早鸽—汇聚行业精英
  • 联系客服
  • 帮助中心
  • 投诉举报
  • 关注微信
400-006-1351
您的问题早鸽都有答案
3000+专业顾问
搜索
咨询

组合物及制备α-(1,2)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖的方法

  • 专利名称
    组合物及制备α-(1,2)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖的方法
  • 发明者
    A·艾纳汉德, M·勒莫-西梅翁, M·洛佩, P·F·E·蒙桑, S·M·波特, T·纳艾
  • 公开日
    2012年5月2日
  • 申请日期
    2010年5月7日
  • 优先权日
    2009年5月7日
  • 申请人
    泰莱配料法国有限公司
  • 文档编号
    A61K31/721GK102439048SQ201080020234
  • 关键字
  • 权利要求
    1.用于改善个体健康的组合物,其包含a-(ld)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖2.权利要求1的组合物,其中所述葡聚寡糖是益生元化合物3.权利要求1的组合物,其中所述葡聚寡糖包含至少10%的Ci-(Id)-糖苷侧链4.权利要求1的组合物,其中所述葡聚寡糖包含基本为线性的骨架,所述骨架包含至少2个由α-(1,6)_键连接的α-D-吡喃葡萄糖基单元5.权利要求4的组合物,其中所述骨架包含至少90%的α-(1,6)-D-吡喃葡萄糖苷键6.权利要求4的组合物,其中所述骨架的平均分子量为约0.5kDa至lOOkDa7.权利要求4的组合物,其中所述骨架的平均分子量为约IOkDa至70kDa,并且所述葡聚寡糖包含约10%至50%的α-(1,2)_糖苷侧链8.权利要求1的组合物,其中所述葡聚寡糖包含少于10%的α-(1,4)-键9.用于改善个体健康的方法,其包括向个体给药对所述个体的健康发挥有益效应的有效量的包含α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖的组合物10.权利要求9的方法,其中所述葡聚寡糖是益生元化合物11.权利要求10的方法,其中所述益生元化合物对所述个体的肠微生物群提供有益效应12.权利要求9的方法,其中所述葡聚寡糖包含至少10%的a-(lj)-糖苷侧链13.权利要求9的方法,其中所述葡聚寡糖包含基本为线性的骨架,所述骨架包含至少 2个由a-(l,6)_键连接的a-D-吡喃葡萄糖基单元14.权利要求13的方法,其中所述骨架包含至少90%的a-(1,6)-D-吡喃葡萄糖苷键15.权利要求13的方法,其中所述骨架的平均分子量为约0.5kDa至lOOkDa16.权利要求13的方法,其中所述骨架的平均分子量为约IOkDa至70kDa,并且所述葡聚寡糖包含约10%至50%的α-(1,2)_糖苷侧链17.权利要求9的方法,其中所述葡聚寡糖包含少于10%的α-(1,4)-键18.权利要求9的方法,其中所述有益效应选自改善肠健康、降低脂质含量、降低体重增长、减少食物摄入、减轻血糖反应、增加葡萄糖耐量、增加胰岛素分泌、增加GLPl分泌、预防或治疗代谢综合征、预防或治疗糖尿病,及其组合19.权利要求9的方法,其中所述有益效应选自增加短链脂肪酸的产生、降低胃肠道中的气体形成、改善肠舒适度、预防或治疗胃肠道病症、刺激有益菌的生长或活性、抑制致病菌的生长、缓解肠疼痛、预防或治疗炎性肠疾病、预防或治疗肠易激综合征、提供镇痛效应、 提供内脏疼痛的缓解,及其组合20.权利要求9的方法,其中所述有益效应选自预防或治疗孤独症、预防或治疗阿尔茨海默病、预防或治疗变态反应、预防或治疗类风湿性关节炎,及其组合21.权利要求9的方法,其中所述有益效应选自预防或治疗胆固醇相关的病症、预防或治疗肥胖、增加丙酸的产生、降低血液甘油三酯水平、降低脂肪量、降低低密度脂蛋白水平, 及其组合22.权利要求9的方法,其中所述组合物还包含选自乳杆菌属(LactcAacillus)、双岐杆菌属(Bifidobacterium)、肠球菌属(Enterococcus)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、链球菌属(Str印tococcus)、酵母菌属(Saccharomyces)及其组合的益生菌23.权利要求9的方法,其中所述组合物还包含选自抗性麦芽糖糊精、抗性淀粉、聚葡萄糖、可溶性玉米(葡萄糖)纤维、菊糖、寡聚果糖、纤维糊精、支链淀粉、半纤维素、寡聚半乳糖、阿拉伯糖基木糖寡糖、乳果糖、塔格糖、益生元化合物及其组合的膳食纤维24.权利要求9的方法,其中所述组合物是食品,并且还包含至少一种食品成分25.权利要求9的方法,其中所述组合物是药物组合物,并且还包含至少一种药学成分26.权利要求9的方法,其中所述有效量包括每天约0.Ig至约40g27.制备具有受控的大小和受控的支化度的葡聚寡糖的方法,其包括以下步骤(1)提供平均分子量为0. 5-lOOkDa的α-(1,6)葡聚寡糖;(2)将至少10%的α-(1,2)-糖苷侧链引入所述α-(1,6)葡聚寡糖上,由此获得α-(1,2)_支化的α_(1,6)葡聚寡糖;和(3) 任选地纯化所述a-(lj)-支化的a-(l,6)葡聚寡糖28.权利要求27的方法,其中步骤(1)包括(Ia)使含有葡萄糖的原料进行酶法转葡萄糖基化反应,由此获得异麦芽糖寡糖(IMOS);和(Ib)使所述IMOS与葡聚糖蔗糖酶在蔗糖的存在下反应,由此获得所述a-(l,6)葡聚寡糖29.权利要求观的方法,其中所述含有葡萄糖的原料包括葡聚糖、淀粉、葡萄糖浆或者麦芽糖浆30.权利要求观的方法,其中(Ia)和(Ib)在单一步骤中进行31.权利要求观的方法,其中步骤( 包括使所述a-(l,6)葡聚寡糖与转葡糖苷酶 GBD-⑶2在蔗糖的存在下反应,由此获得a-(l,2)_支化的a-(l,6)葡聚寡糖32.权利要求31的方法,其中在步骤(2)中蔗糖与a-(l,6)葡聚寡糖的摩尔比为约 0. 10-5. 00,并且a-(l,2)_键的百分比为约10%至50%33.权利要求31的方法,其中在步骤(2)中蔗糖与a-(l,6)葡聚寡糖的摩尔比为约 0. 90-1. 00,并且a -(1,2)-键的百分比为约30%至40%34.权利要求27的方法,其中步骤(3)包括通过过滤纯化所述a-(l,2)_支化的 a-(l,6)葡聚寡糖,其中所述被纯化的葡聚寡糖的平均分子量为约0. 5-lOOkDa35.权利要求27的方法,其中步骤(1)包括使蔗糖与葡聚糖蔗糖酶反应,由此获得所述 a-(l,6)葡聚寡糖36.权利要求27的方法,其中步骤(1)包括使蔗糖与葡聚糖蔗糖酶在葡萄糖的存在下反应,由此获得所述a-(l,6)葡聚寡糖37.权利要求36的方法,其中步骤(1)还包括调整蔗糖与葡萄糖的比值,由此调整所述 a-(l,6)葡聚寡糖的DP特征38.权利要求23的方法,其中所述葡聚寡糖能够到达所述个体的结肠的整个长度39.权利要求16的方法,其中所述分子量越高并且a-(l,2)支化的百分比越高,则所述化合物在所述个体中的抗消化性越高40.权利要求9的方法,其中所述有益效应包括增加短链脂肪酸的产生,由此降低肠中的PH,并且(i)改善矿物质吸收,(ii)改善骨健康,或者(iii)预防或治疗骨质疏松41.权利要求9的方法,其中所述有益效应包括降低所述个体中产生气体的量和速度, 由此减轻气胀和胃气胀
