一种桑椹复合提取物的加工方法

曹勇, 朱月信, 李文军, 杨春杰, 杨景生, 马凯

2011年4月27日

2010年10月27日

2010年10月27日

安徽济人药业有限公司

A61P3/06GK102028757SQ20101052405

桑椹 提取物 复合 加工

1. 一种桑椹复合提取物的加工方法，以桑椹为起始原料，包括粉碎、提取、浓缩、萃取、 分离和纯化，其特征在于所述的提取是将粉碎过80-100目筛的桑椹用PH3-5的酸水于 50-70°C下搅拌提取至少两次，得到提取液，每次提取时向提取罐中充入罐容积5-10%的 CO2气体；提取液浓缩至原体积的1/2-1/3后用正丁醇萃取至少两次，得到萃取液；萃取 液脱溶后得到浸膏状粗提物，粗提物用大孔吸附树脂层析柱分离纯化，柱填料为罗姆哈斯 XAD-8树脂与AB-8大孔树脂按8 2-6 4的质量比混合的复合填料，依次用去离子水、乙 酸乙酯和75-95%乙醇洗脱，收集乙酸乙酯和75-95%乙醇洗脱液，洗脱液混合，真空浓缩、 干燥，得到含量15-30%的桑椹红色素、25-45%的桑椹黄酮和10-20%的白藜芦醇复合提 取物

