专利名称：一种富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法桑黄，来源于真菌类担子菌纲多孔菌目多孔菌科桑黄的子实体，拉丁学名 phellinus igniarius(L. ex Fr)Quel.又名火木层孔菌、猢狲眼、桑耳、针层孔菌。生于杨、 柳、桦、栎、杜醇、四照花等阔叶树干上，造成心材白腐，多年生；利五脏，软坚，排毒，止血，活 血，和胃止泻。主治淋病，崩漏带下，症瘕积聚，癖饮，脾虚泄泻。主要成分含有葡萄糖、半乳 糖、甘露糖等多糖类，木糖氧化酶、过氧化氢酶、酯酶，麦芽糖酶等多种酶及铁、锌、钙、镁等 十多种微量元素。近年来，人们又从桑黄中提出7个黄酮及2个香豆素类化合物，让桑黄这 味中药越来越重要。桑黄总黄酮能够提高人体的免疫力，减轻抗癌剂的副作用，所以可用来辅助肿瘤 病人的放疗和化疗，另外，桑黄对女性月经不调等妇科疾病也有疗效。近年来，人们发现天 然植物桑黄中含有大量的桑黄总黄酮，由于其原料桑黄可以栽植，来源广泛，从中提取桑黄 总黄酮已取得了可喜进展。名称为“一种桑黄黄酮及其制备方法和用途”的专利申请中便 公开了将桑黄经乙醇提取桑黄总黄酮工艺流程。上述专利文献中的桑黄总黄酮提取工艺主 要是经过用乙醇提取等步骤提取而成，其分离纯化效果远远不如间歇蒸馏-大孔吸附树脂 耦合法处理后在进行硅胶柱层析分离的效果。
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种 利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法，其 步骤如下(1)将干桑黄粉碎后用乙醇加热回流提取；(2)将经步骤(1)处理的桑黄提取液抽滤，将滤液减压回收乙醇，得初提物；(3)所获初提物用酸调其PH值为2. 0 2. 5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压 浓缩得桑黄总黄酮粗提物；(4)将所得桑黄总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集桑 黄总黄酮各阶段洗脱液；(6)将桑黄总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得桑黄总黄酮半成品，其含量为 35%以上；(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液；(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得桑黄总黄 酮，其含量在90%以上。所述的步骤(1)中，桑黄粉碎后过30 80目筛在进行乙醇提取。所述的步骤(1)中，乙醇浓度为80%。所述的步骤(1)中，提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取 法中的一种或一种以上。所述的步骤(1)中，加入乙醇的体积为桦树皮粉碎体积的5 10倍。所述的步骤中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、 S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动 态吸附。所述的步骤(5)中所述的洗脱为用40-80%的乙醇进行洗脱。所述的在步骤( 和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。所述的步骤(7)中所采取的丙酮，甲醇的体积比为1 7 1。本发明应用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法分离纯化桑黄总黄酮，对桑黄总黄酮 的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成 本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35%以上的桑黄总黄酮半成品和含量 90%以上的桑黄总黄酮终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力 强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐 类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附桑黄总黄 酮，吸附快、解析也快，吸附容量较大。品 ；(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液；(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 92%桑黄总黄酮。实施案例2 —种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄 酮的方法，其步骤如下(1)将干桑黄粉碎后过30目筛，用桑黄粉体积8倍的乙醇回流提取3次，每次池；(2)将经步骤(1)处理的桑黄提取液抽滤，将滤液减压回收乙醇得初提物；(3)所获初提物用酸调其PH值为2. 3，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压浓缩得 桑黄总黄酮粗提物；(4)将所得桑黄总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津 南开大学所生产的D4006型树脂；(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱 法跟踪检测，收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液；(6)将桑黄总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量36%桑黄总黄酮半成品。(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集桑黄 总黄酮各阶段洗脱液；(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 94%桑黄总黄酮。实施案例3 —种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄 酮的方法，其步骤如下(1)将干桑黄粉碎后过80目筛，用桑黄粉体积10倍的乙醇回流提取3次，每次 2. 5h ；(2)将经步骤(1)处理的桦树皮提取液抽滤，将滤液减压回收乙醇得初提物；(3)所获初提物用酸调其PH值为2. 5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压浓缩得 桑黄总黄酮粗提物；(4)将所得桑黄总黄酮粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔 树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；(5)用40^^50^^60^^70^^80%的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行 梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液；(6)将桑黄总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量38%桑黄总黄酮半成品。(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集桑黄 总黄酮洗脱液；(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 95%桑黄总黄酮。本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法。其特点是应用大孔吸附技术分离纯化桑黄总黄酮，对桑黄总黄酮的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的桑黄总黄酮半成品和含量90％以上的桑黄总黄酮终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附桑黄总黄酮，吸附快、解析也快，吸附容量较大。