  • 技术领域
    本发明涉及α-(1,2)-支化的 α-(1,6)葡聚寡糖(alpha-(1, 2)-branched alpha-(1,6)oligodextran).具体而言,本发明的实施方案涉及使用α-(1,2)_支化的 α-(1,6)葡聚寡糖来改善个体的胃肠和心血管健康的组合物及方法
  • 背景技术
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:组合物及制备α-(1,2)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖的方法益生元(prebiotic)(例如寡糖)是被肠内微生物群的微生物降解的非消化性膳食化合物。益生元的降解通常对宿主健康发挥有益效应。这些有益健康的效应是由对肠微生物群中向宿主提供健康益处的有限数量的微生物属、种或株(特别是肠内菌群的双岐杆菌和乳酸菌)的生长和/或生物活性进行选择性刺激引起的。已证明益生元在健康个体中增加粪便和粘膜的双岐杆菌。寡糖广泛用于食品,例如软饮料、饼干、谷物制品、糖果和乳制品中。也已开发了寡糖的其它应用,例如防龋剂或者低甜度保湿剂。益生元的效应主要是由选择性地刺激肠中的双岐杆菌(也称为双歧生成性效应 (bifidogenic effect))和/或其它有益菌的生长引起的。对该生长的刺激使得能够降低结肠的PH、增加短链脂肪酸的产生、预防致病微生物的增殖和粘附(屏蔽效应)、增加潜在致癌胺化化合物的代谢以及维生素B的产生。但是,寡糖的缺点是,若它们增加碳水化合物发酵,则它们也增加气体形成。这意味着,主要副作用是气胀(flatulence)、不适和胃气胀 (bloating) 0目前,最明确定义的益生元是归类于膳食纤维的碳水化合物非消化性寡糖(也称为低聚糖)。寡糖具有低的聚合度。参与形成寡糖的糖单元多种多样。实例包括己糖例如葡萄糖、半乳糖和果糖,以及戊糖例如木糖。寡糖可包含单一类型的单糖(同质寡糖) 或者混合单糖(杂寡糖)。寡糖目前是从天然聚合物例如淀粉或菊糖的降解、从天然物质例如大豆的直接提取或者由化学合成或酶法合成制得。特定益生元对多种健康问题的效应仍然未知。在膳食不均衡的情况下,大部分人群表现出血脂肪值,特别是血液胆固醇值的含量升高。高胆固醇水平被公认为是心血管病症的主要风险因素。因此,急需针对显著增高的胆固醇值(特别是LDL胆固醇)和增高的血脂肪值的治疗。对此已记载了多种解决方法;但是,特定益生元寡糖对这样的胆固醇相关的疾病或问题的效应仍然未知。特定益生元对明显影响大部分人群的内脏疼痛和肥胖(例如脂肪代谢)问题也仍然未知。发明概述本发明提供用于改善个体健康的组合物,其包含α-(1,2)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖。所述a-(ld)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖具有受控的大小和受控的支化度。例如,在本发明的一实施方案中,所述α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖的平均分子量为约10千道尔顿(kDa)至70kDa,并且包含约10%至50%的α-(1,2)_糖苷(alpha_(l, 2)-osidic)侧链。本发明还提供用于改善个体健康的方法,其包括向个体给药对所述个体的健康发挥有益效应的有效量的包含a-(ld)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖的组合物。所述有益效应可包括例如改善肠健康、改善肠舒适度、降低脂质含量、影响体重,或者预防或治疗胃肠道病症、糖尿病、肥胖或胆固醇相关的病症。本发明还提供制备具有受控的大小和受控的支化度的葡聚寡糖(oligodextran) 的方法。例如,在本发明的一实施方案中,所述方法包括(1)提供数均分子量为 0. 5-lOOkDa的α-(1,6)葡聚寡糖;(2)将至少10%的α -(1,2)-糖苷侧链引入所述α -(1, 6)葡聚寡糖上,由此获得α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖;和( 任选地纯化所述 α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖。应理解以上概述和以下详述均是本发明的示例而非限制。附图简述图1显示对于本发明化合物的各种实施方案,在控制pH(pH controlled) 的粪便分批培养发酵的Oh、10h,24h,36h和48h,对来自4位健康供体的双岐杆菌属(Bifidobacterium)、拟杆菌属(Bacteroides)、乳杆菌属(Lactobacillus)、梭菌属(Clostridium)、奇异菌属(Atopobium)、真细菌属(Eubacterium)和梭菌 IX 群 (Clostridium Cluster IX)水平的平均细菌计数(LoglO个细胞/ml培养液)。图2显示在给药本发明化合物的各种实施方案后,在控制pH的粪便分批培养发酵的10h,24h,36h ^P 48h,短链脂肪酸(SCFA)特别是乳酸(lactate)、乙酸(acetate)、丙酸 (propionate)禾口丁酸(butyrate)的测定(mM)。图3显示在本发明化合物的各种实施方案中,在控制pH的分批培养发酵中的乙酸比丙酸的比值(mM)。图4A和4B显示用本发明化合物的体外消化试验的结果。绘制表示具有受控的分子量(IkD或40kDa)和受控的支化度(%支化0^^16%或32% )的α-(1,2)_支化的 α-(1,6)葡聚寡糖的可消化性曲线的图表。图5显示表示用本发明化合物进行的气体产生试验的结果的图表。图6Α显示在4周给药期间本发明化合物对大鼠体重增长的效应。图6Β显示依据在大鼠中的结肠直肠胀(colorectal distension)研究结果的本发明化合物的镇痛性质。图7显示本发明的化合物对大鼠肠微生物群的效应。图8A显示在瘦和肥胖供体中本发明化合物对气体产生速度的效应。