专利名称：使用mek抑制剂治疗慢性疼痛的方法背景本发明涉及使用MEK抑制剂治疗慢性疼痛的方法。慢性疼痛包括神经病性疼痛和慢性炎性疼痛。神经路径中无论何处的异常都会破坏神经信号，这又依次反常地反映在大脑中，引起神经病性疼痛。神经病性疼痛可以是例如重度疼痛、烧灼感、或对碰触高度敏感。与神经病性疼痛有关的疾病或病况非限制性地包括糖尿病性神经病、灼痛、神经丛撕脱、神经瘤、结节性脉管炎、挤压伤、病毒感染(例如疱疹病毒感染或HIV)、压缩损伤、组织损伤、从外周到中枢神经系统的神经损伤、截肢术、甲状腺机能减退、尿毒症、慢性酒精中毒、手术后疼痛、关节炎、背痛和缺乏维生素。感染诸如带状疱疹(shingles)可引起神经炎症并产生带状疱疹后神经痛，这是局限于病毒感染区域的一种慢性烧灼痛。痛觉过敏是已经有害的刺激变得更加疼痛，和先前无害的刺激(诸如接触衣服或吹微风)变得疼痛时的异常性疼痛。反射交感性营养不良伴有肿胀和出汗或局部血流变化、组织萎缩或骨质疏松。灼痛，包括严重的燃烧般疼痛和肿胀、出汗以及血流变化，可在损伤或主神经诸如坐骨神经疾病后出现。有些类型的慢性背下部疼痛可具有神经病性成分(例如坐骨神经痛、脊髓灰质炎后的疼痛和CPRM)。神经病性疼痛还可由癌症或化疗引起。神经病性疼痛目前是用抗惊厥药诸如卡马西平和抗抑郁药诸如阿米替林进行治疗。NSAIDS和阿片样物质通常只有很小的作用(Fields等，1994，痛疼的教科书(Textbook of Pain)，991-996页(出版Churchill Livingstone)，James&Page，1994，美国儿科医学会杂志(J.Am.Pediatr.Med.Assoc)，8439-447，Galer，1995，神经学(Neurology)45 S17-S25)。已用加巴喷丁进行治疗的神经病性疾病包括带状疱疹后神经痛、脊髓灰质炎后、CPRM、与HIV有关的神经病、三叉神经痛和反射交感性营养不良(RSD)。抗炎药普遍功效弱提示将慢性疼痛的机理与痛觉过敏区分开。发明概述本发明涉及治疗慢性疼痛的方法，该方法包括对需要这种治疗的病人给药包含MEK抑制剂的组合物的步骤。慢性疼痛包括神经病性疼痛、特发性疼痛以及与缺乏维生素、尿毒症、甲状腺机能减退、手术后疼痛、关节炎、背痛和慢性酒精中毒有关的疼痛。本发明还涉及配制后用于治疗慢性疼痛的所公开的化合物。这样一种组合物可包括具有国际申请日为1998年6月24的专利申请PCT/US98/13106和国际申请日为1998年6月24日的PCT/US98/13105中所公开的结构的一种或多种MEK抑制剂化合物。MEK抑制剂的实例包括4-溴和4-碘苯氨基苯氧肟酸衍生物，它们是激酶抑制剂，因此可用于治疗增殖性疾病诸如癌症、牛皮癣和再狭窄。这些化合物由式I定义 其中R1是氢、羟基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、卤素、三氟甲基或CN；R2是氢；R3、R4和R5独立地为氢、羟基、卤素、三氟甲基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、硝基、CN或(O或NH)m-(CH2)n-R9，其中R9是氢、羟基、CO2H或NR10R11；n是0-4；m是0或1；R10和R11独立地为氢或C1-C8烷基，或与它们所连接的氮合在一起形成3-10元环，所述环可任选地含有一个、两个或三个选自O、S、NH或N-C1-C8烷基的其它杂原子；R6是氢、C1-C8烷基、 芳基、芳烷基或C3-C10环烷基；R7是氢、C1-C8烷基、C2-C8链烯基、C2-C8炔基、C3-C10(环烷基或可任选地含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基)；或者R6和R7与它们所连接的N-O合在一起形成5-10元环，可任选地含有一个、两个或三个选自O、S或NR10R11的其它杂原子；其中，前述的任何一个烷基、链烯基和炔基都可以是未取代的或被环烷基(或可任选地含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基)、芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代。优选的化合物具有式II结构 其中R1、R3、R4、R5、R6和R7如上定义。特别优选其中R1是甲基或卤素而R3、R4和R5是卤素如氟或溴的化合物。另一组优选化合物具有式III结构 其中R1、R3、R4、R5和R7如上定义。
首选的化合物是其中R1是甲基或卤素如F、Br、Cl和I，R3是氢或卤素如氟，R4是卤素如氟，R5是氢或卤素如氟或溴的那些化合物。这类化合物具有下式结构 本发明提供的具体化合物包括以下这些3，4，5-三氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-氯-3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；5-氯-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4，5-三氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-羟基-4-甲基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-3，4，5-三氟-N-羟基-苯甲酰胺；
2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-5-氯-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)苯甲酰胺；5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲酰胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-N-乙氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-乙氧基-4-硝基-苯甲酰胺；
2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-4-硝基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-4-氟-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-4-氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-N-异丙基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-N-甲基-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-5-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺(HCl盐)；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-4-氟-N-(四氢-吡喃-2-基氧基)苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丁基甲氧基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-(2-二甲氨基-乙氧基)-3，4-二氟-苯甲酰胺一盐酸盐；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；
3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；5-溴-N-环己基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环戊基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；和5-溴-N-环丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺。
本发明的其他方面规定在下面的说明书、实施例和中。
