专利名称：治疗神经退化之方法治疗神经退化之方法背景技术神经压迫综合征(Nerve compressive syndrome)，也称为绞扼性神经病 (entrapment neuropathy)，是一种由直接压迫、神经或邻近组织的结构性改变或单一神经的机械性损伤引起的医学状况。其症状包括疼痛、刺痛、麻木及肌肉萎缩。取决于受到影响的神经，这些症状仅影响机体的一个特定部位。尽管公知的实例是在腕部的正中神经的压迫(腕管综合症)，但是其它神经，例如腕部或肘部的尺骨神经及锥孔的脊神经根也非常容易受影响。神经压迫的长期影响可能导致神经元退化及神经系统功能的丧失。减压手术是常规的治疗方法，通过该方法除去压迫源，例如骨头或软骨，从而缓解压力和减轻神经性痛疼。手术后，症状可能完全消除，但是如果压迫足够严重或者时间足够持久，神经可能不会完全恢复，某些症状可能还会持续。而且，手术后患者将需要较长的时间才能实现功能恢复。大多情况下，减压手术无法修复神经纤维的退化。因此，需要开发一种在绞扼性神经病的早期或在减压手术之后用于使退化的神经功能改善或恢复的方法。发明内容本发明预料不到地发现酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)在神经再生中起到重要的作用。当对罹患神经压迫综合征的对象施予aFGF时，观察到退化或损伤的神经的功能性恢复。与传统的减压手术相比较，注射aFGF是更加有效和安全的治疗方法。因此，本发明提供一种用于治疗由神经压迫综合征或绞扼性神经病引起的神经退化之方法，其包含对需要治疗的对象施予人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)。应理解到，上述的总体说明和下述的详细说明仅是示例性的，仅用于解释本发明而不是对本发明的限制。结合附图，将更好地理解本发明的上述内容及下述的详细说明。
在附图中
图1是示出对通过枕骨大孔注射生理盐水或人aFGF施行压迫手术的大鼠进行的抓力测试的示意图。*表示aFGF处理组合对照组之间具有显著性差异(ρ < 0. 05)，#表示 aFGF处理前和aFGF处理后具有显著性差异(ρ < 0. 05)。

除非说明书中明确指明所使用的冠词“一”仅表示单数之外，本发明中所使用的冠词“一”表示一个或多个(也就是，至少一个)该冠词所修饰的对象。
本发明提供一种用于治疗由神经压迫综合征或绞扼性神经病引起的神经退化之方法，其包含对需要治疗的对象施予人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)。
本发明中所使用的术语“神经压迫综合征”或“绞扼性神经病”指由微脉管功能的局部干涉和神经或邻近组织中结构性变化造成的外周神经功能性障碍。长时间的或反复的外力可能压迫神经压迫综合征，例如将手臂搁在桌椅的后背上(桡神经)，频繁地将肘支在桌子上(尺神经)，或者不合适的投掷或翘腿(腓神经)。随着时间的推移，压迫会越来越严重，发生病灶性脱髓鞘，随后将发生轴突损伤，最后形成创伤。而且，一些情况引起神经对压迫尤其敏感。这些情况包括糖尿病，这种情况下，供应给神经的血液已经受到压迫，使得神经对较小的压迫度变得更加敏感。
常见的神经压迫综合征包括椎间盘突出(herniated intervertebral disc)、颈神经压迫综合征(cervical nerve compression syndrome)、胸廓出口综合征(thoracic outlet syndrome)及腕管综合症(carpal tunnel syndrome)。其它的神经压迫综合征可以包括但不限于骨间前神经综合征(anterior interosseous syndrome)、旋前圆肌综合症(pronator teres syndrome)、韦刃带斯特拉瑟斯综合征(ligament of Struthers syndrome)、月寸管综合征(cubital tunnel syndrome)、腕尺管综合(Guyon ‘ s canal syndrome)、|^神经Bi迫症(radial nerve compression)、骨间后神经卡Bi症(posterior interosseous nerve entrapment)、Wartenberg 