专利名称：利用与血管肽-2类似物结合的抗癌剂治疗卵巢癌的制作方法卵巢癌是一种严重的健康问题；美国国家癌症研究所(National Cancer Institute)估测美国2008年死于卵巢癌的人数超过15，000，其中每年新增超过21，000病例。卵巢癌是死于妇科癌症的首要原因，并且是女性癌症死亡的最为常见的位居第五位的诱因。基于这些数字，可以预估女性具有1. 39%的发展卵巢癌的终身风险。很难较早地诊断出卵巢癌，因为对于该病的早期症状常常是非特异性的。因此，在癌症从卵巢中扩散之前，只有19%的卵巢癌被诊断出；事实上，2/3(的癌症)只有在癌症转移至身体中较远的部位之后才被诊断出。癌症一旦转移，五年的相对存活率(与整体人口数相比)只有30.6%。由于这些原因，对于卵巢癌，尤其是患有转移性癌症(metastatic cancer)的患者，需要更有效的治疗。
我们发现通过给予ANG1005，即一种包括与肽血管肽_2 (Angiop印_2) (SEQ ID NO 97)结合的三分子的紫杉醇的治疗剂，成功地治疗了转移性卵巢癌。该结合物(conjugate) 能够治疗在大脑外部和内部发生转移的转移性癌症，甚至是治疗不响应标准化疗剂的患者。因为ANG1005有效地靶向癌细胞，因而在特定情况下，其能够以相对于紫杉醇自身更低的等效剂量给予而维持功效。同样，由于ANG1005的结合紫杉醇相比于未结合的药剂毒性更小，因此ANG1005还可以相对于单独的紫杉醇更高的剂量给予而表现出更少的副作用。基于这种发现，本发明的特征在于，一种治疗患有原发于(originating from)卵巢的癌症(如卵巢上皮癌或卵巢腺癌、或其转移形式)的患者的方法。该方法包括向患者给予有效量的结合物，该结合物包含(a)抗癌剂，和(b)包含一种氨基酸序列的多肽、其修饰形式(如本文描述的)、或其片段，该氨基酸序列基本上同一于包含SEQ ID NO :1-105和 107-116(如SEQ ID NO 97)中任一个的氨基酸序列的多肽，其中该多肽、修饰形式、或片段与抗癌剂结合(conjugate)。在特定实施方式中，抗癌剂选自由紫杉醇、长春碱、长春新碱、 依托泊苷、多柔比星、环磷酰胺、泰索帝(taxotere)、美法仑、和苯丁酸氮芥组成的组。在具体的实施方式中，抗癌剂为紫杉醇。在特定实施方式中，多肽包括与SEQ ID N0:97的序列至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、或 100% 同一 (identical)的氨基酸序列。多肽可具有。该结合物可以约 1、10、25、50、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900、1000、 1200、1400、1600、1800、2000、2500、或3000mg/m2的剂量、或这些数字之间的任意范围进行给予。在特定实施方式中，该剂量在100mg/m2和2000mg/m2之间、或300mg/m2和1000mg/m2 之间。结合物可通过本领域中已知的任何方式给予患者，如静脉内、口服、动脉内、鼻内、腹膜内、肌内、皮下、经皮、或经口(per os)给药。卵巢癌可处于本文描述的任何阶段(如，阶段IA、IB、IC、IIA、IIB、IIC、ΙΙΙΑ、 IIIB、IIIC、或IV)或任何形态学等级(如，等级1、等级2、或等级幻。癌症可以是在一个卵巢或两个卵巢中。癌症可限定在卵巢内部，或可出现在卵巢的外表面上。在特定实施方式中，癌细胞发现于子宫、输卵管、或这两者中。在其他实施方式中，癌症已扩散至骨盆器官如结肠、膀胱、或直肠中。在其他实施方式中，癌细胞发现于腹部(如肉眼可见(如横向 (across)大于或小于2cm)、或仅在显微镜下可见)。癌症还可能已转移至腹部或骨盆的内层(腹膜)，腹部器官如肠、膀胱、子宫、肝和肺，或已转移至脑部。癌症可能已转移至卵巢外的至少一个部位(如，转移至脑、肺、或这两者)。在特定实施方式中，癌症在淋巴系统中。 在特定实施方式中，患者具有脑、肺、肝、肾、或眼外部的至少一种转移。在特定实施方式中，癌症可为耐药性的或包括耐药性细胞(如表达MDRl的细胞)。癌症可以对任何化疗剂，包括紫杉醇、卡钼、顺钼、多柔比星、托泊替康、吉西他宾、多烯紫杉醇、紫杉烷衍生物、或本文描述的任何药剂具有耐受性(抗性，resistant)，或者可包含对任何化疗剂，包括紫杉醇、卡钼、顺钼、多柔比星、托泊替康(topotecan)、吉西他宾 (gemcitabine)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉烷衍生物、或本文描述的任何药剂具有耐受性的细胞。在其他的实施方式中，该方法包括给予第二抗癌治疗(如本文描述的任何治疗)。 在特定实施方式中，患者之前可能已接受另一种化疗剂(如紫杉醇、钼类药剂如卡钼、顺钼、多柔比星、托泊替康、吉西他宾、多烯紫杉醇、或本文描述的任何药剂)，并可选地对于该治疗具有耐药性。