图8B显示在瘦和肥胖供体中菊糖(用作对照)对气体产生速度的效应。图9A显示在肥胖供体中给药本发明化合物后溶组织梭菌(C. histolyticum)的水平。图9B显示在肥胖供体中给药本发明化合物后普拉氏梭杆菌(F.prausnizii)的水平。图IOA显示葡萄糖的加入有助于获得本发明的纯α-1,6结构。图IOB显示降低蔗糖/葡萄糖的比值使得能够控制产物的多分散性。图IOC显示通过加入葡萄糖并调整蔗糖与葡萄糖的比值可在DP和MW的分布曲线方面控制期望的化合物的合成。图11显示在给药本发明化合物后的接受高脂肪饮食的大鼠中的体重增长。图12显示在给药本发明化合物后的大鼠中的葡萄糖耐量。发明详述本发明提供支化的葡聚寡糖化合物及包含这样的化合物的组合物。本发明还提供用于改善个体健康(特别是用于改善胃肠健康和控制血液胆固醇水平)的方法,其包括向个体给药对所述个体的健康发挥有益效应的有效量的葡聚寡糖化合物。本发明还提供制备具有受控的大小和受控的支化度的葡聚寡糖的方法。“葡聚糖(dextran) ”是包含葡萄糖单元的聚合物,也称为多聚葡萄糖,并且包含至少50%的连续的α-1,6葡萄糖苷键(alpha 1,6 glucosidic bond)。各种结构和分子量的葡聚糖已久为人所知。葡聚糖是通过在蔗糖培养基上培养乳酸菌(例如明串珠球菌属(Leuconostoc)、乳球菌属(Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)、魏斯氏菌属 (Weisella)和乳杆菌属)制备的。参与它们的合成的酶是葡聚糖蔗糖酶(glucansucrase), 其产生葡聚糖(glucan)并从蔗糖培养基中释放果糖。术语葡聚糖、天然葡聚糖和高分子量葡聚糖在本文中同义使用。葡聚糖的平均分子量通常高于lOOOkDa。本文中使用的“葡聚寡糖“或“ α _(1,6)葡聚寡糖”指数均分子量介于常少于3个葡萄糖单元的寡聚葡糖苷(oligoglucoside)与天然葡聚糖(常高于IOOOkDa)的平均分子量之间的多聚葡萄糖。本文中使用的“α-(1,2)-支化的α_(1,6)葡聚寡糖”是指包含基本上由α-(1, 6)_键连接的α-D-吡喃葡萄糖基单元的基本为线性的骨架并具有α-(1,2)_糖苷侧链的葡聚寡糖。该基本上由α-(1,6)_键连接的α-D-吡喃葡萄糖基单元的基本为线性的骨架在本文中常称为“骨架”或“受体”。应注意,本文中使用的术语“葡萄糖”和“吡喃葡萄糖”被视为同义并可互换使用。 相似地,本文中使用的术语“葡萄糖基”和“吡喃葡萄糖基”单元被视为同义并可互换使用。本文中使用的术语“异麦芽糖寡糖(isomaltooligosaccharide),,或IMOS是指包含由α-1,6葡萄糖苷键连接的葡萄糖单体的化合物,其可从α-淀粉酶、支链淀粉酶和 β-淀粉酶、α -葡糖苷酶对玉米淀粉或淀粉衍生产品的酶反应商业生产。可商购的产品包括异麦芽糖寡糖(DP为2-8,例如异麦芽糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖、异麦芽五糖、异麦芽六糖、异麦芽七糖、异麦芽八糖)的混合物和葡萄糖的混合物,以及含有α-1,4和α_1,6 键二者的葡萄糖寡糖(glucooligosaccharide)(例如潘糖)的混合物。“平均分子量”是指单个高分子的分子量的常规算术平均值或平均值。它是通过测定η个聚合物分子的分子量,求得重量之和,并除以η来确定的。数均分子量是确定聚合物分子量的一种方式。聚合物的数均分子量可通过凝胶渗透色谱法、粘度测定法以及依数性法(例如蒸气压渗透压测定法或端基滴定法)进行测定。本文所称的“受控的分子量”是指可根据本发明调整或控制葡聚寡糖化合物的长度乃至分子质量或分子量。“支化度”是指骨架中支承α-(1, -位的葡萄糖单元或与之偶连的葡萄糖单元数除以该分子中所含的葡萄糖单元总数,以百分比表示。因此,支化度是指 α-(1, -位的葡萄糖单元占整个分子而不只是骨架的百分比。“受控的支化度”是指可根据本发明的方法调整或控制该葡萄糖单元数。术语“本发明的化合物”、“支化的葡聚寡糖”和“α _(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖”在本文中同义地使用。在一具体实施方案中,本发明涉及0-(1, -支化的α-(1, 6)葡聚寡糖。在一优选实施方案中,这样的α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖是包含基本上由α-(1,6)键连接的α-D-吡喃葡萄糖基单元的线性或基本为线性的骨架并且具有 α-(1,2)-糖苷侧链(优选一个或多个葡萄糖单元的链)的α _(1,2)-支化的α_(1,6)葡聚寡糖。在一优选实施方案中,本发明涉及葡聚寡糖化合物,其中所述α-(1, -糖苷侧链包含1、2或3个葡萄糖单元,优选1个葡萄糖单元。在一实例中,单个葡萄糖单元与所述葡聚寡糖的骨架连接以形成支化的化合物。术语“ α -(1, -糖苷侧链”在上下文中优选地指通过α-(1, -键与所述线性骨架的葡萄糖单元连接的一个或多个葡萄糖单元的链。正如以下更详细的描述,本发明的一个方面提供用于改善个体健康的组合物,其包含α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖。在一实施方案中,所述葡聚寡糖是益生元化合物。本发明的葡聚寡糖优选地包含至少10%的Ci-(Id)-糖苷侧链以及基本为线性的骨架,所述骨架包含至少2个由α-(1,6)-键连接的α-D-吡喃葡萄糖基单元。所述基本为线性的骨架优选地包含至少90%的α-(1,6)-D-吡喃葡萄糖苷键。所述包含α-(1,6)_键的骨架优选地包含约10%至50%的α-(1,2)-糖苷侧链和少于10%的α-(1,4)-键。每分子优选地存在多于1个α-(1, -糖苷侧链。在这些骨架上添加α-(1, -糖苷侧链使平均分子量随支化度而增高。所述α-(1, -糖苷侧链可随机地分布于本发明的葡聚寡糖的整个骨架,或者它们可存在于所述骨架的某些区域,例如骨架的末端。在一优选实施方案中,所述α-(1, 2)_糖苷侧链随机地分布于葡聚寡糖的整个骨架。优选地,本发明的支化的葡聚寡糖的平均分子量介于寡聚葡糖苷的平均分子量 (通常低于IkDa)和天然葡聚糖的平均分子量(通常高于IOOOkDa)之间。例如,包含α _(1, 6)-键的骨架的平均分子量优选地为0. 5kDa至IOOkDa,或者IkDa至70kDa,或者IkDa至 IOkDa0在一优选实施方案中,骨架的平均分子量为至少0.5kDa,或者至少lkDa,或者至少 IOkDa,或者至少40kDa,或者至少70kDa。