MEK抑制剂的其他实例包括4-溴和4-碘苯氨基苯甲酸衍生物，它们是选择性MEK激酶抑制剂。这类化合物由式I(A)定义 其中R1是氢、羟基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、卤素、三氟甲基或CN；R2是氢；R3、R4和R5独立地为氢、羟基、卤素、三氟甲基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、硝基、CN或-(O或NH)m-(CH2)n-R9，其中R9是氢、羟基、CO2H或NR10R11；n是0-4；m是0或1；R10和R11独立地为氢或C1-C8烷基，或与它们所连接的氮合在一起形成3-10元环，所述环可任选地含有一个、两个或三个选自O、S、NH或N-C1-C8烷基的其它杂原子；Z是COOR7、四唑基、CONR6R7、CONHNR10R11或CH2OR7；R6和R7独立地为氢、C1-C8烷基、C2-C8链烯基、C2-C8炔基、OC-C1-C8烷基、芳基、杂芳基、C3-C10环烷基或C3-C10(可任选地含有一个、两个或三个选自O、S、NH或N烷基的杂原子的环烷基)；或者R6和R7与它们所连接的氮合在一起形成3-10元环，所述环可任选地含有1、2或3个选自O、S、NH或N烷基的其它杂原子；其中，前述的任何一个烷基、链烯基和炔基都可以是未取代的或被卤素、羟基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、环烷基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代，以及其可药用盐。
优选的化合物具有式II(A)结构 其中R1、R3、R4、R5、R6和R7如上定义。特别优选其中R1是甲基或卤素而R3、R4和R5是卤素如氟或溴的化合物。
当R7为氢时，式II(A)化合物是羧酸，当R7不为氢时，式II(A)化合物是酯。与酸在物理和生物学性能方面类似的化合物是式IIa的四唑基衍生物 另一组优选化合物是式III(A)的酰胺 和式IIIa的酰肼 本发明的苄醇具有式IV(A)结构 在这组化合物中，首选的化合物是其中R1是甲基，R3是氢或卤素如氟，R4是卤素如氟，R5是氢或卤素如氟、溴或氯的那些化合物。典型化合物具有下式结构 本发明的优选实施方案包括使用一种或多种下列化合物的方法(a)所述MEK抑制剂具有选自下列成员的结构2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺，钾盐；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丁基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-4-氟-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-N-甲氧基-苯甲酰胺；3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺，盐酸盐；5-溴-3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-(2-羟基-乙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-N-(2-羟基-乙氧基)-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-(3-羟基-丙氧基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4，5-三氟-N-(3-羟基-丙氧基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4，5-三氟-N-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基]-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-(3-羟基-丙氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-N-(3-羟基-丙氧基)-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；3，4，5-三氟-N-(3-羟基-丙氧基)-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；3，4，5-三氟-N-(2-羟基-乙氧基)-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-(2-羟基-乙氧基)-苯甲酰胺；和3，4-二氟-N-(2-羟基-乙氧基)-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；(b)所述MEK抑制剂具有选自下列成员的结构2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-N-(2-羟基-乙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-N-(2-羟基-乙氧基)-2--(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酰胺；(c)所述MEK抑制剂具有选自下列成员的结构2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-苯甲酸；3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酸；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-苯甲酸；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酸；
5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酸；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-5-硝基-苯甲酸；2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4，5-三氟-苯甲酸；7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯氨基)1H-苯并咪唑-5-羧酸环丙基甲氧基-酰胺；5-氯-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯氨基)-苯甲酸；和5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-苯甲酸；和(d)所述MEK抑制剂具有选自下列成员的结构2-(2-氯-4-碘-苯氨基)-3，4-二氟-苯甲酸；和7-氟-6-(4-碘-2-甲基-苯氨基)1H-苯并咪唑-5-羧酸环丙基甲氧基-酰胺。
本发明还提供了适于治疗慢性疼痛的药物制剂，所述制剂包含所公开的化合物再加上可药用赋形剂、稀释剂或载体。优选的制剂包括前述任何一种优选化合物加上赋形剂、稀释剂或载体。
所公开的化合物是强的并且是选择性的激酶、特别是MEK1和MEK2的抑制剂。
附图的简要描述

图1柱形图描绘了作为以天数表示的时间的函数的以克表示的足爪缩回阈(PWT)。空白的、带交叉阴影线的和带单一阴影线的条柱分别是赋形剂、PD 198306和pregabalin。箭头指示给药的时间(30mg/kg，口服)。
图2柱形图描绘了作为以天数表示的时间的函数的用von Frey发丝引起足爪缩回所需的以克表示的力。基线(BL)的测量在治疗前进行。动物接受单次口服给药PD 198306(3-30mg/kg)或pregabalin(30mg/kg)，治疗1小时后再次评定缩回阈。治疗每天重复两次，进行两天。结果表示为中值±第一和第三四分值。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表示与用赋形剂处理的动物相比有显著差异(Mann-Whitney t检验；n＝7-8)。
图3柱形图描绘了作为以天数表示的时间的函数的用von Frey发丝引起足爪缩回所需的以克表示的力。基线(BL)的测量在治疗前进行。动物接受单次口服给药PD 198306(3-30mg/kg)或pregabalin(30mg/kg)，治疗1小时后再次评定缩回阈。治疗每天重复两次，进行两天。结果表示为中值±第一和第三四分值。**P＜0.01表示与用赋形剂处理的动物相比有显著差异(Mann-Whitney t检验；n＝6)。