氏综合征(ffartenberg ‘ s syndrome) > 肩月甲上神经卡压症(suprascapular nerve entrapment)、]]非神经压迫症(peroneal nerve compression)、踝管综合征(tarsal tunnel syndrome)、感觉异常性股痛(meralgia paraesthetica)、骨客腹下神经卡压症(iliohypogastric nerve entrapment)、闭孑L神经卡压症(obturator nerve entrapment)、阴部神经卡压症(pudendal nerve entrapment)及腹部皮神经卡压综合征(abdominal cutaneous nerve entrapment syndrome)。
本发明中的术语“人aFGF，，指天然的人aFGF或任何由天然的人aFGF修饰的肽。 修饰的肽可以例如通过在天然的人aFGF中删除、插入或取代一个或多个氨基酸或这些方式的组合而得到。在本发明的一个实施例中，修饰的人aFGF是这样一种肽，其包含从天然的人aFGF的N端删除20个氨基酸、并且在截短后的天然的aFGF的前端添加丙氨酸的天然的人aFGF。例如，人aFGF可以是具有SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列的肽，其公开于美国第12/482,041号申请中，其全部内容通过引用的方式合并于此。
根据本发明，人aFGF可以制备成任何适于所选择的施予模式的形式。优选地，通过局部给药、神经内给药或肌肉内给药施予人aFGF。根据本发明，本领域的技术人员根据他的经验或罹患神经压迫综合征的患者的生理状况，即年龄、体重、严重性或服用量而能够容易地确定施予途径和剂量。在本发明的一实施例中，将0. lmg/ml的人aFGF注射到左拇收肌。
已知的是多肽或蛋白质在体外容易降解。为了延长人aFGF在对象中的作用，可以将人aFGF包含于能够持续释放的任何载体或组合物中。例如，纤维蛋白胶已经成功地广泛应用于外科手术领域，例如皮肤移植固定、神经修复、软骨重附着及微脉管愈合。研究还显示活性剂能够从纤维蛋白胶中较长的时间地释放。
因此，在本发明的一个实施例中，将人aFGF包含于纤维蛋白胶混合物中并将其施予给罹患神经压迫症或绞扼性神经病的对象。aFGF在纤维蛋白胶混合物中的浓度最好在大约0. 0lmg/ml到100mg/ml。在本发明的一个实施例中，通过拇收肌注射施予时纤维蛋白胶包含0. lmg/ml的aFGF。在本发明的另一实施例中，通过枕骨大孔注射施予时纤维蛋白胶包含0. 04mg/ml的aFGF。对本领域的技术人员来说，基于本发明的公开内容，根据他的知识及常规试验的标准方法能够容易地确定治疗的有效量及剂量和施予频率。
本发明的纤维蛋白胶混合物是指一能够提供生物适应性和持续释放性能的药学组合物，其包含人aFGF、纤维蛋白原、抑肽酶及二价钙离子。在本发明的一个实施例中，二价钙离子可以是任何的钙离子来源，例如可以通过添加氯化钙或碳酸钙提供的钙离子。
根据本发明，纤维蛋白胶混合物包含0. 01-100mg/ml的人酸性成纤维细胞生长因子，以及含10-1000mg/ml的纤维蛋白原、10_500KIU/ml的抑肽酶及0. I-IOmM的二价钙离子的纤维蛋白胶。在本发明的一个实施例中，为了提供更好的凝结效果，纤维蛋白胶混合物可进一步包含10-100IU/ml的凝血酶。
本发明的纤维蛋白胶混合物可以制备成任何适于所选择的施予模式的形式。优选地，通过局部给药、神经内给药或肌肉内给药施予纤维蛋白胶混合物。根据本发明，本领域的技术人员根据他的经验或罹患神经压迫综合征的患者的生理状况，即年龄、体重、严重性或服用量而能够容易地确定施予途径。
根据本发明，神经病变动物模型设计成显示在促进神经纤维突触生长和功能性恢复中的效果。在本发明的一个实施例中，用8-0尼龙缝合线结扎左颈椎背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)。结扎损伤一周后，将6 μ 1含0. 6 μ g aFGF的生理盐水全部注入左拇收肌。
