专利名称：眼镜蛇神经毒素的口服制剂组成与方法眼镜蛇神经毒素的口服制剂组成与方法本发明有关的参考文献本发明是2009年8月3日申请的美国专利61/273，314的后续。经应用法律许可，美国专利61/273，314列此供参考。本发明领域本发明主要涉及治疗疼痛的药品和医疗保健产品的领域，尤其是口服给药的无菌眼镜蛇神经毒素的配方以及产品的液体制剂和喷雾制剂的组成。本全世界数以万计的人遭受着多种疾病引起的疼痛。人类寻求有效的止痛药有上千年了，先后发明了源于柳皮，罂粟(吗啡，可待因和二甲基吗啡的原料)和蛇毒的天然止痛药。早在公元前3400年，鸦片已经被闪族人，亚述人，巴比伦人，埃及人所种植。鸦片被希腊名医希波格拉底用于麻醉，后被亚历山大大帝引进到波斯和印度，在文艺复兴时期被帕拉塞尔苏斯用于治疗疼痛。尽管吗啡，可待因之类的阿片类药物的镇痛作用十分显著，然而很多国家将他们列为麻醉品，它们的使用也受到繁复的法律和医学条例的限制。另外，阿片药物具有很高的潜在滥用性和成瘾性。1930至1950年的临床调研显示眼镜蛇神经毒素是一潜在的镇痛药，其镇痛效果高于吗啡，而没有阿片类的副作用。在美国，眼镜蛇神经毒素的医药产品仅限于低剂量的顺势疗法的药品。这些药品通过活性成分几何数量级的稀释后制成。在顺势疗法中，眼镜蛇神经毒素的稀释倍数是1比IO4 ；在1870年代欧洲，稀释倍数也是1比IO4 ；当今法规，如美国顺势疗法药典推荐稀释倍数为1比IO4至108，如此高稀释后，可能造成有效活性成分在单个服用剂量中的缺失。在中国的临床应用，眼镜蛇神经毒素通常是小剂量即需即配给药，给药量为一周。通常干燥眼镜蛇神经毒素和作为稀释剂的乳糖混合制成小丸，或者眼镜蛇神经毒素溶液和混合制成水溶液。这些仅限于医院制剂用于治疗。不幸的是在低度稀释下，直接的摄入眼镜蛇神经毒素给受试者带来了一些副作用，包括咽喉刺激性，咽喉痛，头痛，恶心，呕吐，腹部绞痛，突发性腹泻。由于以上的副作用，西方医药摒弃了眼镜蛇神经毒素作为治疗疼痛的药物使用就不足为怪了。20世纪30年代，临床研究和实验证明眼镜蛇神经毒素具有强效的镇痛作用，随之迎来了眼镜蛇神经毒素作为治疗疼痛的药物的短暂复兴。在这一时期，眼镜蛇神经毒素只通过60°C加热灭菌处理，注射给药。虽然在临床上试验获得成功并且安全，但是医师必须平凡的注射蛇毒溶液，使用的不便最终导致这种给药途径在20世纪70年代逐渐消失。基于1930年至1970年的临床研究结果，即注射用眼镜蛇神经毒素尽管有副作用，还是有显著的镇痛作用的，以及阿片类制剂的副作用，急需研发眼镜蛇神经毒素的口服镇痛制剂的配方和给药方法，以适应疼痛病人的需求。本发明小结本发明涉及一新型的眼镜蛇神经毒素口服制剂及制作方法，即本发明提供了口服使用的眼镜蛇神经毒素的灭菌溶液，以饮品和口服喷雾等多种的定量给药装置给药，并加入防腐剂防腐。本产品和给药系统使眼镜蛇神经毒素有效储存和长期稳定。一方面，本发明提供了一种适合口服给药的眼镜蛇神经毒素的制剂。该制剂包含了无菌的眼镜蛇神经毒素溶液和食品级防腐剂。在本发明诸多具体制剂配方3X，4X，5X中，无菌眼镜蛇神经毒素以蛋白计，浓度分别为 0. 35，0. 035,0. 0035mg/mlo另一方面，本发明提供了一种的口服给药的方法，既无菌的眼镜蛇神经毒素溶液和食品级防腐剂组成的溶液，通过泵喷雾装置给药。本发明也包括一种以饮品形式的制剂。如以可食用膜为载体，活性主要成分通过口腔粘膜给药。本发明的详细描述本发明涉及眼镜蛇神经毒素的口服制剂和给药方法。