专利名称：固态酶配制剂及其制备方法通过现有技术获知了许多固态酶组合物，它们通过，例如喷雾干燥液体酶溶液制备。进一歩公知的是，在此类喷雾干燥过程中酶的稳定性可通过添加稳定盐，如例如硫酸镁 而显著提高。因此，按照此类方式生产的固态酶组合物即使在喷雾干燥后还具有较高的酶活性百分比。例如，在EP-A-O 758 018中描述了储存稳定且加工稳定的固态酶组合物，它们通过干燥包含至少ー种酶和水溶性无机盐的溶液获得。该文献所述的酶组合物优选用作固态动物饲料组合物的添加剂。为了生产此类添加酶的动物饲料组合物，期望酶尽可能均匀地分布在最終的饲料制剂中。由于干的酶制剂中包含高浓度的酶，因此基于饲料组合物的总重量，远远低于I重量％的添加量通常完全足以为饲料组合物提供期望的酶活性。但是，要求的酶添加量越低，在最终饲料制剂中均匀分布酶活性越难以实现。当然，在生产要添加的高度浓缩固态酶组合物在其中尽可能均匀分布的食品和食品添加物时也观察到同样的困难。因此，本发明的目的是寻找一种能够使基本仅包含酶和稳定载体的高度浓缩固态酶组合物形成下述形态的方法确保在食品和饲料中的剂量均匀且可再现。同时，本发明还应该保证使用的配制剂因此具有良好的加工性能，例如产生灰尘的趋势降低、良好的流变性能和较窄的粒度分布。发明概述所述目的已经令人惊讶地通过提供一种固态酶配制剂实现，其中所述的固态酶制剂通过混合盐稳定酶的微粒状组合物、微粒状载体和疏水性液体获得。尤其冷人惊奇的是，本发明生产的固态配制剂特别易于处理，原因在于它们显示出高度的分离稳定性、极其低的起尘倾向，以及无论是否添加疏水性液体都具有优异的流变性能。图I以流程图为基础显示了本发明的一种优选实施方案，特别是固态木聚糖酶配制剂的生产。为此，将含木聚糖酶的液态浓缩物与硫酸镁混合，在喷雾设施中干燥，得到包含木聚糖酶的稳定化粉末，并且可同时获得附聚的颗粒，例如粒径约50-250 u m的颗粒。下一歩，将含木聚糖酶的干燥粉末与固态的有机载体混合并且，同时或然后，用豆油喷雾。这样就生产出具有低起尘倾向和高分离稳定性的含木聚糖酶的配制剂。图2说明了本发明优选的其它固态酶配制剂的生产，依照不同的实施方案，所述配制剂包含木聚糖酶和葡聚糖酶混合物。依照方法方案(a)，该方法由葡聚糖酶与木聚糖酶的液态混合浓缩物开始，而在方法方案(b)中，该方法首先由液态葡聚糖酶浓缩物开始。依照方法方案(a)，葡聚糖酶与木聚糖酶的混合浓缩物按照上文图I所述干燥并且与有机载体混合并且用豆油喷雾。与之不同，依照方法方案(b)，首先处理液态的葡聚糖酶浓缩物以按照与上文关于木聚糖酶浓缩物相似的方式生成含葡聚糖酶的粉末。将该粉末与依照图I制备的木聚糖酶粉末混合，同时与有机载体混合并且用豆油喷雾，同样生产出包含木聚糖酶和葡聚糖酶的酶配制剂。所得的含葡聚糖酶和木聚糖酶的固态酶配制剂同样以非常低的起尘倾向和高分离稳定性为特征。发明详述a)本发明的优选实施方案本发明涉及固态酶配制剂，其包含下述组分的混合物a)至少ー种酶和至少ー种ー价或ニ价金属阳离子的有机或无机盐的至少ー种微粒状酶组合物，b)至少ー种生理 上相容的微粒状无机或有机载体和c)至少ー种具有粘合性能的疏水性液体，特别是熔点在-60° C至30° C范围内，尤其在-50至0° C范围内，例如-40至-5° C或-30至-10° C的疏水性液体。本发明尤其涉及包含下述组分的酶配制剂a) ー种微粒状酶组合物，其包含一种与至少ー种一价或ニ价阳离子的有机或无机盐混合的酶；或b) ー种微粒状酶组合物，其包含至少两种彼此不同且与至少ー种一价或ニ价阳离子的有机或无机盐混合的酶；或c)至少两种彼此不同的微粒状酶组合物，所述两种组合物的差别在于它们包含至少ー种不同的酶，每种组合物中的酶以与至少ー种一价或ニ价阳离子的有机或无机盐混合的形式存在。特别地，本发明涉及酶配制剂，其中载体与酶组合物的中值粒径比在约0. 125-8范围内，特别是0. 25-4或0. 5-2或1-1. 5。所用酶组合物与所用载体的中值粒度应该在约50-500 y m范围内，或150-350 u m。有利地，酶组合物与载体的混合比设定在约1:1000-1:5重量份，或1:500-1:10或1:100-1:20范围内。疏水性液体的比例基于所述酶配制剂总重量为0. 1-5重量％、0. 2-2重量％、0. 3-1. 5 重量 ％ 或 0. 3-0. 7 重量 ％。在依照本发明使用的酶组合物中，盐的比例基于所述酶组合物总重量为1-30重量％、5-25重量％或10-20重量％。所述酶组合物中酶蛋白质的百分比为约0. 01-99重量％，如例如，0. 01-80重量％、10-80重量％、20-75重量％或30-60重量％。除至少ー种酶和至少ー种盐之外，所述酶组合物还可以包含其它的组分。