专利名称：一种燕麦肽的酶法提取方法燕麦，禾本科燕麦属，一年生或多年生草本植物。燕麦营养价值丰富而全面，其蛋白质、脂肪、维生素E、膳食纤维以及钙、镁、铁、磷等矿物元素含量均高于其它谷类作物，具有降血脂、降低胆固醇、降血压、降血糖和抗氧化性等多种生物活性功能。血管紧张素转化酶(Angiotensin-I-convertingenenzyme, ACE,EC 3. 4. 15. I)是一种含锌二肽羧酶，广泛分布于哺乳动物组织中并对其血压调节起着关键性的作用。ACE在人体肾素-血管紧张素系统(Renin angiotensin system, RAS)和激肽-激肽生成酶系统 (Kallikerni-kinin system,KKS)中，对血压调节起着重要的作用。因此通过抑制体内ACE 活性来达到治疗高血压的目的是一条非常重要的途径。近年来，一些具有特定生理活性的短肽，如ACE抑制肽、阿片肽、免疫调节肽等引起了人们的极大关注，这些肽具有安全性高、无副作用、来源广泛等优点。植物蛋白以其不可替代的优点成为人们研究活性肽的主要来源。燕麦降压肽即是从燕麦蛋白中得到的一种活性多肽。燕麦麸皮是燕麦加工过程中的副产物，其中蛋白质含量很高，目前国内外对燕麦麸皮的研究主要集中在膳食纤维方面，对燕麦麸皮蛋白的利用很少。
本发明的目的是提供一种燕麦肽的酶法提取方法及其应用。本发明的技术方案所提供的燕麦肽的酶法提取方法，以燕麦麸皮为原料采用酶法提取燕麦肽，包括如下步骤(1)预处理将燕麦麸皮粉碎过60-100目筛,燕麦麸皮与水混合,燕麦麸皮水的重量比为I : 10-1 20，调节pH为8. 0-9. 5，在温度为50-60°C条件下，进行搅拌预处理，预处理时间为30-50min ；(2)酶处理在经过步骤(I)预处理后的液体中加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的添加量为20-50mL/kg燕麦麸皮，在45-55 °C下搅拌处理2_5小时；然后，加入风味蛋白酶，风味蛋白酶的添加量为50-70mL/Kg燕麦麸皮，在50_60°C下搅拌处理1-2小时；(3)纯化将步骤(2)酶处理后的液体离心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶和真菌淀粉酶反应2-4小时，β -葡聚糖酶的用量为30-50mL/Kg燕麦麸皮，真菌淀粉酶的用量为60-80ml/Kg燕麦麸皮，过滤得到澄清液体；将所述澄清液体加入到以CBE313ADS17大孔吸附树脂为填料的吸附柱中，然后用去离子水冲洗至洗脱液中没有糖分和盐分，最后用体积浓度60%-75%乙醇溶液洗脱，得到含燕麦肽的溶液；3(4)制干粉将含燕麦肽溶液旋转蒸发浓缩至一半体积，喷射干燥得到燕麦肽干粉。所述步骤(2)中，所述碱性蛋白酶的添加量优选为40mL/Kg燕麦麸皮；所述风味蛋白酶的添加量优选为60mL/Kg燕麦麸皮。所述碱性蛋白酶和所述风味蛋白酶为诺维信公司产品。所述步骤(3)中，所述过滤得到澄清液体，过滤的滤径为O. 5-0. 8 μ m。所述步骤(3)中，所述澄清液体优选按照CBE313ADS17大孔吸附树脂的2倍体积加入到吸附柱中；所述乙醇溶液洗脱的体积优选为吸附柱体积的2倍。用所述方法制备的燕麦肽的应用，其在制备抑制ACE活性和降血压的食品或药物中的应用。本发明的有益效果本发明的方法将燕麦麸皮用酶法降解燕麦麸皮蛋白成为燕麦肽，通过板框过滤、树脂吸附等手段将其分离提纯，所得燕麦肽89%的分子量在1500Da以下，具有抑制ACE的活性，可以广泛应用于降压保健食品或制备降压药物等领域。

具体步骤如下
I、燕麦麸皮预处理
燕麦麸皮粉碎至60-100目，凯氏定氮法测定其中蛋白含量可达25%。将80g步骤I所述60-100目的燕麦麸皮与去离子水按重量比I : 10混合，调pH值到9.0，在55°C水浴中搅拌处理时间为40min。2、酶处理
