一种用于癌性疼痛镇痛的中药注射液制作方法

张平

2002年10月2日

2002年3月13日

2002年3月13日

张平

A61K9/08GK1371741SQ0211495

癌性 镇痛 注射液 中药 疼痛 用于

1.一种用于癌性疼痛镇痛的中药注射液，该注射液由下述方法制备获得以白屈菜为原料，将白屈菜切成0.3～10cm段，加4～12倍量的55～95％乙醇，加热回流提取1～6次，每次0.5～5小时，合并醇提取液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.28，用0.5～1.5mol/L磷酸溶液调pH值至1.5～4.5，于5～10℃冷藏16～72小时，滤过，滤液用5～40％氢氧化钠溶液调pH值至9～11.5，用等量氯仿提取2～8次，合并氯仿液，回收氯仿，残留物真空干燥，得总生物碱提取物，然后加注射用水，搅拌使溶解，用0.5～1.5mol/L磷酸溶液调pH值至3.0～5.0，滤过，滤液加吐温-80，苯甲醇，氯化钠，混匀，用0.3～0.45μm微孔滤膜滤过，补加注射用水，灌封，灭菌，即得

本发明涉及一种用于癌性疼痛镇痛的药物，具体是涉及一种中药注射液目前，癌痛尚属于一种难于征服的病症世界卫生组织对癌性疼痛的治疗，推荐使用三阶梯疗法轻度疼痛，使用非阿片类止痛药，如扑热息痛，阿司匹林及布洛芬、萘普生、炎痛喜康等；中度疼痛，则使用弱阿片类镇痛药，如可待因、氨酚待因，或加入非阿片类镇痛药及辅助性药物等；重度疼痛，则采用强阿片类药，如吗啡、二氢吗啡酮、美沙酮等这些强阿片类药，可使患者解决暂时痛苦，并使精神得到适当休息，但连续使用易产生蓄积毒性和依赖性等副作用如果使用不当，失之管理，更会危害人身健康和社会安定近年来，这类药吕的滥用和依赖性的产生明显增加，以及由此而带来的严重社会问题日益突出，使这类药品的临床应用受到严格限制，导致许多癌痛患者至今仍未得到良好治疗，对癌痛的处理仍然是医生们所而临的一个棘手的问题本发明提供的用于癌性疼痛镇痛的中药注射液，该注射液由下述方法制备获得以白屈菜为原料，将白屈菜切成0.3～10cm段，加4～12倍量的55～95％乙醇，加热回流提取1～6次，每次0.5～5小时，合并醇提取液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.28，用0.5～1.5mol/L磷酸溶液调pH值至1.5～4.5，于5～10℃冷藏16～72小时，滤过，滤液用5～40％氢氧化钠溶液调pH值至9～11.5，用等量氯仿提取2～8次，合并氯仿液，回收氯仿，残留物真空干燥，得总生物碱提取物，然后加注射用水，搅拌使溶解，用0.5～1.5mol/L磷酸溶液调pH值至3.0～5.0，滤过，滤液加吐温-80，苯甲醇，氯化钠，混匀，用0.3～0.45μm微孔滤膜滤过，补加注射用水，灌封，灭菌，即得白屈菜(Chelidonium majus L.)，味苦、辛，性微温，有毒，为罂粟科植物，主产于我国东北、内蒙古、河北、河南、山东、山西、江苏、江西、浙江等地白屈菜的根、茎、叶主含白屈菜碱，其中含白屈菜碱0.2～0.4％，原阿片碱0.04～0.12％，α-别隐品碱0.01～0.06％，其余尚含有少量的白屈菜红碱、血根碱及隐品碱等，此外，还含有胆碱、组织胺、酪胺、皂甙、黄酮醇、白屈菜醇和维生素C、胡萝卜素等由白屈菜为原料制成的本发明中药注射液，对癌性疼痛具有明显的镇痛、镇静、催眠和抗炎作用下面结合具体实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明取白屈菜3000g，将其切成1cm段，加6倍量85％乙醇，加热回流提取二次，每次2小时，合并醇提取液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10(50℃)，用1mol/L磷酸溶液调pH值至2.0，于10℃冷藏24小时，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调pH值至10.5，用等量氯仿提取4次，合并氯仿液，回收氯仿，残留物真空干燥，得总生物碱提取物，然后加注射用水800ml，搅拌使溶解，用1mol/L磷酸溶液调pH值至4.0，滤过，滤液加吐温-80 