这些组分可用作粘合剂(例如聚合物或糖)、填料(例如石灰、壤土、碳水化合物、糖、淀粉)、染料或其它的稳定剂。此类其它组分本身可由现有技术获知并且是本领域熟练技术人员公知的。本发明酶混合物的残余水分在5-30重量％范围内，如例如，5-20重量％，或7_16重量％。本发明不限于任何规定的酶。但是，具体地，适合使用的酶选自水解酶(EC3.)、特别是糖苷酶(EC3. 2. I)、肽酶(EC3. 4)，尤其是，木聚糖酶、葡聚糖酶(半纤维素酶)、纤维素酶、蛋白酶、角蛋白酶、淀粉酶、肽酶和它们的混合物。在优选的酶配制剂中，所述酶选自内-1，4-3 -木聚糖酶(EC3. 2. I. 8)、内-I, 4-3 -葡聚糖酶(EC3. 2. I. 4)和它们的混合物。本发明还涉及进一歩具有至少ー种下述性能的酶配制剂 a)重量分析测定的粉尘值(依照实施例描述的方法)在0-0. 5、或0. 001-0. 3、或0. 01-0. 2重量％范围内；b)堆积密度在 200-700、300-500 或 350_450g/l 范围内(依照 DIN ENIS060 的规定限定)；c)流动性(通过Schulze环剪切试验測定)具有3_30、5_15或6_10范围内的ffc值。本发明特别涉及酶配制剂，该配制剂包含下述组分的混合物a)至少ー种酶组合物，其中酶组分选自按照上文所述的木聚糖酶、葡聚糖酶和它们的混合物，所述酶组分为与硫酸镁混合的，其中硫酸镁的比例基于所述干燥酶组合物总重量为约5-25重量％，或15-20重量％ ；b)至少ー种小麦粗粉麸(Weizengriepkleietriiger)载体，酶组合物与载体的混合比在1:5-1:500或1:10-1:100范围内；c)植物油，比例基于所述酶配制剂总重量为约0. 1-1重量％,或0. 3-0. 6重量％,酶组合物和载体的中值粒度在约100-500、或150-350 iim，并且木聚糖酶的比例为约3000-30000、或5200-18000、或5400-9000TXU/g配制剂，葡聚糖酶的比例为约2000-20000、或2200-10000TCU/g配制剂。木聚糖酶的百分比为约1_20重量％，优选2_10重量％，尤其2. 5-5重量％，并且葡聚糖酶的重量百分比为约0. 01-10重量％，优选0. 1-6重量％，尤其0. 2-2重量％。特别优选包含上述类型酶组合物并且其中的酶组分为木聚糖酶的配制剂。特别优选包含上述类型酶组合物并且其中的酶组分为葡聚糖酶的配制剂。特别优选包含上述类型酶组合物并且其中的酶组分为木聚糖酶与葡聚糖酶的混合物的配制剂。特别优选包含两种不同酶的酶组合物并且其中一种酶组分为葡聚糖酶、另ー种为木聚糖酶的配制剂。本发明还涉及ー种生产根据上述定义的固态酶配制剂的方法，其中将至少ー种包含至少ー种酶和至少ー种ー价或ニ价金属阳离子的有机或无机盐的微粒状酶组合物与生理上相容的微粒状无机或有机载体混合，并且将该混合物用疏水性液体(依照上述定义具有的熔点在-60 30 ° C范围内)湿润。特别地，本发明涉及这样的方法，其中a)提供ー种包含ー种酶、特别是木聚糖酶或葡聚糖酶的微粒状酶组合物，所述酶为与至少ー种ー价或ニ价阳离子的有机或无机盐的混合物；或b)提供ー种包含至少两种彼此不同的酶的微粒状酶组合物，所述酶选自木聚糖酶和葡聚糖酶，且以与至少ー种一价或ニ价阳离子的有机或无机盐的混合物提供；或
c)提供至少两种彼此不同的微粒状酶组合物，所述两种组合物的不同之处在于它们包含至少ー种不同的酶，并且每种组合物中的酶以与至少ー种一价或ニ价阳离子的有机或无机盐的混合物存在。优选的方法是那些通过将其中引入了至少ー种一价或ニ价阳离子的有机或无机盐的含酶液体喷雾干燥或喷雾干燥并附聚来获得所述酶组合物的方法。另外，优选的方法是这样的方法，通过将其中引入了至少ー种一价或ニ价阳离子的有机或无机盐的至少两种包含不同酶的液体喷雾干燥或喷雾干燥并附聚来获得至少两种彼此不同的酶的酶组合物，并且a)将所述至少两种酶组合物各自与微粒状无机或有机载体混合，或b)将微粒状无机或有机载体与所述至少两种酶组合物混合；并且将依照方案a)或方案b)制备的混合物用疏水性液体湿润。
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所用的含酶液体包含至少ー种木聚糖酶、至少一种葡聚糖酶或它们的混合物。具体地，在所用酶组合物中盐的比例基于所述酶组合物总重量为1-30重量％，或约10-25重量％，或15-20重量％。另外，特别使用这样的载体和酶组合物，其中中值粒径之比在约0. 125-8范围内，优选 0. 25-4，或 0. 5-2，或 1-1. 5。所用酶组合物和所用载体的中值粒度为约50-500 ii m，或150-350 U m。酶组合物与载体的混合比在约1:1000-1:5，或1:500-1:10，或1:100-1:20范围内。根据颗粒的尺寸，中值粒度可通过筛分分析(例如使用振动筛机，来自Retsch的Vibro VS1000型)或通过激光衍射(例如使用来自Malvern的Mastersizer)确定。疏水性液体的比例基于所述酶配制剂总重量为0. 1-5重量％,或0. 2-2重量％、
