专利名称：对由局部缺血引发的组织损伤的治疗的制作方法醛糖还原酶与调节醛糖如葡萄糖和半乳糖生成其相应的多元醇如山梨醇和半乳糖醇的还原反应有关。本发明的式I所示的磺酰基哒嗪酮化合物被用作治疗和预防人和其它哺乳动物的糖尿病并发症的醛糖还原酶抑制剂，该糖尿病并发症与受该并发症侵袭的人和其它哺乳动物的特定组织(例如神经、肾、晶状体和视网膜组织)内的多元醇浓度升高有关。编号为2647676的法国专利出版物公开了某些具有被取代的苄基侧链和苯并噻唑侧链的哒嗪酮衍生物，该衍生物被用作醛糖还原酶的抑制剂。美国专利US 4251528公开了多种具有醛糖还原酶抑制特性的芳香碳环氧代二氮杂萘乙酸化合物。共同转让的美国专利US 4939140公开了作为醛糖还原酶抑制剂的杂环氧代二氮杂萘乙酸化合物。共同转让的美国专利US 4996204公开了被用作醛糖还原酶抑制剂的吡啶并哒嗪酮乙酸化合物。美国专利US 5834466公开了一种通过采用一种化合物如一种醛糖还原酶抑制剂的治疗方法来限制或降低局部缺血损伤程度的方法，所述缺血损伤是由心脏组织的新陈代谢和由局部缺血导致的离子异常造成的，所述醛糖还原酶抑制剂降低了NADH/NAD+的比例并促进糖酵解来产生ATP。本发明的概述本发明提供了治疗方法，该治疗方法包括给需要治疗或预防由局部缺血导致组织损伤的哺乳动物施用一种有效量的式I化合物、或一种所述化合物的前体药物、或一种所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐， 其中R1和R2各自独立地是氢或甲基；X和Y共同是CH2-CH(OH)-Ar或CH2-C(O)-Ar，或X是一个共价键、NR3或CHR4，其中，R3是(C1-C3)烷基或被一个或多个选自OH、F、Cl、Br、I、CN、CF3、(C1-C6)烷基、O-(C1-C6)烷基、S(O)n-(C1-C6)烷基和SO2-NR5R6的取代基选择性取代的苯基，而R4是氢或甲基，并且Y是被一个或多个选自Ar、OH、F、Cl、Br、I、CN、CF3、(C1-C6)烷基、O-(C1-C6)烷基、S(O)n-(C1-C6)烷基和SO2-NR5R6的取代基选择性取代的苯环或萘环；Ar是被一个或多个选自F、Cl、Br、I、CN、CF3、(C1-C6)烷基、O-(C1-C6)烷基、S(O)n-(C1-C6)烷基和SO2-NR5R6的取代基选择性取代的苯环或萘环；每次出现的n独立地是0、1或2；每次出现的R5独立地是H、(C1-C6)烷基、苯基或萘基；而每次出现的R6独立地是(C1-C6)烷基、苯基或萘基。在本发明的一个优选的技术方案中，所述化合物选自6-(3-三氟甲基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4-溴-2-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4-三氟甲基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-溴-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(3，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4-甲氧基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(3-溴-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；
6-(二苯基-4-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4’-氟-二苯基-4-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4’-三氟甲基-二苯基-4-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(3’，5’-双-三氟甲基-二苯基-4-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(二苯基-2-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4’-三氟甲基-二苯基-2-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-羟基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(3-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，3-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，5-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，3-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，4-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，6-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-氯-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-溴-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；和6-(萘-1-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮，或一种选自其中的化合物的前体药物，或一种所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐。
在本发明的一个更优选的技术方案中，所述化合物选自6-(2-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(3-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，3-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，5-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；
6-(4-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，3-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，4-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，6-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-氯-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-溴-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；和6-(萘-1-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮，或一种选自其中的化合物的前体药物，或一种所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐。