10ml，苯甲醇10ml，氯化钠3.45g，混匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，补加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得本发明中药注射液以下第4～14页记载的为本发明的主要药效学试验，其中本发明中药注射液称为白屈菜注射液白屈菜注射液的主要药效学试验摘要 镇痛实验显示白屈菜注射液低剂量(小鼠3g/kg，大鼠2g/kg)对各疼痛实验模型均已表现有不同程度的镇痛作用，镇痛特点是起效快(15min起效)、持续时间长、剂量依赖性明显；镇静实验表明白屈菜(3-8g/kg)使小鼠自由活动减少，可协同巴比妥钠的镇静催眠作用，抑制苯丙胺的兴奋作用；抗炎实验证明白屈菜明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀及蛋清所致的大鼠足跖肿胀，抑制率达40％以上上述结果表明白屈菜注射液有明显的镇痛、镇静、催眠、抗炎作用试验目的观察白屈菜注射液镇痛、镇静、催眠和抗炎作用，评价其效果，为该药的临床应用提供药理学依据受试药物白屈菜注射液，规格6.0g生药/ml，批号000312，青海圣域医药科技有限公司提供配制方法(每批实验都新鲜配制)小鼠(1)高浓度取10ml白屈菜注射液加注射用水27.5ml(南京金陵药业集团公司提供，批号991002)稀释成1.6g生药/ml的工作液，4℃保存(2)中浓度取配好的高浓度液17.5ml加注射用水10.5ml稀释成1.0g生药/ml的工作液，4℃保存(3)低浓度取配好的中浓度液10ml加注射用水6.7ml稀释成0.6g生药/ml的工作液，4℃保存每次使用时分装所需要量，每只小鼠后腿上部外侧肌肉注射量均为0.1ml大鼠(1)高浓度取10ml白屈菜注射液加注射用水6ml稀释成3.75g生药/ml的工作液，4℃保存(2)中浓度取配好的高浓度液8ml加注射用水5ml稀释成2.3g生药/ml的工作液，4℃保存(3)低浓度取配好的中浓度液5ml加注射用水3ml稀释成1.4g生药/ml的工作液，4℃保存每次使用时分装所需要量，每只大鼠后腿上部外侧肌肉注射量均为0.2ml实验动物 昆明种小鼠，体重18～22g，动物合格证第98-022号；Wistar种大鼠，体重200±20g，动物合格证第98-037号，均由南京军区总医院药理科提供动物进入实验室后，雌雄分开，小鼠每笼5只，大鼠每笼3只，实验前适应性饲养3天动物室光照充足，通风，光照时间为12h/天，室温控制在20～25℃，湿度为50-70％，按常规定期消毒给药途径 肌肉注射，与拟推荐的临床用药途径一致试验对照 空白对照等体积注射用水；阳性对照盐酸曲马多注射液(小鼠50mg/kg，大鼠25mg/kg)实验数据统计 实验数据以x±s表示，所有数据由SPSS统计软件进行方差分析及组间检验一.白屈菜注射液镇痛试验剂量设置用小鼠热板法作预试验，每组3只，找出所有小鼠对热刺激都没有反应的最小药物剂量为10.5g生药/kg，所有小鼠对热刺激都有反应的最大药物剂量为1.25g生药/kg在此有效剂量范围内，我们分别取3、5、8g生药/kg作为白屈菜注射液小鼠低、中、高剂量按“人与各种动物以及各种动物之间用药剂量换(估)算方案”[1]，可算出大鼠低、中、高剂量分别约为2.1、3.5、5.6g生药/kg实验材料盐酸曲马多针剂千帆医药有限公司，批号A302J，生产日期3/1998，规格100mg/2ml配制方法小鼠取2ml加注射用水8ml，稀释成10mg/ml的工作液，4℃保存使用时取0.1ml于小鼠后腿上部外侧肌肉注射大鼠取2ml加注射用水4ml，稀释成16.7mg/ml的工作液，4℃保存使用时取0.3ml于大鼠后腿上部外侧肌肉注射实验方法与结果1.