlO可以包括CoQlO的衍生物，其中X代表4-10个的多个异戊二烯单元，或6-10个的多个异戊二烯单元，或8-10个的多个异戊二烯单元，或9-10个异戊二烯单元。CoQlO包括完全氧化的形式(也称作泛醌)、部分氧化的形式(也称作半醌或泛半醌)或者完全还原的形式(也称作泛醇)，或者它们的任何混合物或组合。CoQlO的结构块包括CoQlO的任何元件或合成前体，优选生物相关前体。因此，CoQlO的结构块包括，但不限于，苯丙氨酸、酪氨酸、4-羟基苯基丙酮酸、苯基乙酸、3-甲氧基-4-羟基扁桃酸、香草酸、4-羟基苯甲酸、甲羟戊酸、法呢基、2，3-二甲氧基-5-甲基-P-苯醌以及对应的酸或其离子。实验数据表明，CoQlO生物合成的结构块，如用于苯醌环生物合成的前体及用于类异戊二烯重复单元生物合成的那些和它们与苯醌环的连接物，可以单独地施用或组合地施用于靶细胞以调节细胞凋亡抑制剂Bcl-2的表达和/或细胞凋亡促进剂半胱天冬酶-3的表达。参见，例如，美国专利申请系列号12/778，094和本文中提供的实施例。CoQlO的代谢物包括任何已知的CoQlO的代谢物。参见，例如，Turunen, M.等，Biochemica et Biophysica Acta 1660 :171-199 (2004),其全部内容通过引用并入本文。主要代谢物已经确认为具有带缩短到5-7个原子的侧链的芳香环。这种代谢物显示如下。该代谢物可以任选地在碳4或碳I处磷酸化。


本文公开了适于肠胃外施用特定疏水活性剂如辅酶Q10的制剂。还公开了其制备方法和使用该制剂治疗肿瘤疾病的方法。制剂包含水性溶液、分散形成颗粒的胶体状纳米分散体的疏水活性剂及分散稳定剂和调理素作