在本发明的一个甚至更优选的技术方案中，所述化合物选自6-(2-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(3-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，3-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，5-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，3-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，4-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，6-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-氯-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-溴-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；和6-(萘-1-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮，或一种选自其中的化合物的前体药物，或一种所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐。
在本发明的一个更特别优选的技术方案中，所述化合物选自6-(2，3-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；6-(2-溴-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮；和
6-(萘-1-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮，或一种选自其中的化合物的前体药物，或一种所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐。
在本发明的另一个优选的技术方案中，所述组织是心脏、脑、肝脏、肾脏、肺、肠、骨骼肌肉、脾脏、胰腺、视网膜或肠组织，特别是心脏组织。
在本发明的另外一个优选的技术方案中，所述式I化合物、所述前体药物，或所述化合物或所述前体药物的所述药学上可接受的盐以一种抑制醛糖还原酶的量进行施用。
在本发明的一个进一步优选的技术方案中，所述哺乳动物是人。
本文使用的术语“本发明的化合物”是指式I化合物。术语“式I化合物”意味着包括这种化合物的前体药物和这种化合物以及这种前体化合物的药学上可接受的盐。
本文使用的术语“(C1-Ct)烷基”表示一种具有一个至t个碳原子的饱和单价直链或支链脂族烃基，其中下标“t”表示一个大于1的整数。
术语“DMF”、“DMSO”和“THF”分别指的是N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和四氢呋喃。
本文使用的与本发明化合物有关的表达方式“药学上可接受的盐”包括药学上可接受的阳离子盐。表达方式“药学上可接受的阳离子盐”是为了定义但并不限于诸如碱金属盐(例如钠和钾)、碱土金属盐(例如钙和镁)、铝盐、铵盐和与有机胺的盐如苯乍生(N，N-二苄基乙二胺)、胆碱、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲葡糖胺)、苄乙胺(N-苄基苯乙胺)、乙醇胺、二乙胺、哌嗪、三乙醇胺(2-氨基-2-羟甲基-1，3-丙二醇)和普鲁卡因。
本发明式I化合物的药学上可接受的盐可以通过使游离酸形式的所述化合物与一种适当的碱，通常是一种等同物，在一种共溶剂中进行反应而方便制得。优选的共溶剂包括乙醚、二甘醇二甲醚和丙酮。优选的碱包括氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、氢化钠、甲醇钾、氢氧化镁、氢氧化钙、苯乍生、胆碱、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪和三乙醇胺。所述盐通过浓缩干燥或通过加入非溶剂来进行分离。在许多情况下，盐可以通过将所述盐的溶液与所述阳离子(例如乙基己酸钠或钾、油酸镁)的不同盐的溶液混合并利用上述的一种共溶剂使所需要的阳离子盐从中沉淀出来或通过浓缩分离需要的阳离子盐来制备。
术语“前体药物”表示一种能体内转化为一种具有特定药学活性的化合物的化合物。这种化合物包括式I化合物的N-烷基衍生物以及式I互变异构化合物的O-烷基衍生物。
术语“治疗方法”是指包括缓解方法和预防方法。
本技术领域的技术人员可以得知本发明的化合物能以几种互变异构形式存在。所有这些互变异构形式被认为是本发明的一部分。例如，式I化合物的羰基部分的所有互变异构形式被包含在本发明中。所有烯醇-酮形式的式I化合物被包含在本发明中。
本技术领域的技术人员还可以得知本发明的化合物能以几种非对映异构体和对映异构体的形式存在。所有非对映异构体和对映异构体的形式，及其外消旋混合物被包含在本发明中。
本技术领域的技术人员还可以进一步得知式I化合物能以晶体结构中结合了水分子的水合物的晶体形式和晶体结构中结合了溶剂分子的溶剂化物的晶体形式存在。所有这种水合物和溶剂化物形式被认作是本发明的一部分。
本发明还包括同位素标记的化合物，这些化合物与式I描述的化合物相同，只是其中一个或多个原子被一个原子量或质量数不同于自然界中一般发现的原子量或质量数的原子所取代。能够掺入本发明化合物中的同位素的实例分别包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，诸如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明的化合物、其前体药物以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐在本发明的保护范围内。本发明的某些同位素标记的化合物，例如其中掺入了放射性同位素如3H和14C的那些化合物，被用于药物和/或基底组织分布分析。氚，即3H以及碳-14，即14C同位素尤其适于简易的制备和检测。而且，利用重同位素如氘，即2H的取代可以产生一定的治疗优势，该治疗优势在于新陈代谢稳定性的提高，例如体内半衰期的延长或使用剂量的减少，因此所述取代更适用于某些情况。同位素标记的本发明的式I化合物及其前体药物一般可以通过实施以下图解和/或实施例中记载的步骤，通过利用容易获得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。
本发明的详细描述本发明的式I化合物抑制醛糖还原酶，一种催化葡萄糖向山梨醇进行生物转化的酶。
图解A 如图解A中所示，葡萄糖被醛糖还原酶还原为山梨醇，然后山梨醇被脱氢酶氧化为果糖。山梨醇向果糖的转化消耗了NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)。本发明的式I化合物通过降低用于转化为果糖的山梨醇的浓度而节省了NAD+。
如果降低或中断了氧合血液向组织的供给(局部缺血)，氧缺乏组织中的细胞能够通过糖酵解途径由葡萄糖厌氧产生能量。糖酵解需要利用NAD+。
