2.1方法 先按文献[2]方法将豚鼠用卵蛋致敏。即取体重为150~200豚鼠,每鼠后腿肌肉注射卵蛋白4(一般用4%卵蛋白生理盐水溶液0.1),并腹腔注射百日咳疫苗2×1010菌体。注射后13~14天用于实验。致敏后,按文献[1]方法将每只豚鼠的支气管配对制作成二条气管平滑肌螺旋条标本,同步进行卵蛋白诱发收缩抑制实验(其中一条标本作对照,另一条标本为受试标本),诱导物为1mg/ml卵蛋白K-H液。观察指标同上,其中解痉百分率的计算公式调整为解痉百分率(%)=(对照标本收缩幅度-受试标本收缩幅度)/对照标本收缩幅度×100%2.2结果 由表二结果可得受试品均可明显对抗卵白致敏豚鼠离体支气管平滑肌的收缩作用表现为收缩幅度显著降低、达峰时间明显延长、收缩持续时间明显缩短,而且有一定的剂量依赖性。
表二银星竹鼠血液成分对卵蛋白致敏豚鼠离体支气管平滑肌收缩作用的影响(X±SD,n=8)组别剂量 解痉百分率(%)达峰时间(S)收缩持续时间(S)对照组 NS1ml3.1±0.8 64±7.8 734±112.8地塞米松0.1mg 50.1±3.4*** 60±5.4* 356±67.2***受试品(血清) 0.1ml 30.1±5.1*** 78.2±6.8* 529±82.6***受试品(血清) 0.2ml 44.7±4.3*** 84±7.3** 485±79.2***受试品(血清) 0.4ml 53.2±6.0*** 92±8.5** 426±70.5***注与对照组相比*P>0.05,**P<0.05,***P<0.013.银星竹鼠血液成分对磷酸组织胺诱发整体哮喘模型豚的作用。
3.1方法3.1.1操作步骤和检测方法 按文献[3]方法进行。实验前二天预选体重150~200g幼年豚鼠若干只,分别置喷雾箱内,以53.3~66.6kPa(400~500mmHg)压力喷入1mg/ml磷酸组胺1ml(必要时将浓度提高到2ml/ml)喷入装置箱内,动物在吸入以上药液后经过一定的潜伏期,即产生哮喘反应,“哮喘”反应按程度可分为四级,I级呼吸加速,II级呼吸困难,III级抽搐,IV级跌倒。多数动物在90秒钟以内即可出现III级或IV级反应一般不超过150秒钟,超过150秒钟者可以认为不敏感,不予选用。动物一出现抽搐,即拉开箱门取出动物,必要时辅以人工呼吸,以免动物因窒息而死亡。
3.1.2实验分组和给药方法 将预选过的“哮喘”豚鼠随机分为8组,每组10只,对照组于实验前三天灌胃给予NS 1ml/100g,1次/天;地塞米松组在抗原攻击前30min,皮下注射地塞米松2.5mg/kg;受试组同样于实验前三天灌给予相应剂量的受试药品,1次/天。末次给药30分钟后,分别放入喷雾装置内按预选时的同样条件分别喷雾磷酸组胺。记录喷雾开始至症状出现的时间(以抽搐、跌倒为准)作为潜伏时间,如潜伏时间延长一倍认为有效。
3.2结果 由表三结果可得受试品对磷酸组织胺诱发整体哮喘模型豚鼠无明显抑制作用。
表三银星竹鼠血液成分对磷酸组织胺诱发整体哮喘模型豚鼠的作用(X±SD,n=10)组别 剂量有效率(%)对照组 --10地塞米松 2.5mg/kg 70***受试品(血清) 0.07ml/100g 10*受试品(血清) 0.14ml/100g 10*受试品(血清) 0.28ml/100g20*注与对照组相比*P>0.05,**P<0.05,***P<0.014.银星竹鼠血液成分对卵蛋白致敏整体哮喘模型豚鼠的作用4.1方法4.1.1 操作步骤和检测方法 先按文献[2]方法将豚鼠用卵蛋白致敏。致敏后,除喷入的诱导物为1mg/ml卵蛋白液外,其余均按文献[3]方法进行。4.1.2 实验分组和给药方法 对照组于实验前三天灌胃给予NS 1 ml/100g,1次/天;地塞米松组在抗原攻击前30min,皮下注射地塞米松2.5mg/kg;受试组同样于实验前三天灌胃给予相应剂量的受试药品,1次/天。4.2结果 由表四结果可得受试品均可明显对抗卵白致敏豚鼠整体之哮喘作用而且有一定的剂量依赖性。
表四银星竹鼠血液成分对卵蛋白致敏整体哮喘模型豚鼠的作用(X±SD,n=10)组别 剂量 有效率(%)对照组 -- 0地塞米松 2.5mg/kg70***受试品(血清) 0.07ml/100g 40*受试品(血清) 0.14ml/100g 70***受试品(血清) 0.28ml/100g 80***注与对照组相比*P>0.05,***P<0.01
参考文献1淤泽溥,等。麻黄对豚鼠离体气不定期平滑肌的影响。见陈奇主编中药药理研究方法学。第一版。北京人民卫生出版社。1993p6482卞如濂。过敏性支气管痉挛试验。见徐叔云,等主编药理实验方法学。第二版。北京人民卫生出版社。1991p11993陆茵,等。小青龙汤的豚鼠平喘作用(喷雾致喘法)。见陈奇主编中药药理研究方法学。第一版。北京人民卫生出版社。1993p649
本发明经过大量的科学对比实验证实,银星竹鼠血清比地塞米松、麻黄素类更能舒张支气管平滑肌。将银星竹鼠血清作为治疗哮喘的药物和功效性食品,能迅速舒张支气管平滑肌、镇咳、平喘,用生理盐水稀释血清,再用调合物调准口感,即可用来制成各种药剂和功效性食品。本发明对于人们开发和应用银星竹鼠血清具有重大意义。