0.3-1. 5 重量 ％ 或 0. 3-0. 7 重量 ％。本发明特别涉及一种制备包含至少ー种选自木聚糖酶、葡聚糖酶和其混合物的酶的固态酶配制剂的方法，其中a)将至少一种含酶液体喷雾干燥或喷雾干燥并附聚以得到至少ー种酶组合物，其中的酶组分选自木聚糖酶、葡聚糖酶和它们的混合物，并且该酶组分以与硫酸镁的混合物形式存在于所述液体中，硫酸镁的比例基于干燥酶组合物总重量为约10-25重量％ ；b)将所获得的酶组合物与微粒状无机或有机载体混合；并且c)用熔点在-60和30° C之间的疏水性液体湿润所述的酶/载体混合物。优选的方法方案包括a)提供ー种包含至少ー种与硫酸镁混合的木聚糖酶的微粒状酶组合物；或b)提供ー种包含至少ー种与硫酸镁混合的葡聚糖酶的微粒状酶组合物；或c)提供ー种包含与硫酸镁混合的至少ー种木聚糖酶和至少ー种葡聚糖酶的微粒状酶组合物；或d)提供至少两种彼此不同的微粒状酶组合物，其中一种组合物包含至少ー种木聚糖酶，其他组合物包含至少ー种葡聚糖酶，并且每种组合物中的酶与硫酸镁的混合物存在。在本发明方法的特别实施方案中，将酶组合物与至少ー种小麦粗粉麸载体混合，酶组合物与载体的混合比例为1:5-1:500，或1:10-1:100。混合期间，特别加入植物油，添加比例基于酶配制剂最终重量为约0. 1-1重量％，或0. 3-0. 6重量％。所用酶组合物和所用载体的中值粒度特别为约100-500 i! m，或150-40 u m,并且木聚糖酶的比例为约5000-30000、或5200-10000、或5400-9000TXU/g配制剂和/或葡聚糖酶的比例为约2000-10000、或2200-6000TCU/g配制剂。本发明还涉及根据上述定义的干燥酶配制剂用于生产食品、食品添加物或动物饲料的用途。本发明还涉及包含根据上述定义的干燥酶配制剂的动物饲料、食品或食品添加物；特别是以约0.001-1重量％的比例包含本发明酶配制剂的动物饲料。b)酶根据本发明使用的酶不受任何限制并且可源于天然或重组酶。所述酶可以是来自植物、真菌、细菌或酵母的酶。优选源自微生物的酶，例如源自真菌、细菌或酵母。酶可通过公知技术由各自微生物获得，其中所述的公知技术一般包括使产酶微生物在合适的营养培养基中发酵，然后通过标准技术从发酵培养基中分离出酶或酶浓缩物。 如果需要的话，为调节酶溶液或酶浓缩物的pH，可将常规物质如缓冲剂、碱、酸加入配制剂；优选的pH为3. 5-7，特别优选3. 5-5，尤其是4-4. 5。另外，可以使用酶的突变体或显示高热稳定性的酶，如例如W095/2997、97/00020、97/20920,97/22691,98/28410 或 03/062409 中所建议。但是，根据本发明优选使用具有木聚糖酶活性的多肽、葡聚糖酶活性的多肽和它们的混合物作为酶。bl)具有木聚糖酶活性的多肽这样的酶有EC 3. 2. I. 8类的酶，其法定名称为内-1,4-0-木聚糖酶。系统名称是1，4-0 -D-木聚糖木聚糖水解酶。米用的其他名称为内-(1-4)-0 _木聚糖酶；(1-4)-0 -木聚糖4-木聚糖酶；内-1，4-木聚糖酶；木聚糖酶；& -I, 4-木聚糖酶；内-1，4-木聚糖酶；内-P -1，4-木聚糖酶；内-1，4- & -D-木聚糖酶；1，4- P -木聚糖木聚糖水解酶木聚糖酶；3-1，4-木聚糖木聚糖水解酶；内-1,4-0-木聚糖酶；3-D-木聚糖酶。所述酶催化木聚糖中1，4-P-D-木糖苷键的内水解。木聚糖酶可源自例如细菌，如例如梭菌属(Clostridium)、链霉菌属(Streptomyces)、类芽抱杆菌属(Paenibacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、栖热袍菌属(Thermotoga)、芽孢杆菌属(Bacillus),和，例如，源自下列菌株的木聚糖酶Bacillus halodurans、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、Bacillus agaradhaerens、环状芽抱杆菌(Bacillus circulans)、多粘芽抱杆菌(Paenibacillus polymyxa)、芽抱杆菌属(Bacillus sp.