专利名称：：蝇蛆蛋白粉在制备抗疲劳、增强免疫力的产品中的应用的制作方法技术领域：。：家蝇是重要的医学昆虫，能传播多种人畜疾病而自身却不患病。这一事实提示家蝇具有很强的免疫机制。对于家蝇幼虫各种抗病机理的研究早在二十世纪中叶业已开始，并不断深入和扩展，从微生物学、寄生虫学、细胞免疫学、农业科学的角度将家蝇幼虫的研究推向了多元化和高科技化。家蝇幼虫含有蛋白质、不饱和脂肪酸、矿物质及多种维生素，是一种不可多得的优质营养蛋白。家蝇作为养殖开发的对象，国内能大规模养殖家蝇生产蝇蛆幼虫的技术已经成熟，大多以禽畜粪便以及麦麸作为养殖饲料，所得蝇蛆幼虫主要用于饲料添加剂及喂养家禽、水产品的优质动物蛋白，但利用蝇蛆幼虫蛋白开发保健品或药品方面的研究还不多。目前已开发的蛋白类保健品多为植物性蛋白类食物，营养成分单一成为植物源性蛋白作为保健品使用的一大死角。将家蝇幼虫蛋白开发成为新一代的保健品或药品，并不断多元化，对人类健康具有重要的意义。
本发明的目的在于提供蝇蛆蛋白粉在制备抗疲劳、增强免疫力的产品中的应用。本发明通过动物试验，对以茅台酒糟饲养的工程蝇幼虫为原料制成的蝇蛆蛋白粉进行了增强免疫和抗疲劳作用的研究，为蝇蛆蛋白粉应用于药物或保健品领域提供了理论依据。本发明是这样构成的蝇蛆蛋白粉在制备抗疲劳、增强免疫力的产品中的应用。所述的蝇蛆蛋白粉是将茅台酒糟饲养的工程蝇三龄幼虫洗净、粉碎、烘干制成的。所述的产品为药物或保健品。具体的说，将蝇蛆蛋白粉与适量药用辅料按照常规方法制备成药物制剂。例如取蝇蛆蛋白粉，加入适量淀粉、滑石粉混匀，过筛后，按常规方法制成片剂。或者将蝇蛆蛋白粉与其它药用成分组合，加入适量药用辅料，按照常规方法制备成药物制剂。例如取蝇蛆蛋白粉1000g、大豆蛋白粉150g，加入适量辅料，混匀，烘干，灭菌，包装，制成冲剂或胶囊剂。还可以将蝇蛆蛋白粉单独或与其它物质组合，按照常规方法制备成保健品。例如取蝇蛆蛋白粉，过筛，烘干，灭菌后，按常规方法制成冲剂或胶囊剂。或者取蝇蛆蛋白粉1000g、黄芪150g，粉碎，过筛，加入适量辅料，混匀，烘干，灭菌，制成片剂、冲剂或胶囊剂。上述药物制剂或保健品可根据本领域已知的方法制备成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、检剂、膏剂、贴剂、注射剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。制成片剂时，可以广泛使用本领域公知的各种辅料例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、尿素、微晶纤维素等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片、多层片。制成丸剂时，可以广泛使用本领域公知的各种辅料例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氮化植物油、聚乙烯吡咯烷酮等；粘合剂如阿拉伯胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。若制成胶囊，将有效成分蝇蛆蛋白粉与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分蝇蛆蛋白粉制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。若制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。如需要，也可以向药物制剂或保健品中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它辅料。为了验证蝇蛆蛋白粉在增强免疫力和抗疲劳方面的作用效果，申请人进行了一系列试验研究，具体如下一、蝇蛆蛋白粉对正常小鼠及免疫抑制小鼠的免疫功能的影响1实验材料l.l药物蝇蛆蛋白粉，由贵州琨恩生物工程有限公司提供。实验临用时用蒸馏水配成所需浓度。1.2试剂印度墨汁，IndiaInkTuachenachburri3D065。环磷酰胺(Cy)，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号05110621。绵羊红细胞，由贵阳医学院实验动物中心提供。