如果不希望受任何特定理论或机理的束缚，应当相信通过醛糖还原酶抑制剂来节省NAD+的使用将提高或延长局部缺血组织进行糖酵解的能力，即在缺氧的情况下产生能量从而增强和延长组织细胞的存活力。由于对醛糖还原酶的抑制将减缓组织NAD+的消耗，所以醛糖还原酶抑制剂是一种有效的抗局部缺血剂。
通常，本发明的式I化合物可以通过包括与化学领域中已知方法类似的方法来制备，尤其是按照本文记载的内容来制备。某些生产本发明式I化合物的方法通过下列反应式来进行阐述。其它方法在实验部分进行描述。
反应式1 按照反应式1，式I化合物可以通过式1-1的二氯哒嗪化合物或式1-2的氯哒嗪酮化合物与一种碱或Y-X-SO2H的碱金属盐，例如式1-3的Y-X-SO2Na发生反应来制备，其中R1、R2、X和Y如本文所定义。所述反应可以在水中或水与可混溶于水的溶剂如二噁烷或四氢呋喃(THF)的混合物中进行。所述反应通常在环境压力下以及在约80℃至所用溶剂的沸点之间的温度下进行。
反应式2 式I化合物还可以按照反应式2的步骤来制备。在反应式2的步骤1中，式2-1的化合物与式2-2的硫醇化合物发生反应生成式2-3的硫基化合物，其中R1、R2、X和Y如本文所定义并且Z是Cl、O-(C1-C6)烷基、O-Ph、O-CH2-Ph，其中Ph是被氯、溴或甲基任选地单或双取代的苯基。
在反应式2的步骤1的一种方法中，一种式2-1的化合物与式2-2硫醇的碱金属盐发生反应。所述碱金属盐是通过式2-2的硫醇与一种碱金属(C1-C6)醇盐在(C1-C6)烷基-OH中发生反应来制备的。优选的是(C1-C6)醇盐和(C1-C6)烷基-OH对应于式2-1化合物中的Z。例如，当Z是OMe时，首选的醇盐是碱金属甲醇盐，优选地是甲醇钠，以及首选的(C1-C6)烷基-OH是甲醇。叔丁醇钾可被用于链烷醇和Z的任意结合。首选的金属氧化物是甲醇钠和乙醇钠。将由形成式2-2硫醇化合物的碱金属盐的反应产生的过量乙醇蒸发掉并且将所形成的碱金属盐在一种芳香烃溶剂，优选的是在甲苯中与式2-1化合物回流过夜以便生成式2-3化合物。
在反应式2的步骤1的另一个方法中，式2-3的化合物可以通过式2-1的化合物与式2-2的化合物在含有碳酸钠或碳酸钾的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中发生反应来制备。该反应优选地在环境压力下以及在约80℃至约120℃之间的温度下进行。
在反应式2的步骤1的另外一个方法中，式2-1的化合物与式2-2的化合物在一种极性非水溶剂(例如乙腈)中或在一种醚溶剂(例如二甘醇二甲醚、四氢呋喃或DMF)中发生反应，其中所述溶剂含有碱或碱土金属氢化物，优选地含有氢化钠或叔-丁醇钾，其中式2-1化合物中的Z是O-(C1-C6)烷基。优选的溶剂是DMF。
反应式2的式2-1化合物，其中Z是O-(C1-C6)烷基、O-Ph、O-CH2-Ph，Ph是被氯、溴或甲基任选地单或双取代的苯基，可以通过式1-1的化合物与HO-(C1-C6)烷基、HO-Ph、HO-CH2-Ph的钠盐发生反应来制备。 合适地是，所述钠盐可以通过HO-(C1-C6)烷基、HO-Ph、HO-CH2-Ph与金属钠在约0℃至约50℃的温度下发生反应来制备。所述氧化物还可以通过HO-(C1-C6)烷基、HO-Ph、HO-CH2-Ph与氢化钠，任选地在一种反应-惰性溶剂，优选地是苯、甲苯、THF或醚存在的条件下，在约0℃至约室温的温度下发生反应来制备。
在反应式2的步骤2中，式2-3的化合物被氧化生成式2-4的磺酰基化合物。所述式2-3的化合物任选地在有甲酸、乙酸或过酸，诸如间-氯过苯甲酸(MCPBA)存在的条件下，于一种卤化碳溶剂(例如，二氯甲烷)中可以被30％的过氧化氢所氧化。该反应优选地在环境压力下和在约20℃至约40℃的温度下进行约3至约6小时而完成。该反应需谨慎地进行调控以免氮原子被过度-氧化为N-氧化物。形成的N-氧化物可以通过与亚磷酸三乙酯、亚硫酸钠或亚硫酸钾，优选地在约100℃下反应大约4小时而被转化成还原的哒嗪化合物。
反应式2的步骤3中的式2-4化合物可以被无机酸，例如浓盐酸单独水解或在一种醚溶剂如二噁烷中被无机酸，例如浓盐酸水解从而获得式I的化合物。该步骤3的反应优选地在环境压力下和在所用溶剂的回流温度下进行。
反应式3 反应式3还提供了另外一种制备式I化合物的方法。在反应式3中，一种式1-2的氯哒嗪酮化合物与一种式2-2的硫醇化合物发生反应从而生成一种式3-1的亚磺酰基哒嗪酮化合物。该反应优选地在有一种碱或一种碱金属醇盐，例如叔丁醇钾存在的条件下，于反应-惰性极性溶剂如DMF或乙腈中于大约室温至100℃的温度下进行。所产生的式3-1化合物任选地在有乙酸或过酸，优选地在有间-氯过苯甲酸(MCPBA)存在的条件下，于一种卤化碳溶剂如二氯甲烷中被过氧化氢氧化生成一种式I的化合物。
反应式4 其中X是CHR4、R4是氢或甲基的式工化合物可以按照反应式4来制备。在反应式4的步骤1中，式4-1的化合物与Y-X-L在有一种碱(优选地碳酸钠、碳酸钾或氢化钠)存在的条件下发生反应从而生成式2-3的化合物，其中Z是Cl、O-(C1-C6)烷基、O-Ph1、O-CH2-Ph11，其中Ph1是被氯、溴或甲基任选地单或双取代的苯基，其中L是一种离去基团，优选地是Cl、Br、I、OSO2CH3、OSO2CF3或OSO2Ph2、其中Ph2是被Br、Cl或OCH3任选地单取代的苯基。如果所述碱是碳酸钠或碳酸钾，那么所述反应溶剂优选地是丙酮。然而，如果所述碱是氢化钠，那么DMF或乙腈则被用作反应溶剂。该反应优选地是在环境压力和在约室温至约100℃之间的温度下进行。步骤2和3类似于反应式2的步骤2和3并且以其同样的方式进行。
其中X和Y共同形成-CH2C(O)Ar的式I化合物可以按照反应式4来制备，其中在步骤1中，式4-1的化合物与LCH2C(O)Ar反应生成式2-3的化合物。该反应是在有碱，优选地碳酸钠或碳酸钾存在的条件下并且在一种反应-惰性溶剂如二甲基甲酰胺中进行的。该反应的温度优选地从约室温至约80℃。反应式4的步骤2和步骤3是以与反应式2的步骤2和3类似的方式进行。
其中X和Y共同形成-CH2CH(OH)Ar的式I化合物可以通过其中X和Y共同形成-CH2C(O)Ar的式I化合物与氢硼化钠在醇溶剂如甲醇、乙醇或异丙醇中反应来制备。该反应优选地在约0℃至约60℃的温度下和环境压力下进行。
反应式5 其中X是NR3且R3是(C1-C3)烷基的式I化合物(式5-3化合物)可以按照反应式5来制备。在反应式5的步骤1中，式2-1的化合物与硫脲在一种酮溶剂，优选地在丙酮、乙甲酮或异丁酮中发生反应从而获得式4-1的化合物，其中所述式2-1的化合物中的Z是Cl、O-(C1-C6)烷基、O-Ph、O-CH2-Ph，其中Ph是被氯、溴或甲基任选地单或双取代的苯基。步骤1在环境压力和在所述溶剂的回流温度下进行。式2-1的化合物可以按照上述反应式2来制备。
在反应式5的步骤2中，按照杂环化学杂志(J.Heterocyclic Chem.)1998，35，429-436中记载的方法制备式5-1的化合物。式5-1的化合物尤其适合用作制备式I化合物的中间体。
在反应式5的步骤3中，式5-2化合物通过式5-1的化合物与过量HN(R3)-Y，任选地在一种有机反应惰性碱，优选地一种选自三甲胺、三乙胺和二甲基-异丙基-胺的三烷基胺，更优选地三乙胺中发生反应来制备。该反应可以任选地在一种反应惰性溶剂如一种醚、卤化碳或芳香烃溶剂，优选地选自二乙醚、异丙醚、四氢呋喃、二甘醇二甲醚、氯仿、二氯甲烷、苯和甲苯的反应惰性溶剂中进行。步骤3的反应优选地在约室温至约所用溶剂的回流温度下进行。