本发明涉及一种天然产物有效成分的提取分离方法，确切地说是一种桑椹复合提 取物的加工方法二、背景技术桑椹为桑科落叶乔木桑树(Morus alba L.)的干燥果穗，又名桑实、乌椹、文武实、 黑椹、桑枣、桑椹子等主要分布于北半球的温带地区并扩展至亚热带至热带山区，但除澳 洲和南极洲之外的各大洲均有分布，在中国大部分地区均产，主产四川南充、合川、涪陵，江 苏南通、镇江，浙江嘉兴、吴兴、桐乡、余杭，山东临朐、菏泽，安徽阜阳、芜湖、蛘埠，辽宁彰 武、绥中、凤城，河南商丘，许昌，山西太原等地此外，新疆、云南、陕西、湖南、湖北等地亦 产在我国桑椹最早可见于《尔雅》，郭璞云辨，半也，葚与椹同但作为药用始载于唐 《新修本草》，列于木部中品，述于桑根白皮项下“桑椹味甘寒、无毒，单食主消渴”除此以 外桑椹在许多中药著作中都有记载，如《本草纲目》有“捣汁饮，解酒中毒；酿酒服，利水气， 消肿”等，另外，桑椹的作用在《本草拾遗》、《滇南本草》、《本草求真》、《随息居饮食谱》中也 有记载中医认为，桑椹性寒，味甘，功能补肝、益肾、熄风、滋液，主治肝肾亏虚、消渴、便秘、 目暗、耳鸣、关节不利现代医学对桑椹进行药理、药效毒理测试的结果也表明，桑椹入胃能 补充胃液的缺乏，促进胃液的消化；入肠能促进肠液分泌，增进胃肠蠕动，因而有补益强壮 的功效早在1993年卫生部就已将桑椹列入“既是食品又是药品”的名单之中了传统中 医认为桑椹味甘性寒，具生津止渴、补肝益肾、滋阴补血、明目安神、利关节、祛风湿，解酒 等功效现代医学研究表明桑椹具有调整机体免疫功能，促进造血细胞生长、降糖、降脂、 降血压、护肝等作用在临床上应用很广，尤其是对老年病和延缓衰老有重要意义桑椹具有上述等功效，是因为其含有桑椹红色素、黄酮类化合物、白藜芦醇，以及 维生素、脂肪酸、氨基酸类和微量元素等有效成分；而桑椹红色素、黄酮类化合物和白藜芦 醇为主要功效成分；桑椹红色素，既花色甙，为一类天然有色物质，属多酚类化合物，溶于水 和乙醇，无毒，且具有很强的抗氧化和清除自由基的作用；黄酮类物质，主要是芦丁和槲皮 素，其中芦丁含量较高桑椹中含有的乌发因子与活性成分黄酮类化合物有关，因此，桑椹 一直被认为具有乌发明目等功能白藜芦醇为植物次生代谢产物，是重要的植物抗毒素，具 有抑制癌细胞、降低血脂、防治心血管疾病等功能，其抗氧化、延缓衰老等作用也比较明显， 被喻为继紫杉醇之后的又一新的天然抗癌药物考虑到桑椹红色素、黄酮、白藜芦醇具有上述特殊功效，有必要进行提取分离而 国内对桑椹红色素、黄酮和白藜芦醇提取分离研究较多，大多研究方法为桑椹红色素、桑 椹黄酮主要采用水、乙醇等溶剂进行提取，获得浸膏，再采用大孔树脂吸附分离(例如，张 燕忠，王忠华.桑果生理活性成分及其产品开发研究进展，《食品工业科技》，2009，30 (11) 314-318 ；刘树兴，杨兆艳，吴娟亭.树脂法提取桑椹红色素的研究.《食品科学》，2004， 25(6) 129-133;马婧，韩伟，胡贤卿.二次正交旋转组合设计优化微波辅助提取桑椹总黄酮的研究.《安徽农业科学》，2010，11 5877-5878)；而桑叶中白藜芦醇的提取分离主要采 用有机溶剂浸提、酶法、超临界C02萃取，微波及超声波提取等；纯化技术有柱层析、高速逆 流色谱和薄层层析等(例如，张初署杨庆利潘丽娟禹山林.白藜芦醇的提取及分离纯化研 究进展，《食品工业科技》，2008 (8) =289-291)经由国家知识产权局网站检索，截至2010年9月30日，与桑椹活性物质提取分离 方法直接相关的授权发明专利或申请主要有(1)ZL200710068355.4(《从桑椹中分离制备花色苷单体的方法》)本发明为一种 从桑椹中分离制备高纯度花色苷单体的方法采用酸化乙醇浸提桑椹中的花色苷；用阳离 子交换树脂对桑椹乙醇提取物进行初步纯化；以逆流色谱技术分离桑椹花色苷粗提物中的 花色苷，其溶剂系统由常温常压下处于液态的正丁醇、乙腈、甲基叔丁基醚(TBME)和三氟 乙酸(TFA)水溶液组成，TBME、乙腈和正丁醇的体积比为1 0. 5 1 1. 25 3. 5，TFA 水溶液的浓度为每升水溶液中含1 10毫升TFA本发明使用高速逆流色谱仪(HSCCC)或 低速逆流色谱仪(SRCCC)为分离设备，有效降低了花色苷单体的制备成本O)ZL2005100M615. 9(《一种具降血压作用的桑椹、桑椹汁、桑椹活性提取物及其 制备方法、用途》)本发明是一种具降压作用的桑椹，属食品、保健食品和医药技术领域，具 体为一种桑椹或从桑椹制备的桑椹汁和桑椹活性提取物及其制备方法和用途(3)CN101531825A(申请号200910074162. 9，《桑椹红色素提取的工艺》)本发明 公开了一种桑椹红色素的提取工艺，包括以下步骤①前加工将桑椹粉碎；②萃取用重 量千分比为1. 5% 5%的柠檬酸水溶液在30 50°C，浸泡粉碎的桑椹30 180min，得提 取液；③提纯提取液经过滤、树脂吸附、洗脱、浓缩，制得桑椹红色素本发明在较低温度 下、采用低柠檬酸浓度进行萃取，整个生产过程连续密闭、环保，柠檬酸液可以重复使用；并 且采用国内最先进的纳滤膜浓缩、真空离心薄膜蒸发器二次浓缩，制得的桑椹红色素色价 达150，纯度达99. 96%，提取率达89%(4)CN101444557A(申请号200810306634. 