补体3雄2雌健康豚鼠的混合血清(-2(TC保存，临用时生理盐水l:IO稀释)，阿氏液(葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、氯化钠0.42g、蒸馏水100ml，无菌过滤)，都氏试剂(碳酸氢钠l.Og、氰化钾O.05g、高铁氰化钾O.2g、蒸馏水1000ml)。1.3主要仪器U—Quant扫描酶标分光光度仪美国Bio-Tek公司；数显恒温水浴锅HH-2:国华电器有限公司；DJ-1000J电子天平中外合资亚太电子天平。1.4动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重16—18g，由贵阳医学院实验动物中心提供。1.5统计方法用成组设计t检验进行数据统计学分析。2方法2.l分组及造模2.1.l蝇蛆蛋白粉对正常小鼠的影响取小鼠40只，雌雄各半，体重16—18g，随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组、蛋白粉低剂量组(2g/kg)、蛋白粉中剂量组(4g/kg)、蛋白粉高剂量组(6g/kg)。蝇蛆蛋白粉低、中、高剂量组灌胃蝇蛆蛋白粉，空白对照组灌胃等量蒸馏水，每天1次，连续7天。2.1.2预防性给药取小鼠40只，雌雄各半，体重16—18g，随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组、Cy模型组、蝇蛆蛋白粉低(4g/kg)、高剂量组(6g/kg)。除空白对照组外，其余各组动物均ip环磷酰胺60mg/kg，每天1次，连续4天。蝇蛆蛋白粉低、高剂量组灌胃蝇蛆蛋白粉，空白对照组和Cy模型组灌胃等量蒸馏水，每天1次，连续7天。2.1.3治疗性给药小鼠随机取10只作为空白对照组，其余20只均ip环磷酰胺60mg/kg，每天1次，连续4天。模型造成后，随机分为Cy治疗模型组、蝇蛆蛋白粉治疗组(6g/kg)，每组10只。蝇蛆蛋白粉治疗组每日给药1次，空白对照组和Cy治疗模型组灌胃等量蒸馏水，每天1次，连续7天。2.2免疫功能指标测定2.2.l对血清溶血素含量的影响于給药第2天，每鼠腹腔注射20%压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液O.2ml进行免疫，继续給药5天，于最后一次給药后lh，从小鼠眼眶静脉丛取血，离心分离血清，取血清用生理盐水稀释500倍，然后取稀释血清lml置试管中，加10XSRBC混悬液0.5ml，置冰浴中，再加入以生理盐水1:10稀释的豚鼠血清1ml混合，另设不加血清的空白对照。移置37。C恒温水浴中保温10min后，立即置冰浴中终止反应。用2000r/min离心10min，取上清液lml，加都氏试剂3ml，混匀放置10分钟，取上清液用96孔板于扫描酶标分光光度仪540nm处比色，测吸光度值(OD)。另取10XSRBC混悬液0.25ml，加都氏试剂3.75ml，同上测定OD值，作为半数溶血值。血清溶血素含量以半数溶血值(HC5())表示。按下式计算HC50二样品的OD值/SRBC半数溶血时的OD值X稀释倍数2.2.2对碳粒廓清指数的影响分组及给药均同上。于末次给药lh后，每鼠尾静脉注射稀释的印度墨汁O.lml/10g。各鼠均分别于注射印度墨汁后2min和12min(秒表记录)各用一次性采血管眼眶取血20yL，立即吹入盛有2m10.P/。Na2C03溶液的试管中，吹吸数次以充分洗出采血管壁附着的血液，摇匀，15min后于扫描酶标分光光度仪600nm处比色，测光密度值(OD)。并于第二次采血后，用脱颈椎法将小鼠处死，称体重，解剖取肝、脾称重，按公式计算小鼠吞噬指数a^VKX体重/(肝重+脾重)(其中K二(lgOD广lgOD2)/(t2-t工)，ODh0D2分别为2和12min光密度，ti=2，t2=12)。3结果3.l蝇蛆蛋白粉对正常小鼠免疫功能的影响实验结果表明，各剂量组小鼠HC5o均高于空白对照组，差异具有显著性(p〈0.05)。中剂量组药效最好，但高剂量组效果并未比低、中剂量组好，说明在低剂量时，药效随剂量的增加而增强，当到了一定剂量后，药效与剂量并无依赖关系。各剂量组小鼠a均低于空白对照组，但差异无显著性(p>0.05)。表明蝇蛆蛋白粉可显著提高正常小鼠HC50，增强其体液免疫功能；而对正常小鼠a无影响，即对巨噬细胞的吞噬功能无影响。见表l。