在本发明的另一实施例中，结扎损伤一周后，将含0. 04mg/ml的aFGF (5 μ 1生理盐水中含0. 2 μ g aFGF)、10mg/ml的纤维蛋白原及200KIU/ml的抑肽酶的51纤维蛋白胶混合物直接注射到施行手术的大鼠的枕骨大孔中。第一次注射后5分钟，将含0.45mM氯化钙及 10IU/ml凝血酶的10 μ 1补充组合物用同一注射器注射到枕骨大孔中。
通过抓力测试测定功能改善。处理后2周和3周进行测试从而获取结果，施予aFGF 的组根据显著高抓力比率(损伤侧-L/正常侧-R)比对照组(仅施予生理盐水)在恢复神经功能方面具有更好的效果。鉴于这种结果，本发明提供了用于恢复神经功能的预料不到的治疗方法。
因为神经再生需要很长时间，因此需要持续施予，以修复神经退化。在本发明的一个实施例中，建议每月一次向对象施予包含人aFGF的纤维蛋白胶混合物。本领域的技术人员能够根据标准方法和公知常识及施予对象的表现确定剂量。
通过下述的实施例能够更详细地解释本发明。但是应当注意的是，本发明并不以任何形式限于这些实施例。
实施例aFGF修复压迫性神经病大鼠模型中的神经功能
动物
使用年龄在8至10周、体重250_300g的共20只成熟雌性Sprague-Dawley大鼠。 将这些动物置于加热垫上用氟烷全身麻醉(1. Oliter/min,以保持大约60/分钟的呼吸频率)施行手术。在手术中监测并保持直肠温度。使用双极电烙术使出血减少到最小。手术之前皮下注射抗生素，之后每天一次持续一周。手术后，将动物保持在通风、湿度和温度可控的室内12个昼夜。
大鼠的压迫性手术
卧姿放置大鼠，并暴露它们的C4-C8椎骨。切除左C4至C7的半椎板。在显微镜下，确定颈根，移走重叠的小面后，在这些部位中轻轻地在侧向钻孔。然后小心地打开脑膜，拉紧动C5至C7神经根，暴露左颈椎背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的C5、C6及 C7部位并用8-0尼龙缝合线与末梢部位结扎。手术后，将这些大鼠分成两个实验组。
在A组，将大鼠分成对照组(用生理盐水处理，η = 6)及aFGF组(用6 μ 1生理盐水中的0.6yg aFGF处理，η =。。压迫手术后一周，用异氟烷麻醉大鼠并将它们保持在温暖的垫上以维持它们的体温，在aFGF处理组将6 μ 1生理盐水中的共0. 6 μ g aFGF缓慢地肌肉注射到拇收肌(从第1至第4趾肉，1.5μ1/趾肉)，对照组注射生理盐水。通过抓力测试评估神经能恢复(表1)。
选择性地，在B组，将大鼠也分为两组用生理盐水处理的对照组(n = 4)及aFGF 处理组(5 μ 1生理盐水中的0. 2 μ g aFGF, η = 4)。压迫手术后一周，将与包含1. 5mg纤维蛋白原(Beriplast P，德国)、抑肽酶溶液(200KIU/ml，20 μ 1)及HBSS(汉克平衡盐缓冲液，80 μ 1)的5 μ 1的鸡尾酒溶液混合的aFGF缓慢注射到aFGF处理组中的枕骨大孔中，对照组注射与5 μ 1的上述鸡尾酒溶液混合的生理盐水。用含有aFGF或生理盐水的鸡尾酒溶液注射5分钟后，将10 μ 1的包含0. 45mM氯化钙和10IU/ml凝血酶的第二溶液注射到枕骨大孔中，几秒钟后移走注射器。同样通过抓力测试评估神经功能恢复(图1)。
抓力测试
抓力测试是Bertelli 和 Mira 的方法(J.A. Bertelli et al.，and J. C. Mira, Neurosci Methods 58 151_5，199 的改进。为了评估抓力强度，将一线棒连接到一普通的电子秤上。测试两个前爪，每次测试一个前爪。不测试的前爪用胶带缠住以暂时防止抓动，测试的前爪保持自由。在提起尾巴时允许大鼠抓棒，逐渐增加力度，直到它们松开抓握， 记录抓握力。抓握力指数是损失侧/正常侧的比率(损失侧-L/正常侧-R)。数值越大，说明功能恢复越好。
表1示出肌肉注射到拇收肌中的A组的抓力结果。观察到aFGF处理组的大鼠比对照组的大鼠表现出更好的抓力。
表IA组(肌肉注射)的抓力测试结果


本发明提供一种用于治疗由神经压迫综合征或绞扼性神经病引起的神经退化之方法，其包含对需要治疗的对象施予人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、纤维蛋白原、抑肽酶及二价钙离子。