专利名称：兽用复方三氮脒和青蒿素制剂及其制备工艺的制作方法三氮脒又名贝尼尔，血虫净，70年代在我国实现工业规模生产。三氮脒及其注射剂已收载中华人民共和国兽药典。用于由锥虫引起的伊氏锥虫病和马媾疫。本产品作用机理是通过选择性阻断锥虫动基体的DNA合成和复制，并与核产生不可逆性结合，从而使锥虫的动基体消失，并不能分裂繁殖，达到治疗目的。但它的毒性大、安全范围较小，应用治疗量也会出现牲畜肌肉震颤，起卧不安，频频排尿，等不良反应。亟待寻求保留三氮脒疗效，又降低其毒性的组方。 药用青蒿素是从中药青蒿即菊科植物黄花蒿的叶和花蕾(Artemisia annua L.)中分离获得的。青蒿素的分子式为C15H22O5，分子量282. 34是一种新型倍半萜内酯，为白色针状结晶，熔点为156 157°C，[a]17D = +66.3° (C = I. 64氯仿)。易溶于氯仿、醋酸乙酯、石油醚、乙醇等有机溶媒中，几乎不溶于水。青蒿为菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L.)的全草,在我国作为抗痕药已有二千多年的历史，还有很多其它药用价值，如可用于消暑、杀菌、退热、治疗感冒等。近代研究表明青蒿素及衍生物能显著提高淋巴细胞转化率，增强抗体的免疫功能；对寄生虫类疾病、心血管系统疾病以及肿瘤等方面也有一定疗效。特别是对很多原虫独特的活性。青蒿素类药物低毒安全，具有增效协同作用，为这类药物作为兽用抗原虫药复方提供了前景。目前广泛使用的青蒿素衍生物蒿甲醚、二氢青蒿素和青蒿琥酯等，它们的价格数倍于青蒿素，寻求价格比青蒿素更低的资源对青蒿素类药物在牲畜中的应用十分迫切。我们在中国专利？ ？公开了青蒿素提取物制备的低成本工艺，并特别指出中药提取物制备合理也可实现低毒安全，不一定纯化为单体。鉴于青蒿素体内活性高于体外活性，可以使用青蒿素或青蒿素提取物，将降低用药成本。三氮脒原料药具有工业生产价值的工艺路线必须自产对-硝基苯腈，后者对人有剧毒，严重污染环境。寻求价格合理的三氮脒原料药的来源，受到使用者重视。国外在我国销售的三氮脒，价格远低于我国生产的三氮脒，但质量不能完全达到兽药级的要求。研制将市售三氮脒制成达到兽药级质量指标，具有市场价值。
本发明所要解决的问题是针对上述现有技术而提出一种吸收快，生物利用度高，用药价格比较低廉，不易产生耐药性的兽用复方三氮脒和青蒿素注射剂。本发明为解决上述提出的问题所采用解决方案为兽用复方三氮脒和青蒿素制齐U，包括有以下药物组分组成的粉针剂三氮脒10% 85%;青蒿素或青蒿素提取物5% 60%; β —环糊精2% 30%，均为质量百分比。按上述方案，所述的β —环糊精为羟丙基一 β —环糊精或磺丁基醚一 β —环糊ο本发明临床时即配即用，用粉针剂总量20 30倍(g/ml)的注射水溶解，注射剂规格为O. 5 4g/支，皮下或肌肉注射。本发明的兽用复方三氮脒和青蒿素制剂的制备工艺，包括有以下步骤I)三氮脒的精制将三氮脒与组合溶剂搅拌混合，加热O. 6 2h，过滤，冷却结晶，过滤，结晶，干燥即得精制的三氮脒，所述的组合溶剂为C1 C3的醇与无机弱碱的混合溶液，所述的C1 C3醇为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇，醇水溶液的质量百分比浓度为10 80%;2)青蒿素或青蒿素提取物水溶性包结配合物的制备； 将青蒿素提取物或青蒿素40 50°C溶于乙醇中，搅拌下滴入β -环糊精和蒸馏水的溶液中，反应2 4小时，过滤，滤液真空浓缩至干，得青蒿素-β -环糊精固体包结配合物；3)制剂的配置、混合和灭菌灌封称取精制的三氮脒和青蒿素-环糊精固体包结配合物，配置、混合和灌封灭菌制成复方三氮脒和青蒿素制剂，其中组分和质量百分比为三氮脒10% 85% ;青蒿素或青蒿素提取物5% 60% ；β 一环糊精2% 30%，均为质量百分比。按上述方案，所述的三氮脒与组合溶剂配比为I : 8 35(g/ml)。按上述方案，所述的青蒿素提取物的制备方法采用青蒿素的含量在O. 2%以上的黄花蒿的叶和花蕾为原料，通过多个提取罐逆流提取获得膏状青蒿素提取物，其青蒿素含量> 90%，质量计；提取罐采用提取温度50°C ;提取时间30 80min ;搅拌转速200 400转/分；提取溶剂为30 60°C石油醚或溶剂汽油；黄花蒿的叶和花蕾与提取溶剂的固液比I : 8 10。本发明的三氮脒采用组合溶剂精制，采用碳I 碳3醇和碱性水溶液，收率可达70 % 85 %，质量符合兽药典。本发明的三氮脒作为抗伊氏锥虫病、媾疫锥虫病和附红细胞体病，占主要份额,青蒿素，或青蒿素提取物对很多原虫的独特活性，通过增效协同作用，提高药效，降低毒性，提高用药安全。