小鼠热板法镇痛实验[2]1.1方法 将小鼠放在55±1℃的热板上，以小鼠舔后足时间作为正常痛阈值重复测定二次，取平均值为正常痛阈值(给药前痛阈值)，筛选痛阈值在5-30s内的小鼠供实验用选出合格小鼠60只，随机分组肌肉注射不同剂量白屈菜注射液(共3个剂量组)、等溶量生理盐水(空白对照组)、曲马多注射液(阳性对照组)，然后各组按相应剂量给药各组均于给药后15、60、120、240min分别测定痛阈值一次小鼠在热板上停留60s仍不舔后足时，则立即取出小鼠，以防汤伤，其痛阈值以60s计算按下式计算痛阈提高百分率，然后以时间为横坐标，痛阈提高百分率为纵坐标，绘制时程曲线 1.2结果 由表1可见，白屈菜注射液镇痛作用在给药后15min起效，2h后镇痛作用达高峰，4h后尚有镇痛作用与曲马多相比，白屈菜镇痛强度虽然比曲马多弱，但镇痛持续时间比曲马多长表1 白屈菜注射液对小鼠热板法不同时间痛阈的影响(n＝10，x±s)剂量 给药前给药后不同时间痛阈(s)组 别g生药/kg 痛阈(s) 15min60min 120min240min对照 -18.6±3.8 19.4±4.020.2±4.2 20.5±4.8 19.6±3.6白屈菜 3.00 20.3±3.4 23.5±5.024.6±5.6 29.5±7.2**25.8±8.75.00 19.4±4.2 24.2±4.7*29.2±7.1**35.7±10.3**27.6±7.3**8.00 19.6±4.5 29.8±8.2**34.6±9.1**40.4±11.5**31.2±8.6**曲马多 0.05 18.8±4.0 32.6±9.6**45.6±12.0**34.5±5.5**21.2±4.4与给药前比较*p＜0.05，**p＜0.012.小鼠醋酸扭体实验[2]2.1方法 小鼠50只，雌雄各半分组和给药方法同1.1各组小鼠均于给药后1h腹腔注射0.6％醋酸0.2ml，10分钟后观察并记录15分钟内小鼠的扭体次数(以腹部收缩、后肢伸展或臀部抬高为扭体反应阳性)并按下式计算扭体反应抑制率 2.2结果 白屈菜注射液3、5、8g生药/kg可显著抑制醋酸引起的小鼠扭体反应，抑制率分别为51.2％、68.5％、78.9％，具有一定的量效关系(见表2)表2 白屈菜注射液对小鼠醋酸刺激痛(扭体法)的影响(n＝10，x±s)组 别剂量(g生药/kg) 扭体次数 抑制率(％) P值对照 -33.8±12.6 0-白屈菜 3.00 16.6±6.5 51.2＜0.015.00 10.8±5.7 68.5＜0.018.00 7.3±3.6 78.9＜0.01曲马多 0.05 4.3±2.2 88.6＜0.013.白屈菜注射液对大鼠三叉神经痛的作用[3]3.1方法 取大鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，按表3大鼠给药剂量肌注给药(0.2ml/100g体重)给药后1h乙醚麻醉动物，剪毛后切开头颈部皮肤，分离肌肉，暴露枕骨及第一颈椎间的硬脑膜，在大鼠的脑闩左下方约1mm处(相当于三叉神经脊束核尾侧部)，缓慢微量注射25万u/ml的青霉素G钾盐3μ1后缝合切口，置笼内观察以大鼠尖叫、甩头及左右肢快速抓同侧面部的次数之和为总发作次数，记录大鼠翻正反射恢复后40min内总发作次数作为镇痛效果评价指标3.2结果 白屈菜注射液对大鼠三叉神经痛有明显的抑制作用由低到高剂量，发作次数分别为158.3±24.7，106.2±22.8，88.5±26.6(见表3)表3 白屈菜注射液对大鼠三叉神经痛的影响(n＝10，x±s)组 别剂量(g生药/kg)总发作次数 P值对照 - 246.7±58.2 -白屈菜2.100 158.3±24.7＜0.053.500 106.2±22.8＜0.015.600 88.5±26.6 ＜0.01曲马多0.025 50.7±21.3 ＜0.014.电刺激法4.1方法 将大鼠放入大鼠固定器，露出鼠尾，用75％酒精清洁尾部后，涂以导电胶并按置刺激电极，用药理生理多用仪进行方波电刺激(电压10v，频率1Hz，波宽10ms)连续电刺激二次(间隔5min)皆有嘶叫反应者为合格大鼠选出合格小鼠60只，随机分组肌肉注射不同剂量白屈菜注射液(共3个剂量组)、等溶量生理盐水(空白对照组)、曲马多注射液(阳性对照组)，然后各组按设计的剂量给药给药60min后，重复电刺激大鼠，连续2次刺激不嘶叫者，为镇痛药有效，按下式计算镇痛有效率 4.2结果 白屈菜注射液3、5、8g生药/kg可显著抑制电刺激引起的大鼠嘶叫反应，抑制率分别为41.6％、58.3％、66.7％(见表4)表4 白屈菜注射液大鼠电刺激法镇痛结果(n＝12，x±s)组 别 剂量(g生药/kg)镇痛动物数 镇痛百分率(％) P值对照 -0 0-白屈菜 3.00 5 41.6＜0.055.00 7 58.3＜0.018.00 8 