超临界二氧化碳制备辅酶q10脂质体的方法[0005]本发明的目的在于针对现有辅酶QlO脂质体制备方法中存在的有毒有机溶剂残留，粒度单分散性不强，脂质体稳定性较差等缺陷，提供一种超临界二氧化碳制备无有毒溶剂残留，产物单分散性好，稳定性好辅酶QlO脂质体的方法。[0006]一种超临界二氧化碳制备辅酶QlO纳米脂质体的方法，其特征在于，具体步骤如下: (1)将磷脂酰胆碱、胆固醇及辅酶QlO加入无水乙醇中，搅拌使其充分溶解并制备成溶液，放入超声波震荡器中5分钟，混合均匀后放入冰箱中待用； (2)将步骤(1)制得的溶液置入超临界反应釜中，打开二氧化碳钢瓶，二氧化碳气体经冷机冷却成液体后，由高压泵加压后进入反应釜中，控制压力和温度，并保压一定时间；(3)将上述超临界溶液通过喷嘴快速喷射至磷酸缓冲溶液中，经分散并沉析，即可得到辅酶QlO纳米脂质体混悬液； (4)收集上述辅酶QlO纳米混悬液，即为本发明所述辅酶QlO纳米脂质体。[0007]所述辅酶QlO为脂溶性辅酶QlO。[0008]所述磷脂酰胆碱与胆固醇的质量比为30:1— 1:1。
[0009]所述磷脂酰胆碱和胆固醇总量与辅酶QlO的质量比为50:1—5:1。
[0010]步骤(2)所述压力为15MPa — 40MPa.步骤(2)所述温度为313K—343K。
[0011]步骤(2)所述时间为20— 60分钟。
[0012]步骤(1)所述无水乙醇的用量以在二氧化碳中的摩尔分数计为5% — 30%。
[0013]所述磷酸缓冲溶液浓度为0.01Mol/L, PH值为7.2。
[0014]所述喷嘴直径为100— 500 μ m。
[0015]采用本发明所述方法制备的辅酶QlO纳米脂质体,脂质体粒径通常在60nm-150nm之间，数均粒径约为lOOnm，粒径分布窄，单分散性很好，且包封率能高达75%以上。
[0016]与传统制备脂质体 的方法相比，本发明方法的优势主要体现在以下几个方面:
1)环境友好，绿色，无毒，价廉；
2)流程简单，粒径及包封率易于控制；
3)在现行药品生产管理规范(CGMP)条件下有可能实现脂质体的工业化；
4)制备的脂质体粒径分布均匀，单分散性好，稳定性高。
[0017]超临界二氧化碳是一种无毒、惰性且对环境无害的反应介质，且在制备结束后易于与产物分离。随着超临界二氧化碳流体技术的不断发展，其渐渐被应用于脂质体的制备中。因此，采用超临界二氧化碳法制备辅酶QlO脂质体，制备过程不使用有毒有机溶剂，所制备的辅酶QlO脂质体粒径均一，稳定性好，确保了脂质体的安全性，具有技术与应用的新颖性和创造性。

[0018]下面通过实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明的范围。
[0019]实施例1:
按照配方精确称取一定量磷脂、胆固醇及辅酶QlO(磷脂与胆固醇的质量比为3:1，膜材与辅酶QlO的质量比为20:1)，将其加入一定量无水乙醇中(质量分数为15%)，搅拌使其充分溶解并制备成溶液，放入超声波震荡器中5分钟，混合均匀后放入冰箱中待用。将上述溶液置入超临界反应釜中，打开二氧化碳钢瓶，二氧化碳气体经冷机冷却成液体后，由高压泵加压后进入反应釜中。控制一定的压力(20MPa)和温度(323K)，并保压一定时间(40min)；将上述超临界溶液通过喷嘴(直径为500 μ m)快速喷射至PBS缓冲溶液中，经分散并沉析，即可得到数均粒径为99nm，包封率约为75%的辅酶QlO纳米脂质体混悬液。
[0020]实施例2:
按照配方精确称取一定量磷脂、胆固醇及辅酶QlO (磷脂与胆固醇的质量比为10:1，膜材与辅酶QlO的质量比为30:1)，将其加入一定量无水乙醇中(质量分数为10%)，搅拌使其充分溶解并制备成溶液，放入超声波震荡器中5分钟，混合均匀后放入冰箱中待用。将上述溶液置入超临界反应釜中，打开二氧化碳钢瓶，二氧化碳气体经冷机冷却成液体后，由高压泵加压后进入反应釜中。控制一定的压力(20MPa)和温度(333K)，并保压一定时间(30min);将上述超临界溶液通过喷嘴(直径为250 μ m)快速喷射至PBS缓冲溶液中，经分散并沉析，即可得到数均粒径为113nm，包封率约为82%的辅酶QlO纳米脂质体混悬液。
[0021]实施例3:
按照配方精确称取一定量磷脂、胆固醇及辅酶QlO(磷脂与胆固醇的质量比为5:1，膜材与辅酶QlO的质量比为10:1)，将其加入一定量无水乙醇中(质量分数为20%)，搅拌使其充分溶解并制备成溶液，放入超声波震荡器中5分钟，混合均匀后放入冰箱中待用。将上述溶液置入超临界反应釜中，打开二氧化碳钢瓶，二氧化碳气体经冷机冷却成液体后，由高压泵加压后进入反应釜中。控制一定的压力(25MPa)和温度(328K)，并保压一定时间(50min)；将上述超临界溶液通过喷嘴(直径为170 μ m)快速喷射至PBS缓冲溶液中，经分散并沉析，即可得到数均粒径为105nm，包封率约为73%的辅酶QlO纳米脂质体混悬液。
[0022]实施例4:
按照配方精确称取一定量磷脂、胆固醇及辅酶QlO(磷脂与胆固醇的质量比为3:1，膜材与辅酶QlO的质量比为30:1)，将其加入一定量无水乙醇中(质量分数为15%)，搅拌使其充分溶解并制备成溶液，放入超声波震荡器中5分钟，混合均匀后放入冰箱中待用。将上述溶液置入超临界反应釜中，打开二氧化碳钢瓶，二氧化碳气体经冷机冷却成液体后，由高压泵加压后进入反应釜中。控制一定的压力(15MPa)和温度(318K)，并保压一定时间(30min)；将上述超临界溶液通过喷嘴(直径为500 μ m)快速喷射至PBS缓冲溶液中，经分散并沉析，即可得到数均粒径为 123nm，包封率约为78%的辅酶QlO纳米脂质体混悬液。