图4柱形图描绘了作为以天数表示的时间的函数的用yon Frey发丝引起足爪缩回所需的以克表示的力。基线(BL)的测量在治疗前进行。动物接受单次i.t.给药PD 198306(1-30μg/10μl)或pregabalin(100μg/10μl)，治疗30分钟、1小时和2小时后再次评定缩回阈。结果表示为中值±第一和第三四分值。*P＜0.05，***P＜0.001表示与用赋形剂处理的动物相比有显著差异(Mann-Whitney t检验；n＝7-9)。
图5柱形图描绘了作为以天数表示的时间的函数的用von Frey发丝引起足爪缩回所需的以克表示的力。基线(BL)的测量在治疗前进行。动物接受单次i.t.给药PD 198306(1-30μg/10μl)或pregabalin(100μg/10μl)，治疗30分钟、1小时和2小时后再次评定缩回阈。结果表示为中值±第一和第三四分值。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表示与用赋形剂处理的动物相比有显著差异(Mann-Whitney t检验；n＝6-8)。
图6柱形图描绘了作为以天数表示的时间的函数的用von Frey发丝引起足爪缩回所需的以克表示的力。动物接受单次跖内给药(i.pl.)PD 198306(3mg/100μl)或鞘内注射PD198306(30μg/10μl)，治疗1小时后再次评定缩回阈。结果表示为中值±第一和第三四分值。**P＜0.01表示与用赋形剂处理的动物相比有显著差异(Mann-Whitney t检验；n＝6-9)。
图7柱形图描绘了作为以天数表示的时间的函数的用von Frey发丝引起足爪缩回所需的以克表示的力。动物接受单次跖内给药(i.pl.)PD 198306(3mg/100μl)或鞘内注射PD198306(30μg/10μl)，治疗1小时后再次评定缩回阈。结果表示为中值±第一和第三四分值。**P＜0.01表示与用赋形剂处理的动物相比有显著差异(Mann-Whitney t检验；n＝6)。
图8柱形图描绘了用von Frey发丝引起足爪缩回所需的以克表示的力。基线(BL)的测量在治疗前进行。动物接受单次i.t.给药PD219622、PD297447、PD184352或PD254552(30μg/10μl)或pregabalin(100μg/10μl)，治疗30分钟、1小时和2小时后再次评定缩回阈。结果表示为中值±第一和第三四分值。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表示与用赋形剂处理的动物相比有显著差异(Mann-Whitney t检验；n＝7-8)。
发明详述本文中公开的化合物是有药物活性的，例如，它们能抑制MEK。MEK酶是双重特异性激酶，与例如免疫调制、炎症和增殖性疾病如癌症和再狭窄以及疼痛有关。
增殖性疾病是由细胞内信号系统或某些蛋白质的信号转导机制的缺陷引起的。缺陷包括信号级联中一种或多种信号蛋白的内在活性或细胞浓度发生了改变。细胞可产生与其自身受体结合的生长因子，导致形成自分泌环路，不断地刺激增殖。细胞内信号蛋白的突变或过度表达可导致在细胞内产生假的致有丝分裂信号。最常见的一些突变发生在编码被称为Ras的蛋白质的基因上，该蛋白是一种G-蛋白，当与GTP结合时被激活，与GDP结合时则失活。上述生长因子受体以及许多其他致有丝分裂受体，当被激活时，可导致Ras从GDP-结合状态转变为GTP-结合状态。该信号对于大多数细胞类型的增殖来说是绝对必要的。该信号系统中的缺陷、尤其是Ras-GTP复合物的失活中的缺陷在癌症中很常见，并导致Ras下的信号级联长期被激活。
激活的Ras又可引起丝氨酸/苏氨酸激酶级联的激活。已知在其自身的激活中需要活性Ras-GTP的激酶组之一是Raf家族。这些激酶依次激活MEK(例如MEK1和MEK2)，MEK又再激活MAP激酶ERK(ERK1和ERK2)。MAP激酶被促分裂原激活似乎是增殖所必需的；该激酶的组成性激活足以导致细胞转化。下游Ras信号的阻断，例如通过使用显性失活的Raf-1蛋白质引起的，可完全抑制致有丝分裂作用，无论该致有丝分裂作用是由细胞表面受体引起的还是由致癌的Ras突变体引起的。虽然Ras本身不是蛋白质激酶，但它参与Raf和其他激酶的激活，最有可能是通过磷酸化机制。一旦被激活，Raf和其他激酶就将MEK在两个紧邻的丝氨酸残基(对于MEK-1来说是S218和S222)上磷酸化，这对于MEK激酶的激活是必需的。MEK接着将MAP激酶在只隔一个氨基酸的酪氨酸残基Y185和苏氨酸残基T183上磷酸化。
这种双重磷酸化作用将MAP激酶活化了至少100倍。激活的MAP激酶然后可催化大量蛋白质、包括多种转录因子和其他激酶的磷酸化。在这些MAP激酶磷酸化作用中，有许多是对靶蛋白如激酶、转录因子或另一种细胞蛋白的促分裂性激活。除了Raf-1和MEKK以外，其他激酶也可激活MEK，且MEK本身似乎就是一种信号整合激酶。就目前所知，MEK对MAP激酶的磷酸化是高度特异性的。事实上，迄今还未发现除MAP激酶ERK以外的其他MEK底物，且MEK不会磷酸化基于MAP激酶磷酸化序列的肽，甚至不会磷酸化变性的MAP激酶。MEK还似乎在磷酸化MAP激酶之前就与其紧密关联，表明MEK对MAP激酶的磷酸化作用可能事先需要这两种蛋白之间强有力的相互作用。MEK的这种需要和不寻常的特异性都表明在其作用机制上与其他蛋白激酶有很大的差异，因此可能发现MEK的选择性抑制剂，该抑制剂可能通过变构机制而不是通过常见的阻断ATP结合位点来起作用。
MEK抑制剂PD 198306的作用已通过评定用von Frey发丝引起的静态异常性疼痛而用两种神经病性疼痛动物模型进行了研究。
在坐骨神经的慢性压缩损伤(CCI)模型中，口服给药PD198306(3-30mg/kg)没有作用。不过，重复给药(2天给药3剂)后，在糖尿病性神经病模型(链佐星)中有短暂的作用。这可能是由这些动物的糖尿病状况导致的血脑屏障紊乱引起的，于是产生了化合物的中枢作用。在神经病性疼痛的链佐星和CCI模型中，鞘内给药PD198306(1-30μg)都剂量依赖性地阻断了静态异常性疼痛，最小有效剂量(MED)分别是3μg和10μg。所用的最高剂量(30μg)完全阻断了静态异常性疼痛的维持，最长达1小时。以比鞘内给药时显示有效的剂量(30μg/10μl)高100倍的剂量跖内给药PD198306(3mg/100μl)在两种神经病性疼痛模型中都对静态异常性疼痛不起作用。该发现证实了全身性给药后所见到的作用缺乏，并提示了化合物的中枢作用位点。
该研究结果支持了将MEK抑制剂用作慢性疼痛的可能的新的治疗工具。对于未来的脑渗透剂MEK抑制剂的潜在的副作用的研究，尤其是与记忆力有关的副作用的研究，将进一步支持这类新颖的化合物在疼痛的治疗中的治疗窗(window)。
A.术语某些术语如下并借助它们在整个本说明书中的使用来定义。
烷基包括具有自由价的脂族基团(即含有氢和碳原子的烃基或烃原子团结构)。烷基应理解为包括直链和支链结构。实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、2，3-二甲基丙基、己基、2，3-二甲基己基、1，1-二甲基戊基、庚基和辛基。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
烷基可以被1、2、3或更多个取代基取代，这些取代基独立地选自卤素(氟、氯、溴或碘)、羟基、氨基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、环烷基、芳基、芳氧基、芳基烷氧基、杂环基和(杂环基)氧基。具体实例包括氟甲基、羟乙基、2，3-二羟乙基、(2-或3-呋喃基)甲基、环丙基甲基、苄氧基乙基、(3-吡啶基)甲基、(2-或3-呋喃基)甲基、(2-噻吩基)乙基、羟丙基、氨基环己基、2-二甲氨基丁基、甲氧基甲基、N-吡啶基乙基、二乙氨基乙基和环丁基甲基。
链烯基与烷基类似，但具有至少一个双键(两个相邻的sp2碳原子)。根据双键和取代基(如果有的话)的位置，双键的几何学可以是entgegen(E)或zusammen(Z)构型、顺或反式。类似地，炔基具有至少一个三键(两个相邻的sp碳原子)。不饱和链烯基或炔基可以分别具有一个或多个双键或三键，或其混合物；象烷基一样，不饱和基可以是直链或支链的，并且它们可以如上文中对烷基所述和在整个说明书中通过实施例所述的那样被取代。链烯基、炔基和取代形式的链烯基、炔基的实例包括顺-2-丁烯基、反-2-丁烯基、3-丁炔基、3-苯基-2-丙炔基、3-(2’-氟苯基)-2-丙炔基、3-甲基(5-苯基)-4-戊炔基、2-羟基-2-丙炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-丙烯基、4-羟基-3-丁炔基、3-(3-氟苯基)-2-丙炔基和2-甲基-2-丙烯基。在式(I)中，链烯基和炔基例如可以是C2-4或C2-8的，优选是C3-4或C3-8的。