青蒿素、青蒿素提取物水溶性很低，可采用添加增溶剂或助溶剂加以提高，但有些助溶剂，如聚氧乙烯蓖麻油和乙醇，易引起过敏反应及毒副作用。本发明采用环糊精增溶剂与青蒿素、青蒿素提取物制成水溶性包合物(固体)，再与水溶性的三氮脒(固体)混合制成粉针剂，临床时与适量注射用水混合、溶解形成复方水注射剂供用，采用羟丙基一 β —环糊精、磺丁基醚一 β —环糊精为原料做增溶剂，安全性高，成本低。本发明的复方制剂主用于治疗畜家畜巴贝斯梨形虫病、泰勒梨形虫病、伊氏锥虫病、媾疫锥虫病及附红细胞体病。本发明的优势在于皮下或肌肉注射给药吸收快、生物利用度高；中药有效成分青蒿素和三氮脒联合使用，能发挥中药的协同增效，降低三氮脒毒副作用；青蒿素特别是青蒿素提取物价格比二氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯便宜得多；适合具有GMP条件的动物药厂注射车间生产，无需更新投入。
图I为青蒿素提取物及青蒿素获取流程框图；图2为多iip逆流提取连接不意图。


本发明的兽用复方三氮脒和青蒿素注射剂制备工艺包括有以下步骤I)青蒿素提取物或青蒿素的获取；一.青蒿素提取物的获取(参考文献DANIEL L. KLAYMAN et.al，ISOLATIONOFARTEMISININ(QINGHAOSU)FROM ARTEMISIA ANNUA GROWING IN THE UNITEDSTATES[J]，Journal of Natural Products, 1984,47 (4) :715-717 ;赵兵等，青蒿素提取条件研究[J]中草药，2000，31 (6) 421 ;韦国锋等，青蒿不同提取工艺的研究[J]，数理医药杂志2002，15(2) :170)采用湖北郧西地区产青蒿素的含量在0.2%以上的菊科植物黄花蒿的叶和花蕾(Artemisia annua L.)为原料，按图I流程框图获取青蒿素提取物和青蒿素，青蒿素提取物为膏状物，青蒿素> 90%,质量计。其中I 4，提取罐；5 9，溶剂或提取液转移泵；10 13，回流冷器提取罐I青蒿粉碎料被提取过三次，正进行第四次提取；提取罐2青蒿粉碎料被提取过二次，正进行第三次提取；提取罐3青蒿粉碎料被提取过一次，正进行第二次提取；提取罐4新鲜的青蒿粉碎料，正进行第一次提取。提取罐功能提取，加热，搅拌，过滤。提取罐操作参数罐容100升；装料量青蒿粉碎料IOkg左右；装料系数 0. 7 ;温度50°C ;提取时间30 80min ;搅拌转速200 400转/分；提取溶剂30 60°C石油醚或溶剂汽油；固液比I : 8 10 ;青蒿粉碎料60目 0. 25mm。2)市售二氣脉精品和粗品等精细化工广品的精制以达到兽药规格；市售精细化工产品级三氮脒与兽药级比较，杂质较多，水溶性较差，澄明度不合格。根据三氮脒溶于水，基本不溶于醇的特性。本发明采用组合溶剂精制，采用碳I 碳3醇和碱性水溶液。组合溶剂组成为蒸馏水；碳I 碳3醇包括甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇；碱性物为无机弱碱。无机弱碱微量，醇水溶液的质量百分比浓度10 80%。精细化工产品级三氮脒与组合溶剂配比I : 8 35 (g/ml)。将精细化工产品级三氮脒与上述组合溶剂搅拌混合，加热0. 6 2hr.，过滤，冷却结晶，过滤，干燥。3)青蒿素或青蒿素提取物水溶性包结配合物的制备；将步骤I)制得的青蒿素提取物或青蒿素50°C溶于乙醇中，搅拌下仔细滴入环糊精和蒸馏水的溶液中，青蒿素(折纯)比羟丙基-β-环糊精I : I 1.3(摩尔比)，反应2 4小时，过滤，滤液真空浓缩至干，得青蒿素-β -环糊精固体包结配合物，粉碎。 4)兽用复方三氮脒和青蒿素注射粉剂的配置、混合和灌封灭菌等。称取精制的三氮脒和青蒿素环糊精固体包结配合物粉末，按以下组成和质量百分组成三氮脒10% 85% ;青蒿素或青蒿素提取物5% 60% ； β 一环糊精2% 30%，均为质量百分比，配置、混合和灌封灭菌等制成规格为O. 5 4g/支的复方三氮脒和
青蒿素制剂。



本发明涉及一种兽用复方三氮脒和青蒿素制剂，包括有以下药物组分组成的粉针剂三氮脒10％～85％；青蒿素或青蒿素提取物5％～60％；β一环糊精2％～30％，均为质量百分比，包括有以下步骤1)三氮脒的精制；2)青蒿素或青蒿素提取物水溶性包结配合物的制备；3)制剂的配置、混合和灭菌灌封。本发明的优势在于皮下或肌肉注射给药吸收快、生物利用度高；中药有效成分青蒿素和三氮脒联合使用，能发挥中药的协同增效，降低三氮脒毒副作用；青蒿素特别是青蒿素提取物价格比二氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯便宜得多；适合具有GMP条件的动物药厂注射车间生产，无需更新投入。