一种含丹参提取物的软胶囊及其制备方法[0002]丹参为唇形科多年生草本植物，临床常用于心脑血管活血化瘀症。现代研究表明，丹参能促进肝细胞分化增殖，提高肝脏的再生力，可部分逆转酒精对肝脏再生的抑制作用。丹参酮IIA是丹参主要有效活性成分之一，是天然抗氧化剂。丹参酮IIA通过清除氧自由基，发挥抗氧化、减轻脂质过氧化对肝脏起保护作用。(蒋惠娣、黄夏琴和杨怡，九种护肝中药抗脂质过氧化作用的研究[J]，中药材，1997，20 (12):624-626)。丹参酮IIA在水中几乎不溶，口服吸收差，生物利用度低，半衰期短，不适宜制成口服制剂(许昌胜等，丹参酮IIA及其类似物的全合成和结构修饰研究进展[J]，药学进展2013，(37)2:58-65)。为了提高丹参酮IIA活性成分的作用，现有技术采用化学修饰成丹参酮IIA磺酸钠，如CN1624474A。丹参酮IIA磺酸钠注射液临床使用受输液pH值影响，易发生浑浊、析晶等现象，也受到了限制使用。[0003]大豆磷脂是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸等混合物。不同分子构型磷脂具有不同的生物学功能。研究证明:二亚油酰磷脂酰胆碱也称“多烯磷脂酰胆碱”具有改善神经功能，减少损伤，促进了神经细胞对于外源性的β -淀粉样蛋白的吞噬和代谢降解(张晓辉等，多烯磷脂酰胆碱对β_淀粉样蛋白(Αβ 1-40)致阿尔茨海默病模型大鼠的治疗作用[J]，现代生物医学进展，2011，11 (13):2438-2442)。二亚油酰磷脂酰胆碱含有丰富油酸成分也是脂溶性化合物非常好的乳化剂和表面活性剂。磷脂酸胆碱是最具生物学活性的磷脂。磷脂酰胆碱由于甘油基I位和2位结合脂肪酸的链的长短和饱和度不同，因而各种磷脂酰胆碱生物学功能也不同。德国科学家对大豆磷脂进一步纯化，获得了两个烃基侧链上都含不饱和双健亚油酸的磷脂酰胆碱(二亚油酰磷脂酰胆碱)，也有称“多烯磷脂酰胆碱(PPC)”。多烯磷脂能够替代内源性饱和磷脂，使膜流动性与跨膜转运系统活性增强，易使受损的肝细胞膜得以恢复。多烯磷脂酰胆碱含有丰富油酸成分也是脂溶性药物非常好的乳化剂和表面活性剂。[0004]中链甘油三酸酯(也称中链油)主要成分是辛酸和癸酸的甘油三酯。中链甘油三酸酯具有很好的脂溶性，是长链脂肪酸的100倍，常作为多种临床肠外营养使用并不产生脂肪蓄积。[0005]从植物里提取具有药用和保健作用的可食用油含有丰富的不饱和脂肪酸，例如罂粟籽油，紫苏籽油、月见草籽油、葵花籽油、玉米油等。研究证明罂粟籽油不饱和脂肪酸占88%以上，罂粟籽油已鉴定出的成分还含有烃类、醛类、酮类、芳香族化合物的含氧衍生物和呋喃化合物的含氧衍生物，还有部分有机酸及其酯类化合物(祖新，罂粟籽油脂肪酸组成分析[J]，粮油食品科技，2010，18 (6):20-21)。罂粟籽油具有软化血管防止血脂在血管壁上沉积、抑制肝脏低密度脂蛋白的合成改善睡眠质量。罂粟籽油还具有极好的脂溶性作用和特殊的清香味。鱼油富含ω-3系列多不饱和脂肪酸二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。EPA、DHA为人体所必需的脂肪酸。[0006]肝脏是人体进行新陈代谢的大型器官。事实上，所有的化学物质是通过损害肝细胞膜的方式来损害肝脏。据统计，我国大、中城市脂肪肝的平均发病率已达人口总数的8-10%,60-90%的肥胖者都患有脂肪肝。30岁左右的男性中约有20%的人患有不同程度的脂肪肝，45岁以下男性脂肪肝明显多于女性。75-90%慢性嗜酒者有脂肪肝，酒精性脂肪肝发病也趋年轻化，我国已经成为肝病大国，各种类型肝病已越来越成为主要疾病之一。[0007]丹参酮IIA药学上现有技术应用大都采用聚氧乙烯类化合物作为丹参酮助溶剂。CN101732409A涉及一种丹参软胶囊及其制备方法，主要溶剂是聚乙二醇400、聚乙二醇6000和少量丙二醇。CN102100741A涉及一种丹参总酮复合制剂，虽然使用了中链甘油三酸酯，但是，仍然采用聚氧乙烯氢化蓖麻油和1，2-丙二醇作为表面活性剂。[0008]一些常规的表面活性剂的使用并没有得到广泛的认可，例如，已公布的大量文献证明，聚乙二醇(PEG)几乎没有副作用和毒性，但是欧洲食品安全局研究认为，PEG人体内的吸收程度依赖于其聚合物的分子量，低分子量的PEG更容易被吸收。加拿大卫生部以世界卫生组织WHO于1968年对PEG的动物研究数据作为产品批准放行的限度。PEG的吸收程度取决于其分子量，即低分子量PEG (如1000或更小)比高分子量PEG (如4000或6000)更容易被体内吸收。不同的国家对聚乙二醇的平均每人摄入量有着不同要求，因此这类化合物为人们长期的大量食用还有待认识。


