专利名称：一种基于毛细电泳的呼吸道病毒的多重基因检测方法目前，呼吸道病毒感染每年造成大量人群死亡，尤其甲型流感时有局部暴发或爆发性流行如2009年的猪流感流行，对人民的健康及社会造成巨大威胁。目前对呼吸 道感染的最终检测方法仍以病原体检查为主，往往在确诊上报之时，疫情已经有一定程度的传播。本发明可同步检测19种呼吸道病毒(包括季节性甲型流感、猪流感、禽流感、非典病毒等)及达菲敏感或抗性，一天之内可完成192个患者样品的检测。利用美国贝克曼库尔特有限公司的GeXP遗传分析系统灵敏、准确定量、快速、高通量的技术优势，将为疾控中心、医院及其它医疗机构提供一种灵敏、准确、快速且低成本的多重基因检测方案。
本发明的目的是提供一种灵敏度高、重复性好、准确性强、灵活性强、成本低的基于毛细电泳的呼吸道病毒的多重基因检测方法。本发明采用如下技术方案一种基于毛细电泳的呼吸道病毒的多重基因检测方法，包括如下步骤(1)生产“呼吸道病毒多重基因检测试剂盒”;(2)采集患者样品，并提取核酸；(3)以患者核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。优选地，所述步骤(2)中的患者样品包括鼻咽拭子、痰液等等。优选地，所述步骤(3)包括按比例在样品板上加入试剂和样品、以及混匀后在一定温度下孵育的子步骤。优选地，所述步骤(3)中的孵育温度分别为48°C、42°C、95°C、4°C。优选地，所述步骤(4)包括按比例在样品板上加入试剂和样品、以及混匀后按一定温度进行热循环反应的子步骤。优选地，所述步骤(4)的子步骤中的热循环温度分别为95°C、94°C、55°C、70°C、4。。。本发明的有益效果为1.灵敏度高、重复性好采用激光诱导荧光-PMT，具有超高灵敏度。2.准确性强采用毛细管电泳对PCR产物进行分离检测，可将非特异性扩增产物、引物二聚体和特异性扩增产物分离，最大程度降低假阳性。3.高通量本系统采用双(96孔)板、自动加样和样品追踪技术，实现单个反应检测15-40个位点，可同时做192个反应(如192个患者样品，每个样品检测19种呼吸道病毒，22个位点)，一天出结果；对于交叉感染患者，本方法可一次性给出准确报告，避免漏检。4.精确定量可精确定量病原体基因拷贝数。5.灵活性强可随时根据需求调整检测的靶基因，例如甲型流感发生新变异，可立即设计特异性引物，将其放入“呼吸道感染病原体多重基因检测方案”中去。6.成本低每个样品的检测成本少于Y50,利于大规模推广。1.检测的病毒包括甲型流感病毒及其亚型(禽流感、猪流感、季节性流感)、乙型流感病毒、副流感病毒、冠状病毒、博卡病毒、合胞病毒、腺病毒、偏肺病毒等(表I)。2.在检测上述呼吸道病毒的同时，检测猪流感病毒对达菲抗药性，明确地鉴别患者是否适宜服用达菲(表I)。3.建立了可靠地样品质量及反应过程的对照(表I)a)人DNA和人RNA完整性的对照内参确保在检验过程中对样品质量的判断，避免假阴性。b)正常反应对照内参监控PCR反应效率，避免假阴性。表1.检测的靶位点靶点名称检测内容/内参

本发明公开了一种基于毛细电泳的呼吸道病毒的多重基因检测方法，包括如下步骤(1)生产“呼吸道病毒多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者样品，并提取核酸；(3)以患者核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。本发明具有灵敏度高、重复性好、准确性强、灵活性强、成本低的优点。