一种抑制增生性疤痕的中药组合物及制备方法及用途[0002]疤痕是皮肤软组织的严重损伤而不能完全自行正常修复，转由纤维组织替代修复留下的既影响外观又影响功能的局部症状。而增生性疤痕是成纤维细胞异常增殖所导致的一种病理性结果。增生性疤痕表现为局部组织的潮红，组织高出皮面，严重者可引发挛缩畸形，造成关节的屈曲畸形或器官移位给患者带来的是巨大的肉体痛苦和精神痛苦。[0003]目前常用的几种疤痕治疗方法有切除疤痕无创缝合、软组织扩张器扩张正常皮肤后修复疤痕、疤痕内药物注射、激光除疤、疤痕磨削术等方法。这些疤痕修复方法存在着恢复期较长、心理压力较重、费用较高、副作用大等问题。中医修复疤痕是一种相对安全、绿色、无副作用的治疗方法。
[0004]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种抑制增生性疤痕的中药组合物。[0005]本发明的第二个目的是提供一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法。[0006]本发明的第三个目的是提供一种抑制增生性疤痕的中药组合物的用途。 [0007]本发明的技术方案概述如下:
[0008]一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤:
[0009](I)按重量份数称取:大黄35-45份、川芎25_35份、三七15_25份、地龙5_15份；
[0010](2)取大黄，粉碎，用大黄质量6-10倍的石油醚、氯仿或乙酸乙酯加热回流提取1-3次，每次2-4小时，提取液过滤，减压浓缩至密度为l_2g/mL的稠膏；
[0011](3)取川芎，粉碎，用川芎质量6-10倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取
1-3次，每次2-4小时，提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积1-3倍的水中，搅拌均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:1-2的比例将滤液用石油醚萃取；再按体积比为1:1-2的比例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至密度为l_2g/mL的稠膏；
[0012](4)取三七，粉碎，用三七质量6-10倍的体积分数为65%_75%的乙醇水溶液加热回流提取1-3次，每次2-4小时，提取液过滤减压浓缩至密度为l_2g/mL的稠膏；
[0013](5)取地龙，粉碎，用地龙质量6-10倍的水浸泡30分钟后回流提取1_3次，每次
2-4小时，提取液滤过，浓缩至密度为l_2g/mL的稠膏；
[0014](6)将步骤(2)、(3)、(4)和(5)获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药组合物。
[0015]上述制备方法制备的抑制增生性疤痕的中药组合物。
[0016]上述一种抑制增生性疤痕的中药组合物在制备抑制增生性疤痕的药品中的用途。
[0017]上述一种抑制增生性疤痕的中药组合物在制备抑制增生性疤痕的化妆品中的用途。
[0018]本发明的中药组合物中大黄是一味传统中药，它具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿退黄的功效，大黄本身具有广谱抗菌作用，还对其它抗菌药物有协同增效作用，且不易产生耐药性，大黄的主要功效成分蒽醌类化合物具有抗菌消炎的药理作用；三七是中国特有的名贵中药材，具有止血、增强免疫力、抗炎、抗纤维化、消除自由基、抗氧化等药理作用；川芎味辛，性温，归肝、胆、心经，气香升散，具有活血行气，祛风止痛的功效；地龙具有通经活络、活血化瘀、预防治疗心脑血管疾病的作用；地龙中提取胶原酶、纤溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多种成分已被广泛的应用在药物中，具有通经活络、活血化瘀的作用。一种抑制增生性疤痕的中药组合物把传统的中医理论与现代中药技术相结合，根据皮肤的生理和疤痕形成的原因，结合多年的临床经验，筛选而成。



[0019]图1为本发明的组合物对成纤维细胞(HSF)增殖和对乳酸脱氢酶(LDH)活力的影响。

[0020]下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好的理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
[0021]实施例1
[0022]一种抑制增生性疤 痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤:
[0023](I)按重量份数称取:大黄35份、川弯35份、三七15份、地龙15份。
[0024](2)取大黄，粉碎，用大黄质量6倍的石油醚加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，减压浓缩至密度为2g/mL的稠膏；
[0025](3)取川；，粉碎，用川芎质量6倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积I倍的水中，搅拌均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:1的比例将滤液用石油醚萃取；再按体积比为1:1的比例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至密度为2g/mL的稠膏；
[0026](4)取三七，粉碎，用三七质量6倍的体积分数为75%的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤减压浓缩至密度为2g/mL的稠膏；
[0027](5)取地龙，粉碎，用地龙质量6倍的水浸泡30分钟后回流提取3次，每次2小时，提取液滤过，浓缩至密度为2g/mL的稠膏；