[0009]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种保健效果较佳且避免使用常规的表面活性剂的用于改善肝损伤和降血脂的软胶囊及其制备方法。
[0010]为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种软胶囊，该软胶囊的内容物含有丹参提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂，其中，相对于I重量份的丹参提取物，中链甘油三酸酯的含量为40-600重量份，食用油的含量为50-650重量份，磷脂的含量为40-600重量份，所述食用油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量％，所述磷脂中的磷脂酰胆碱的含量为20-80重量％且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量％。
[0011]第二方面，本发明提供了第一方面所述的软胶囊的制备方法，该方法包括将丹参提取物、中链甘油三酸 酯、食用油和磷脂混合获得软胶囊的内容物，并将该内容物包封于软胶囊囊壳中。
[0012]经过动物功效实验证明，本发明的软胶囊能够有效地改善化学性肝损伤、酒精性肝损伤和降低血脂。
[0013]而且，参照有关药品稳定性考察规定验证，本发明的软胶囊未使用聚乙二醇等表面活性剂，但是丹参提取物、磷脂等活性成分能够长期稳定存在。
[0014]本发明的其他特征和优点将在随后的



[0015]附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的【具体实施方式】一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中:
[0016]图1显示的是测试例I中ICR雄性小鼠肝脏组织切片形态学观察(400X)的显微镜照片；
[0017]图2显示的是测试例2中ICR雄性小鼠肝脏组织切片形态学观察(400 X )的显微镜照片。
【具体实施方式】
[0018]以下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的【具体实施方式】仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0019]本发明提供的软胶囊的内容物含有丹参提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂，其中，相对于I重量份的丹参提取物，中链甘油三酸酯的含量为40-600重量份(优选为60-400重量份)，食用油的含量为50-650重量份(优选为60-600重量份)，磷脂的含量为40-600重量份(优选为60-400重量份)，所述食用油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量％(如70-95重量％)，所述磷脂中的磷脂酰胆碱的含量为20-80重量％且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量％。
[0020]根据本发明，对所述丹参提取物没有特别的限制，可以为常规方法获得的丹参提取物，如，丹参的乙醇提取物。优选情况下，采用的丹参提取物中的丹参酮IIA的含量在20重量％以上(如20-99.9重量％，更优选30-60重量％)。获得丹参酮IIA含量在上述范围内的丹参提取物的方法为本领域技术人员所熟知(亦可以通过商购获得)，在此不再赘述。