由于添加α-(1-2)连接的残基,本发明的α-(1, 2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖的平均分子量得以增加。因此,分子量的变化与支化度和侧链中所含单元(例如葡萄糖单元)的总数直接相关。例如,所述骨架的平均分子量的范围是约0.5kDa至约IOOkDa,而所述α-(1,2)_支化的α_(1,6)葡聚寡糖的平均分子量的范围是约0. 60kDa (例如,约0. 5kDa的骨架加10%的支化度)至约170kDa (例如,约IOOkDa 的骨架加约40%的支化度)。在实施例部分提供本发明的α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖化合物的其它优选实例。在一优选实施方案中,本发明的α-(1,2)_支化的α_(1,6)葡聚寡糖具有多于一个α-(1,2)-糖苷侧链,并且其支化度为至少10%的α-(1,2)-糖苷侧链,例如至少15%, 或者至少20%,或者至少25%,或者至少30%,或者至少35%,或者至少40%的α-(1, 2)-糖苷侧链。更优选地,支化水平为约10%至40%,最优选约15%、16%、18%、31%、 32%、33%或者 37%。在另一优选实施方案中,本发明的α-(1,2)_支化的α_(1,6)葡聚寡糖包含少于10%,优选少于5%的α _(1,4)-键,更优选地,其基本上没有α _(1,4)_键。其优点在于本发明的化合物所含的易水解键的含量低。因此,所述化合物高度不易消化,并且能够相当完整地到达肠的较下部,从而可最大影响局部微生物群。在又一实施方案中,所述支化的葡聚寡糖的骨架包含至少3个,例如至少4个,至少5个或者至少6个基本上由α-(1,6)-键连接的α-D-吡喃葡萄糖基单元。在另一实施方案中,所述骨架包含6-12个,或者6-10个α -D-吡喃葡萄糖基单元。在另一实施方案中, 所述葡聚寡糖的骨架包含100-1000个α -D-吡喃葡萄糖基单元。本发明的葡聚寡糖化合物包含基本上由α -(1,6)_键连接的α _D_吡喃葡萄糖基单元的线性或者基本为线性的骨架,并具有α-(1,2)_糖苷侧链。术语“基本上由α-(1, 6)-键连接”是指所述线性骨架中的大多数葡萄糖单元通过α - (1,6)-键彼此连接。在一优选实施方案中,所述化合物的线性骨架中至少90% ;至少92% ;至少95% ; 或乃至至少97%的葡萄糖单元在该线性骨架中通过α-(1,6)-键彼此连接。因此,在另一实施方案中,所述葡聚寡糖包含线性骨架,其含有至少90% ;至少92% ;至少95% ;或乃至至少97%的α _(1,6)_吡喃葡萄糖苷键。本发明还提供支化的葡聚寡糖化合物,其中所述线性骨架包含少于10%或者少于5%的在该线性骨架中彼此连接的葡萄糖单元的α-(1, 4)_ 键。在一优选实施方案中,所述葡聚寡糖骨架包含至少2个基本上由a-D(l,6)-键连接的α -D-吡喃葡萄糖基单元,优选3-600个α -D-吡喃葡萄糖基单元,更优选6_10个单元。在另一实施方案中,所述线性骨架包含至少90%的α _(1,6)_吡喃葡萄糖苷键。在另一方面,本发明提供制备上述化合物的方法,所述化合物优选地具有受控的大小和受控的支化度。本申请的申请人已发现具有目标分子量和支化度的α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖的合成方法。根据该方法,可制备具有多种分子量和支化度的多种葡聚寡糖化合物。具体而言,本申请的申请人已建立将α-(1, -支链接枝到包含葡萄糖单元的骨架上的方法。该包含葡萄糖单元的骨架优选为线性或者基本为线性的葡聚寡糖,其平均分子量为0. 5-70kDa。因此,本发明的另一方面提供制备α-(1,2)_支化的α_(1,6)葡聚寡糖的方法, 其包括以下步骤提供具有适当分子量的寡糖(优选葡聚寡糖),并将a-(lj)-糖苷侧链引入所述葡聚寡糖上。任选地,所述方法包括纯化步骤,用以除去在该制备方法中已获得的不需要的副产物,例如果糖、葡萄糖、明串珠菌二糖、曲二糖和/或剩余的蔗糖。在一优选实施方案中,上述制备具有受控的大小和受控的支化度的葡聚寡糖的方法包括以下步骤(1)提供平均分子量为0. 5-lOOkDa的a_(l,6)葡聚寡糖;( 将至少 10%的0-(1,2)_糖苷侧链引入步骤(1)中所得的a-(l,6)葡聚寡糖上,由此获得α _(1, 2)_支化的a-(l,6)葡聚寡糖;和(3)任选地纯化所述a-(l,2)_支化的a-(l,6)葡聚寡糖以除去在该方法中已得到的不需要的副产物。在一优选实施方案中,步骤(1)包括(Ia)使含有葡萄糖的原料进行酶法转葡萄糖基化(transglucosylation)反应,由此获得异麦芽糖寡糖(IMOS);和(Ib)使所述IMOS 与葡聚糖蔗糖酶在蔗糖的存在下反应,由此获得a-(l,6)葡聚寡糖。在一实施方案中, (Ia)和(Ib)在单一步骤中进行。所述含有葡萄糖的原料可包括例如葡聚糖、淀粉、葡萄糖浆、葡萄糖或者麦芽糖浆。通常,IMOS是通过以麦芽糖浆为底物的转葡萄糖基化酶法制得。所述麦芽糖浆可使用α-淀粉酶、支链淀粉酶、β-淀粉酶和/或α-葡糖苷酶作为催化剂进行制备。因此, 根据本发明,通过转葡萄糖基化获得的IMOS可在没有任何纯化处理的情况下直接使用。另一方面,其它α-(1-6)葡聚寡糖通常是通过部分水解和分级分离高分子量葡聚糖而从蔗糖底物制得。在支化前,必须纯化这些产物以消除果糖残余物。步骤(1)中提供的葡聚寡糖优选地具有线性或者基本为线性的骨架。更优选地, 所述葡聚寡糖具有糖苷骨架,所述糖苷骨架包含至少90%的a-(l,6)-D-吡喃葡萄糖苷键,更优选包含至少92 %、95 %或者97 %的α - (1,6) -D-吡喃葡萄糖苷键。在另一实施方案中,步骤(1)中提供的葡聚寡糖的分子量为0.5-100kDa;例如 l-70kDa或者l-40kDa。在又一实施方案中,步骤(1)中提供的葡聚寡糖的平均分子量为 0. 5-lOkDa。在又一实施方案中,步骤(1)中提供的葡聚寡糖的平均分子量为至少0. 5kDa或者至少IkDa或者至少70kD。步骤( 中提供的葡聚寡糖的平均分子量因添加α-(1-2)连接的残基而增高。因此,分子量的变化与支化度和该侧链中所含单元(例如葡萄糖单元)的总数直接相关。例如,步骤(1)中制得的骨架的平均分子量范围是约0.5kDa至约IOOkDa, α-(1,2) α-(1,6)葡聚寡糖的平均分子量范围是约0. 60kDa至约170kDa。步骤(1)中提供的葡聚寡糖可从不同的原料制备。在一实施方案中,步骤(1)中提供的葡聚寡糖可从葡聚糖获得。所使用的葡聚糖可以是任意适合的葡聚糖(天然的、合成的或者部分水解的葡聚糖)。在一实施例中,高分子量天然葡聚糖(即分子量大于105kDa 的葡聚糖)可用来提供具有选定分子量的葡聚寡糖。高分子量葡聚糖可从微生物如明串珠球菌属获得。此方法是本领域公知的。