[0028](6)将步骤(2)、(3)、(4)和(5)获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药组合物。
[0029]实施例2
[0030]一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤:
[0031](I)按重量份数称取:大黄40份、川弯30份、二七20份、地龙10份；
[0032](2)取大黄，粉碎，用大黄质量8倍的乙酸乙酯加热回流提取2次，每次3小时，提取液过滤，减压浓缩至密度为1.5g/mL的稠膏；[0033](3)取川；，粉碎，用川芎质量8倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取2次，每次3小时，提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积2倍的水中，搅拌均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:1.5的比例将滤液用石油醚萃取；再按体积比为1:1.5的比例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至密度为1.5g/mL的稠膏；
[0034](4)取三七，粉碎，用三七质量8倍的体积分数为70%的乙醇水溶液加热回流提取2次，每次3小时，提取液过滤减压浓缩至密度为1.5g/mL的稠膏；
[0035](5)取地龙，粉碎，用地龙质量8倍的水浸泡30分钟后回流提取2次，每次3小时，提取液滤过，浓缩至密度为1.5g/mL的稠膏；
[0036](6)将步骤(2)、(3)、(4)和(5)获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药组合物。
[0037]实施例3
[0038]一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤:
[0039](I)按重量份数称取:大黄45份、川弯25份、三七25份、地龙5份；
[0040](2)取大黄，粉碎，用10倍体积的氯仿加热回流提取I次，4小时，提取液滤过，减压浓缩至密度为lg/mL的稠膏；
[0041](3)取川芎，粉碎，用川芎质量10倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取I次，4小时，提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积3倍的水中，搅拌均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:2的比例将滤液用石油醚萃取；再按体积比为1:2的比例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至密度为lg/mL的稠膏；
[0042](4)取三七，粉碎，用三七质量10倍的体积分数为65%的乙醇水溶液加热回流提取I次，4小时，提取液过滤减压浓缩至密度为lg/mL的稠膏；
[0043](5)取地龙，粉碎，用地龙质量10倍的水浸泡30分钟后回流提取I次，4小时，提取液滤过，浓缩至密度为lg/mL的稠膏；
[0044](6)将步骤(2)、(3)、(4)和(5)获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药组合物。
[0045]实施例4
[0046]成纤维细胞(HSF)增殖抑制率和乳酸脱氢酶(LDH)活力的测定
[0047]成纤维细胞购于上海拜力生物技术有限公司；
[0048]DMEM高糖培养基购于美国Hyclone公司；
[0049]MTS溶液购于美国Promega公司；
[0050]胎牛血清购自以色列Biological Industries公司；
[0051]胰蛋白酶，美国Gibco公司；
[0052]乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，南京建成生物工程研究所。
[0053]增生性疤痕病理本质是以疤痕成纤维细胞(HSF)为主的细胞过度增殖和以胶原为主的细胞外基质过度沉积的结果。
[0054](I)对数生长期成纤维细胞用0.25%胰蛋白酶(0.25%胰蛋白酶是0.25g胰蛋白酶用100ml的双蒸水配制而成，并用碳酸氢钠调节pH值至7.2)消化，悬于含有胎牛血清、青霉素和链霉素的DMEM高糖培养基中，(基中，含质量浓度为10%胎牛血清、1%青霉素和1%链霉素)，调整细胞密度为5X104/mL，接种于96孔培养板，每孔100 μ L，于5%C02、37°C培养12h后，除去上清液，加入第二种培养基，分为对照组，氢化可的松阳性对照组，实施例1、2、3组，其中，对照组:含1%胎牛血清的DMEM高糖培养基；氢化可的松阳性对照组:将氢化可的松用含1%胎牛血清的DMEM高糖培养基配制成浓度为100μ g/mL的溶液；实施例1、2、3组:将实施例1、2、3获得的稠膏分别用含1%胎牛血清的DMEM高糖培养基配制成浓度为50 μ g/mL的溶液。各组培养24h后，每孔加入120 μ L MTS稀释液(MTS稀释液是MTS溶液用5体积倍的DMEM高糖培养基稀释而成)，5%C02、37°C继续培养4h，取上清液，分别进行细胞增殖抑制率测定和乳酸脱氢酶(LDH)活力评价。
[0055](2)用酶标仪测步骤(1)获得的上清液490nm处吸光度(A)值，计算成纤维细胞增殖抑制率。[增殖抑制率=(1-A样品/A对照)X 100%]
[0056](3)药物的细胞毒性通过受损细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶进行评价，取步骤(I)中对照组，氢化可的松阳性对照组，实施例1、2、3组的培养基按乳酸脱氢酶试剂盒(酶标法)说明书进行，450nm测吸光度值计算乳酸脱氢酶的活力。
[0057](4 )试验结果表明，在各组细胞乳酸脱氢酶无显著差异的条件下，实施例1、2、3抑制增生性疤痕的中药组合物组均能抑制成纤维细胞的增殖。见图1。
[0058]实施例5
[0059]抑制增生性疤痕的中药组合物溶液剂的制备
[0060]表1抑制增生性疤痕的中药组合物溶液剂配方
[0061]