[0021]根据本发明，所述中链甘油三酸酯为本领域常见饱和甘油三酸酯的混合物，优选地，所述中链甘油三酸酯为含有辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的混合物，辛酸甘油三酯的含量为50-80重量％，癸酸甘油三酯的含量为20-50重量％且辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯总量不低于95重量％。
[0022]根据本发明，不饱和脂肪酸含量不低于70重量％的食用油均可以用于本发明，但优选情况下，所述食用油为罂粟籽油、葡萄籽油、月见草油、黑加仑籽油、紫苏籽油、亚麻油籽油、橄榄油、鱼油、大豆油、玉米油和葵花籽油中的至少一种，更优选为罂粟籽油。可以通过常规的压榨法、浸出法、超临界萃取法或水代法从植物中获取上述食用油，且这些方法均为本领域技术人员所熟知，在此不再赘述。 [0023]本发明中，“磷脂”是指分子中含有一个或多个磷酸基的，并且有极性的复合脂质之一，其分子由甘油、脂肪酸和带羟化合物(具有极性)三部分构成，其代表物有磷脂酸、磷脂酰甘油、心磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇，以及通过酯键与脂肪酸结合的缩醛磷脂类、醚脂质类等，本发明中使用的磷脂是指磷脂酰胆碱的含量为20-80重量％且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量％的磷脂，可以从动物脑和/或大豆等中提取获得。优选地，所述磷脂为大豆磷脂。需要说明的是，市售的大豆磷脂还含有磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰甘油等成分。但是这些成分并不会对本发明软胶囊的改善肝损伤和降血脂效果产生影响，因此，可以直接用于制备本发明可作为保健品或药品的软胶囊。
[0024]根据本发明，为了增强软胶囊的抗氧化性能，从而延长保质期，所述软胶囊的内容物还含有抗氧化剂。所述抗氧化剂可以为本领域常用的各种能够抗氧化的物质，更优选地，所述抗氧化剂为维生素E。
[0025]根据本发明，所述软胶囊的囊壳可以为各种常规的软胶囊囊壳，例如，可以通过将明胶、纯净水、甘油、山梨醇、甘氨酸和二氧化钛加入适量色素(柠檬黄或亮蓝)进行化胶获得。
[0026]本发明提供的制备上述软胶囊的方法包括将丹参提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂混合获得软胶囊的内容物，并将该内容物包封于软胶囊囊壳中。
[0027]其中，软胶囊囊壳可以采用常规的方式制备，例如，将明胶、纯净水、甘油、山梨醇、甘氨酸和二氧化钛加入适量色素(柠檬黄或亮蓝)进行化胶获得。继而可以采用常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸、制成半成品，包装。
[0028]根据本发明，对所述混合的具体方式没有特别的限定，例如，混合的方式可以为:在55-60°C下，将丹参提取物、食用油和磷脂溶于中链甘油三酸酯中，然后降温至35-40°C备用。其中，对丹参提取物、食用油和磷脂的溶解顺序没有特别的要求，可以按一定顺序溶解，也可以同时溶解。更优选地，可以先将丹参提取物溶解于中链甘油三酸酯中，再加入食用油和磷脂。
[0029]本发明的软胶囊能够用于改善肝损伤和/或降血脂。其中，软胶囊的服用量可以根据服用者的具体身体状况而定，例如，所述软胶囊的服用量可以为0.l_5g/kg/天，优选为 0.4-2g/kg/ 天。
[0030]以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，中链甘油三酸酯购自铁岭北亚药用油有限公司，辛酸甘油三酯的含量为70重量％，癸酸甘油三酯的含量为30重量％且辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯总量为95重量％ ;罂粟籽油购自上海万代制药有限公司，葡萄籽油、月见草油、黑加仑籽油、紫苏籽油、亚麻油籽油购自长春市现代应用生物医学有限公司，橄榄油、大豆油、玉米油、葵花籽油购自长春市恒客隆超市，鱼油购自上海东尚实业有限公司；丹参提取物购自西安鸿生生物技术有限公司(批号:121220)，丹参酮IIA的含量为42重量％ ;大豆磷脂购自德国Lipoid公司，批号:576500:磷脂酰胆碱的含量45重量％且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为49重量％，批号1032675:磷脂酰胆碱的含量30重量％且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为65重量％。