取代烃基的更普遍形式包括羟基烷基、羟基烯基、羟基炔基、羟基环烷基、羟基芳基、以及相应的前缀形式氨基-、卤素-(例如氟-、氯-或溴-)、硝基-、烷基-、苯基-、环烷基-等等，或这些取代基的组合。因此，根据式(I)，取代的烷基包括羟基烷基、氨基烷基、硝基烷基、卤代烷基、烷基烷基(支链烷基，如甲基戊基)、(环烷基)烷基、苯基烷基、烷氧基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、芳基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、(杂环基)烷基和(杂环基)氧基烷基。R1于是包括羟基烷基、羟基烯基、羟基炔基、羟基环烷基、羟基芳基、氨基烷基、烷基烯基、氨基炔基、氨基环烷基、氨基芳基、烷基烯基、(烷芳基)烷基、(卤代芳基)烷基、(羟基芳基)炔基，等等。类似地，RA包括羟基烷基和氨基芳基，而RB包括羟基烷基、氨基烷基和羟基烷基(杂环基)烷基。
包括但不限于杂芳基的杂环基包括呋喃基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、咪唑基、1，3，4-三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基和它们的非芳族相应物。杂环基的其他实例包括哌啶基、喹啉基、异噻唑基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、吡咯烷基、八氢吲哚基、八氢苯并噻吩基和八氢苯并呋喃基。
选择性MEK 1或MEK 2抑制剂是分别抑制MEK 1或MEK 2酶的那些化合物，它们基本上不会抑制其他酶诸如MKK3、PKC、Cdk2A、磷酸化酶激酶、EGF和PDGF受体激酶以及C-src。一般说来，选择性MEK 1或MEK 2抑制剂对于MEK 1或MEK 2具有的IC50至少是其对于上面提到的其他酶的IC50的五十分之一(1/50)。优选地，选择性抑制剂具有的IC50至少是其对上面提到的一种或多种酶的IC50的1/100、更优选是1/500、甚至更优选是1/1000、1/5000或更小。
B.化合物本文中所用的术语“芳基”是指含有5-12个碳原子的单环、二环或三环的芳环部分。典型芳基的实例包括苯基、萘基和芴基。该芳基可以被一个、两个或三个选自氟、氯、溴、碘、烷基、羟基、烷氧基、硝基或氨基的基团所取代。典型的取代芳基包括3-氟苯基、3，5-二甲氧基苯基、4-硝基萘基、2-甲基-4-氯-7-氨基芴基等。
术语“芳氧基”是指通过氧原子键合的芳基，例如苯氧基、3-溴苯氧基、萘氧基和4-甲基-1-芴氧基。
“杂芳基”是指含有4-11个碳原子和一个、两个或三个选自O、S或N的杂原子的单环、二环或三环的芳环部分。其实例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻唑基、呫吨基、吡喃酮基、吲哚基、嘧啶基、1，5-二氮杂萘基、吡啶基和三嗪基。杂芳基可以是未取代的或被一个、两个或三个选自氟、氯、溴、碘、烷基、羟基、烷氧基、硝基或氨基的基团所取代。取代的杂芳基的实例包括氯代吡喃基、甲基噻吩基、氟代吡啶基、氨基-1，4-苯并异噁嗪基、硝基异喹啉基和羟基吲哚基。
杂芳基可以通过氧键合而形成杂芳氧基，例如噻吩氧基、异噻唑基氧基、苯并呋喃基氧基、吡啶氧基和4-甲基异喹啉基氧基。
术语“C1-C8烷基”是指含有1-8个碳原子的直链或支链脂族基团。典型的C1-C8烷基包括甲基、乙基、异丙基、叔丁基、2，3-二甲基己基和1，1-二甲基戊基。该烷基可以是未取代的或被环烷基、含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基、上文所定义的芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代。芳基和芳氧基取代的烷基的实例包括苯基甲基、2-苯基乙基、3-氯苯基甲基、1，1-二甲基-3-(2-硝基苯氧基)丁基和3，4，5-三氟萘基甲基。被杂芳基或杂芳氧基取代的烷基的实例包括噻吩基甲基、2-呋喃基乙基、6-呋喃氧基辛基、4-甲基喹啉氧基甲基和6-异噻唑基己基。环烷基取代的烷基包括环丙基甲基、2-环戊基乙基、2-哌啶-1-基乙基、3-(四氢吡喃-2-基)丙基和环丁基甲基。
“C2-C8链烯基”是指含有一个或多个双键的直链或支链碳链。实例包括丁-2-烯基、2-甲基-丙-2-烯基、1，1-二甲基-己-4-烯基、3-乙基-4-甲基-戊-2-烯基和3-异丙基-戊-4-烯基。该链烯基可以被芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代，例如3-苯基丙-2-烯基、6-噻吩基-己-2-烯基、2-呋喃氧基-丁-2-烯基和4-萘氧基-己-2-烯基。
“C2-C8炔基”是指含有2-8个碳原子和至少一个三键的直链或支链碳链。典型的炔基包括丙-2-炔基、2-甲基-己-5-炔基、3，4-二甲基-己-5-炔基和2-乙基-丁-3-炔基。该炔基可以被芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代，例如4-(2-氟苯基)-丁-3-炔基、3-甲基-5-噻吩基戊-4-炔基、3-苯氧基-己-4-炔基和2-呋喃氧基-3-甲基-己-4-炔基。
链烯基和炔基可以分别含有一个或多个双键或三键，或同时含有双键和三键。例如，同时含有双键和三键的典型基团包括己-2-烯-4-炔基、3-甲基-5-苯基戊-2-烯-4-炔基和3-噻吩氧基-己-3-烯-5-炔基。
术语“C3-C10环烷基”是指含有3-10个碳原子的非芳族环或稠合的环。其实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环辛基、二环庚基、金刚烷基和环己基。该环可以选择性地含有一个选自O、S或NR9的杂原子。这类基团包括四氢呋喃基、四氢吡咯基、八氢苯并呋喃基、八氢吲哚基和八氢苯并噻吩基。
R3、R4和R5可包括由术语(O或NH)m-(CH2)n-R9定义的基团。这类基团的实施是氨基甲基、2-氨基乙基、2-氨基乙氨基、3-氨基丙氧基、N，N-二乙氨基、3-(N-甲基-N-异丙基氨基)-丙氨基、2-(N-乙酰氨基)-乙氧基、4-(N-二甲氨基羰基氨基)-丁氧基和3-(N-环丙基氨基)-丙氧基。
本文中所用的术语“芳基”是指含有5-12个碳原子的单环、二环或三环的芳环部分。典型芳基的实例包括苯基、萘基和芴基。该芳基可以被一个、两个或三个选自氟、氯、溴、碘、烷基、羟基、烷氧基、硝基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基的基团所取代。典型的取代芳基包括3-氟苯基、3，5-二甲氧基苯基、4-硝基萘基、2-甲基-4-氯-7-氨基芴基等。
术语“芳氧基”是指通过氧原子键合的芳基，例如苯氧基、3-溴苯氧基、萘氧基和4-甲基-1-芴氧基。
“杂芳基”是指含有4-11个碳原子和一个、两个或三个选自O、S或N的杂原子的单环、二环或三环的芳环部分。其实例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噻唑基、噁唑基、呫吨基、吡喃酮基、吲哚基、嘧啶基、1，5-二氮杂萘基、吡啶基、苯并咪唑基和三嗪基。杂芳基可以是未取代的或被一个、两个或三个选自氟、氯、溴、碘、烷基、羟基、烷氧基、硝基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基的基团所取代。取代的杂芳基的实例包括氯代吡喃基、甲基噻吩基、氟代吡啶基、氨基-1，4-苯并异噁嗪基、硝基异喹啉基和羟基吲哚基。
杂芳基可以通过氧键合而形成杂芳氧基，例如噻吩氧基、异噻唑基氧基、苯并呋喃基氧基、吡啶氧基和4-甲基异喹啉基氧基。
术语“C1-C8烷基”是指含有1-8个、优选1-4个碳原子的直链和支链脂族基团。典型的C1-C8烷基包括甲基、乙基、异丙基、叔丁基、2，3-二甲基己基和1，1-二甲基戊基。该烷基可以是未取代的或被本文中所定义的卤素、羟基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、环烷基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代。典型的取代烷基包括氯甲基、3-羟基丙基、2-二甲氨基丁基和2-(羟基甲氨基)乙基。芳基和芳氧基取代的烷基的实例包括苯基甲基、2-苯基乙基、3-氯苯基甲基、1，1-二甲基-3-(2-硝基苯氧基)丁基和3，4，5-三氟萘基甲基。被杂芳基或杂芳氧基取代的烷基的实例包括噻吩基甲基、2-呋喃基乙基、6-呋喃氧基辛基、4-甲基喹啉氧基甲基和6-异噻唑基己基。环烷基取代的烷基包括环丙基甲基、2-环己基乙基、哌啶基-2-甲基、2-(哌啶-1-基)乙基、3-(吗啉-4-基)丙基。