基本上,它包括水解高分子量天然葡聚糖以提供不同分子量的葡聚寡糖。将经水解的组合物分级分离以提供具有不同分子量的葡聚寡糖流分, 并且纯化这些流分。通过此方法获得的葡聚寡糖是公知的,并且可商购获得。在又一实施方案中,淀粉可用作原料来制备葡聚寡糖。淀粉是廉价易得的原料。可能100%可转化成水解产物,例如麦芽糖浆。在又一实施方案中,麦芽糖浆可用作原料来制备葡聚寡糖。在另一实施方案中,用于步骤O)中的步骤(1)中提供的α-(1,6)葡聚寡糖可通过能够提供葡聚糖蔗糖酶的微生物进行制备。葡聚糖蔗糖酶对蔗糖底物的作用提供一般分子量高于105kDa的聚合物。在又一实施方案中,用于步骤(2)中的步骤(1)中提供的葡聚寡糖可通过直接提供具有期望分子量的葡聚寡糖的合成方法获得。例如,这可利用可产生修饰葡聚糖蔗糖酶的修饰微生物如明串珠球菌属得以实现。适合的葡聚糖蔗糖酶可包括按照 W02007/091178(其援引加入本文)中所述获得的葡聚糖蔗糖酶DSR-S的变异体。这些葡聚糖蔗糖酶突变体以一步法从蔗糖合成受控大小的葡聚糖。参照上述方法,含有葡萄糖的原料可用于上述方法的步骤(Ia)中,所述原料可包括淀粉或者其它材料(如葡聚糖或麦芽糖浆)。在一优选实施方案中,淀粉用作上述方法的步骤(Ia)中的原料。至多100%的淀粉可被转化成水解产物,例如麦芽糖或者麦芽糖浆。 由转葡糖苷酶催化的转葡萄糖基化反应将麦芽糖转化成聚合度(DP)主要为2-5的异麦芽糖寡糖(IMOS),例如异麦芽糖、潘糖、异葡糖基麦芽糖(isopanose)和异麦芽三糖。在以上方法中,所述IMOS可与蔗糖和葡聚糖蔗糖酶一起用作受体。这致使IMOS延长。所述IMOS的骨架由葡萄糖单元延长并形成葡聚寡糖。用于此步骤中的葡聚糖蔗糖酶优先催化α-(1,6)_键的形成。可用于本发明的步骤(Ib)中的葡聚糖蔗糖酶是本领域已知的,并且未在本文中详细公开。适合的实例是例如从肠膜状明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)B512F、肠膜状明串珠菌B1299和/或肠膜状明串珠菌B742获得的葡聚糖蔗糖酶。在本发明方法的一具体实施方案中,当麦芽糖浆用作原料时,其优选地进行本文所述方法的步骤(Ia)和(Ib)。在另一实施方案中,步骤(1)包括使蔗糖与葡聚糖蔗糖酶反应,由此获得α-(1, 6)葡聚寡糖。在一优选实施方案中,步骤(1)包括使蔗糖与葡聚糖蔗糖酶在葡萄糖的存在下反应,由此获得α-(1,6)葡聚寡糖。本申请的申请人已发现这使得能够直接合成具有受控的分子量(即集中于特定的丽值)的期望的骨架。本申请的申请人已发现,可通过在反应介质中向蔗糖中加入大量的葡萄糖来制备具有受控的大小的骨架。因此,蔗糖是供体,而葡萄糖起受体的作用(此反应被称为“由受体进行的合成(synthesis by acc印tor) ”反应)。加入葡萄糖受体使所述结构中α-1,6_键的含量增高,产生更纯的IMOS型产物,即加入葡萄糖有助于获得纯的α -1,6结构(参见图10Α)。在另一优选实施方案中,步骤(1)还包括调整蔗糖与葡萄糖的比值,由此调整所述α -(1,6)葡聚寡糖的DP特征。降低供体/受体的比值使得能够控制产物的多分散性; 例如,在供体与受体的比值为10时,聚合度远远更高,而通过将该比值降至6然后降至2,则限制了高聚合度化合物的合成(参见图10Β)。通过加入葡萄糖并调整供体与受体的比值, 可在DP和漏的分布曲线方面控制期望的化合物的合成(参见图10C)。在步骤O)中,将额外的葡萄糖单元连接到寡糖或者葡聚寡糖骨架上。它们被连接到骨架中在α-(1,2)_位的葡萄糖单元上,从而形成α-(1,2)_支链。所得化合物是 α-(1, -支化的α-(1,6)葡聚寡糖。所述支链通常随机地分布于整个骨架。在一优选实施方案中,本发明的方法包括其中将至少15^^20^^25^^30^^35% 或40%的α _(1,2)_糖苷侧链引入或者接枝到所述葡聚寡糖骨架上的步骤。此步骤有利地使该制备方法能够产生具有受控的可消化性和可发酵性的化合物。在一优选实施方案中,步骤( 包括在蔗糖的存在下用适合的葡聚糖蔗糖酶将 Ci-(Id)-糖苷侧链(优选一个或多个吡喃葡萄糖基(葡萄糖)单元的侧链)引入α-(1, 6)葡聚寡糖上,由此获得α - (1,2)-支化的α - (1,6)葡聚寡糖。在此实施方案中,步骤(2) 包括使α-(1,6)葡聚寡糖与葡聚糖蔗糖酶(优选转葡糖苷酶GBD-CM)在蔗糖的存在下反应。可用于本发明的步骤O)中的葡聚糖蔗糖酶是本领域已知的,并且未在本文中详细公开。在一实例中,适合的葡聚糖蔗糖酶是由天然肠膜状明串珠菌(L. mesenteroides) NRRL B-1299菌株产生的葡聚糖蔗糖酶DSR-E。在另一实例中,用于步骤(2)中的适合的葡聚糖蔗糖酶在WO 02/074943、FR 2822162和FR观22163 (其援引加入本文)中有述,并且优选地包括葡聚糖蔗糖酶DSR-E和/或GBD-⑶2。通常,由B-1299菌株或GBD-⑶2产生的葡聚糖蔗糖酶可生成α-(1, -键。本申请的申请人发现,葡聚糖蔗糖酶对具有一个α-(1,6)_葡萄糖单元或者 α _(1,6)_葡萄糖单元重复序列的结构的亲和性高于对麦芽糖的亲和性。因此,在步骤(2)中使用IMOS替代麦芽糖的反应在时间和收率方面有所改善。在另一实施方案中,本发明提供其中可通过调整受体/蔗糖的比值,特别是步骤 (2)中使用的IMOS与蔗糖的比值来控制所述化合物的支化度,优选至少10 %至40 %的支化度的方法。因此,在另一实施方案中,本发明涉及其中调整步骤O)中使用的IMOS与蔗糖的比值的方法。在一实例中,使用转葡糖苷酶GBD-⑶2实现本发明的α-(1,2)_支化的α-(1,6) 葡聚寡糖化合物的合成。通过使用该酶可获得受控量的a-(lj)-支化。GBD-CD2是由 DSR-E (由肠膜状明串珠菌NRRL B-1299天然产生的葡聚糖蔗糖酶)改造(engineer)而得的a-(ld)转葡糖苷酶。该酶催化糖苷基部分从蔗糖a-(lj)-转葡萄糖基化到a-1, 6-葡聚糖链上。水解和转葡萄糖基化可在作为受体的蔗糖和葡聚寡糖的存在下在该方法的早期进行,其中步骤(1)中所得的葡聚寡糖可具有选定的分子量。本申请的申请人发现,合成的a-(1, 支链的量或者支化度取决于步骤O)中使用的蔗糖与a-(l,6)葡聚寡糖的比值。可通过调整步骤( 中使用的蔗糖与葡聚寡糖的比值获得具有受控的分子量和受控的支化度的a-(l,2)_支化的a-(l,6)葡聚寡糖。在一实例中,支化度可为13%至40% 不等。如下文实施例中所述,在一优选实施方案中,蔗糖与a-(l,6)葡聚寡糖的摩尔比为约0. 10-5. 00,并且a-(1,2)-键的百分比(即支化度)为约10%至50% ;更优选地,蔗糖与a-(l,6)葡聚寡糖的摩尔比为约0.90-1. 