在特定实施方式中，患者之前接受过卡钼-紫杉醇联合治疗。患者还可具有发展卵巢癌的风险因子(如本文描述的任何风险因子)。在以上任意实施方式中，多肽可为任意长度，例如，至少6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、25、35、50、75、100、200、或 500 个氨基酸。在特定实施方式中， 多肽为10至50个氨基酸长度。结合物可以是基本上纯的(pure)。多肽可通过重组基因技术或化学合成而产生。结合物可与药学上可接受的载体配制。多肽可包括具有下式的氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19其中，X1-X19中的每一个(如 X1-X6、X8、X9、X11-X14、和 X16-X19)独立地为任意氨基酸(例如天然存在的氨基酸，如 Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、Gly、His、lie、Leu、 Iys、Met、Phe, Pro、Ser、Thr、Trp, Tyr、和 Val)或不存在，并且 XI、X10、和 Χ15 中的至少一个(如2或3个)为精氨酸。在一些实施方式中，Χ7为Ser或Cys ；或XlO和Χ15各自独立地为Arg或Lys。在一些实施方式中，从Xl至X19 (包括Xl和X19)的残基基本上同一于SEQ ID NO 1-105和107-116中任一个的任意氨基酸序列(如血管肽_1、血管肽_2、血管肽_3、血管肽_4a、血管肽_4b、血管肽-5、血管肽-6、和血管肽-7)。在一些实施方式中， 氨基酸X1-X19中至少一个(如，2、3、4、或5个)为Arg。在一些实施方式中，该多肽在多肽的N端、多肽的C端、或这两者上具有一个或多个另外的半胱氨酸残基。在以上任意方面的特定实施方式中，多肽是经修饰的(如在本文所描述的)。多肽可以是经酰胺化的、乙酰化的、或既经酰胺化又经乙酰化的。对于多肽的此类修饰可以是在多肽的氨基或羧基末端。本发明的结合物还可包括本文描述的任意多肽的拟肽(模拟肽， ρ印tidomimetics)。多肽可为多聚体形式(multimeric form)，例如，二聚体形式(如，通过半胱氨酸残基经二硫键形成)。在特定实施方式中，多肽具有本文描述的具有至少一个氨基酸取代(如2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、或12个取代)的氨基酸序列。多肽可包含，例如，1至12、1至10、1至5、 或1至3个氨基酸取代，例如，1至10个(如，至9、8、7、6、5、4、3、2个)氨基酸取代。(一个或多个)氨基酸取代可为保守的或非保守的。例如，多肽可在对应于SEQ ID N0:1、血管肽-1、血管肽_2、血管肽-3、血管肽-4a、血管肽-4b、血管肽_5、血管肽_6、和血管肽-7中任何一个的氨基酸序列的位置1、10、和15的至少一个、两个、或三个位置上具有精氨酸。在以上任意方面中，结合物可特定地排除包括或由SEQ ID NO :1-105和107-116 中任一个组成的多肽(如血管肽-1、血管肽_2、血管肽-3、血管肽-4a、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、和血管肽-7)。在一些实施方式中，本发明的多肽和结合物排除SEQ ID NO :102、103、104、和 105 的多肽。在一些实施方式中，氨基酸序列与选自由SEQ ID NO :1-105和107-116、或其功能衍生物所组成的组中的氨基酸序列具有至少35%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、 80 %、85 %、90 %、或95 %的同一性。在特定实施方式中，氨基酸序列与选自由血管肽-2 (SEQ ID NO :97)、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、和血管肽-7 (SEQ ID NO :109-116)所构成的组中的氨基酸序列具有至少；35%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或 95%的同一性。在其他的实施方式中，氨基酸序列与血管肽-2(SEQ ID NO :97)的氨基酸序列具有至少 35%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或 95% 的同一性。在一些实施方式中，氨基酸序列包含选自由SEQ ID NO :1-105和107-116、或其功能衍生物所组成的组中的氨基酸序列。在特定实施方式中，氨基酸序列为血管肽-2 (SEQ ID NO :97)、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、或血管肽-7 (SEQ ID NO :109-112)的氨基酸序列。