在反应式5的步骤4中，式5-3的化合物可以通过利用无机酸如浓盐酸单独地或在一种醚溶剂(例如二噁烷)中水解式5-2的化合物来制备。该反应可以在大约室温至大约所用溶剂的回流温度下进行。
其中X是一个共价键而Y是一个被羟基取代的苯环或萘环的式I化合物可以通过其中Y是被C1-C6烷氧基取代的苯环或萘环的式I化合物与脱烷基化试剂如AlCl3、AlBR3或BF3发生反应来制备。如果以AlCl3或AlBR3作为脱烷基化试剂，那么反应优选地在不采用任何试剂的情况下进行。如果以BF3作为脱烷基化试剂，那么优选地采用卤化碳，优选地是二氯甲烷或二氯乙烯。该反应在环境压力和大约60℃至大约80℃的温度下进行。
其中X是一个共价键而Y是一个被任选取代的苯环或萘环取代的苯基或萘基的式I化合物的制备可以首先通过式2-4的化合物与适当取代的苯基或萘基硼酸在有钯催化剂(如Pd[P(Ph)3]4)和碳酸钾或碳酸钠存在的条件下发生反应，其中式2-4的化合物中的X是一个共价键，Z是O-(C1-C6)烷基，Y是具有一个溴基或碘基取代基的苯基或萘基。该反应优选地在一种芳香烃溶剂(优选地甲苯)，或一种C1-C6醇(优选地乙醇)中，在环境压力和大约室温至所用溶剂的回流温度下进行。采用一种无机酸(优选地盐酸)单独地或在一种醚溶剂(优选地二噁烷)中对第一步骤的产物进行水解来获得其中Y是被任选取代的苯环或萘环取代的苯基或萘基的式I化合物。
心脏防护(如表现为梗塞心肌的减少)，可以通过在作为心肌局部缺血预处理的体外模型的离体的、逆行性滴注的兔子心脏中利用腺苷受体兴奋剂来进行药理学诱导(Liu等，心血管研究(Cardiovasc.Res.)，281057-1061，1994)。下面记载的体外试验表明如果对离体的兔子心脏施用测试化合物(即一种本文记载的化合物)，也能够对心脏防护进行药理学诱导，即减少心肌梗塞程度。所述测试化合物的药效与局部缺血预处理和A1/A3腺苷兴奋剂、APNEA 2-(4-氨基苯基)乙基腺苷相当，表明在兔子离体心脏中已经从药理学水平上诱导了心脏的防护(Liu等，心血管研究(Cardiovasc.Res.)，281057-1061，1994)。精确的方法如下所述。
用于这些实验的方案严格按照Liu等描述的方法进行。采用戊巴比妥钠(30mg/kg，静脉注射)麻醉雄性新西兰科白兔(3-4kg)。达到深度麻醉(通过不出现眼睛瞬间反射来确定)后，对该动物进行插管并采用正压通风机通入100％的氧气。进行胸廓切开术，露出心脏，将一个套圈(2-0丝)松弛地放置在下行冠状动脉的左前方分支的周围，离心脏尖大约2/3的距离。将所述心脏从胸腔中取取出并快速(小于30秒)放置在兰根道尔夫氏装置上。在80mmHg的恒压和37℃下，以非循环方式采用一种改进的Krebs溶液(NaCl 118.5mM，KCl 4.7mM，MgSO41.2mM，KH2PO41.2mM，NaHCO324.8mM，CaCl22.5mM和葡萄糖10mM)经动脉退行性滴注所述心脏。通过采用95％的O2/5％的CO2进行鼓泡将滴注液的pH维持在7.4-7.5。心脏的温度通过采用加热生理溶液和滴注管和离体心脏周围的夹套水的容器来进行严格地控制。心脏速率和左心室压力通过一个插入左心室并通过不锈钢管与一个压力转换器连接的胶乳球来确定。心室内的这个球被充气以便提供80-100mmHg的收缩压和小于10mmHg的舒张压。整个冠状流还通过采用一个在线流式探测器进行连续的监控并相对心脏重量进行标准化。
将所述心脏平衡30分钟，平衡期间所述心脏必须将左心室压力稳定在上述参数之内。在区域性局部缺血30分钟期间前的任何时间，如果所述心脏速率低于180bpm，那么在剩余的实验时间内所述心脏的速率大约在200bpm。通过完全停止心脏滴注(完全局部缺血)5分钟，接着再滴注10分钟来诱导局部缺血预处理。完全局部缺血/再滴注再重复一次，接着进行30分钟的区域性缺血。通过勒紧冠状动脉分支周围的套圈来达到区域性局部缺血。进行30分钟的区域性局部缺血后，放松所述套圈并对心脏再进行120分钟的滴注。
药理学心脏防护可以通过在30分钟的区域性局部缺血的前30分钟开始以预定浓度滴注测试化合物，并且一直持续到结束了120分钟的再滴注来进行诱导。接受了测试化合物的心脏不进行两个期间的局部缺血预处理。对照化合物，APNEA(50nM)通过心脏(没有接受所述测试化合物)滴注5分钟，在30分钟的区域性局部缺血的前10分钟结束。
120分钟的再滴注结束时，勒紧冠状动脉套圈，并通过心脏滴注0.5％的荧光锌镉硫酸盐颗粒(1-10μm)悬浮液；这使得除可能发生梗塞的区域(危险区域)外的全部心肌着色。将所述心脏从兰根道尔夫氏装置上取下，吸干，称重，用铝箔包裹起来并在-20℃下贮藏过夜。第二天，将所述心脏从尖端到冠状动脉套圈的正上方切成2mm的横切片。在磷酸盐缓冲液中，用1％氯化三苯基四唑(TTC)将所述切片在37℃下染色20分钟。TTC与活组织(含有NAD-依赖-脱氢酶)反应，这种染色在活组织(染成红色)与死组织(未染色的梗塞组织)之间有差别。采用预校准图像分析仪计算左心室的每一切片的梗塞区域(未着色)和危险区域(没有荧光颗粒)。为了使心脏之间危险区域不同程度的局部缺血损伤标准化，将所述数据表示为梗塞区域与危险区域的比值(％IA/AAR)。
本发明的化合物作为预防哺乳动物组织局部缺血损伤的药剂活性以及功效可以通过按照本技术领域的技术人员已知的标准体外分析方法(例如，B.L.Mylari等，医药化学杂志(J.Med.Chem.)，1991，34，108-122)以及按照下文通用实验规程(General Experimental Procedures)中记载的方案测定醛糖还原酶抑制所述化合物的活性来得到进一步的证实。一种组织中的醛糖还原酶抑制剂的活性可以通过测定降低组织山梨醇浓度或组织果糖浓度(即，由于抑制醛糖还原酶而抑制由山梨醇产生果糖)所需的醛糖还原酶抑制剂的量来进行确定。
在本发明的治疗方法中，式I化合物作为被设计用来获得治疗效果的适当配药方案的一部分进行用药。每次用药剂量和所述化合物用药间隔将取决于所用本发明的式I化合物，所用药物组合物的类型，治疗对象的特性和疾病的严重程度。通常，在实施本发明的方法的过程中，本发明的式I化合物的有效剂量范围为单次剂量或均分剂量大约是0.1mg/kg/天至大约500mg/kg/天。然而，根据治疗对象的状况，用药剂量必然会出现某种程度的差异。任何情况下，用药个体决定个体对象的合适用药剂量。
所述体外分析方法和本文记载的体内方案提供了一种可以对本发明化合物的活性与其它已知化合物活性进行比较的方法。比较的结果有助于确定用于诱导哺乳动物包括人预防局部缺血的用药剂量水平。这种分析方法提供了一种对本发明式I化合物的活性与其它已知醛糖还原酶抑制剂化合物的活性进行比较的方法。比较的结果有助于确定这种用药剂量水平。
本发明的化合物可以通过任何将本发明化合物优先传输到靶向组织(例如，神经、肾、晶状体、视网膜和/或心脏组织)的方法来进行施用。所述化合物可以通过多种药用途径进行施用，包括口服、十二指肠内地、非肠道地(例如，静脉内地、直肠地、皮下地或吸入)等，并且可以单次用药(例如，每天一次)或多次用药或通过连续滴注用药。