00,并且α-(1,2)_键的百分比(即支化度) 为约30%至40%。可有利地在步骤(1)中使用可直接合成具有期望分子量的葡聚寡糖的酶,然后在步骤(2)中使用可将期望量的α-(1,2)支链引入线性骨架中的酶,从而得到针对具体需要 (例如针对具体性能或用途)而特制的a-(lj)-支化的a-(l,6)葡聚寡糖化合物库。在一实例中,从包括以下步骤的方法获得α-(1,2)_支化的a_(l,6)葡聚寡糖 步骤(1),使用W02007/091178(其援引加入本文)中所述的葡聚糖蔗糖酶DSR-S的变异体; 然后步骤O),使用WO 02/074943(其援引加入本文)中所述的酶GBD-CD2。任选地,本发明的方法还包括纯化步骤以除去不需要的副产物。所述任选的纯化步骤可包括通过过滤纯化a-(1,2)-支化的a-(l,6)葡聚寡糖,其中纯化的葡聚寡糖的平均分子量为约0. 5-lOOkDa。从反应介质中除去果糖可基于本领域技术的现有状态。例如, 超滤可用来分离集中于70kDa的化合物,而在用于分离的任意类型的树脂上通过色谱法富集可用来分离0. 5kDa和/或IkDa和/或IOkDa的a-(1,2)-支化的a-(l,6)葡聚寡糖。 可使用离子交换树脂,例如其中钙和/或钾作为可交换反离子的阳离子型树脂。在另一方面,本发明提供组合物,其包含本文所述的支化的葡聚寡糖化合物。利用上述方法,可控制支化的葡聚寡糖的a-(lj)-键的量和分子量二者。这有利于制备适合的a-(l,2)_支化的a-(l,6)葡聚寡糖。可利用本文所述的方法合成大批α-(1,2)_支化的α-(1,6)葡聚寡糖化合物,为新的组合物提供途径。正如下文中更详细的描述,本发明的另一方面提供用于改善个体健康的方法, 其包括向个体给药对所述个体的健康发挥有益效应的有效量的包含α-(1,2)_支化的 α-(1,6)葡聚寡糖的组合物。在一实施方案中,所述葡聚寡糖是益生元化合物,其对所述个体的肠微生物群提供有益效应。本发明的葡聚寡糖的有益效应可包括例如改善肠健康、 提供镇痛效应(例如改善肠舒适度)、降低脂质含量(即脂肪量)、影响体重(例如体重增长)或者预防或治疗胃肠道病症、糖尿病或它们的症状。这样的有益效应的实例包括增加短链脂肪酸的产生、降低胃肠道中的气体形成、 刺激肠有益菌(例如双岐杆菌)的生长或活性、缓解肠疼痛,及其组合。本发明的葡聚寡糖的另一有益效应可包括例如预防或治疗胆固醇相关的病症或其症状。这样的有益效应的实例包括增加丙酸的产生、降低血液甘油三酯水平、降低低密度脂蛋白水平,及其组合。在本发明的一个方面,所述组合物还包含益生菌,例如乳杆菌属、双岐杆菌属、肠球菌属(Enterococcus)、埃希氏杆菌属Escherichia)、链球菌属、酵母菌属 (Saccharomyces),及其组合。在本发明的另一发明,所述组合物还包含膳食纤维,例如抗性麦芽糖糊精、纤维糊精、聚葡萄糖、菊糖、IM0S、线性和支化葡聚糖、支链淀粉、半纤维素,及其组合。本文限定的支化的葡聚寡糖化合物可配制成适合的组合物。术语“组合物”在上下文中可包括例如营养组合物或者食品组合物,例如食品、食品补充剂或者功能性食品。其还可包括药用组合物。本文中使用的术语“食品”意图涵盖供人类摄取和供动物摄取的食物。“功能性食品f指除了供给营养素的基本营养功能之外还声称具有促进健康和/或预防疾病和/或减轻疾病的性质的任意新鲜食品或加工食品。功能性食品可包括例如加工食品或者用促进健康的添加剂强化的食品。功能性食品的实例是用维生素强化的食品或者用活培养物发酵的食品。本发明的组合物还包含本领域中已知的包含于营养组合物中的其它物质,例如水或其它水溶液、脂肪、糖类、淀粉、粘合剂、增稠剂、着色剂、矫味剂、芳香剂、酸化剂(例如乳酸或者苹果酸等)、稳定剂或者高强度甜味剂或者矿物质等。适合的食品的实例包括面包、 早餐用谷物制品、饼干、蛋糕、甜饼、薄脆饼干(cracker)、酸乳(yogurt)、酸奶(kefir)、味噌、纳豆、印尼豆豉、朝鲜泡菜、德国泡菜、水、乳、果汁、蔬菜汁、碳酸软饮料、非碳酸软饮料、 咖啡、茶、啤酒、葡萄酒、烈性酒、酒精饮料、点心、汤、速冻甜点、油炸食品、披萨、面食品、马铃薯制品、大米制品、玉米制品、小麦制品、乳制品、硬糖、营养棒、谷类食物、生面团、加工的肉食和乳酪、酸乳酪(yoghurt)、冰淇淋甜食、乳饮料、色拉调料、调味汁、糕点装饰配料、甜点、糖果制品、基于谷物的点心棒、事先准备好的餐品(pr印ared dish)等。本发明的组合物还可包含期望的其它膳食纤维。例如,组合物可包含其它多糖,例如不溶性纤维和可溶性纤维。“膳食纤维”通常指植物食品的基本上不消化的部分,其使食物通过消化系统移动,并吸收水和通便,膳食纤维包括合成而得的纤维以及源自植物或天然来源的那些纤维。根据一些定义,“膳食纤维”是指具有10个或更多个单体单元的碳水化合物聚合物(或者在一些情况中具有3-9个单体单元的碳水化合物),其不被人小肠中的内源酶水解,并且属于以下类别(1)摄取的食物中天然存在的可食用的碳水化合物聚合物,或者通过物理、酶或化学手段从原食材已得到的以及已证明具有经公认的科学证据证实的健康裨益的碳水化合物聚合物,和/或O)已证明具有经公认的科学证据证实的健康裨益的合成碳水化合物聚合物。膳食纤维可包括非淀粉类多糖例如纤维素,以及许多其它植物组分例如糊精、 菊糖、木素、甲壳质、果胶、葡聚糖、寡聚果糖、抗性淀粉、可溶性玉米(葡萄糖)纤维 (soluble corn (gluco) fiber)、聚葡萄糖,以及树胶例如瓜耳胶、槐豆胶、黄原胶或者支链淀粉胶。已知一些膳食纤维对胆固醇和葡萄糖水平具有有益效应。适合的可溶性和不溶性纤维来源可商购获得。适合的纤维的实例是菊糖或其水解产物。所述菊糖可以以天然提取物的形式提供,其适合于人类摄取。适合的菊糖提取物可从Orafti NV Belgium以商标“Raftiline” 获得。例如,所述菊糖可以以Raftiline ST的形式提供,其是包含约90重量%至约94重量%的菊糖、至多约4重量%的葡萄糖和果糖,以及约4重量%至9重量%的蔗糖的白色细粉。所述菊糖的平均聚合度为约10至约12。菊糖的水解产物是果糖低聚物形式的寡聚果糖,其包含I-蔗果三糖(GM)、真菌四糖(GF!3)和IF-呋喃果糖基真菌四糖(GF4),其中果糖基单元(F)分别通过β _(2,1)-键与蔗糖(GF)连接。所述寡聚果糖可从例如Orafti NV, Belgium以商标“Raftilose”商购获得。在一优选实施方案中,菊糖提取物从knsus获得。 优选的knsus产品包括Frutafit⑧HD和Frutafit TEX !。Frutafit⑧HD是较短链的菊糖(约8-13个单体单元),Frutafit TEX !是较长链的菊糖(> 22个单体)。在实施例和附图中,它们通常由菊糖(即短链)或者菊糖TEX(即长链)表示。