一种细胞迁移实验用的装置制造方法[0002]细胞迁移在人体的正常生理活动和疾病发生中普遍存在，例如细胞的觅食、伤口损伤愈合、胚胎发生、神经系统形成、免疫反应、癌症转移等很多事件都涉及到细胞迁移。细胞迁移是当前生命科学研究的一个重要方向和热点，科学家们试图通过对细胞迁移的研究，在血管损伤修复、阻止癌症转移、植皮等医学应用方面取得更大成果。[0003]目前研究细胞迁移主要用划痕实验。上皮细胞、角质细胞等在生理状态下形成单层或者复层上皮，在创伤愈合等病理状态下，细胞发生迁移，以侧向的运动为主。划痕实验很好地模拟了这种运动形式，并且操作方便，因此是研究细胞迁移的一个很好的模型。在现行的划痕实验中，一般采用无菌的塑料枪头人工手划，如图1所示，可见划痕边缘不整齐，划痕中有PBS清洗后残留的细胞，不同孔中划痕面积不同，这些都会影响实验效果及结果的判断，因此此种方法具有划痕不直、划痕位置不准确、划痕面积不统一等问题。实用新型内容[0004]本实用新型的目的在于提供一种细胞迁移实验用的装置，可以方便快速的进行划痕，且划痕整齐大小一致，板体底部有栅格刻度线，便于观察及计算相对划痕面积。[0005]本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是:一种细胞迁移实验用的装置，其特征是，包括板体和均匀分布在板体上的孔，孔设置为方形，在孔底部的外侧设有栅格，栅格的中心线与孔的中轴线重合，在孔底部的内侧贴有分隔条，粘合的材料为医用高分子粘合剂，分隔条纵向中心线与栅格的中心线重合，所述分隔条的宽度为1_，长度大于孔长度，在分隔条的一端设有拿持部。[0006]所述的栅格间距为0.25mm。[0007]所述的分隔条的拿持部位于孔外且不高于板盖，且末端设有拉环。
[0008]所述的分隔条为材质超薄透明塑料胶条。
[0009]本实用新型的有益效果是:通过设计为方形孔，划痕的面积为长方形，与圆形孔相比面积计算更加精确；通过在孔内贴有带拉环的分隔条，可在划痕实验时，揭下分隔条，即可得到大小一致规格整齐的划痕，且方便快速；通过在孔底部设有栅格，可方便观测统计细胞移动的位置，计算相对划痕面积。



[0010]图1是普通实验中人工划痕后的边缘状态示意图，
[0011]图2是本实用新型的结构示意图，
[0012]图3是孔底面仰视图，
[0013]图4是孔底面俯视图，[0014]图5是图4的A-A视图，
[0015]图6是揭下分隔条后的边缘状态示意图。
[0016]图中:I板体，2孔，3分隔条，31拿持部，32拉环，4栅格。

[0017]一种细胞迁移实验用的装置，包括板体I和均匀分布在板体I上的孔2，孔2设置为方形。可根据需求确定需要的孔的数量，在孔2底部的外侧设有栅格4，栅格间距为
0.25_，栅格4的中心线与孔2的中轴线重合。在孔2底部的内侧贴有分隔条3为材质超薄透明塑料胶条，粘合的材料为医用高分子粘合剂，无细胞毒性，去除分隔条3后孔2底部无残留，不影响细胞生长。分隔条3纵向中心线与栅格4的中心线重合，这样当分隔条3揭下后，分隔条3两侧的细胞相对于栅格4中心线的距离是相同的，便于数据统计。所述分隔条3的宽度为1_，长度大于方形孔长度，这样可避免圆形孔边缘有部分细胞未分割开而导致的划痕面积计算不准确问题。在分隔条3的一端设有拿持部31，拿持部位于孔外且不高于板盖，拿持部31高于孔2边缘部分设有拉环32，便于工作人员拿镊子夹持制作划痕。
[0018]实验步骤:
[0019]1.细胞培养
[0020]以人肝癌细胞系BEL-7402为例，肿瘤细胞在RPMI1640培养基(含10% FBS，100U/ml青霉素，100ug/ml链霉素)、37°C、5% C02条件下培养，待细胞达到90%融合度时消化细胞进行计数。
[0021](I) 75%酒精擦拭超净台台面，依次摆好操作所需要的塑料吸管、培养瓶等，紫外线照射30min后使用；PBS磷酸盐缓冲液、RPMI1640完全培养液及0.25%胰酶置于37°C温箱中预温，酒精擦拭后放入超净台；
[0022](2)戴好无菌无粉手套，取出培养瓶置于倒置相差显微镜下观察细胞生长状态，待细胞生长至大约90%融合度时即可消化细胞进行计数；
[0023](3)吸管吸弃旧培养液，用PBS缓冲液冲洗2遍，加入适量胰酶，胰酶的量以刚好覆盖细胞即可，必要时放在37°C温箱中孵育；
[0024](4)显微镜下观察消化细胞，待胞质回缩，细胞间隙增大，肉眼观察细胞呈沙状脱落，表明细胞消化适度，吸弃消化液，加入完全培养液终止消化；
[0025](5)用吸管将消化下来的细胞轻柔吹打成细胞悬液。
[0026]2.细胞计数和种板
[0027](I)用75%的酒精棉球将血球计数板及盖玻片擦拭干净，将盖玻片盖在血球计数槽上；
[0028](2)将待测细胞悬液吹打均匀，然后吸取少量悬液沿盖玻片边缘缓缓滴入，要保证盖玻片下充满悬液，注意不能出现气泡，也不能让悬液流入旁边凹槽中，静置3min后计数；
[0029](3)将血球计数板置于显微镜低倍镜下观察，计数4角4个大格(每个大格含有16个中格)的细胞总数，按下面公式计算细胞密度:
[0030]细胞悬液的细胞数/ml = (4个大格的细胞总数/4) X 14 ；
[0031]3.划痕实验
[0032](I)将细胞悬液分别注入孔2中，至细胞融合度约90%时进行实验；[0033](2)用无菌镊子夹住拿持部31轻轻将分隔条3取下，由于采用医用高分子粘合剂，无细胞毒性，去除分隔条3后孔2底部无残留，不影响细胞生长；
[0034](3)用PBS洗细胞3次，加入无血清培养基，显微镜下选取实验点并拍照记录，37°C,5% C02培养箱培养；
[0035](4)48小时后观察，通过栅格4判断细胞位置，从而判断不同组别迁移速度，并拍
昭.[0036](5)运用Image-Pro Plus6.0软件进行分析。计算相对划痕面积。各组划痕面积均以BEL7402细胞Oh划痕面积为标准取相对值，相对划痕面积=48h划痕面积/Oh划痕面积。