66.7＜0.01曲马多 0.05 10 83.3＜0.01 二、白屈菜注射液镇静试验实验剂量设定通过预试验，我们发现白屈菜注射液在发挥镇痛作用的同时，还有很好的镇静作用，而且，随着镇痛作用剂量的增加，镇静作用明显增强考虑该药镇痛作用是其主要作用，因此，本试验给药剂量采用镇痛作用的试验剂量实验材料盐酸氯丙嗪，江苏金坛市制药厂生产，批号9803201用注射用水配成1.56mg/ml的工作液备用，使用时20g小鼠肌注0.1ml；苯丙胺，天丰制药厂生产，批号970715，用注射用水配成0.5mg/ml的工作液，使用时20g小鼠腹腔注射0.2ml；戊巴比妥钠，上海第四制药厂生产，批号980874，用注射用水稀释成2.5mg/ml备用实验方法与结果1.白屈菜注射液对小鼠自发活动的影响1.1方法 以小鼠一般精神状态和自发活动为指标评价白屈菜注射液对小鼠中枢神经系统的影响实验前筛选2分钟内抬举双前肢15～30次的正常小鼠40只，雌雄各半，随机分为空白对照组及白屈菜注射液低、中、高剂量组采用小动物记录装置(仿抖笼法)，记录各组小鼠给药前的活动情况然后各动物按各组剂量分别肌肉注射白屈菜注射液给药后1h、2h、3h记录各组小鼠2min内的自发活动次数1.2结果 白屈菜注射液三个剂量组均能明显抑制小鼠的自发活动(与给药前相比，P＜0.05和P＜0.01)，而空白对照组无明显变化(见表5)抑制作用1h后最明显，3h后基本消失小鼠未见流涎、肌颤等现象表5 白屈菜注射液对小鼠自发活动的影响(n＝10，x±s)剂量给药前 给药后活动次数(次/min)组别(g生药/kg)(次/min) 1h2h3h空白对照 - 125.8±14.4 130.2±17.7 127.5±15.6124.8±20.5白屈菜低剂量3.0 122.0±13.6 108.7±12.0*113.4±11.2118.7±10.5中剂量5.0 118.2±10.4 96.8±8.8**106.5±10.6*112.5±11.9高剂量8.0 125.5±13.7 82.8±8.3**108.5±12.5**116.7±15.8与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.012.白屈菜注射液对戊巴比妥钠催眠作用的影响[4-5]2.1对戊巴比妥钠阈下睡眠剂量诱导小鼠入睡的影响2.1.1方法 小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，每组12只模型对照组，白屈菜注射液低、中、高剂量组及氯丙嗪阳性对照组各组按表5给药剂量im给药给药1h后给每只小鼠ip戊巴比妥钠25mg/kg，记录15min内小鼠翻正反射消失超过1min的小鼠个数2.1.2结果 结果表明，对照组(注射用水+戊巴比妥钠)12只小鼠只有2只入睡(表现为翻正反射消失)，而氯丙嗪对照组(氯丙嗪+戊巴比妥钠)12只小鼠全部入睡，表明造模成功白屈菜注射液的低、中、高剂量组翻正反射消失的小鼠数依次为5、8、10，经x2检验，白屈菜注射液低、中、高剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.01)表明白屈菜注射液可以使戊巴比妥钠阈下睡眠剂量所致入睡小鼠数目明显增加(见表6)表6 白屈菜注射液对戊巴比妥钠阐下睡眠剂量诱导小鼠入睡的影响(n＝12)组 别 剂量(g生药/kg) 翻正反射消失个数增加率(％) P值对照- 2--白屈菜 3.0 5 150＜0.015.0 8 300＜0.018.0 10 400＜0.01氯丙嗪 5.0(mg/kg) 12 500＜0.012.2对戊巴比妥钠阈上睡眠剂量所致小鼠睡眠时间的影响2.2.1方法 每组鼠数为10只，分组及给药同实验2.1.1给药后1h，各组小鼠ip戊巴比妥钠40mg/kg，以小鼠翻正反射消失至恢复作为睡眠时间，记录各组小鼠的睡眠时间2.2.2结果 对照组小鼠睡眠时间平均约1h，而氯丙嗪对照组小鼠睡眠时间平均达4.5h白屈菜注射液的低、中、高剂量组小鼠平均睡眠时间依次为94.6min、128.3min、184.5min，经方差分析，白屈菜注射液低、中、高剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.01)表明白屈菜注射液能显著延长戊巴比妥钠阈上睡眠剂量所致的睡眠时间(见表7)表7 白屈菜注射液阈上睡眠剂量所致小鼠睡眠时间的影响(n＝10)组 别 剂量(g生药/kg) 睡眠时间(min)增加率(％) P值对照 - 56.8±17.4 --白屈菜 3.088.6±36.756.0＜0.055.0128.3±34.2 125.9 ＜0.018.0184.5±40.4 224.8 ＜0.01氯丙嗪 5.0(mg/kg) 276.5±46.6 386.8 ＜0.013.