本发明的化合物可以单独或与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂结合，以单次或多次用药的方式进行施用。合适的药学载体、赋形剂和稀释剂包括惰性固体稀释剂或填充剂，无菌水溶液和各种有机溶剂。通过本发明的化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂进行结合所形成的药物组合物以多种用药形式如片剂、粉剂、锭剂、糖浆、注射液等方便地进行施用。如果需要，这些药物组合物可以含有其它成分如增香剂、粘合剂、赋形剂等。因此，为了口服，含有各种赋形剂如柠檬酸钠、碳酸钙和/或磷酸钙的片剂可以同各种分散剂如淀粉、海藻酸和/或某些复合硅酸盐和粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶和/或阿拉伯胶一起使用。另外，润滑剂如硬脂酸镁、十二烷基磺酸钠和滑石粉通常被用于制备片剂。类似形式的固体组合物还可以被用作软和硬填充明胶胶囊的填充剂。优选用于此目的的物质包括乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇。当水悬浮液或酏剂被用于口服时，其中的药物活性剂可以将各种甜味剂或增香剂、色素或染料并且如果需要，乳化剂或悬浮剂与稀释剂如水、乙醇、丙二醇、甘油和/或其组合结合起来使用。
为了进行非肠道用药，可以使用本发明化合物在芝麻油或花生油、含水丙二醇或无菌水溶液中的溶液。如果需要，这种水溶液应当进行适当的缓冲并且所述液体稀释剂首先提供了与充足盐水和葡萄糖的等渗性。这些特定的水溶液特别适用于静脉内、肌内、皮下和腹膜内用药。在这点上，所使用的无菌含水介质可以通过本技术领域的技术人员已知的标准技术方便地得到。
通常，本发明的组合物是通过口服或非肠道进行用药(例如，静脉内的、肌内的、皮下的或骨髓内的)。例如，对于患者患有胃肠疾病的情况还可以进行局部用药，或者无论何时由参与的医师确定施用于组织或器官表面的最好治疗方案。
本发明化合物的口腔用药可以采取通过常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
对于鼻内用药或通过吸入用药，本发明的化合物适合于以一种来自由患者挤压和打气的泵喷雾容器的溶液或悬浮液的形式或来自增压容器或一个喷雾器的气溶胶喷雾形式进行传输，与所述增压容器或一个喷雾器一起使用的是一种适当的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适当的气体。对于增压气溶胶，剂量单位可以通过提供一个释放仪表计量值的阀门来确定。所述增压容器或雾化器可以装有一种本发明化合物的溶液或悬浮液。用于吸入器或吹入器的胶囊或药筒(例如，由明胶制得)可以配制成含有本发明的一种化合物或化合物和一种适当粉状基质(如乳糖或淀粉)的粉状混合物。
为了经皮(例如，局部)用药，制备稀释无菌、含水或部分含水溶液(通常以大约0.1％至5％的浓度)，其它方面类似于上述非肠道溶液。
制备含有一定量活性成分的各种药物组合物的方法是已知的，或者在本文公开内容的基础上对于本技术领域的技术人员来说是显而易见的。例如制备药物组合物的方法，参见雷明顿的制药科学(Remington’Pharmaceutical Sciences)，Mack出版公司，Easton，Pa.，第19版(1995)。
上文引用的杂志论文和科学参考文献以及专利出版物被全文引入本文作为参考。
通用实验方法利用Thomas-Hoover毛细血管熔点装置测定熔点，并且是未校正的。利用Bruker AM-250(Bruker Co.，Billerica，马萨诸塞州)，BrukerAM-300，Varian XL-300(Varian Co.，Palo Alto，加利福尼亚)或VarianUnity 400在大约30℃和250、300或400MHz下获得质子的1H NMR光谱。所测化学移位相对于作为内标的剩余氯仿(7.26ppm)，二甲亚砜(2.49ppm)或甲醇(3.30ppm)是百万分之几(6)。峰形和对峰形的描述表示如下s，单峰；d，双峰；t，三峰；q，四峰；m，多峰；c，复合峰；br，宽峰；app，表观峰。在热喷雾(TS)条件下通过利用Fisons(现在的Micromass)Trio 1000质谱仪(Micromass公司，Beverly，马萨诸塞州)，在化学离子化条件下通过利用Hewlett Packard 5989A离子束质谱仪(Hewlett Packard公司.，Palo Alto，加利福尼亚)或在大气压离子化(APCI)条件下通过利用Fisons平台光谱仪获得低分辨质谱。
实施例16-(3-三氟甲基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮制备3，6-二氯哒嗪(4.44g)，3-三氟甲基苯基亚磺酸钠盐(6.93g)，异丙醇(30mL)和水(1mL)的混合物并回流18小时。然后冷却所述反应混合物，用水(100mL)稀释并收集固体沉淀。所述固体与正丙醇一起研磨并收集所述固体来获得标题化合物(25％，2.3g)。
实施例2
6-(3-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮步骤A3-(2-氟-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪。向4-氟苯硫酚(2.56g)于DMF(10ml)中的清澄溶液中加入3-氯-6-甲氧基-哒嗪(3.18g)b并在室温下搅拌1小时。所述反应混合物用水(30mL)进行淬火并用乙酸乙酯(50mL)进行萃取。收集所述乙酸乙酯层，用水(2×20mL)冲洗乙酸乙酯层，收集有机部分并用无水硫酸钠干燥并过滤，然后蒸发过滤物以便获得粗提物3-(2-氟-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪(85％，4.0g，mp，58-62℃；质谱M+，236)。
步骤B3-(2-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪。制备3-(2-氟-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪(500mg)，间-氯过苯甲酸(MCPBA)(1.04g)与二氯甲烷(10mL)的混合物并在室温下搅拌2小时。用二氯甲烷稀释所述反应混合物并用饱和的碳酸氢钠(10mL)冲洗二氯甲烷层，然后用水冲洗(2×20mL)。收集二氯甲烷层，并在无水硫酸钠上干燥，过滤并蒸发干燥过滤物。通过硅胶层析纯化残余物(以3∶1乙酸乙酯/己烷作为洗脱液)来获得白色固体3-(2-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪(51％，290mg；NMR，4.19(s，3H)，7.13(d，1H)，7.21(d，1H)，8.13(m，4H))。
步骤C6-(2-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮。制备3-(2-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪(200mg)与浓盐酸(2mL)的混合物并回流1小时。冷却所述反应混合物并用水(20mL)稀释。然后加入充足的40％的氢氧化钠水溶液将所述混合物的pH调节到3并采用乙酸乙酯(2×20mL)提取所述混合物。收集和合并乙酸乙酯提取部分，在无水硫酸钠上干燥并进行过滤。蒸发所述过滤物来获得白色固体的标题化合物(45％，80mg)，mp，173-176℃；NMR，7.06(d，1H)，7.23(m，1H)，7.3(m，1H)，7.89(d，1H)，8.02(m，2H)和11.66(s，1H)。