“C2-C8链烯基”是指含有一个或多个双键的直链或支链碳链。实例包括丁-2-烯基、2-甲基-丙-2-烯基、1，1-二甲基-己-4-烯基、3-乙基-4-甲基-戊-2-烯基和3-异丙基-戊-4-烯基。该链烯基可以被卤素、羟基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代，例如2-溴乙烯基、3-羟基-2-丁烯基、1-氨基乙烯基、3-苯基丙-2-烯基、6-噻吩基-己-2-烯基、2-呋喃氧基-丁-2-烯基和4-萘氧基-己-2-烯基。
“C2-C8炔基”是指含有2-8个碳原子和至少一个三键的直链或支链碳链。典型的炔基包括丙-2-炔基、2-甲基-己-5-炔基、3，4-二甲基-己-5-炔基和2-乙基-丁-3-炔基。该炔基可以如烷基和链烯基那样，例如被芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代，例如4-(2-氟苯基)-丁-3-炔基、3-甲基-5-噻吩基戊-4-炔基、3-苯氧基-己-4-炔基和2-呋喃氧基-3-甲基-己-4-炔基。
链烯基和炔基可以分别含有一个或多个双键或三键，或同时含有双键和三键。例如，同时含有双键和三键的典型基团包括己-2-烯-4-炔基、3-甲基-5-苯基戊-2-烯-4-炔基和3-噻吩氧基-己-3-烯-5-炔基。
术语“C3-C10环烷基”是指含有3-10个碳原子的非芳族环或稠合的环。其实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环辛基、二环庚基、金刚烷基和环己基。该环可以选择性地含有一个、两个或三个选自O、S或NR9的杂原子。这类基团包括四氢呋喃基、四氢吡咯基、八氢苯并呋喃基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、八氢吲哚基和八氢苯并噻吩基。该环烷基可以被与烷基和链烯基相同的取代基、例如卤素、羟基、芳基和杂芳氧基所取代。实例包括3-羟基环己基、2-氨基环丙基、2-苯基吡咯烷基和3-噻吩基吗啉-1-基。
R6和R7可以与它们所连接的氮合在一起形成3-10元的环，其可含有1、2或3个选自O、S、NH或N烷基的其他杂原子。这类环的实例包括哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、N-甲基哌嗪基、氮杂环丙炔基等。这类环可以被卤素、羟基、烷基、烷氧基、氨基、烷基和二烷基氨基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基所取代。典型实例包括3-羟基-吡咯烷基、2-氟-哌啶基、4-(2-羟乙基)-哌啶基和3-噻吩基吗啉基。
C.合成式I的4-溴和4-碘苯氨基苯氧肟酸衍生物可以从商业上购得的原料采用有机化学领域中的技术人员熟知的合成方法制备。典型的合成方法是将4-溴或4-碘苯胺与在2-位带有离去基团的苯甲酸反应得到苯氨基苯甲酸，然后使该苯甲酸苯氨基衍生物与羟胺衍生物反应。该过程如反应方案1所示。
反应方案1 其中L是离去基团，例如卤素如氟、氯、溴或碘，或活化的羟基如磷酸二乙酯、三甲基甲硅烷氧基、对硝基苯氧基或苯基磺酰氧基。
苯胺衍生物与苯甲酸衍生物的反应通常通过将苯甲酸与等摩尔量或过量的苯胺在惰性有机溶剂如四氢呋喃或甲苯中，在碱如二异丙氨基锂、正丁基锂、氢化钠和氨基钠的存在下混合来完成。该反应通常在约-78℃至约25℃的温度下进行，通常在约2小时到约4天内完成。产物可以通过例如减压蒸发除去溶剂进行分离，如需要，可通过常规方法如层析法、结晶或蒸馏进一步纯化。
然后使苯氨基苯甲酸与羟胺衍生物HNR6OR7在肽偶联剂的存在下反应。可以使用的羟胺衍生物包括甲氧基胺、N-乙基-异丙氧基胺和四氢噁嗪。典型的偶联剂包括2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)、1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)、溴-三(吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)和(苯并三唑基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)。通常将苯氨基苯甲酸和羟基氨基衍生物以约等摩尔量在惰性有机溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿或二甲苯中混合，并加入等摩尔量的偶联剂。如需要，可加入碱如三乙胺或二异丙基乙胺作为酸清除剂。偶联反应通常在约10分钟至2小时后完成，产物很容易通过例如减压蒸除反应溶剂进行分离，并通过常规方法如层析法或用溶剂如丙酮、乙醚或乙醇结晶来纯化产物。
另一种制备本发明化合物的方法包括，首先将苯甲酸转变为异羟肟酸衍生物，然后使该异羟肟酸衍生物与苯胺反应。该合成过程如反应方案2所示。
反应方案2 其中L是离去基团。反应方案2中的这两步反应的一般反应条件与上面的反应方案1中描述的相同。
制备本发明化合物的又一种方法包括使苯氨基苯氧肟酸与成酯基团反应，如反应方案3所示。
反应方案3 其中L是离去基团如卤素，碱是三乙胺或二异丙基胺。
本发明式I化合物的合成通过以下详细的实施例1-102进一步说明。
式I(A)的2-(4-溴和4-碘苯氨基)-苯甲酸衍生物可以从商业上购得的原料采用有机化学领域中的技术人员熟知的和在下面的合成实施例1A-224A中说明的合成方法制备。典型的合成方法是将4-溴或4-碘苯胺与在2-位带有离去基团的苯甲酸反应得到2-(苯氨基)-苯甲酸。该过程如反应方案1(A)所示。
反应方案1(A) 其中L是离去基团，例如卤素如氟。
苯胺与苯甲酸衍生物的反应通常通过将苯甲酸与等摩尔量或过量的苯胺在惰性有机溶剂如四氢呋喃或甲苯中，在碱如二异丙氨基锂、正丁基锂、氢化钠、三乙胺和Hunig碱的存在下混合来完成。该反应通常在约-78℃至约100℃的温度下进行，通常在约2小时到约4天内完成。产物可以通过例如减压蒸发除去溶剂进行分离，如需要，可通过常规方法如层析法、结晶或蒸馏进一步纯化。
该2-(苯氨基)-苯甲酸(例如式IA，其中R7是氢)可以与有机或无机碱如吡啶、三乙胺、碳酸钙或氢氧化钠反应生成可药用盐。该游离酸也可与式HOR7的醇(其中R7不是氢，例如是甲基)反应生成相应的酯。苯甲酸与醇的反应可以在偶联剂的存在下进行。典型的偶联剂包括2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)、1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)、溴-三(吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)和(苯并三唑基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)。通常将苯氨基苯甲酸和醇衍生物以约等摩尔量在惰性有机溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿或二甲苯中混合，并加入等摩尔量的偶联剂。如需要，可加入碱如三乙胺或二异丙基乙胺作为酸清除剂。偶联反应通常在约10分钟至2小时后完成，产物很容易通过例如减压蒸除反应溶剂进行分离，并通过常规方法如层析法或用溶剂如丙酮、乙醚或乙醇结晶来纯化产物。
本发明的苯甲酰胺，其中Z是CONR6R7的式I(A)，很容易通过使前述苯甲酸与式HNR6R7的胺反应来制备。该反应通过使约等摩尔量的苯甲酸与胺在惰性有机溶剂中在偶联剂的存在下反应来进行。典型溶剂是氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、苯、甲苯和二甲苯。典型偶联剂包括DCC、EEDQ、PyBrOP和PyBOP。该反应当在约0℃至约60℃的温度下进行时通常在约10分钟至约2小时后完成。产物酰胺很容易通过例如蒸发除去反应溶剂进行分离，进一步的纯化可通过常规方法如层析法、结晶或蒸馏来完成。酰肼(z＝CONHNR10R11)类似地通过将苯甲酸与式H2HNR10R11的肼偶联来制备。
本发明的苄醇，其中Z是CH2OR6而R6是氢的式I(A)化合物，很容易通过相应的苯甲酸按照以下方案的还原来制备 常用的典型还原剂包括硼烷的四氢呋喃溶液。还原通常在惰性有机溶剂如四氢呋喃中进行，并且当在约0℃至约40℃的温度下进行时通常在约2小时至约24小时内完成。