白屈菜注射液对苯丙胺兴奋小鼠的影响3.1方法 小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，每组10只第一组为注射用水对照组；第二组为苯丙胺模型组；第三至五组为白屈菜注射液低、中、高剂量+苯丙胺组，第六组为氯丙嗪+苯丙胺阳性对照组各组给药剂量和方法同前给药1h后，给每只小鼠ip苯丙胺5mg/kg，30min后，采用小动物活动记录仪记录小鼠2min内的活动次数3.2结果 模型组小鼠ip苯丙胺后，小鼠活动次数比对照组小鼠活动次数明显增加(P＜0.01)，表明造模成功预先给氯丙嗪，可明显抑制苯丙胺对小鼠的兴奋作用白屈菜注射液各剂量组与模型组比较，均能明显抑制小鼠活动次数(P＜0.05或＜0.01)，说明白屈菜注射液对苯丙胺引起的兴奋有抑制作用(见表8)表8 白屈菜注射液对苯丙胺致小鼠兴奋作用的影响(n＝10)组 别剂量(g生药/kg) 活动次数(次/min) 抑制率(％) P值对照 - 112.6±17.4 - -模型 - 387.8±51.3 - -白屈菜 3.0 340.5±42.612.2 ＜0.055.0 320.3±35.017.4 ＜0.018.0 271.4±30.330.0 ＜0.01氯丙嗪 5.0(mg/kg) 83.5±11.9 78.5 ＜0.01 三、白屈菜注射液的抗炎作用实验材料鱼腥草注射液，2g/ml，四川雅安三九药业公司，批号980805用注射用水配成0.2g/ml的药液备用二甲苯，广州化学试剂厂，批号980108实验方法与结果1.对小鼠二甲苯耳廓炎症的影响[6]1.1方法 取小鼠50只，雌雄各半随机均分为5组，按前述方法im给药阳性对照药为鱼腥草注射液各组给药45min后，用棉球将二甲苯20μl/每耳涂于小鼠右耳廓前后两侧，30min后处死小鼠，以直径5mm打孔器将小鼠左右耳廓相同部位等面积取下并称重以两耳片重差值作为肿胀程度指标，比较药物组和对照组间的差异，并求出抑制率1.2结果 白屈菜注射液各实验剂量组对小鼠二甲苯耳廓炎症均有明显的抑制作用(见表9)表9 白屈菜注射液对小鼠耳廓二甲苯炎症的影响(n＝10 x±s)组 别剂量(g/kg)肿胀度(mg)-抑肿率(％) P值对照 - 6.91±2.05- -白屈菜 3.06.25±3.32 9.6 ＞0.055.05.10±1.68 26.2 ＜0.058.03.53±2.17 48.9 ＜0.01鱼腥草 1.03.44±1.85 50.2 ＜0.012.对蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响[7]2.1方法 取体重180-220g Wistar大鼠50只，雌雄各半，随机均分5组给药前先用排水法体积装置测定各鼠左后足跖体积，按表5给药剂量和上述给药方法给药，给药后30min，于左后足跖皮下注射新鲜鸡蛋清0.05ml/只，于1小时后再测大鼠足跖体积，按下式计算足跖肿胀百分率和抑制率 2.2结果白屈菜注射液对大鼠蛋清性足跖肿胀有显著抑制作用(见表10)表10 白屈菜注射液对大鼠蛋清性足跖肿胀的影响(n＝10，x±s)组 别 剂量(g/kg)肿胀百分率(％，x±s) 抑制率(％) P值对照 69.7±15.3 --白屈菜 2.1 58.7±12.2 15.8 ＞0.053.5 53.8±11.7 22.8 ＜0.055.6 40.9±10.5 41.3 ＜0.01鱼腥草 0.7 34.2±9.150.9 ＜0.01结论1.白屈菜注射液对小鼠皮肤热刺痛、醋酸腹膜刺激痛、电刺激痛及大鼠三叉神经痛有明显的镇痛作用特点是起效快，维持时间长，有剂量依赖性2.白屈菜注射液有镇静作用，能抑制正常小鼠的自发活动，增加戊巴比妥钠催眠时间，对苯丙胺兴奋小鼠具有抑制作用3.白屈菜注射液还具有抗炎作用