在一优选实施方案中,本发明的组合物可包含至少两种纤维源。在一更优选的实施方案中,一种纤维源是本发明的α-(1,2)_支化的α _(1,6)_葡聚糖,而第二纤维源是选自抗性麦芽糖糊精、聚葡萄糖、可溶性玉米(葡萄糖)纤维、纤维糊精、支链淀粉、抗性淀粉、 菊糖、寡聚果糖、寡聚半乳糖、半纤维素和果糖低聚物浆或者乳果糖或者任意其它益生元化合物(包括益生元二糖例如乳果糖和塔格糖等)的寡糖或多糖。含有Ci-(Id)-支化的 α-(1,6)葡聚寡糖的纤维源的该组合的结果是益生元被供给至个体的胃肠道的较大部分, 从而所述益生元不仅在小肠的第一部分中发酵,而且在结肠的整个长度中发酵。通过改变不同化合物的比值,可能可靶向从结肠的近端、中部至远端的发酵部位。因此,对所述个体遍及整个结肠长度的肠微生物群生态发挥有益效应。若使用可溶性纤维和不溶性纤维二者,则可溶性纤维与不溶性纤维的重量比优选为约1 4至约4 1;更优选约1 1至约 2 I0当所述营养组合物是食品或营养配方(nutritional formula)的形式时,所述营养组合物可包含蛋白质源、脂质源和/或碳水化合物源。这些来源可视需要进行选择,并且是本领域公知的。本发明的组合物也可包含维生素和矿物质或者高强度/高效甜味剂。例如,可提供足够的维生素和矿物质,以使每1000卡的所述营养组合物供给推荐的维生素和矿物质每日规定量的约25%至约250%。本文所述的化合物和组合物可用作益生元,或者当与下述益生菌组合使用时用作 “合生剂(synbiotics) ”。“益生元”是指通过选择性地刺激胃肠道特别是结肠中的有限数量的细菌的生长和/或活性来有益地影响个体,由此改善宿主健康的食品成分。益生元的实例包括寡聚果糖、菊糖、聚葡萄糖、抗性淀粉、可溶性玉米(葡萄糖)纤维、寡聚葡萄糖和寡聚半乳糖、阿拉伯糖基木糖寡糖(arabinoxylan-oligosaccharide)以及乳果糖。在另一实施方案中,本发明的组合物还包含益生菌。“益生菌(probiotic organism)”是指活微生物膳食补充剂,其通过它们在消化道中的功能为个体提供有益效应。为了发挥效应,所述益生微生物必须能够在消化条件下存活,并且它们必须能够在绝不损及所述个体的情况下至少暂时地在胃肠道中形成集落。仅有某些微生物菌株具有这些性质。优选地,所述益生菌选自乳杆菌属、双歧杆菌属、芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、肠球菌属、埃希氏杆菌属、链球菌属和酵母菌属。具体的微生物包括但不限于枯草杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bificum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、婴儿双岐杆菌(Bifidobacterium infantis)、IL双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、B誉热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)、尿肠 求菌(Enterococcus faecium) > 1 ! |ii> ^lif (Lactobacillus acidophilus) > 保力口利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、干酷乳杆菌(Lactobacillus casei)、 乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、罗伊季L Iflif (Lactobacillus reuteri)、罗氏季L If 菌(Lactobacillus rhamnosus) > M 球菌(Streptococcus faecium)、双乙酰乳酸链球菌(diacetilactus)、变异链球菌 (Streptococcus mutans)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、鲍氏酵母菌 (Saccharomyces boulardii. )、Torulopsia、米曲霉菌(Aspergillus oryzae)禾口链霉菌 (Streptomyces)等,包括它们的营养性孢子、非营养性孢子(芽孢杆菌属)及合成衍生物。 根据本发明,更优选的益生微生物包括但不限于以下三种细菌属的成员乳杆菌属、双岐杆菌属和酵母菌属。在一优选实施方案中,所述益生菌是双岐杆菌属。所述益生菌可以以其在水或另一种液体或半固体介质中的培养物的形式掺入到所述组合物中,在所述培养物中所述益生菌仍然有活力。在另一种技术中,可将包含所述益生菌的冻干粉通过混合或掺和掺入颗粒材料或者液体或半固体材料中。在一优选实施方案中,所述组合物所含的益生菌的量为至少1000个细胞/10g,优选10,000个细胞/10g,更优选100,000个细胞/10g,最优选1,000, 000个细胞/10g。应理解任何提及的益生菌细胞计数是指活细胞数。两种或更多种益生菌可用于组合物中。本发明的葡聚寡糖和包含它们的组合物具有缓慢的可发酵性。这导致产生气体的量低而且平缓,由此减轻与其相关的症状。菊糖快速且大量地促进气体生成,而与菊糖相比,本发明的葡聚寡糖较低量地逐渐释放气体。参见例如实施例10和图8A及8B。快速峰 (rapid peak)造成胃肠不适例如气胀和胃气胀,而若是逐渐且低量地产生气体,则身体可更容易地应对。依据体外消化数据(参见例如实施例4、图4A和4B以及实施例12),本发明的葡聚寡糖因α-(1, 支化而至少部分地不可消化。相信支化水平越高,则化合物的抗消化性越好,并且分子越大,则可消化性越低。支化避免被人类酶消化,并且分子越大,则在结肠中的发酵速度(即可被细菌消化的速度)越低。不可消化性是纤维的重要特征。本发明的葡聚寡糖可依据此特征归类为纤维。使用本发明的化合物使得能够产生短链脂肪酸,特别是丙酸。已知丙酸降低胆固醇。因此,本发明的化合物可降低罹患高胆固醇的风险。出人意料的是,在发酵研究中,低于IOOkD的葡聚寡糖的缓慢可发酵性刺激短链脂肪酸特别是丙酸的产生。由于丙酸的产生或者丙酸与乙酸的比值增高有益于控制有此需要的哺乳动物中的胆固醇水平,故此本发明对营养学家和消费者而言具有特别意义用以预防和/或治疗心血管病症风险。故此,本发明的另一方面提供用于改善个体健康(例如用于治疗胆固醇相关的疾病)的方法,其包括向个体给药对所述个体的健康发挥有益效应的有效量的包含a-(ld)-支化的α-(1,6) 葡聚寡糖的组合物。此外,公知短链脂肪酸降低肠内的PH并且这有助于钙吸收。故此,本发明的化合物还可影响矿物质吸收。这意味着它们还可通过因肠中SCFA增加而降低pH,从而改善骨健康,或者预防或治疗骨质疏松。