在其他的实施方式中，氨基酸序列由选自由SEQ ID NO :1-105和107-116、或其功能衍生物所组成的组中的氨基酸序列组成。在特定实施方式中，氨基酸序列为血管 Ι -2 (SEQ ID NO :97)、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、或血管肽-7 (SEQ ID NO :109-112) 的氨基酸序列。“患者”意指治疗人或非人动物(如，哺乳动物)。“治疗”意指与同等未处理(未治疗)的对照相比，改善患有病症或疾病(如诊断为患有代谢紊乱的主体)的主体中该病症或疾病的至少一种症状。通过任何标准技术测量， 该症状减轻(如血糖水平降低)至少5%、10%、20%、40%、50%、60%、80%、90%、95%、或 100%。“结合物”意指与抗癌剂连接的多肽(如，本文描述的这些)。结合可以是化学性质的，例如经由连接子，或是遗传性质的，例如通过基因重组技术。“有效量”意指以临床相关方式治疗或减轻卵巢癌所需的化合物的量。例如，用于实施本发明的用于治疗卵巢癌的活性化合物的足够量取决于给予方式、年龄、体重、和癌症的(严重)程度。最后，处方医师将决定合适的量和给药方案。“基本上同一(substantially identical) ”意指相对于参考氨基酸或核酸序列表现出至少；35%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、85%、90%、95%、或甚至 99% 的同一性的多肽或核酸。对于多肽，对比序列的长度通常为至少4个(如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、或100个)氨基酸。对于核酸，对比序列的长度通常为至少60个核苷酸，优选至少90个核苷酸，且更优选至少120个核苷酸，或全长。此处应当理解的是，在与原始多肽相同(同一)或相似的类似物的氨基酸之间存在空隙(空格、空位，gap)。空隙可包括没有氨基酸、与原始多肽不相同或不相似的一个或多个氨基酸。 本发明载体(多肽)的生物活性类似物也包含在这里。同一性百分比可利用缺省空隙重量 (default gap weight),通过 Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0 中的 η算法GAP、BESTFIT、或FASTA进行测定。“片段”意指源于原始或亲本序列或源于所述亲本序列的类似物的一部分的多肽。 片段包含具有一个或多个氨基酸的截短体(truncations)的多肽，其中截短体可源于蛋白质的氨基端(N-端)、羧基端(C-端)或内部。片段可包括与原始序列的相应部分相同的序列。本发明包含本文描述的载体(多肽)的功能片段。片段可为至少5个(如，至少5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25、28、30、35、40、45、50、60、75、 100、或150个)氨基酸。本发明的片段可包括，例如，7、8、9或10个氨基酸至18个氨基酸的多肽。片段可包含本文描述的任何修饰(如，乙酰化、酰胺化、氨基酸替代)。“耐药性(药物耐受性、药物抗性，drug resistant) ”癌症意指对一种或多种化疗剂(如本文描述的任何药剂)不应答或表现为应答下降的癌症。“测定为耐药性的”癌症意指基于对于化疗剂的不应答性或下降的应答性，癌症是耐药性的，或者基于预后测试(如基因表达测试)预测癌症为耐药性的。本发明的其他特征和优点通过以下、附图和权利要求书将变得明Mo

图1是ANG1005结构的示意图。ANG1005包含与血管肽_2肽(SEQ ID NO 97)结合的三分子的紫杉醇。图2A和2B是示出在用ANG1005处理之前(图2A)和之后(图2B)患者脑部的CT 扫描的图像。图3A-3D是示出在用ANG1005处理之前(图3A和3C)和之后(图和3D)患者肺部的CT扫描的图像。图4A和4B是示出在用ANG1005处理之前(图4A)和之后(图4B)患者腹部(包括肝)的CT扫描的图像。图5A和5B是示出在用ANG1005处理之前(图5A)和之后(图5B)患者骨盆的CT 扫描的图像。图6A和6B是示出血管肽-2肽(图6A)或受体相关蛋白(RAP)或抑肽酶 (aprotinin)(图 6B)对 ANG1005 的抑制的图。图7是示出各种细胞类型和细胞系中LRP表达的图。数据是从Novartis Research Foundation 的 Genetics Institute 的 Gene Expression Atlas 获取(可于 http: // expression, gnf. org/cgi-bin/index. cgi#Q 在线使用)。