表l蝇蛆蛋白粉对正常小鼠免疫功能的影响(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与空白对照组比较，"p〈0.05，*、〈0.01，—Ap>0.05，以下同(3.2蝇蛆蛋白粉对免疫功能低下小鼠的影响3.2.l蝇蛆蛋白粉对免疫功能低下小鼠的预防作用实验结果表明，模型组小鼠HC5(j、a均低于空白对照组，差异有显著性(p〈0.01)，表明造模成功。各剂量组小鼠HC5o与模型组相比，差异无显著性(p>0.05)。各剂量组小鼠a均高于模型组，差异具有显著性(p〈0.05);其中，高剂量组小鼠a显著高于模型组(p〈0.01)，且与空白对照组比较，差异无显著性(p>0.05)。表明蝇蛆蛋白粉对免疫功能低下小鼠HC5o无影响，即对巨噬细胞的吞噬功能无影响；但可显著提高免疫功能低下小鼠a，即对CY造成的体液免疫功能低下的小鼠有保护作用。见表2。表2蝇蛆蛋白粉对免疫功能低下小鼠的预防作用(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与模型组比较，vp〈0.05，vvp〈0.01，Ap>0.05，以下同。3.2.2蝇蛆蛋白粉对免疫功能低下小鼠的治疗作用实验结果表明，模型组小鼠HC5(j、a均低于空白对照组，差异有显著性(p〈0.01)，表明造模成功。治疗组小鼠HC5o与模型组相比，差异无显著性(p>0.05)。治疗组小鼠a低于空白对照组，差异无显著性(p>0.05);与模型组相比，治疗组小鼠a高于模型组，差异具有显著性(p〈0.01)。表明蝇蛆蛋白粉对免疫功能低下小鼠HC5o无影响，即对巨噬细胞的吞噬功能无影响；但可显著提高免疫功能低下小鼠a，即对CY造成的体液免疫功能低下的小鼠有治疗作用。见表3。表3蝇蛆蛋白粉对免疫功能低下小鼠的治疗作用(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>二、蝇蛆蛋白粉对小鼠的抗疲劳作用:实验材料同上。实验方法取小鼠随机分为3组，分别为空白组、蛋白粉低剂量组(4g/kg)、蛋白粉高剂量组(6g/kg);低剂量组每日给药l次，高剂量组每天给药2次，连续15天；末次给药后30min后称小鼠体重，于鼠尾末端缚以10%体重的橡皮泥，将小鼠置于水深20cm水池内，水温2(TC，记录小鼠游泳时间。将结果用SPSS12.0统计软件进行统计分析，结果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>蛋白粉低剂量组与蛋白粉高剂量组分别与空白组比较，P<0.01。表明蝇蛆蛋白粉具有明显的抗疲劳作用。与现有技术相比，本发明所用蝇蛆蛋白粉由茅台酒糟饲养的工程蝇幼虫制备而得，富含各种营养成分，低脂肪、低胆固醇，营养结构合理，肉质纤维少，又易于吸收，可提高人体的免疫能力和抗衰老能力，能达到预防疾病、营养保健、康复身体等多种效果，在作为抗疲劳、增强免疫力的药物或保健品方面具有良好的应用前景。具体实施例方式本发明的实施例l:取蝇蛆蛋白粉1000g，加入适量淀粉、滑石粉混匀，过筛后，按常规方法制成片剂。该制剂口服，2g/次，每日3次，用于免疫力低下者或其它疾病的辅助治疗。本发明的实施例2:取蝇蛆蛋白粉1000g、大豆蛋白粉150g，加入适量辅料，混匀，烘干，灭菌，包装，制成冲剂或胶囊剂。该制剂口服，2g/次，每日3次，用于免疫力低下者或其他疾病的辅助治疗，有抗疲劳作用。本发明的实施例3:取蝇蛆蛋白粉1000g，过筛，烘干，灭菌后，按常规方法制成冲剂或胶囊剂。该制剂口服，1.5g/次，每日3次，用于提高机体抵抗力，防治因免疫力低下所致的疾病。本发明的实施例4:取蝇蛆蛋白粉1000g、黄芪150g，粉碎，过筛，加入适量辅料，混匀，烘干，灭菌，制成片剂、冲剂或胶囊剂。该制剂口服，1.8g/次，每日3次，用于提高机体抵抗力，防治因免疫力低下所致的疾病。权利要求1.蝇蛆蛋白粉在制备抗疲劳、增强免疫力的产品中的应用。全文摘要本发明公开了蝇蛆蛋白粉在制备抗疲劳、增强免疫力的产品中的应用，所述的蝇蛆蛋白粉是以茅台酒糟饲养的工程蝇三龄幼虫为原料制成的。与现有技术相比，本发明所用蝇蛆蛋白粉富含各种营养成分，低脂肪、低胆固醇，营养结构合理，肉质纤维少，又易于吸收，可提高人体的免疫能力和抗衰老能力，能达到预防疾病、营养保健、康复身体等多种效果，在作为抗疲劳、增强免疫力的药物或保健品方面具有良好的应用前景。文档编号A61K36/185GK101104002SQ20071020103公开日2008年1月16日申请日期2007年7月10日优先权日2007年7月10日发明者萍付,吴建伟,杨明开,覃容贵,谢明忠,陈治莉申请人:贵州琨恩生物工程有限公司