[0031]实施例1
[0032]按1000粒计，在氮气保护下，将95g中链甘油三酸酯水浴加热至55°C，并在该温度下，加入0.5g丹参提取物，搅拌至溶解，再加入95g罂粟籽油(不饱和脂肪酸含量为90重量％)、110g大豆磷脂(批号:576500)和0.06g维生素E，搅拌至溶解，降温至35°C作为软胶囊的内容物待用；
[0033]按照如下重量比配制软胶囊囊壳:明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到软胶囊S-1。
[0034]对比例I
[0035]按照实施例1的方法制备软胶囊S-D1，不同的是，中链甘油三酸酯的用量为15g，罂粟籽油的用量为175g。
[0036]对比例2
[0037]按照实施例1的方法制备软胶囊S-D2，不同的是，将中链甘油三酸酯替换为油酸乙酯。
[0038]对比例3[0039]按照实施例1的方法制备软胶囊S-D3，不同的是，将中链甘油三酸酯替换为肉豆蘧酸异丙酯。
[0040]实施例2
[0041]按1000粒计，在氮气保护下，将80g中链甘油三酸酯水浴加热至60°C，并在该温度下，加入0.2g丹参提取物，搅拌至溶解，再加入120g大豆油(不饱和脂肪酸含量为70重量％)、80g大豆磷脂(批号1032675)和0.06g维生素E，搅拌至溶解，降温至40°C作为软胶囊的内容物待用；
[0042]按照如下重量比配制软胶囊囊壳:明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到软胶囊S-2。
[0043]实施例3
[0044]按1000粒计，在氮气保护下，将120g中链甘油三酸酯水浴加热至58°C，并在该温度下，加入2g丹参提取物，搅拌至溶解，再加入120g葡萄籽油(不饱和脂肪酸含量为75重量％)、12(^大豆磷脂(批号:576500)、0.06g维生素E，搅拌至溶解，降温至38°C作为软胶囊的内容物待用；
[0045]按照如下重量比配制软胶囊囊壳:明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到软胶囊S-3。
[0046]实施例4-11
[0047]按照实施例1的方法制备软胶囊S-4至S-11，不同的是，将罂粟籽油分别替换为月见草油、黑加仑籽油、紫苏籽油、亚麻油籽油、橄榄油、鱼油、玉米油和葵花籽油。
[0048]测试例I
[0049]本测试例用来说明本发明的软胶囊对化学性肝脏损伤的保护功能。
[0050]将ICR雄性小鼠(18_22g，购自吉林大学动物中心，清洁级，动物许可证编号SYXK(吉)2007-0011)分成模型给药组、模型对照组、空白对照组和阳性给药组(n=8)。以灌胃方式向模型给药组小鼠给予实施例1-11和对比例1-3制得的软胶囊(即S-1至S-1l和S-Dl至S-D3);向阳性给药组小鼠给予联苯双酯片(批号为A02121005，浙江万邦药业股份有限公司)；向空白对照组和模型对照组小鼠给予蒸馏水，一天一次给药，每周称重两次，以调整给药量。给药30天后，各组小鼠隔夜禁食16小时，然后将模型给药组、模型对照组和阳性给药组的小鼠一次灌胃给予的I重量％的CC14(0.lmL/10g，采用花生油稀释)，空白对照组给予的花生油(0.lmL/10g)，模型给药组与阳性给药组继续给药至实验结束(与CC14灌胃间隔4小时)。给予CC14的20小时后处死小鼠，取血分离血清，使用试剂盒测定谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平(X土 S，具体方法参见试剂盒说明书，且谷草转氨酶AST试剂盒(批号20130426)和谷丙转氨酶ALT试剂盒(批号20130427)均购自南京建成生物工程研究所)，结果见表1。
[0051]小鼠的喂养条件:所有小鼠在实验期间饲养于屏蔽级动物房，温度25°C，湿度50-60%,每日明暗室各12小时，通风良好，标准饲料，自由饮水。
[0052]表1
[0053]