，)、嗜热脂肪芽抱杆菌(Bacillusstearothermophilus)或枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)。真菌木聚糖酶源自例如酵母和丝状真菌，如例如源自下列属曲霉菌属(Aspergillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、裸孢壳属(Emericella)、链孢霉属(Fusarium)、顶襄壳属(Gaeumannomyces)、腐放鄭属(Humicolaノ、香燕ノ禹(Lentinula)、稻痕病菌(Magnaporthe)、新丽鞭毛菌(Neocallimastix)、诺卡土壤菌属(Nocardiopsis)、厌氧真菌(Orpinomyces)、拟青霉(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母菌属(Saccharomyces)、裂裙菌属(Schizophyllum)、踩节菌属(Talaromyces)、嗜热真菌属(Thermomyces)、木霉属(Trichoderma),如例如,Talaromycesemersonii o木聚糖酶的活性按照本身公知的方法确定,如例如Engelen等人在Journal ofAOAC International第79卷第5期，第1019页(1996)描述的方法。与其中描述的方法不同，用源自小麦的阿糖基木聚糖(Megazyme, article P-ffAXY, Ireland)替代源自斯卑尔脱燕麦的木聚糖底物(Serva Feinbiochemia GmbH u. Co.，Heidelberg)。各种情况下通过经至少12小时将IOOOg无结块的阿糖基木聚糖溶于100. OOml水中制备新鲜的底物溶液。b2)具有葡聚糖酶活性的多肽内切葡聚糖酶归类为EC3. 2. I. 4并且经常称作纤维素酶。其它的名称为内-葡聚糖酶、内-1,4-0-葡聚糖酶、纤维素A或羧甲基纤维素酶。酶催化纤维中的1，4-P-D-糖苷键以及P-D-葡聚糖内的1，4-键的内水解，其中P-D-葡聚糖还包含1，3-键。葡聚糖酶可源自例如细菌，如例如源自芽孢杆菌属(BaciIIus)、梭菌属 (Clostridium)、类芽抱杆菌(Paenibacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、栖热袍菌属(Thermotoga)。真菌葡聚糖酶源自例如酵母和丝状真菌，如例如源自下列属曲霉菌属(Aspergillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、裸孢壳属(Emericella)、链孢霉属(Fusarium)、顶囊壳属(Gaeumannomyces)、腐质霉属(Humicola)、香燕属(Lentinula)、稻痕病菌(Magnaporthe)、新丽鞭毛菌(Neocallimastix)、诺卡土壤菌属(Nocardiopsis)、厌氧真菌(Orpinomyces)、拟青霉(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母菌属(Saccharomyces)、裂裙菌属(Schizophyllum)、踩节菌属(Talaromyces)、嗜热真菌属(Tnermomyces)、木霉属(Trichoderma)，5ロ例如，Talaromyces emersonii。葡聚糖酶的活性依照本身公知的方法确定，并且例如Engelen等人描述在Journal of AOAC International第79卷第5期，第1019页(1996)中。与其中描述的方法不同，用源自大麦的￠-葡聚糖(Megazyme, articleP-BGBM, Ireland)替代源自大麦的3 _ 葡聚糖底物(Sigma Chemical Co.，St. Louis, M0:No. G-6513)。各种情况下都通过下述步骤制备新鲜的底物溶液首先将0. 750g葡聚糖悬浮于20ml水中，接着通过加入20ml氢氧化钠溶液(2mol/l)并同时搅拌15分钟进行溶解；加入42. 5ml柠檬酸溶液(lmol/1)，利用氢氧化钠溶液(2mol/l)或柠檬酸溶液(lmol/1)在40. (TC +/-0. 1°C下将pH调整为