实施例36-(4-溴-2-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮步骤A3-(4-溴-2-氟-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪。制备2-氟-4-溴苯硫酚(300mg)，2，6-氯-哒嗪(149mg)，碳酸钠(400mg)与丙酮(6mL)的混合物并回流2小时。蒸发掉所述混合物中的丙酮并将得到的残余物溶解在甲醇(3mL)和金属钠(166mg)溶液中。将所得到的溶液回流1小时。蒸发掉甲醇以得到3-(4-溴-2-氟-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪，其不需要分离便可以直接被用于步骤2。
步骤B3-(4溴-2-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪。将步骤A的产物(400mg)溶解在氯仿(10mL)中并将间-氯过苯甲酸(MCPBA)(770mg)加到所得到的溶液中。所述混合物在室温下搅拌过夜。蒸发掉溶剂并通过硅胶层析纯化得到的残余物(以90％己烷/10％乙酸乙酯作为洗脱液)来获得标题化合物(264mg，60％)质谱，M+，346。
步骤C6-(4-溴-2-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮。制备3-(4-溴-2-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪(260mg)，二噁烷(5mL)与浓盐酸(1mL)的混合物并回流2小时。然后将所述混合物蒸发至干。所得到的残余物用水研磨并收集和风干沉淀的固体来获得标题化合物(90％，225mg)，mp＞220℃；NMR，7.05(d，1H)，7.7(d，1H)，7.9(m，3H)，13.8(s，1H)。
实施例46-(3-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮步骤A3-(3-氯-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪。将金属钠(218mg)溶解在甲醇(10ml)中。加入3-氯苯硫酚并在室温下搅拌1小时。蒸发掉过量的甲醇并向干燥的残余物中加入甲苯(20mL)和3-氯-6-甲氧基哒嗪(1.1g)。将所述反应混合物回流1小时，并冷却至室温，然后注入水(30m1)。用20％的氢氧化钾将所述溶液的pH调节到10并用乙酸乙酯(2×20mL)进行萃取。收集萃取物的含水层。用浓盐酸将含水部分酸化到pH3，然后用乙酸乙酯(3×10mL)进行萃取。蒸发乙酸乙酯萃取物，然后通过硅胶层析纯化残余物来得到3-(3-氯-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪(M+，253)。
步骤B3-(3-氯-苯酰磺基)-6-甲氧基-哒嗪。制备3-(3-氯-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪(529mg)，间-氯过苯甲酸(MCPBA)(760mg)与氯仿(20mL)的混合物并在室温下搅拌2小时。用5％的硫代硫酸钠(20mL)稀释所述反应混合物，接着用水(30mL)稀释。收集所述氯仿层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并蒸发干燥氯仿部分。通过硅胶层析纯化所得到的固体残余物(以3∶1己烷/乙酸乙酯作为洗脱液)来获得3-(3-氯-苯酰磺基)-6-甲氧基-哒嗪(29％，173mg)质谱，M+，285。
步骤C6-(3-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮。制备3-(3-氯-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪(148mg)，二噁烷(2mL)与浓盐酸(0.5mL)的混合物并回流30分钟。然后将所述反应混合物蒸发至干并用乙酸乙酯(2×10mL)提取残余物。收集乙酸乙酯提取部分，在无水硫酸钠上干燥并进行过滤。蒸发所述过滤物来获得白色固体6-(3-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮(38％，61mg)，mp，222-223℃；NMR，7.11(d，1H)，7.74(m，1H)，7.86-8.04(m，4H)，13.86(s，1H)。
以类似于实施例4的方法由适当的起始物制备实施例4A至4N的化合物。
实例化合物MP℃4A6-(4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮＞2254B6-(4-三氟甲基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 ＞2204C6-(2-溴-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮210-2134D6-(3，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 166-1684E6-(4-甲氧基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮111-1134F6-(2-氯-4-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 205-2084G6-(4-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮＞2204H6-(2-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮220-2224I6-(3-溴-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮＞2204K6-(4-溴-2-氟-甲苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 ＞2204L6-(2，6-二氯-甲苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 219-2204M6-(3-氯-5-甲基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 ＞2504N6-(2-氯-4，6-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 ＞250实施例56-(2，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮步骤A6-(2，4-二氯-苯硫基)-2H-哒嗪-3-酮。将叔丁醇钾(1.1g)加到2，4-二氯苯硫酚(1.8g)于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(5mL)中的溶液中。所述混合物在室温下搅拌10分钟，然后加入6-氯-2H-哒嗪-3-酮(1.31g)。所述反应混合物在100℃下搅拌5小时。然后将所述混合物冷却至室温，注入水(20ml)并加入20％的氢氧化钾(5mL)。所得到的深色溶液用乙酸乙酯(2×10mL)进行萃取。收集含水层并用浓盐酸将pH调节到3。然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取所述溶液。收集乙酸乙酯层，在无水硫酸钠上进行干燥，过滤并蒸发以便获得粗制产品，该粗制产品通过硅胶层析进行纯化(以1∶1乙酸乙酯/己烷作为洗脱液)后得到6-(2，4-二氯-苯硫基)-2H-哒嗪-3-酮(418mg，15％，)，NMR，6.88(d，1H)，7.10(d，1H)，7.24(dd，1H)，7.48(d，1H)，7.52(s，1H)。
