专利名称：一种丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法丙型肝炎病毒(HCV)感染者中有超过70%发展成慢性丙型肝炎，在10 20中有20% 50%进展成肝硬化，1% 2%发展成肝细胞肝癌，危害严重。丙型肝炎的抗病毒治疗是缓解和抑制肝硬化和肝癌的重要途径。但抗HCV药物昂贵，且对不同病情有不同用药标准，因此需要检测多种信息以辅助用药治疗。指导丙型肝炎的用药治疗的信息主要有血清丙型肝炎病毒RNA水平，丙型肝炎病毒的基因型和人类相关单核苷酸多态性(SNP)。只有联系病毒亚型类别、病毒在体内的复制水平和患者的个体信息综合分析，才能做到真正的对症下药。目前，主流的检测方法缺点是:技术成本昂贵、复杂:每个样品需要一个芯片，成本大于Y1000/样品，不利于大规模推广；探针的合成与固定比较复杂，特别是制作高密度的探针阵列，是主要的限速步骤。不能精确定量，重复性差。灵敏度较低:芯片法需核酸量较大，一般须先做多重PCR扩增，由于引物较多，容易自身产生二聚体，发夹结构，或由于Tm值不同，而导致扩增目的片段效率不同，进而影响检测的灵敏度。对于不同亚型的混合感染较难分辨。由于芯片的种类较多，难以制定一个统一的质量控制标准。
本发明的目的是提供一种高通量、准确定量、灵活性强、成本低的一种丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法。本发明采用如下技术方案:一种基于毛细电泳的丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法，包括如下步骤:(I)生产“丙型肝炎治疗用药指导多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者血液样品，并提取核酸；(3)以样品核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。优选地，所述步骤(3)包括按比例在样品板上加入试剂和样品、以及混匀后在一定温度下孵育的子步骤。优选地，所述步骤(3)中的孵育温度分别为48°C、42°C、95°C、4°C。优选地，所述步骤(4)包括按比例在样品板上加入试剂和样品、以及混匀后按一定温度进行热循环反应的子步骤。优选地，所述步骤⑷的子步骤中的热循环温度分别为94°C、60°C、70°C、4°C。优选地，所述步骤(5)包括制备GeXP遗传分析仪样品、准备分离液、毛细电泳分离样品、结果分析的步骤。本发明的有益效果为:1.采用激光诱导荧光-PMT，具有超高灵敏度，重复性好。2.GeXP采用毛细管电泳对PCR产物进行分离检测，可将精确分离一个碱基数量差异的片段，能有效分辨出特异性产物，避免假阳性。3.高通量检测:可以在一个反应当中同时检测丙型肝炎病毒的RNA水平和人类的SNP位点并检测，即一个反应获得三种用药治疗指导信息。4.精确定量:对病原体基因拷贝数的定量检测有着与荧光定量PCR同样的高精确性。5.灵活性强:可随时根据需求增加或修改所需研究的SNP位点。6.成本低:每个样品的检测成本少于Y50，包括了丙型肝炎病毒RNA定量检测、人类SNP位点的检测和感染病毒亚型多种信息，利于大规模推广。):采集患者样品(血样)，提取核酸，以之为模板进行反转录和PCR反应，最终用毛细电泳方法分离PCR产物。1.检测目标主要1.)定量检测样品丙型肝炎病毒RNA水平。参见表I2.)检测与丙型肝炎治疗用药相关的SNP位点:rsl2979860和rs8099917。3.)检测丙型肝炎病毒亚型:la、lb、2、2a、3a、3b、6共七种亚型。2.建立了可靠地样品质量及反应过程的对照。参见表II)人DNA和人RNA完整性的对照内参:确保在检验过程中对样品质量的判断，避免假阴性。2)正常反应对照内参:监控PCR反应效率，避免假阴性。3.多重基因检测 的引物设计。参见表2表I多重检测目标


本发明公开了一种丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法，包括如下步骤(1)生产“丙型肝炎治疗用药指导多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者血液样品，并提取核酸；(3)以样品核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。本发明具有灵敏度高、重复性好、准确性强、灵活性强、成本低的优点。