3.50+/-0. 03 ;冷却到室温后，用水将混合物配至100. 00ml。c)稳定盐可以提及的合适稳定盐的实例为无机盐或有机盐。特别是金属盐，尤其是有机酸的碱金属和碱土金属盐，如例如具有1-8个碳原子的一价或ニ价羧酸的Mg、Ca、Zn、Na、K盐，如例如柠檬酸盐、こ酸盐、甲酸盐和氢甲酸盐(Hydrogenformiate),还有无机盐,如例如Mg、Ca、Zn、Na、K的硫酸盐、碳酸盐、娃酸盐或磷酸盐；碱土金属氧化物，例如CaO和MgO ;无机缓冲剂，如碱金属磷酸氢盐，特别是钠和钾的磷酸氢盐，如例如K2HPO4,KH2PO4和Na2HPO4。特别优选按照基于酶组合物的所示重量比例使用下列盐硫酸锌(0.5-10，或 3-8 重量 ％)，硫酸钙(1-30，或10-25 重量 ％)，硫酸镁(5-30，或10-25 重量 ％)，
硫酸钠(1-30，或10-20 重量 ％)。d)合适的载体载体材料的实例是碳水化合物，特别是糖类以及淀粉类，例如源自玉米、稻、马铃薯、小麦和木薯；改性淀粉，例如辛烯基琥珀酸酐；纤维素和微晶纤维素；无机矿物或壤土，例如粘土、煤、硅藻土、硅酸、滑石和高岭土 ；粗粒小麦粉，例如小麦粗粉，麸，如小麦麸或小麦粗粉，面粉；盐如金属盐，特别是有机酸的碱金属和碱土金属盐，例如Mg、Ca、Zn、Na、K的柠檬酸盐、こ酸盐、甲酸盐和氢甲酸盐，无机盐，例如Mg、Ca、Zn、Na、K的硫酸盐、碳酸盐、硅酸盐或磷酸盐；碱土金属氧化物如CaO和MgO ;无机缓冲剂如碱金属的磷酸氢盐，特别是钠和钾的磷酸氢盐，例如K2HP04、KH2PO4和Na2HPO415e)合适的疏水性液体可以提及的合适疏水性液体的实例为原则上所有的(熔点在-60到30° C范围内，具有疏水性分子结构部分的)疏水性液体都可以使用，但是前提是它们适合用作食品或饲料添加剤。优选天然存在的植物或动物液体，如磷脂和一 _、ニ -和三酰甘油酯和它们的混合物。可以提及的非限定性实例为大豆卵磷脂，植物油如葵花油、玉米胚芽油、豆油、棕 桐油、菜籽油、棕榈壳油、棉籽油、花生油、巴巴苏油、蓟油以及动物油如例如鱼油。f)配制剂的生产本发明酶配制剂使用本身公知的现有技术方法制备，如例如下述文献所描述的万法Mollet 等人，Formulierungstecnnik [Formulation technique], 2000, VerlagWiiey-VCH, Weinheim,或 Heinze, Handouch der Agglomerationstecnnik[Handbook ofagglomeration technique], 2000, Verlag Wiley-VCH, Weinheim。fl)干燥为了通过干燥产生盐稳定的，优选附聚的酶组合物，可以考虑各种技术，例如，特别地，-喷雾干燥，-流化床粒化，-流化床附聚，-流化喷雾干燥器(FSD)技术，-来自Glatt 的 Procell 技术(W02004/108911)。干燥可以连续或间歇进行。如果合适的话，在干燥后，干燥的产物必须进ー步筛分、研磨或附聚。所述步骤也可以组合。依照本发明用于喷雾干燥或附聚的酶溶液包含至少ー种溶解或悬浮在水相中的可用作食品添加剂或饲料添加剂的酶，如例如，可通过包括发酵和处理步骤的生产方法获得的酶浓缩物。所述溶液具有的蛋白比例基于该溶液总重量为约1-50重量％，优选约10-35重量％。pH—般为约3-9。除了上述盐形式酶稳定剂，如例如碱金属或碱土金属盐，例如硫酸钠或硫酸镁之外，所述溶液还可以任选包含其他的常规添加剂。可以提及的实例为缓冲齐U，如例如磷酸盐缓冲剂；稳定剂，如例如こ醇或表面活性剂等。在所述酶溶液的粘合性能不足以确保颗粒在喷雾后粘结在一起的情况下，额外使用粘结剂是有利的。这样避免了附聚体在干燥过程中再次崩解。在这种情况下，优选将溶于或分散于水性介质的粘结剂喷入流化床。所述粘结剂可以溶于要喷入的酶溶液中进行喷雾或者与之分开地喷雾，时间上可以同时或者错开。可以提及的合适粘结剂的实例为碳水化合物溶液，如例如葡萄糖、蔗糖、糊精，特别是糖醇，如例如甘露醇的溶液，或聚合物溶液，如例如羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚こ烯基吡咯烷酮(PVP)、聚こ烯醇(PVA)、こ氧基化纤维素(EC)、こ基纤维素或丙基纤维素的溶液。通过有目标地选择喷入的粘结剂的量和粘合性能，能够获得不同大小和強度的附聚体。