以下详细实施例1A-224A说明了本发明提供的具体化合物。
D.使用所公开的组合物可用于预防和治疗涉及慢性疼痛、包括神经病性疼痛的疾病或病症，如在概述部分提出的那些，也可用于预防和治疗由MEK级联调制的疾病或病症。例如，在一个实施方案中，所公开的方法涉及手术后疼痛、幻肢疼痛、烧伤疼痛、痛风、三叉神经痛、急性疱疹和疱疹后疼痛、灼痛、糖尿病性神经病、神经丛撕脱、神经瘤、脉管炎、挤压伤、压缩损伤、组织损伤、外科手术后疼痛、关节炎疼痛或截肢术。
例如，局部损伤可以用局部或表面给药来治疗。影响整个身体的慢性疼痛，诸如糖尿病性神经病，可以全身性给药(注射或口服)所公开的组合物来治疗。对于限制在身体较低处的慢性疼痛(例如手术后疼痛)的治疗可以中枢给药，例如硬膜外给药。制剂和给药方法可包括使用一种以上MEK抑制剂，或MEK抑制剂与另一种药剂如抗炎剂、镇痛剂、肌肉松弛剂或抗感染剂的联合形式。优选的给药途径是口服、鞘内或硬膜外给药、皮下、静脉内、肌内注射和对于非人哺乳动物的跖内给药，最好是硬膜外给药。
1.剂量根据已知方法，本领域技术人员将能够在考虑了诸如年龄、体重、一般健康状况、需要进行治疗的疼痛的类型和其他药物治疗的存在等因素后确定病人的适宜剂量。一般说来，对于正常体重的成年患者，有效量在0.1至1000mg/kg/天之间，优选在1至300mg/kg体重之间，每日剂量将在10-5000mg之间。可从商业上获得的100mg、200mg、300mg或400mg的胶囊或其他制剂(如液剂和包衣片剂)可以按照所公开的方法给药。
2.制剂剂量单位形式包括片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、含水和不含水口服溶液和悬浮液、和肠胃外溶液，包装在适合于分剂给药的容器内。剂量单位形式还可适于各种给药方法，包括控释制剂，如皮下植入片。给药方法包括口服、直肠、胃肠外(静脉内、肌内、皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(滴剂、散剂、软膏剂、凝胶或膏霜)给药，以及通过吸入给药(口腔或鼻腔喷雾剂)。
胃肠外制剂包括可药用含水或不含水溶液、分散体、悬浮液、乳液和用于制备其的无菌粉末。载体的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇)、植物油和可注射的有机酯如油酸乙酯。流动性可通过使用包衣如卵磷脂、表面活性剂或维持适宜的粒径来保持。用于固体剂型的载体包括(a)填充剂或膨胀剂，(b)粘合剂，(c)湿润剂，(d)崩解剂，(e)溶液阻聚剂，(f)吸收促进剂，(g)吸附剂，(h)润滑剂，(i)缓冲剂，和(j)推进剂。
组合物还可含有佐剂如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂；抗微生物剂如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚和山梨酸；等渗剂如糖或氯化钠；吸收延长剂如单硬脂酸铝和明胶；以及吸收增强剂。
3.相关化合物本发明提供了所公开的化合物以及所公开化合物的密切相关的可药用形式，如其盐、酯、酰胺、水合物或溶剂化物形式；掩蔽或被护形式；以及外消旋混合物，或对映异构或光学纯形式。
可药用盐、酯和酰胺包括羧酸盐(例如C1-8烷基、环烷基、芳基、杂芳基或非芳族杂环的)，氨基酸加成盐、酯和酰胺，它们在合理的利益/风险比范围内、具有药理学有效性并适于与病人的组织接触而没有不适当的毒性、刺激性或过敏反应。代表性的盐包括氢溴化物、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐。这些盐可包括碱金属和碱土金属阳离子如钠、钾、钙和镁，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子如四甲基铵、甲胺、三甲胺和乙胺。参见例如S.M.Berge等，“药用盐”，《药物科学杂志》1977，661-19，该文结合在此作为参考。本发明的代表性的可药用酰胺包括从氨、C1-6烷基伯胺和二(C1-6烷基)仲胺衍生的那些。仲胺包括含有至少一个氮原子和可选的1-2个其它杂原子的5-或6-元杂环或杂芳环部分。优选的酰胺衍生自氨、C1-3烷基伯胺和二(C1-2烷基)胺。本发明的代表性的可药用酯包括C1-7烷基、C5-7环烷基、苯基和苯基(C1-6)烷基酯。优选的酯包括甲酯。
本发明还包括含有一个或多个被保护基掩蔽的官能团(例如羟基、氨基或羧基)的所公开的化合物。这些被掩蔽或被护的化合物中有一些是可药用的；其他将可用作中间体。本文中公开的合成中间体和方法以及其微小变型也包括在本发明范围内。
羟基保护基羟基保护基包括醚、酯和对1，2-和1，3-二醇的保护。醚保护基包括甲基、取代的甲基醚、取代的乙基醚、取代的苄基醚、甲硅烷基醚和甲硅烷基醚向其它官能团的转化。
取代的甲基醚取代的甲基醚包括甲氧基甲基、甲硫基甲基、叔丁硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基、苄氧基甲基、对乙氧基苄氧基甲基、(4-甲氧基苯氧基)甲基、愈创木酚甲基、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2，2，2-三氯乙氧基甲基、双(2-氯-乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、四氢吡喃基、3-溴-四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢吡喃基、4-甲氧基四氢噻喃基、4-甲氧基四氢噻喃基S，S-二氧桥、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基、1，4-二噁烷-2-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、和2，3，3a，4，5，6，7，7a-八氢-7，8，8-三甲基-4，7-桥亚乙基苯并呋喃-2-基。
取代的乙基醚取代的乙基醚包括1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苄氧基乙基、1-甲基-1-苄氧基-2-氟乙基、2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯基氢硒基)乙基、叔丁基、烯丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、2，4-二硝基苯基、和苄基。
取代的苄基醚取代的苄基醚包括对-甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2，6-二氯苄基、对氰基苄基、对苯基苄基、2-和4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基N-氧化物、二苯基甲基、对，对’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、对甲氧基苯基二苯基甲基、二(对甲氧基苯基)苯基甲基、三(对甲氧基苯基)甲基、4-(4’-溴苯甲酰甲氧基)苯基二苯基甲基、4，4’，4″-三(4，5-二氯苯二甲酰亚氨基苯基)甲基、4，4’，4″-三(块茎糖酰氧基苯基)甲基、4，4’，4″-三(苯甲酰氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基甲基)双(4’，4″-二甲氧基苯基)-甲基、1，1-双(4-甲氧基苯基)-1’-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)呫吨基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1，3-苯并二硫杂环戊烷-2-基、和苯并异噻唑基S，S-二氧桥。
甲硅烷基醚甲硅烷基醚包括三甲代甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、二甲基异丙基甲硅烷基、二乙基异丙基甲硅烷基、二甲基1，1，2-三甲基丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三苄基甲硅烷基、三-对二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基、和叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基。