“个体”通常是人类,但是本领域技术人员应理解,所述个体可以是非人类的动物。 故此,其它个体可包括哺乳动物,例如啮齿类动物(包括小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠)、猫、狗、 兔、牛、马、山羊、绵羊、猪和灵长类动物(包括猴、黑猩猩、猩猩和大猩猩)。本文中使用的术语“胆固醇相关的疾病”包括但不限于涉及血浆中胆固醇(特别是非高密度脂质(非HDL)胆固醇)的水平升高的病症,例如LDL胆固醇水平升高和HDL/LDL 比值升高、高胆固醇血症以及高甘油三酯血症等。在患有高胆固醇血症的患者中,降低LDL 胆固醇是治疗的首要目标之一。在患有高甘油三酯血症的患者中,降低高血清甘油三酯浓度是治疗的首要目标之一。具体而言,本文定义的胆固醇相关的疾病的治疗包括通过给药本发明的α-(1,2)_支化的α _(1,6)_葡聚糖或者包含本发明的α-(1,2)_支化的α_(1, 6)-葡聚糖的组合物来控制血液胆固醇水平、血液甘油三酯水平、血液脂蛋白水平、血糖和胰岛素敏感度。“有效量”的本文所述的化合物或组合物是指在剂量下且经所需时间有效实现期望的治疗结果(例如降低血液胆固醇或者预防或治疗胃肠道病症)的量。例如,向个体给药的组合物的量会取决于诸如个体的健康状况、个体的体重、个体的年龄以及组合物是否是唯一营养源等因素而变化。医师或营养师可容易地确定有效量。通常,给药足量的所述组合物以向所述个体提供每天至多约40g的(不溶性和可溶性)膳食纤维;例如,约25g至约35g膳食纤维/天。所述个体接受的a-(lj)-支化的α _(1,6)_葡聚糖的量优选为约 0. Ig至约15g/天,或者至多约40g/天。本文限定的化合物或组合物可以多剂量摄取(例如分散在整天中的2-5次摄取或者急性(acutely)摄取),或者可以单剂量摄取。本文限定的化合物或组合物还可在期望的时期内持续摄取。在某些实施方案中,所述期望的时期为至少1周,或者至少2周,或者至少3周,或者至少1个月,或者至少6个月。在一优选实施方案中,本发明提供通过向有此需要的个体给药本文限定的化合物或组合物来降低该有此需要的个体中的血液甘油三酯水平的方法。在另一优选实施方案中,本发明提供通过向有此需要的个体给药本文限定的化合物或组合物来降低该有此需要的个体中的低密度脂蛋白水平的方法。在另一优选实施方案中,本发明提供通过向有此需要的个体给药本文限定的化合物或组合物来增高该有此需要的个体中的高密度脂蛋白水平的方法。在另一方面,本发明提供含有至少15%的α-(1, -糖苷侧链的葡聚寡糖。这些 α-(1-2)支链的存在赋予该葡聚寡糖特定的性质;实际上人类的消化系统一般不具有水解此类键所需的酶途径。这些支链的存在赋予葡聚寡糖部分或完全的不可消化性,因此,葡萄糖几乎未被吸收或者较缓慢地被吸收入体内,由此导致血糖反应(glycemic response) 低。因此,本发明提供本文限定的葡聚寡糖,其用于制备导致血糖反应低的食品和饮料组合物。例如,这些化合物可用来替代糖或者其它可快速消化的碳水化合物,并由此降低食品的升糖负荷(glycemic load)、降低热量和/或降低食品的能量密度。另外,含有此类键的葡聚寡糖的稳定性使它们能够容易地通过并进入大肠,在其中它们可用作对结肠微生物群具有特异性的底物。因此,这些葡聚寡糖具有作为益生元的特征。在另一实施方案中,本发明的化合物用于治疗和/或改善肠健康。所述支化的葡聚寡糖在肠中被肠微生物群发酵,并且在体外肠模型中表现出与菊糖相比改善的耐受性, 即与菊糖相比,所述支化的葡聚寡糖的发酵导致气体产生较少,并且减轻因气体形成所致的不适,例如气胀和胃气胀。故此,本发明还涉及通过向有此需要的个体给药本文限定的化合物或组合物来减轻所述个体胃肠道中的气体形成,从而减轻由于气胀和胃气胀引起的肠疼痛或者肠不适的方法。在其它实施方案中,本发明的组合物为个体提供对食品发酵的改善的耐受性,并且可与纤维例如菊糖或者FOS、GOS或乳果糖组合以通过降低气体产生来改善耐受性。在另一实施方案中,以影响体重增长的量有效给药本发明的化合物,例如随着时间降低体重增长(参见例如以下实施例9,其中相对于对照,用本发明的化合物治疗的大鼠在给药4周后表现出较少的体重增长)。这表明本发明的化合物影响体重增长,并且可用来预防或治疗肥胖,或者有助于控制重量。此外,由于公知一些纤维如菊糖可诱导GLP1,故而本发明的化合物还可影响食物摄入,由此产生较小的体重增长(GLP1具有许多已知的生理功能,包括通过增加饱满感来减少食物摄入以及增加胰腺分泌的胰岛素)。在另一实施方案中,以降低个体的脂质含量(即通过降低个体的脂肪量)的有效量给药本发明的化合物 (参见例如以下实施例11)。在其它实施方案中,可以产生以下任一种效应的有效量向个体给药本发明的化合物(1)抗菌效应(通过刺激有益菌,葡聚寡糖可有助于对抗致病菌例如沙门氏菌属 (Salmonella)的生长);(2)对食物摄入和胰岛素敏感度的效应(并由此预防或降低代谢综合征、糖尿病和/或肥胖的风险),其是通过影响GLPl释放以及可能地影响与食欲调节和胰岛素分泌相关的其它肠激素实现的;(3)对发育进程(developmental programming)的效应,其是通过在怀孕和/或哺乳期间给药葡聚寡糖实现的(这可影响胎儿和/或婴儿,由此通过影响GLPl和/或肠内微生物群(代谢物)来预防以后生命中的胰岛素抗药性/肥胖);(4)通过因SCFA产生(发酵)降低pH而影响钙吸收;(5)由于已证明益生菌影响孤独症、阿尔茨海默病、变态反应、类风湿性关节炎、其它免疫缺陷等,因此本发明的化合物也可具有相同效应,因为所有这些疾病至少部分地起因于炎症,而炎症可通过使菌群转变为减轻局部(肠)和全身炎症的有益菌而得以消除;(6)预防或治疗炎性肠疾病和/或肠易激综合征,因为已证明给药本发明的化合物在克罗恩病的动物模型中改善炎性反应。参考以下实施例进一步描述本发明。实施例实施例1表1显示平均分子量为l_70kDa并含有至少15%的α - (1,2)-糖苷侧链的本发明的α-(1,2)_支化的α-(1,6)化合物的实施方案。表 本发明提供用于改善个体健康的组合物,其包含α-(1,2)-支化的α-(1,6)葡聚寡糖,所述葡聚寡糖的平均分子量优选为约10kDa至70kDa,具有约10%至50%的α-(1,2)-糖苷侧链,并且在所述个体中至少部分地不可消化。本发明还提供用于改善个体健康的方法,其包括向个体给药有效量的所述组合物以改善肠健康,或者预防或治疗胃肠道病症、胆固醇相关的病症、糖尿病或者肥胖。本发明还提供制备具有受控的大小和受控的支化度的葡聚寡糖的方法,其包括提供平均分子量为0.5-100kDa的α-(1,6)葡聚寡糖,并将至少10%的α-(1,2)-糖苷侧链引入所述α-(1,6)葡聚寡糖上。



查看更多专利详情

下载专利文献

下载专利