如果粘结剂以和酶的混合物的形式喷雾，粘结剂的比例通常基于所述溶液总重量为约0. 5-20重量％，优选约1-10重量％。如果粘结剂作为单独的溶液喷雾，溶液中的粘结剂比例基于所述溶液总重量为约1-30重量％。这种情况下，粘结剂同样溶于水性介质，优选灭菌软化水。常规添加剤，如例如缓冲剂或增溶剂同样可以存在。依照本发明，粘结剂在最终产物(即酶组合物)中的比例为0-约20重量％，例如约1-6重量％。最佳量还取决于所选择的粘结剂类型。液态酶制剂的喷雾干燥可以常规方式进行。为此，将所述酶溶液泵送到喷雾塔的雾化器中。雾化通过，例如压カ喷嘴(单流体喷嘴)、双流体喷嘴或离心雾化器进行。液滴借助通入喷雾干燥器中的热空气流干燥。当使用离心雾化器时，干燥优选以同向流动进行。使用喷嘴的情况下，所述干燥还可以逆流或混合向流动的方式进行。粉末可以由塔部排放或者其通过空气流夹带并在旋风分离机和/或过滤器中分离出。根据产物和程序，可能需要后干燥，其可以通过法兰连接在喷雾干燥器上的内流化床或外部流化床进行。喷雾干燥的产物可随后在流化床中附聚。为此将粉状材料，例如通过上述喷雾干燥获得的酶粉，装入流化床干燥器中。进行涡流处理，例如通过送入预热空气。将例如含酶溶液或粘结剂溶液喷到流化床上，结果装入的粉末被所述溶液湿润并因其粘合性促进附聚。喷到流化床的操作可从顶(顶喷法)或底部(底喷法)开始。与此同时，同时或半连续地(即间隔一定时间)从流化床排出部分(Teilmenge)附聚体。对排放物进行分类，利用例如筛子进行。产生的粗材料可以研磨并连续再循环到流化床内。细小部分，例如来自过滤系统的废气，同样可连续再循环。依照另ー种方法方案，本发明酶附聚体的生产可以连续地进行，更精确地，通过将干燥的粉状物料，如例如干燥的酶粉连续送入流化床干燥器。对此特别适合的干燥器是具有多个喷雾区和多个适当的干燥区的流化床干燥器。在第一区，装入干燥酶粉，涡流处理，喷入酶溶液和/或粘结剂。将在该区形成的附聚体转移到下一区。相同或不同组成的酶溶液和/或粘结剂溶液同样可喷入该区和任选ー个或多个其他区。喷施的酶溶液或粘结剂溶液中的水通过送入空气流除去，该空气流是所有区共有的或単独送入的，其是适当加热的。在最后区的ー个或多个中，可进ー步进行后干燥。产物排放区也在此处。产物的后处理如上所述进行。另ー种优选的方法方案包括将酶溶液喷雾干燥并结合了随后使喷雾干燥的酶粉末附聚。这些操作可间歇或连续进行。优选连续程序。此类方法可使用常规的喷雾干燥设备进行。但是，它们可以有利地在被称为FSD(Fluidized Spray Dryer(流化喷雾干燥机))、SBD(Spray Bed Dryer(喷雾床干燥机))或MSD(Multi Stage Dryer (多级干燥机))的设备中进行。
在这种情况下，如果所获得的粉末中的细小部分要再循环(例如于旋风分离器或过滤器中沉淀后)回干燥器的潮湿区，则将其早在喷雾干燥器内再混入处理程序。然后在流化床的其他阶段进行实际的附聚。该阶段可集成到喷雾干燥器内(内流化床)或者可以在独立的设备中进行(附加的流化床)。如果需要的话，可以在干燥的同时将其他的酶溶液、另外包含粘结剂的酶溶液或仅溶解或悬浮形式的粘结剂注射到流化床中以促进附聚。适合附聚的粘结剂实例为羟丙基甲基纤维素、聚こ烯吡咯烷酮、聚こニ醇和聚氧こ烯与聚氧丙烯的嵌段聚合物。但是，エ艺參数优选以下述方式设定附聚体的产生中不需要其他添加。注入的液体组成和量取决于所喷溶液的粘合性能、要获得的附聚体尺寸和エ艺条件。取决于喷入量，可能需要在其他阶段进行后干燥。然后按照前述方式后处理产物。在喷雾干燥的酶具有高热不稳定性的情况下，在本发明方法期间控制产物温度尤其重要。应该选择尽可能低的温度，因为随着温度的提高和/或喷雾干燥和附聚方法的持续，活性损失加剧。一般地，喷雾干燥中产物温度，也就是喷雾干燥的固态粉末温度，为约40-750C，特别是低于约70°C，常常低于60°C。在流化床中停留的时间越长，应该选择越低的温度。流化床中附聚和干燥期间的产物温度,也就是流化床中附聚体的温度，在较长的·设备停留时间内应选择较低，其值为约30-70°C，特别是低于约60°C，优选低于50°C。为了进一歩降低残余水分含量，可能需要进行后干燥步骤。在后干燥期间，产物温度也应该在上述范围内，尤其为50°C或更低。后干燥将本发明制剂中残余水分含量降低到低于约20重量％，优选约5-17重量％的值。附聚和后干燥期间的干燥通过使用预热的送入空气实现。送入空气的温度可根据所选预定产物温度、空气速率和喷雾速率变化，通常为30-180°C。后干燥在较低温度下进行，也就是说在约35-55°C进行。附聚的持续时间同样取决于所选的批量大小，但在30分钟至数小时范围内。f2)酶配制剂的制备利用本身公知的混合技木，将喷雾干燥，任选附聚的预制产物(干燥的酶组合物)与上述载体材料混合。为此，将酶制剂加入载体中，例如分批加入，并且如果必要的话，混合一定时间，例如1-5分钟，直到达到均匀分布。然后加入疏水性液体。该疏水性液体可以在混合操作期间喷在、滴加或倒在混合物上或混合物中。在加入完成后，继续混合操作，例如5-45分钟，直到该油均匀分布。所获得的产物具有非常低的粉尘比例。通常不需要其他的处理步骤。多种类型的混合器适合所述混合，如例如锥形螺杆混合器(例如来自Nauter)、梨头混合器(例如来自L6dige)、双轴混合器。