步骤B6-(2.4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮。制备6-(2.4-二氯-苯硫基)-2H-哒嗪-3-酮(418mg)，过乙酸(3.2mL)与乙酸(3.2mL)的混合物并在80℃下搅拌2.5小时。然后将所述混合物冷却至室温并注入水(50ml)。收集得到的白色固体并进行干燥来获得标题化合物，6-(2，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮，(37％，173mg)，mp，202-203℃；NMR7.15(d，1H)，7.81(dd，1H)，8.03(m，2H)，8.25(d，1H)，13.88(s，1H)。
以类似于实施例5的方法由适当的起始物制备实5A至5I的化合物。
实例化合物MP℃5A6-(2-氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮220-2225B6-(2，4-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 186-1885C6-(萘-1-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 225-2265D6-(2，4-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 202-2035E6-(2-氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮189-1915F6-(2，3-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 224-2255G6-(2，5-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 229-2325H6-(2，6-二氯-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 118-1205I6-(2，3-二氟-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮 ＞225实施例6
6-(2-羟基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮制备6-(2-甲氧基-苯磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮(100mg)与三溴化铝(2g)的混合物并在100℃下加热2小时。冷却所述反应化合物并加入水(mL)。然后用氯仿提取所述混合物。用水(2×10mL)冲洗有机提取物，在无水硫酸钠上进行干燥并蒸发。用异丙醚研磨所得到的残余物并且通过过滤收集所得到的固体以便得到所述的标题化合物(61％，58mg)，1HNMR(CDCl3，300MHz)，δ7.0(m，3H)，7.6(m，2H)，7.8(d，1H)。
实施例73-(2-氯-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪，N-氧化物制备3-(2-氯-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪，间氯过苯甲酸(MCPBA)(4.0g)与氯仿(30mL)的混合物并回流30小时。质谱分析一份反应样品的结果表明完全转化为所需的砜-N-氧化物(M+，301)。冷却所述反应物，并连续用亚硫酸钠(10％的溶液，20mL)，碳酸钠(10％的溶液，20mL)，和水(2×20mL)冲洗所述反应物。收集氯仿层，在无水硫酸钠上进行干燥，过滤并蒸发过滤物以便获得粗制固体。该粗制产品通过硅胶层析进行纯化(以1∶1乙酸乙酯/己烷作为洗脱液)以便得到标题化合物(38％，425mg)，mp，148-153℃；(38％，425mg)；NMRδ4.01(s，3H)，6.80(d，1H)，7.42(m，1H)，7.57(m，2H)，8.38(d，1H)，8.46(m，1H)。
实施例83-(2-氯-4-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪，N-氧化物以3-(2-氯-4-氟-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪作为起始物并且按照类似于实施例7的方法制备所述标题化合物。(60％)；mp，159-161℃；NMRδ4.01(s，3H)，6.80(d，1H)，7.15(dd，1H)，7.25(dd，1H)，8.37(d，1H)，8.49(m，1H)。
实施例93-(2-氯-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪将由实施例7制备的3-(2-氯-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪，N-氧化物(317mg)和亚磷酸三乙酯(3mL)的混合物加热到100℃持续小时。将所述混合物冷却到室温，注入水(20mL)，并用乙酸乙酯(2×10mL)进行提取。蒸发干燥有机提取物并通过硅胶层析(以1∶1乙酸乙酯/己烷作为洗脱液)纯化粗制产品。(48％，143mg)，NMRδ4.19(s，3H)，7.19(d，1H)，7.43(dd，2H)，7.58(m，2H)，8.27(d，1H)，8.44(dd，2H)。
实施例103-(2-氯-4-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪按照实施例9的方法，由3-(2-氯-4-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪，N-氧化物制备所述标题化合物。(48％)；mp，84-87℃。
实施例116-甲氧基-哒嗪-3-磺酰基氟化物步骤A6-甲氧基-哒嗪-3-硫醇。制备3-氯-6-甲氧基哒嗪(100g)、硫脲(105g)和甲乙酮(1.8L)的混合物并回流3小时。然后冷却所述反应化合物并将上清液注入水中和用1M氢氧化钠(4×100mL)提取。用乙酸乙酯(2×50mL)冲洗所述氢氧化钠并采用的浓盐酸将所述含水提取物酸化到pH5。收集得到的黄色固体并风干从而得到所述的标题化合物(24％，23g)；mp，198-200℃。
步骤B6-甲氧基-哒嗪-3-磺酰基氟化物。制备6-甲氧基-哒嗪-3-硫醇(7.1g)、甲醇(100mL)，水(100mL)和氟氢化钾(39g)的混合物并在-10℃下搅拌30分钟。以保证温度不超过-10℃的速率将氯气鼓入所述混合物。然后将所述发白的黄色反应混合物注入冰冷的水中(50mL)并将所得到的白色固体进行过滤和风干从而得到所述标题化合物(74％，7.1g)；mp，87-88℃。
实施例126-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-磺酰甲基-苯基-酰胺步骤A6-甲氧基-哒嗪-3-磺酰甲基-苯基-酰胺。制备由实施例11获得的6-甲氧基-哒嗪-3-磺酰基氟化物(1.62mmol，312mg)与N-甲基苯胺(24.3mmol，0.26mL)的混合物并在100℃下加热12小时。然后冷却所述混合物。所得到的固体残余物通过硅胶层析进行纯化从而分离到所述标题化合物(53％，240mg)；M+，279。