酯酯保护基包括酯、碳酸酯、辅助裂解、杂酯和磺酸酯。
酯保护性酯的实例包括甲酸酯、苯甲酰基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、对-P-苯基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯(块茎糖酸酯)、4，4-(亚乙二硫基)戊酸酯、新戊酸酯、金刚烷酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯基苯甲酸酯和2，4，6-三甲基苯甲酸酯(?甲酸酯)。
碳酸酯碳酸酯包括甲基、9-芴基甲基、乙基、2，2，2-三氯乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯基磺酰基)乙基、2-(三苯基磷鎓基)乙基、异丁基、乙烯基、烯丙基、对硝基苯基、苄基、对甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、S-苄基硫代碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基和甲基二硫代碳酸酯。
辅助裂解辅助裂解保护基团的实例包括2-碘苯甲酸酯、4-叠氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻-(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲酰基苯-磺酸酯、2-(甲硫基甲氧基)乙基碳酸酯、4-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯和2-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯。
杂酯除了上述种类以外，杂酯包括2，6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2，6-二氯-4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2，4-双(1，1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯(惕各酸酯)、邻-(甲氧羰基)苯甲酸酯、对-P-苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、烷基N，N，N’，N’-四甲基-二氨基磷酸酯、N-苯基氨基甲酸酯、硼酸酯、二甲基硫膦基和2，4-二硝基苯基次磺酸酯。
磺酸酯保护性硫酸酯包括硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苄基磺酸酯和甲苯磺酸酯。
对1，2-和1，3-二醇的保护对1，2-和1，3-二醇基团的保护包括环状缩醛和缩酮、环状原酸酯和甲硅烷基衍生物。
环状缩醛和缩酮环状缩醛和缩酮包括亚甲基、亚乙基、1-叔丁基亚乙基、1-苯基亚乙基、(4-甲氧基苯基)亚乙基、2，2，2-三氯亚乙基、(亚异丙基)丙酮化合物、亚环戊基、亚环己基、亚环庚基、亚苄基、对甲氧基亚苄基、2，4-二甲氧基亚苄基、3，4-二甲氧基亚苄基和2-硝基亚苄基。
环状原酸酯环状原酸酯包括甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、二甲氧基亚甲基、1-甲氧基亚乙基、1-乙氧基亚乙基、1，2-二甲氧基亚乙基、α-甲氧基亚苄基、1-(N，N-二甲氨基)亚乙基衍生物、α-(N，N-二甲氨基)亚苄基衍生物和2-氧杂亚环戊基。
对羧基的保护酯酯保护基包括酯、取代的甲酯、2-取代的乙酯、取代的苄酯、甲硅烷基酯、活化的酯、杂衍生物和甲锡烷基酯。
取代的甲酯取代的甲酯包括9-芴基甲基、甲氧基甲基、甲硫基甲基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、甲氧基乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、苄氧基甲基、苯甲酰甲基、对溴苯甲酰甲基、α-甲基苯甲酰甲基、对甲氧基苯甲酰甲基、甲酰氨基甲基和N-苯二甲酰亚氨基甲基。
2-取代的乙酯2-取代的乙酯包括2，2，2-三氯乙基、2-卤代乙基、α-氯烷基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-甲硫基乙基、1，3-二噻烷基-2-甲基、2-(对硝基苯基亚磺酰)乙基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、2-(2’-吡啶基)乙基、2-(二苯膦基)乙基、1-甲基-1-苯基乙基、叔丁基、环戊基、环己基、烯丙基、3-丁烯-1-基、4-(三甲基甲硅烷基)-2-丁烯-1-基、肉桂基、α-甲基肉桂基、苯基、对-(甲基巯基)-苯基和苄基。
取代的苄酯取代的苄酯包括三苯基甲基、二苯基甲基、双(邻硝基苯基)甲基、9-蒽基甲基、2-(9，10-二氧代)蒽基甲基、5-二苯并环庚基、1-芘基甲基、2-(三氟甲基)-6-铬酰甲基、2，4，6-三甲基苄基、对溴苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、对甲氧基苄基、2，6-二甲氧基苄基、4-(甲基亚磺酰基)苄基、4-磺基苄基、胡椒基和4-P-苄基。
甲硅烷基酯甲硅烷基酯包括三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、异丙基二甲基甲硅烷基、苯基二甲基甲硅烷基和二叔丁基甲基甲硅烷基。
杂衍生物杂衍生物包括噁唑、2-烷基-1，3-噁唑啉、4-烷基-5-氧代-1，3-噁唑烷、5-烷基-4-氧代-1，3-二氧杂环戊烷、原酸酯、苯基和五氨基钴(III)配合物。
甲锡烷基酯甲锡烷基酯的实例包括三乙基甲锡烷基和三正丁基甲锡烷基。
酰胺和酰肼酰胺包括N，N-二甲基、吡咯烷基、哌啶基、5，6-二氢菲啶基、邻硝基-N-酰苯胺、N-7-硝基吲哚基、N-8-硝基-1，2，3，4-四氢喹啉基和对-P-苯磺酰胺。酰肼包括N-苯基、N，N’-二异丙基和其它二烷基酰肼。
对氨基的保护氨基甲酸酯氨基甲酸酯包括氨基甲酸酯、取代的乙基、辅助裂解、光解裂解、脲型衍生物和杂氨基甲酸酯。
氨基甲酸酯氨基甲酸酯包括甲基和乙基、9-芴基甲基、9-(2-磺基)芴基甲基、9-(2，7-二溴)芴基甲基、2，7-二叔丁基-[9-(10，10-二氧代-10，10，10，10-四氢-噻吨基)]甲基和4-甲氧基苯甲酰甲基。
取代的乙基取代的乙基保护基包括2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-苯基乙基、1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙基、1，1-二甲基-2-卤代乙基、1，1-二甲基-2，2-二溴乙基、1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙基、1-甲基-1-(4-联苯基)乙基、1-(3，5-二叔丁基苯基)-1-甲基乙基、2-(2’-和4’-吡啶基)乙基、2-(N，N-二环己基甲酰氨基)-乙基、叔丁基、1-金刚烷基、乙烯基、烯丙基、1-异丙基烯丙基、肉桂基、4-硝基肉桂基、喹啉基、N-羟基哌啶基、烷基二硫基、苄基、对甲氧基苄基、对硝基苄基、对溴苄基、对氯苄基、2，4-二氯苄基、4-甲基亚磺酰基苄基、9-蒽基甲基和二苯基甲基。
辅助裂解通过辅助裂解的保护包括2-甲硫基乙基、2-甲磺酰基乙基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、[2-(1，3-二噻烷基)]甲基、4-甲基噻吩基、2，4-二甲基-噻吩基、2-磷鎓基乙基、2-三苯膦基异丙基、1，1-二甲基-2-氰基乙基、间氯-对乙酰氧基苄基、对(二羟基硼基)苄基、5-苯并异噁唑基甲基和2-(三氟甲基)-6-色酮基甲基。
光解裂解光解裂解法使用诸如下列基团间硝基苯基、3，5-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、3，4-二甲氧基-6-硝基苄基和苯基(邻硝基苯基)甲基。
脲型衍生物脲型衍生物的实例包括吩噻嗪基-(10)-羰基衍生物、N’-对甲苯磺酰氨基羰基和N’-苯基氨基硫代羰基。