混合时间取决于选择的混合器类型并且可能不同。g)食品和饲料组合物依照本发明生产的酶配制剂特别适合添加到食品和饲料。所述配制剂特别适合用作混合物形式的动物饲料添加剂，其中所述动物饲料混合物具有符合FMV(German feed regulation(德国饲料条例))的植物或动物源单组份饲料，如例如谷类副产品、小麦饲料粉、麦麸；提取粉、酒糟、榨糖后甜菜废丝、鱼粉、肉和骨粉；和/或符合FMV的矿物单组份饲料，如例如，碳酸盐、磷酸盐、硫酸盐、丙酸盐。同样适合的为谷类，如例如小麦、黒麦、大麦、燕麦、玉米、粟或黑小麦；谷类副产品(碾磨副产品)，例如麸、粗粒小麦麸、小麦粗粉麸、饲料粉或带麸粗粉；制油副产品(提取粉、压榨粉、油柏)；制糖副产品(糖浆、甜菜丝渣、饲料糖、渣、马铃薯淀粉、玉米筋、小麦筋)；发酵エ业副产品，啤酒酒糟、酵母、麦芽、啤酒酒糟水；以及动物和其他饲料，如血液干粉、鱼粉、压榨果汁、马铃薯蛋白质。实验部分制备实施例Vl :木聚糖酶配制剂a)在4-10° C下，在干物质含量为约20-35重量％、pH为3. 5-5.0和活性为60000-100000TXU/g的木聚糖酶含水浓缩物中溶入基于所述浓缩物为10-20 重量％的七水
合硫酸镁。b)为了干燥和附聚，利用顶喷法通过双流体喷嘴将步骤a)获得的酶组合物喷入来自Niro-Aeromatic的Aeromat MP-1型实验室流化床中。该流化床的塑料锥具有直径IlOmm的气体分布板和具有12%开放表面积的多孔板。向所述流化床供入速率为50m3/h的空气，送入空气的温度为40-100° C。调节送入空气的温度，以使流化床中产物的温度保持在大约45° C。喷雾时间为240分钟。随后，以30° C的速率为50m3/h的空气涡流冷却产物。c)筛分步骤b)获得的酶组合物。筛除细小和粗材料，以获得粒度分布为100 Ii m-400 V- m的适用部分。这样得到的产物具有下述特征数据组成
木聚糖酶(千物质)65重量％
硫酸镁(MgSO4)20重量0/
残余水分15重量％
活性2浦 000-300 OOOTXll/g
外观(显微镜)包含多个初级颗粒的附聚体
中值粒径171 Jimd)为了制备酶配制剂，将小麦粗粉麸(675. Sg)装入实验室混合器(L6dige)中并且在室温以170rpm均化。在这些条件下，将21g步骤C)得到的酶组合物加入混合器并且混合5分钟。之后，通过吸移管缓慢地滴入3. 5g豆油，接着后混合30分钟。这样得到的产物具有下述特征数据组成小麦粗粉麸(干物质)90重量％ 酶组合物(来自C))3重量％ 豆油0.5重量％ 残余水分6.5重量％
活性5 000-7000TXU/g
中值粒径337nm 制备实施例V2 :葡聚糖酶配制剂a)在4-10° C下，在干物质含量为约20-35重量％、pH为3. 5-5.0和活性为150000-400000TCU/g的P -葡聚糖酶含水浓缩物中溶入基于所述浓缩物为10-20重量％的七水合硫酸镁。b)为了干燥和附聚，利用顶喷法通过双流体喷嘴将步骤a)获得的酶组合物喷入来自Niro-Aeromatic的Aeromat MP-1型实验室流化床中。该流化床的塑料锥具有直径IlOmm的气体分布板和具有12%开放表面积的多孔板。向所述流化床供入速率50m3/h的空气，并且送入空气的温度为40-100° C。控制送入空气的温度，以使流化床中产物的温度保持在大约45° C。喷雾时间为240分钟。随后，以50m3/h的空气涡流将产物冷却到30° C。c)筛分步骤b)获得的酶组合物。筛除细小和粗材料，以获得粒度分布为100 Ii m-400 V- m的适用部分。这样得到的产物具有下述特征数据组成
葡聚糖酶(干物质)65重量％
硫酸镁(M^SO4)20重量％
残余水分15重量0/。活性500 000-120 000 TGU/g外观(显微:鏡)包含多个初级颗粒的附聚体中值粒径167jim d)为了生产酶配制剂，将小麦粗粉麸(693g)装入实验室混合器(Iiidige)中并且在室温以170rpm均化。在这些条件下，将3. 5g步骤c)得到的酶组合物加入混合器中并且混合5分钟。之后，通过吸移管缓慢地滴入3. 5g豆油，接着后混合30分钟。这样得到的产物具有下述特征数据组成
小麦粗粉麸(千物质)92.5重量％醃组合物(来Ij C))0.5重量％豆油0.5重量0/O 残余水分6.5重量％
活性1000-7000 TGU/g 中值粒径321pm 制备实施例V3 :木聚糖酶/葡聚糖酶配制剂为了制备酶配制剂，将小麦粗粉麸^72g)装入实验室混合器(Liidige)中并且在室温以170rpm均化。在这些条件下，将21g制备实施例Vl步骤c)得到的酶组合物和3. 5g制备实施例V2步骤c)得到的酶组合物加入混合器中并且混合5分钟。之后，通过吸移管缓慢地滴入豆油，接着后混合30分钟。这样得到的产物具有下述特征数据组成·