我们发现给予肽-药-结合物(例示为ANG1005(图1))能够治疗患者的卵巢癌， 特别在，在用ANG1005治疗两次后，能够显著缩小患者脑内以及脑外(如在肺部)的转移性肿瘤。事实上，该特定患者的癌症对标准化疗剂(包括多烯紫杉醇、卡钼、吉西他宾、托泊替康、和多柔比星)表现出耐受性，因为患者的癌症即使在接受这些药剂后也继续发展。因为已证明卵巢癌，尤其是转移性卵巢癌，难以有效地治疗，并且已知这样的癌症经常会发展为对标准治疗具有耐受性，因此需要能够治疗原发于卵巢的癌症的治疗剂(therapeutics) 和治疗方案，尤其是在癌症已转移的情况下。患有卵巢癌的患者的结合物治疗一位被诊断为转移性卵巢癌的73岁患者被选择参与ANG1005的临床试验。该患者最初是在2006年11月被诊断为卵巢癌。在临床试验之前，该患者从2007年1月到2007 年4月接受Taxotere (多烯紫杉醇)和卡钼的治疗。从2008年2月至2008年3月，该患者接受Gemzar (吉西他宾)和Hycamtin (托泊替康)的联合(治疗)。该患者从2008年 3月直到2008年7月再次接受Taxotere (多烯紫杉醇)和卡钼的联合(治疗)。在2008 年11月，给予该患者Doxil (多柔比星)。因为患者的癌症即使在给予这些药剂后也继续发展，因而该癌症表现出对这些药剂的耐受性。该患者在2009年1月加入临床试验。在ANG1005治疗之前，2009年1月7日进行的CT扫描表明，转移出现在脑(图2A)、肺(图3A和3C)、和肝(图4A)中。并在淋巴结中检测到转移。并进行了肝和骨盆的CT扫描(图4A和5A)。2009年1月8日，向该患者静脉内给予单剂量的ANG1005。三个星期后，给予第二次650mg/m2的剂量。在这些给予后，惊奇地出现了肿瘤体积的缩小。在2009年2月13日进行的CT扫描表明脑转移瘤(图 2B)以及肺转移瘤(图;3B和3D)和肝(图4B)的尺寸显著减小。也示出了骨盆(图5B)的 CT扫描。该患者在2009年2月19日接受第三次ANG1005剂量。基于这些观察，我们认为 ANG1005出乎预料地非常适用于转移性癌症的治疗，尤其是在患者对标准化疗剂具有耐药性或被测定为对标准化疗剂具有耐药性的情况下。临床试验结果以上描述的患者是针对ANG1005治疗剂分成两组进行FDA试验的一个组中的参与者。第一次临床试验的情况总结于下表1中。进行这些试验以测定ANG1005的安全性。第一次试验涉及的患者患有各种脑癌间变少突胶质细胞瘤(AO)、少突星形细胞瘤(OA)、间变星形细胞瘤(AA)、和多形性胶质母细胞瘤(GBM)。表 1# 性别(mg/m2)紫杉烷周期状态整体
_____m____WM__
114 44/F AO 105 否4 退出PD
(Withdrawn) (12 周)
5 43/M OA 105 ^4 MtiiPD
混合(12周)
43/M AO 105 ^2 iitHPD
(6周)
8 43/F AA 105 ^2 MtiiPD
(6周)
9 56/M GBM200 ^ 2 iitH PD ________(6^)__
120 78/M GBM200 ^2 MtiiPD
________(6J|)__
121 41/M AO 200否3 退出SD SAE (3周期后的
(6周)7天)共济失调和出血(与 ANGl 005 不相关)MRI在第6
_________周显示丨22%
12273M GBM 200 ^1+1 Hj手术次研究患者
(将在核心研究
_________中继续)_
12359/F GBM300 ^4 ^pSD
_______(Active) (6 周)__
12469/F GBM300^2 退出
________(6J|)__
125 63/F GBM 300 否4 参加SD 经历2级嗜中性
(6周)白血球减少症的
_________患者(ANC=1.2)
~ 26 42/F GBM300^2 MttJ
____200______
127 30/F GBM300 ^2 MtiiPD
________(6J|)__
~m 51/M GBM300p 参加fSD
_______I (6 周)_
12957/M GBM 3001 参加发烧和嗜中性白
血球减少症(3
_________m_
130"33/M "AO~ 420‘ 2 参加
131~49/F "AO~ 420‘ 2 参加
132 66ΓΡ GBM 420 Μ 经历3级嗜中性
白血球减少症的
________ 患者(ANC=0.65)PD (进行性疾病)；SD (稳定性疾病)涉及患有转移性癌症的患者的第二进行中试验也已开始。该试验的结果在下表2中示出。上文描述的卵巢癌患者在表2中表示为患者134。表

用抗癌剂与血管肽-2多肽类似物(即，包含与Seq.ID NO97至少80％同一的氨基酸序列的多肽)的结合物治疗卵巢癌。这样的治疗包括在治疗转移性卵巢癌和治疗之前已表现出对标准化疗剂具有耐受性的患者中的应用。优选的抗癌剂包括紫杉烷类而优选的结合物为ANG1005，包含与肽血管肽-2结合的三分子的紫杉醇的结合物。