杂氨基甲酸酯除了上述以外，杂氨基甲酸酯包括叔戊基、S-苄基硫代氨基甲酸酯、对氰基苄基、环丁基、环己基、环戊基、环丙基甲基、对癸氧基苄基、二异丙基甲基、2，2-二甲氧羰基乙烯基、邻-(N，N-二甲基甲酰氨基)苄基、1，1-二甲基-3-(N，N-二甲基甲酰氨基)丙基、1，1-二甲基-丙炔基、二(2-吡啶基)甲基、2-呋喃基甲基、2-碘乙基、异冰片基、异丁基、异烟碱基、对(对’-甲氧基苯基-偶氮)苄基、1-甲基环丁基、1-甲基环己基、1-甲基-1-环丙基甲基、1-甲基-(3，5-二甲氧基苯基)乙基、1-甲基-1-(对苯基偶氮苯基)乙基、1-甲基-1-苯基乙基、1-甲基-1-(4-吡啶基)乙基、苯基、对(苯基偶氮)苄基、2，4，6-三叔丁基苯基、4-(三甲铵)苄基和2，4，6-三甲基苄基。
酰胺酰胺酰胺包括N-甲酰基、N-乙酰基、N-氯乙酰基、N-三氯乙酰基、N-三氟乙酰基、N-苯基乙酰基、N-3-苯基丙酰基、N-吡啶甲酰基、N-3-吡啶基甲酰胺、N-苯甲酰基苯丙氨酰衍生物、N-苯甲酰基和N-对苯基苯甲酰基。
辅助裂解辅助裂解基团包括N-邻硝基苯基乙酰基、N-邻硝基苯氧基乙酰基、N-乙酰乙酰基、(N’-二硫苄氧羰基氨基)乙酰基、N-3-(对羟基苯基)丙酰基、N-3-(邻硝基苯基)丙酰基、N-2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰基、N-2-甲基-2-(邻苯基偶氮苯氧基)丙酰基，N-4-氯丁酰基、N-3-甲基-3-硝基丁酰基、N-邻硝基肉桂酰基、N-乙酰基甲硫氨酸衍生物、N-邻硝基苯甲酰基、N-邻(苯甲酰氧基甲基)苯甲酰基和4，5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮。
环状酰亚胺衍生物环状酰亚胺衍生物包括N-邻苯二甲酰亚胺、N-二硫琥珀酰、N-2，3-二苯基-马来酰、N-2，5-二甲基吡咯基、N-1，1，4，4-四甲基二甲硅烷基氮杂环戊烷加合物、5-取代的1，3-二甲基-1，3，5-三氮杂环己烷-2-酮、5-取代的1，3-二苄基-1，3，5-三氮杂环己烷-2-酮和1-取代的3，5-二硝基-4-吡啶酮基。
专门的-NH保护基-NH的保护基包括N-烷基和N-芳基胺、亚胺衍生物、烯胺衍生物、和N-杂原子衍生物(例如N-金属、N-N、N-P、N-Si和N-S)、N-亚磺酰基和N-磺酰基。
N-烷基和N-芳基胺N-烷基和N-芳基胺包括N-甲基、N-烯丙基、N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基、N-3-乙酰氧基丙基、N-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)、季铵盐、N-苄基、N-二(4-甲氧基苯基)甲基、N-5-二苯并环庚基、N-三苯基甲基、N-(4-甲氧基苯基)二苯基甲基、N-9-苯基芴基、N-2，7-二氯-9-芴基亚甲基、N-二茂铁基甲基和N-2-吡啶甲基胺N’-氧化物。
亚胺衍生物亚胺衍生物包括N-1，1-二甲硫基亚甲基、N-亚苄基、N-对甲氧基亚苄基、N-二苯基亚甲基、N-[(2-吡啶基)?基]亚甲基、N-(N’，N’-二甲氨基亚甲基)、N，N’-亚异丙基、N-对硝基亚苄基、N-亚水杨基、N-5-氯亚水杨基、N-(5-氯-2-羟基苯基)苯基亚甲基和N-亚环己基。
烯胺衍生物烯胺衍生物的实例是N-(5，5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)。
N-杂原子衍生物N-金属衍生物包括N-硼烷衍生物、N-二苯基二烃基代硼酸衍生物、N-[苯基(五羰基铬-或-钨)]碳烯基和N-铜或N-锌螯合物。N-N衍生物的实例包括N-硝基、N-亚硝基和N-氧化物。N-P衍生物的实例包括N-二苯膦基、N-二甲硫基膦基、N-二苯硫基膦基、N-二烷基磷酰基、N-二苄基磷酰基和N-二苯基磷酰基。N-亚磺酰基衍生物的实例包括N-苯亚磺酰基、N-邻硝基苯亚磺酰基、N-2，4-二硝基苯亚磺酰基、N-五氯苯亚磺酰基、N-2-硝基-4-甲氧基-苯亚磺酰基、N-三苯基甲基亚磺酰基和N-3-硝基吡啶亚磺酰基。N-磺酰基衍生物包括N-对甲苯磺酰基、N-苯磺酰基、N-2，3，6-三甲基-4-甲氧基苯磺酰基、N-2，4，6-三甲氧基苯磺酰基、N-2，6-二甲基-4-甲氧基-苯磺酰基、N-五甲基苯磺酰基、N-2，3，5，6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰基、N-4-甲氧基苯磺酰基、N-2，4，6-三甲基苯磺酰基、N-2，6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰基、N-2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基、N-甲磺酰基、N-β-三甲基甲硅烷基乙磺酰基、N-9-蒽磺酰基、N-4-(4’，8’-二甲氧基萘基甲基)-苯磺酰基、N-苄基磺酰基、N-三氟甲基磺酰基和N-苯甲酰甲基磺酰基。
所公开的被掩蔽或被保护的化合物可以是药物前体、体内代谢或者以其它方式转化为所公开的化合物的化合物，例如在代谢期间的瞬间。这种转化作用可以是由与体液例如血液接触而引起的水解或氧化，或者是酸、肝脏、胃肠道或其它酶的作用。
本发明的特征进一步描述在下面的实施例中。
E.实施例生物学实施例实施例1PD 198306对链佐星诱导的静态异常性疼痛的作用动物从Bantin&Kingman(Hull，U.K.)得到的雄性Sprague Dawley大鼠(250-300g)分3组在笼中饲养。所有动物保持在12小时光照/黑暗周期下(光照在700开始)，可随意获取食物和水。所有实验由对药物治疗情况不清楚的观察者进行。
大鼠糖尿病的发展通过如先前所述(Courteix等，1993年)给大鼠单一i.p.注射链佐星(50mg/kg)来诱导糖尿病。
对静态异常性疼痛的评估机械过敏性用Semmes-Weinstein von Frey头发(Stoelting，Illinois，U.S.A.)进行测量。将动物放置到丝网底部的笼子里，使得能够接近它们的足爪下侧。开始实验之前先使动物习惯这种环境。机械过敏性通过用von Frey头发以逐渐递增的力(0.7、1.2、1.5、2、3.6、5.5、8.5、11.8、15.1和29g)触及动物右后爪的足底表面最多6秒钟来加以检测。一旦确定了缩回反应，接下来就用逐渐递减的von Frey发丝开始对该足爪重新测试，直到没有反应发生。最高的力29g举起了足爪也引起了反应，因此代表截止点。引起反应所需的最低的力记录为足爪缩回阈(PWT)，以克计。
药物PD 198306[N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基苯氨基)-苯甲酰胺]和CI-1008(pregabalin)在Parke-Davis(AnnArbor，MI，USA)合成。将PD 198306悬浮于聚氧乙烯化脂肪酸酯(cremophor)∶乙醇∶水(1∶1∶8)赋形剂。Pregabalin溶于水。这两种化合物都通过口服给药。链佐星(Aldrich，UK)溶于0.9％w/v NaCl并通过腹膜内注射给药。药物以1ml/kg的体积给药。
统计学静态异常性疼痛数据用对非参数结果的Kruskall-Wallis方差分析进行分析，在用Mann-Whitney t检验确认有显著性后进行。
实验方案静态异常性疼痛用von Frey发丝进行评定，在给药PD198306(30mg/kg，口服)、赋形剂(聚氧乙烯化脂肪酸酯∶乙醇∶水，1∶1∶8)或pregabalin(30mg/kg，口服)(试验)之前(基线，BL)和1小时后进行。在接下来那天的早晨和下午再次对动物给药相同化合物。静态异常性疼痛只在下午给药之前和1小时后进行评定，以将动物对试验条件的习惯作用减至最小。用pregabalin治疗的动物在早晨给药时接受水，以避免潜在的因重复给药而出现对化合物的耐受。
第1天 第2天上午PD 198306水赋形剂下午BL 下午BLPD 198306 PD 198306PregabalinPregabalin赋形剂赋形剂试验 试验结果单次给药pregabalin(30mg/kg，口服)在给药1小时后显著阻断了链佐星诱导的静态异常性疼痛。相反，单次给药PD198306(30mg/kg，口服)在给药后1小时对链佐星诱导的静态异常性疼痛没有作用(参见下文)。但是，当化合物在第二天再给药两次后，它在第三次给药后显著阻断了链佐星诱导的静态异常性疼痛。到接下来的第3天作用消失(参见图1)。
通过如先前所述(Courteix等，1993年)给大鼠单一i.p.注射链佐星(50mg/kg)来诱导糖尿病。
大鼠慢性压缩损伤的发展动物在手术过程中经鼻锥用2％异氟烷1∶4 O2/N2O混合物保持麻醉。如先前Bennett&Xie，1988所述将坐骨神经结扎。操作期间将动物置于恒温的毯子上。