小麦粗撿麸(干物质)89.5重量％
酶组合物(来自Vl c))3重量％ 酶组合物(来自V2 C))0.5重量％ 豆油0.5重量％ 残余水分6.5重量％
木聚糖酶活性5000-7000 TXlJZg 葡聚糖酶活性1000-7000 TGU/g
中值粒径328fim制备实施例V4 :木聚糖酶/葡聚糖酶配制剂a)将干物质含量为约20-35重量％、pH为3. 5-5. 0和活性为150000-400000TCU/g的P -葡聚糖酶含水浓缩物与干物质含量为约20-35重量％、pH为3. 5-5. 0和活性为60000-100000TXU/g的木聚糖酶含水浓缩物按照1:8的比例混合。在4-10° C下，将基于所述浓缩物为10-30重量％的七水合硫酸镁溶于该混合物。之后，按照制备实施例Vl的步骤b)_d)进ー步处理步骤a)获得的酶浓缩物。这样得到的产物具有下述特征数据小麦粗粉麸(干物质)卿重量％ 酶组合物(来自C))3重量％ 豆油0.5重量％ 残余水分6.5重量％
木聚糖酶活性5000-7000 TXlJ/g
葡聚糖酶活性1000-7000 TGlJ/g
中值粒径343fim测试实施例I :粉尘值的测定
在添加和不添加油的条件下分别测定本发明混合物的粉尘值(基于产物总量的%)所述测定依照下述方法进行将三个在测量中各自为10±0. 03g固体的试样通过下落管长=60cm，直径=3cm)缓慢地(大约2-3秒种)倒入容器(高20. 2cm,宽19. 5cm,长19. 5cm ;抽吸管设置在侧壁的约13cm高度处并且与下落管呈直角(90° )地安装)内。利用通过抽吸管与容器连接的油泵，将形成的粉尘从容器吸出并且以恒定的速率(15±0.51/min)收集在过滤器上达I分钟。为此，使用装配有合适过滤器(例如Sartorius玻璃纤维预滤器，13400-37-S ;直径35mm)的玻璃真空过滤器(直径35mm，D2，50ml)。通过抽吸移出的粉尘量利用分析天平测定，以相对所用试样的平均百分数表示。根据所測定的粉尘百分比，试样的起尘性可描述如下
檢尘值[%]说明
0-0.05基本无粉尘
0.05-0.25轻微形成粉尘
0.25-1.00形成粉尘
>1.00强烈地形成粉尘所用材料:木聚糖酶粉(XEA):活性229300TXU/g ;中值粒径=171 ； (20重量％七水合硫酸镁)；按照与制备实施例Vl类似的方式干燥，小麦粗粉鉄(WGK)(Hildebrandmiihlen);中值粒径=370豆油混合试样:将WGK装入Iildige混合器内，将SD粉加入其中并且在室温下以170rpm预混5分钟。将豆油加热到大约80°C，通过细吸移管缓慢地滴入并且后混合30分钟。各种情况下都制备IOOOg混合物。测定各种混合物以及纯XEA和纯WGK的粉尘值并且总结于下表试样小麦粗 SD粉豆油理论活性粉尘注释豆油
E5/051 粉麸(g) (g) (g) (TXlJ/g)值(％) (g)(%)
批次 I 967.3 32.7 0.0 75000.081 轻微形成0.0
粉尘
批次 2 962.3 32 7 50 75000.025 基本无粉0.5
尘
批次 3 957.3 32 7 10.0 7S00OOlS 基本无粉1.0
/N
WGK 纯- 0.0 00 120 轻微形成 0.0·
粉尘
XEA -纯 0.0 229300 0.049 基本无粉 0.0
尘发现本发明含油混合物的粉尘形成趋势惊人地降低。另外，在目测检验和光学显微镜研究所研究批次后，没有发现在分离性能方面的差别(结果没有显示)。测试实施例2 测定流动性本发明酶配制剂的流动性能通过公知方法測定。现有技术中，已经描述了原则上适合的各种方法(參见 Schmitt 等人,Part. Part. Syst. Charact. 21 (2004) 403-410)。依照本发明，使用Schulze环剪切测试仪RST. 01_pc进行测定。所述实验通过ASTMD6773方法(Schulze环剪切测试仪2002)进行。使用下述测试參数试样在测量池中的贮存时间0h温度22°C相对空气湿度70%固结カ(负荷)OI = 11. 18kPa。采用ASTM D6773方法，获得的流动性ffe=8. 8。因此所述产物具有高流动性。


本发明涉及一种新型固态酶配制剂，其包含下述组分的混合物至少一种盐稳定的酶组合物、至少一种微粒状载体和至少一种疏水性液体。另外，本发明涉及制备此类固态酶配制剂的方法以及包含所述酶配制剂的动物饲料、食品和食品添加物的方法。