一种从板栗壳中提取纯化抑制α-葡萄糖苷酶活性成分的方法[0002]板栗壳为壳斗科植物栗(Castanea mollissima Blume)的壳斗，为落叶乔木，一般高15~20米，适宜栽种于山地向阳山坡的沙壤土上，我国南北各地广泛栽培。果实壳斗球形，上有针刺，刺上密被紧贴柔毛，成熟时开裂而散出坚果。[0003]板栗壳的药理作用主要有抗菌、抗炎、抗凝血、治疗慢性支气管炎和治疗菌痢等，现在对板栗壳的研究主要集中在色素和生物活性物质的提取等方面。板栗壳中含有多酚、有机酸、多糖(或甙类)、黄酮(或皂甙类)、植物留醇(或三萜)、内酯、香豆素(或其甙类)和鞣质等化学成份。板栗壳中的棕色素属于黄酮类化合物，具有很好的抑菌效果；从板栗壳中提取的多酚具有较高的抗氧化能力(李金凤等，板栗壳中多酚的提取及体外抗氧化性研究，林产化学与工业，2010，30 (I): 54-58)。[0004]α -葡萄糖苷酶与糖尿病和肥胖症紧密相关，抑制α -葡萄糖苷酶能有效地降低糖尿病的发病率。α-葡萄糖苷酶抑制剂通过竞争性抑制小肠粘膜上皮细胞的α-葡萄糖苷酶，延缓肠道对碳水化合物的吸收，减缓餐后血糖升高从而达到对糖尿病的治疗。目前已研发出以α-葡萄糖苷酶抑制剂为基础的药物如Acarbose和Miglitol等。多种中药提取物也表现出对α-葡萄糖苷酶有明显的抑制作用，有研究指出黄酮类、生物碱类、萜类、酚类等物质能有效地抑制α -葡萄糖苷酶的活性，但是至今尚未发现有报道称从板栗壳中分离出具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质。[0005]板栗壳属于食品加工中的废弃物，从中提取出具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的化学物质，可以用于治疗糖尿病和肥胖症，这对板栗壳的进一步加工利用和相关药物和功能性食品的开发，具有一定的指导意义。
[0006]本发明的目的是提供一种从板栗壳中提取纯化抑制α -葡萄糖苷酶活性成分的方法，首先将板栗壳洗净、烘干、粉碎，用75% (v/v)乙醇回流提取、减压浓缩、加入水饱和正丁醇溶液萃取，最后用大孔树脂AB-8进行吸附洗脱，得到具有抑制α -葡萄糖苷酶活性的多酚提取物。具体步骤如下:[0007](I)将板栗壳洗净、烘干、粉碎，按照料液比1: 10(w/v)加入75% (v/v)乙醇，沸腾回流提取2~3次，每次2~4小时；
[0008](2)合并板栗壳提取液，50°C减压浓缩2~4小时，得到浓缩浸膏；
[0009] (3)将浓缩浸膏用水调配成10mg/mL的溶液,然后用4倍体积的水饱和正丁醇萃取3~5次，每次2~4小时；[0010](4)合并水饱和正丁醇萃取液，于70~80°C减压浓缩2~4小时，得到浓缩浸膏，再于-70~_90°C冷冻干燥10~24小时，得到粉状提取物；
[0011] (5)将粉状提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔树脂AB-8进行吸附，用60%(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脱，收集洗脱液；
[0012](6)测定洗脱液对α -葡萄糖苷酶的抑制率和多酚含量，收集酶活抑制率较高的洗脱液，即可得具有抑制该酶活性的板栗壳组分。



[0013]图1是板栗壳提取物大孔吸附树脂ΑΒ-8洗脱液中的多酚含量和对α -葡萄糖苷酶活性抑制率曲线。

[0014]下面的实施例将对本发明作进一步的解释，但是本发明并不仅仅局限于这些实施例，这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。
[0015]实施例1:
[0016](I)将100g板栗壳洗净、烘干、粉碎，按照料液比1: 10(w/v)加入75% (v/v)乙醇沸腾回流2次，每次2小时；
[0017](2)合并板栗壳提取液，50°C下减压浓缩2小时，得到浓缩浸膏；
[0018](3)将浓缩浸膏用水调配成10mg/mL的溶液，然后用4倍体积的水饱和正丁醇萃取3次,每次2小时；
[0019](4)合并水饱和正丁醇萃取液，于70°C减压浓缩2小时，得到浓缩浸膏，再于_70°C冷冻干燥10小时，得到0.5g粉状提取物；
[0020](5)将粉状提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔树脂AB-8进行吸附，用60 %(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脱，收集洗脱液；
[0021](6)测定不同洗脱管中洗脱液的多酚含量和对α -葡萄糖苷酶的抑制率(图1)，多酚洗脱峰和抑制率的峰值重叠性较好，说明多酚是有效抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质，收集酶活抑制率较高的、洗脱体积1.0-1.5BV处的洗脱液，即可得具有抑制该酶活性的板栗壳组分。
[0022]实施例2:
[0023](I)将IOkg板栗壳洗净、烘干、粉碎，按照料液比I: 10(w/v)加入75% (v/v)乙醇沸腾回流3次，每次4小时；
[0024](2)合并板栗壳提取液，50°C下减压浓缩4小时，得到浓缩浸膏；
[0025](3)将浓缩浸膏用水调配成10mg/mL的溶液，然后用4倍体积的水饱和正丁醇萃取5次,每次4小时；
[0026](4)合并水饱和正丁醇萃取液，于80°C减压浓缩4小时，得到浓缩浸膏，再于_90°C冷冻干燥24小时，得到50g粉状提取物；
[0027](5)将粉状提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔树脂AB-8进行吸附，用60%(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脱，收集洗脱液；
[0028](6)测定洗脱液对α -葡萄糖苷酶的抑制率和多酚含量，收集酶活抑制率较高的洗脱液，即可得具有抑制该酶活性的板栗壳组分。
[0029]实施例3:
[0030](I)将IOOkg板栗壳洗净、烘干、粉碎，按照料液比I: 10 (w/v)加入75% (v/v)乙醇沸腾回流2次，每次3小时；
[0031](2)合并板栗壳提取液，50°C下减压浓缩3小时，得到浓缩浸膏；[0032](3)将浓缩浸膏用水调配成10mg/mL的溶液，然后用4倍体积的水饱和正丁醇萃取4次，每次3小时；
[0033](4)合并水饱和正丁醇萃取液，于75°C减压浓缩3小时，得到浓缩浸膏，再于_80°C冷冻干燥12小时，得到450g粉状提取物；
[0034](5)将粉状提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔树脂AB_8进行吸附，用60 %(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脱，收集洗脱液；
[0035](6)测定洗脱液对α -葡萄糖苷酶的抑制率和多酚含量，收集酶活抑制率较高的洗脱液，即可得具有抑制该酶活性的板栗壳组分。