预处理后测定液体pH值至8. 0-8. 5，加入碱性蛋白酶(诺维信Alcalase2. 4L)，添加量为20mL/kg燕麦麸皮。在温度55°C条件下，继续搅拌2小时；然后加入风味蛋白酶(诺维信FlavourzymelOOOL)，添加量为50mL/Kg燕麦麸皮，在55°C继续搅拌2小时。3、将步骤2酶解后的液体在4000rpm下离心10分钟取上清液，在上清液中加入 β -葡聚糖酶(购自湖南尤特尔生化，添加量为50mL/Kg燕麦麸皮)，真菌淀粉酶(购自江苏博立生物制品有限公司，添加量为80mL/Kg燕麦麸皮)反应3小时，利用板框过滤机(滤径为O. 5-0. 8 μ m)过滤，加入硅藻土助滤，得到棕色澄清液体。4、将步骤3得到的澄清液体按照2 I倍体积加入到装有CBE313ADS17吸附树脂的吸附柱中，用去离子水冲洗至洗脱液没有糖分和盐分。再用75% (体积百分含量)的乙醇水溶液洗脱，接收洗脱液体积为柱体积的2倍。旋转蒸发浓缩至一半体积，喷射干燥得 IOg燕麦肽。二、燕麦肽的分子量分析
将步骤一获得的燕麦肽进行相对分子量分布测定，采用HPLC法，测定色谱条件安捷仑高效液相色谱仪1100 ;色谱柱TSKgel2000 SffXL体积排阻色谱柱(300mmX7. 8mm);流动相:乙腈/冰醋酸/三氟乙酸:45/55/0. I (v/v/v);检测UV 220nm ;流速:0. 5mL/min ;柱温30°C。结果表明95%的多肽分子量在1500Da以下，是较好的ACE抑制肽源。实施例2、燕麦肽的制备一、燕麦肽的制备
提取燕麦肽的工艺流程具体步骤如下
I、燕麦麸皮处理
为了获得更多燕麦肽，选用60-100目燕麦麸皮，凯氏定氮法测定其中蛋白含量可达
25%。将50Kg所述60-100目的燕麦麸皮与去离子水按重量比I : 15混合，调pH值到
8.5，在55°C水浴中搅拌处理时间为30min。2、酶处理
预处理后测定液体pH值至8. 0-8. 5，加入碱性蛋白酶(诺维信Alcalase2. 4L)，添加量为20-50mL/kg燕麦麸皮。在温度55°C条件下，继续搅拌3小时；然后加入风味蛋白酶(诺维信FlavourzymelOOOL)，添加量为50_70mL/Kg燕麦麸皮，在55°C继续搅拌I小时。3、将步骤2酶解后的液体在4000rpm下离心10分钟取上清液，在上清液中加入 β -葡聚糖酶(购自湖南尤特尔生化，添加量为30-50mL/Kg燕麦麸皮)，真菌淀粉酶(购自江苏博立生物制品有限公司，添加量为60-80mL/Kg燕麦麸皮)反应4小时，利用板框过滤机(滤径为O. 5-0. 8 μ m)过滤，加入硅藻土助滤，得到棕色澄清液体。4、将步骤3得到的澄清液体按照2 I倍体积加入到装有CBE313ADS17吸附树脂的吸附柱中，用去离子水冲洗至洗脱液没有糖分和盐分。再用75% (体积百分含量)的乙醇水溶液洗脱，接收洗脱液体积为柱体积的2倍。旋转蒸发浓缩至一半体积，喷射干燥得
6.5Kg燕麦肽。二、燕麦肽的分子量分析
将步骤一获得的燕麦肽进行相对分子量分布测定，采用HPLC法，测定色谱条件安捷仑高效液相色谱仪1100 ;色谱柱TSKgel2000 SffXL体积排阻色谱柱(300mmX7. 8mm);流动相:乙腈/冰醋酸/三氟乙酸:45/55/0. I (v/v/v);检测UV 220nm ;流速:0. 5mL/min ;柱温30°C。结果表明88%的多肽分子量在1500Da以下，是较好的ACE抑制肽源。


本发明公开了一种燕麦肽的酶法提取方法，属于酶法提取燕麦肽技术领域。该燕麦肽的制备方法，包括如下步骤(1)将燕麦麸皮与水混合，调节pH为8.0-9.5，在温度为50-60℃条件下搅拌预处理；(2)在预处理后的液体中加入碱性蛋白酶，在45-55℃下搅拌处理2-5小时；然后，加入风味蛋白酶，在50-60℃下搅拌处理1-2小时；(3)将酶解后的液体离心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶和真菌淀粉酶反应2-4小时，过滤得到澄清液体；将澄清液体用大孔吸附树脂吸附纯化得到含燕麦肽的溶液。该燕麦肽具有抑制ACE酶的活性，可以广泛应用于降压保健食品等领域。本发明方法操作简单，具有较高的纯度和得率。