步骤B6-氧代-16-二氢-哒嗪-3-磺酰甲基-苯基-酰胺。制备6-甲氧基-哒嗪-3-磺酰甲基-苯基-酰胺(239mg)、二噁烷(4mL)与浓盐酸(1mL)的混合物并回流1小时。然后将所述混合物蒸发至干。将所得到的固体与水一起研磨并收集所述固体从而提供所述的标题化合物(75％，171mg)；mp，157-158℃。
实施例136-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-磺酰异丙基-苯基-酰胺按照类似于实施例12制备6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-磺酰甲基-苯基-酰胺的方法，以N-异丙基苯胺代替步骤3中的N-甲基苯胺来制备所述标题化合物，(20％，)，mp，190-191℃。
实施例146-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-磺酰(3，4-二氯-苯基)-甲基-酰胺按照类似于实施例12制备6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-磺酰甲基-苯基-酰胺的方法，以N-甲基-3，4-二氯苯胺代替N-甲基苯胺来制备所述标题化合物(28％，)；mp，207-208℃。
实施例156-(4-氟-苯硫基)-2H-哒嗪-3-酮按照类似于实施例2的步骤A的方法，制备3-(4-氟-苯硫基)-6-甲氧基-哒嗪(250mg)与浓盐酸的混合物并回流30分钟。蒸发所述混合物至干。通过硅胶层析(以乙酸乙酯为洗脱液)纯化所得到的残余物从而提供所述的标题化合物(65％，152mg)；mp，99-101℃。
实施例166-(二苯基-4-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮步骤A3-(联苯基-4-磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪。制备4-氟-苯硼酸(157mg)、3-(4-氟-苯磺酰基)-6-甲氧基-哒嗪(247mg)、碳酸钾(207mg)、Pd[P(Ph)3]4(87mg)、甲苯(4mL)、乙醇(2mL)和水(1.5mL)的混合物并回流1小时。冷却所述混合物并加入水(10mL)。然后过滤所述混合物并用乙酸乙酯(20mL)提取得到的过滤物。用水冲洗得到的乙酸乙酯提取物并收集所述的乙酸乙酯部分，然后用无水硫酸钠进行干燥并过滤。收集过滤物并蒸发至干从而提供步骤A的标题化合物。NMRδ4.17(s，3H)，7.13(m，3H)，7.54(m，2H)，7.70(m，2H)，8.17(m，3H)。
步骤B6-(联苯基-4-磺酰基)-2H-哒嗪-3-酮。按照实施例2的步骤C用浓盐酸处理所述步骤A的产物从而得到的所述的标题化合物。Mp.219-220℃。
实施例176-苄氧基-哒嗪-3-磺酰基氟化物步骤A3-苄氧基-6-氯-哒嗪。将金属(3.1g)钠加到苄醇(75mL)中并缓慢加热到50℃维持30分钟直至所有的金属钠溶解为止。加入3，6-二氯哒嗪于苄醇(75mL)中的溶液(135mmol)。所述反应混合物在100℃下保持24小时。蒸发掉过量的苄醇并用乙酸乙酯(3×100mL)提取残余物，然后用水冲洗所述乙酸乙酯提取物。收集所述的乙酸乙酯层，干燥，过滤，并且蒸发所述过滤物从而提供所述的标题化合物(90％，26.7g)；mp，77-78℃。
步骤26-苄氧基-哒嗪-3-硫醇。制备3-苄氧基-6-氯-哒嗪(4g)、硫脲(2.8g)与甲乙酮(75mL)的混合物并过夜回流。蒸发掉过量的甲乙酮并用2M氢氧化钠(25mL)提取得到的残余物。然后用乙酸乙酯(2×30mL)冲洗所述的氢氧化钠溶液。收集含水层并加入足量的浓盐酸将pH调节到5。用乙酸乙酯(2×30mL)提取所述溶液。收集所述乙酸乙酯提取物，干燥，过滤，并蒸发所述过滤物来提供所述的标题化合物(15％，605mg)；mp，155-157℃。
步骤36-苄氧基-哒嗪-3-磺酰基氟化物。制备6-苄氧基-哒嗪-3-硫醇(510mg)、甲醇(10mL)、水(10mL)与氟氢化钾(1.83g)的混合物并在-10℃下搅拌30分钟。以保证温度不超过-10℃的速率将氯气鼓入所述混合物。然后将所述发白的黄色反应混合物注入冰冷的水中(50mL)并将所得到的白色固体进行过滤和风干从而得到所述标题化合物(产率89％，560mg)；mp，85-86℃。
实施例186-[2-(4-氯-苯基)-2-氧代-乙磺酰基]-2H-哒嗪-3-酮步骤A1-(4-氯-苯基)-2-(6-甲氧基-哒嗪-3-基硫基)-乙酮。在室温下将2-巯基-6-甲氧基哒嗪(1.42g)、4-氯-α-溴苯乙酮(10mmol，2.33g)、碳酸钾(2.76g)与二甲基甲酰胺(15mL)的混合物搅拌1小时。过滤所述反应混合物，用乙酸乙酯(2×20mL)冲洗残余物并用水(2×20mL)冲洗合并的过滤物。收集所述的乙酸乙酯层，干燥，过滤，并且蒸发所述过滤物从而提供步骤A的所述标题化合物(96％，2.85g)；质谱，m+295。
步骤B1-(4-氯-苯基)-2-(6-甲氧基-哒嗪-3-磺酰基)-乙酮。在室温下将步骤A的化合物(8.5mmol，2.3g)、MCPBA(25 mol，5.8g)与二氯甲烷(160mL)的混合物搅拌40分钟。向所述反应混合物中加入碳酸氢钠的饱和溶液(400mL)并收集二氯甲烷层，干燥，过滤，并蒸发所述过滤物来提供白色固体形式的B步骤的所述的标题化合物(79％，2.2g)；mp，153-156℃。
步骤C6-[2-(4-氯-苯基)-2-酮基-乙磺酰基]-2H-哒嗪-3-酮。按照实施例2的步骤C，通过酸水解将由步骤B得到的化合物转化为所述的标题化合物；(79％)；mp，＞240℃。
实施例196-[2-(4-氯-苯基)-2-羟基-乙磺酰基]-2H-哒嗪-3-酮在甲醇(10mL)中制备由实施例18制得的6-[2-(4-氯-苯基)-2-氧代-乙磺酰基]-2H-哒嗪-3-酮(1.0mmol，312mg)的悬浮液。在室温下向所述悬浮液中加入氢硼化钠(1.5mmol，55mg)并搅拌1小时。蒸发所述反应混合物并将残余物与10％的浓盐酸(5mL)一起研磨。对得到的白色沉淀进行过滤并风干从而提供所述的标题化合物(69％，218mg)；mp，178-179℃。
实施例20测定醛糖还原酶抑制性的方法通过将测试化合物(TC)溶解在20μl 20％的二甲亚砜(DMSO)中并采用100mM，pH为7.0的磷酸钾缓冲液进行稀释来制备不同TC浓度，通常从5mM至1μM的测试化合物溶液。制备只含有20μl DMSO(不含TC)的“零点TC”溶液。在一个96-孔板中进行醛糖还原酶活性的分析。所述反应(与底物一起)通过在24℃下将含有125μM NADPH和12.5nM人重组醛糖还原酶(Wako Chemicals，Inc.，#547-00581)的200μl 100mM、pH为7.0的磷酸钾缓冲液与25μl TC溶液一起预温育来进行预温育。所述反应通过加入25μl 20mM的D-甘油醛(Sigma，St.Louis)来启动。OD340的下降速率采用340 ATTC Plate Reader(SLT LabInstruments，Austia)来监控。TC的抑制性被测定为相对不含TC样品的NADPH氧化速率的降低百分率。


本发明涉及治疗或预防由局部缺血导致哺乳动物组织损伤的治疗方法。