4，《采用超临界二氧化碳法萃取药桑椹 总黄酮生产方法》)本发明涉及药桑椹的提取方法技术领域，是一种采用超临界二氧化碳 法萃取药桑椹总黄酮生产方法，按下述方法进行将干燥的药桑椹用密闭性好的粉碎机粉 碎为10目至30目的颗粒后装入萃取料罐中，将萃取料罐置于萃取釜中，密封萃取釜，通入 处于超临界状态的二氧化碳进行萃取，获得浅黄色固体萃取物本发明便于操作及重复，由 于没有使用任何有机溶剂，仅使用了二氧化碳和无水乙醇三、发明内容本发明旨在为开发中药新药或保健食品提供高质量的原料-桑椹复合提取物，所 要解决的技术问题是桑椹红色素、黄酮和白藜芦醇的同步高效提取与分离本发明的技术方案是以桑椹为原料，包括粉碎、提取、浓缩、萃取、分离和纯化，与 现有技术的区别是粉碎过80-100目筛的桑椹用pH3-5的酸水于50-70°C下搅拌提取至少两 次，过滤分离，合并提取液，每次提取时向提取釜(罐)中充入釜容积5-10%的CO2气体进 行保护；将提取液浓缩至原体积的1/2-1/3后用正丁醇萃取至少两次，分离、合并得到萃取 液；萃取液脱溶后得到浅黄色浸膏粗提物；粗提物用大孔吸附树脂层析柱分离纯化，柱填 料为罗姆哈斯XAD-8树脂(美国FDA认可的类型)与AB-8大孔树脂按8 2-6 4的质量比混合的复合填料，依次用去离子水、乙酸乙酯和75-95% (体积百分浓度，下同)乙醇洗 脱，收集乙酸乙酯和75-95%乙醇洗脱液，混合后脱溶、干燥可获得含量15-30%的桑椹红 色素、含量25-45 %的桑椹黄酮和含量10-20 %的白藜芦醇复合提取物具体的技术方案是将桑椹粉碎后，过80-100目筛子；在pH3-5的酸水中进行动态提取，水温控制在 50-70°C，并充入5-10% (按照提取罐容积计量)的CO2进行保护；将2次以上的提取滤 液真空浓缩，至原体积的1/2-1/3后，添加正丁醇进行萃取2次；萃取液浓缩，上层析柱，分 离填料为大孔树脂罗姆哈斯XAD-8与AB-8的复合填料，用去离子水洗脱，再用乙酸乙酯和 75-95%乙醇水洗脱，分别接受乙酸乙酯和乙醇水洗脱流份；两种流份混合、脱溶、干燥，可 制得含量15-30%桑椹红色素、25-45%桑椹黄酮、10-20%白藜芦醇的复合提取物具体操作步骤是(1)首先将桑椹通过粉碎机进行破碎，过80-100目筛子，投入10-20倍体积的 50-70°C、pH为3-5的酸水中，并充入5-10% (以提取罐容积计)的CO2进行保护，动态搅 拌，转速60r/min，时间IOOmin左右，提取至少2次；(2)将提取液合并，真空浓缩至原体积的1/2-1/3，再添加4-6倍体积的正丁醇进 行萃取，萃取至少2次，合并萃取液，浓缩成浸膏，再用3倍体积离子水溶解，用于上柱；(3)进行大孔树脂吸附分离，分离介质选自大孔树脂罗姆哈斯XAD-8与AB-8的复 合填料，流动相选择水、乙酸乙酯、乙醇水，分别进行洗脱，收集乙酸乙酯、75-95%乙醇洗脱 液；(4)将收集的乙酸乙酯流份、乙醇水流份混合，真空浓缩、干燥，可制得含量 15-30 %桑椹红色素、25-45 %桑椹黄酮、10-20 %白藜芦醇的复合提取物备注桑椹红色素(以花色苷计)含量测定紫外-分光光度法，具体见中国药典 2005年版一部附录VA;桑椹黄酮(以芦丁计)含量测定高效液相色谱法，具体见中国药典 2005年版一部附录VI ；白藜芦醇含量测定高效液相色谱法，具体见中国药典2005年版一部 附录VI Do本发明为相关企业提供一种集酸水动态逆流提取-溶剂萃取-一柱层析组合填料 分离纯化的高效提取分离方法，制备含量15-30 %桑椹红色素、25-45 %桑椹黄酮、10-20 % 白藜芦醇的复合提取物，收率50%以上微量惰性(X)2保护的酸热水可实现桑椹红色素、黄 酮、白藜芦醇的同步高效提取；流动相采用水、乙酸乙酯、乙醇等溶剂，绿色、环保四具体实施方式实施例1 1、称取IOkg桑椹，通过粉碎机进行破碎，过80目筛子，投入16倍体积的60°C、pH =4的水中，并充入7%的(X)2进行保护，动态搅拌，转速60r/min，时间IOOmin左右，提取2 次；2、将提取液合并，真空浓缩至原体积的1/2左右，再添加5倍体积的正丁醇酯进行 萃取，萃取2次，合并萃取液，真空浓缩至干，再用3倍体积去离子水溶解，用于上柱；3、柱层析分离，分离介质为大孔树脂罗姆哈斯XAD-8与AB-8的复合填料，两者按 8 2质量比组合；先用3倍柱体积去离子水洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，得洗脱液A ；再用85%乙醇水洗脱，得洗脱液B;4、将收集到的A、B洗脱液混合，真空浓缩、干燥，可制得含量15-30%桑椹红色素、 25-45%桑椹黄酮、10-20%白藜芦醇的复合提取物；三种活性物质的收率都在50%以上实施例2 1、称取IOkg桑椹，通过粉碎机进行破碎，过100目筛子，投入20倍体积的70°C、pH =4. 5的水中，并充入10%的(X)2进行保护，动态搅拌，转速60r/min，时间IOOmin左右，提 取2次；2、将提取液合并，真空浓缩至原体积的1/3左右，再添加6倍体积的正丁醇酯进行 萃取，萃取2次，合并萃取液，真空浓缩至干，再用3倍体积去离子水溶解，用于上柱；3、柱层析分离，分离介质为大孔树脂罗姆哈斯XAD-8与AB-8的复合填料，两者按 7 3质量比组合；先用3倍柱体积去离子水洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，得洗脱液A ；再用 90%乙醇水洗脱，得洗脱液B;4、将收集到的A、B洗脱液混合，真空浓缩、干燥，可制得15-30%桑椹红色素、 25-45%桑椹黄酮、10-20%白藜芦醇的复合提取物；三种活性物质的收率都在50%以上