即本发明提供了以无菌眼镜蛇神经毒素溶液和口服用防腐剂组成的多种制剂，包括可定量方便给药装置给药的饮品型，口腔喷雾型，糖丸型和可食用膜型。这些剂型适于长期储存且安全有效。本发明的制剂能够有效地减缓人类的慢性疼痛症状，如慢性后背疼痛，无明显的副作用和成瘾性，优于阿片类镇痛剂。根据美国和欧洲顺势疗法药典，本发明眼镜蛇神经毒素制剂的原料可以是亚洲眼镜蛇(Naja tripudians)的神经毒素和相关类别蛇的神经毒素。历史上，人类利用眼镜蛇神经毒素的神经毒性治疗神经系统的混乱。由于没有理论的支持，推测活性成分可能是神经毒素。相比阿片类药物与阿片样受体(GABA神经递质激活的G蛋白偶联受体)结合，蛇毒神经毒素主要通过阻断乙酰胆碱的活性，而减轻疼痛，也可能有其他的受体和靶目标参与镇痛过程。注射用的眼镜蛇神经毒素的制备是简单的，然而发明一种有效和方便口服的制剂，且避免现有的口服制剂存在的问题，面临诸多挑战。本发明者进行了小鼠的毒理研究，对小鼠口服每日给药，眼镜蛇毒素的给药浓度为lmg/ml，给药量为350mg/kg，连续28天给药。对照组，注射10-12微克即致小鼠死亡。研究中的小鼠重量增加，非常活跃，很明显小鼠没有受到服用这个浓度的眼镜蛇毒素的影响。上世纪人类临床研究文献记载口服眼镜蛇神经毒素存在明显的副作用，而发明者的小鼠试验却不存在口服副作用，这个困惑和意想不到的结果让发明者质疑文献研究结果。文献中记载的眼镜蛇神经毒素的口服临床试验，所用眼镜蛇神经毒素可能因为细菌污染和局部浓度过高，造成口服诸多副作用。现今，可以通过无菌过滤去除细菌的污染，而不影响眼镜蛇神经毒素的量，如溶液通过0. 45 μ m或更小的孔径的滤头过滤，可以达到灭菌效果，也可以通过长时间低温加热灭菌或巴斯德氏杀菌法灭菌。眼镜蛇神经毒素经过无菌处理后，消化系统无作用消失。本发明的口服制剂通过加入食品级防腐剂抑制细菌生长，这些防腐剂对口服用的神经毒素的镇痛效果没有干扰。这些食品级防腐剂包括对羟苯甲酸甲酯，苯甲酸钠，山梨酸钾及其他已知适当防腐剂。文献报道眼镜口服蛇神经毒素引起咽喉的刺激不适。顺势疗法法规规定顺势疗法产品生产者可以自行确定由蛇毒原料稀释到最终产品的稀释倍数。1873年盖伊医院日志记载泰勒收到一袋273mg的眼镜蛇神经毒素干燥品，该干燥品由1. 78g的15%眼镜蛇神经毒素溶液干燥制成。在文献记载的临床应用中，眼镜蛇神经毒素被稀释1000倍。服用的体积和量比较小，只包含一粒米大小或一滴已经稀释后的毒素。然而这种口服制剂引起的咽喉刺激却和眼镜蛇神经毒素联系在一起。常规的西医用药是根据病人的需求而定药品的给药体积量。例如lmg的药品可以以Iml或IOml的体积给药。在顺势疗法的药品领域，不管药品的稀释倍数由10多倍至100倍，1000倍的不同，而服用的整体体积量是一定的。在十九世纪，由于稀释倍数太大，精确称量微量的活性成份量直接配制所需的浓度几乎是不可能的。唯一的办法是称取一定量的活性成份的原料，精确稀释十倍，以此为高浓度已知储备溶液，进行多次稀释。不同于十九世纪文献记载的顺势疗法配方，发明者首次测定了眼镜蛇神经毒素原料中蛋白的总量约为350mg/ml，这样就可以估量出顺势疗法中以350mg/ml母液稀释得到的各配方的蛋白含量(见表1)。表1 顺势疗法配方中眼镜蛇神经毒素以蛋白计的浓度本文主要描述了无菌眼镜蛇神经毒素的配方组成和口服给药的方法，该方法用于人类和动物的镇痛。含食用级防腐剂的眼镜蛇神经毒素溶液，通过口腔定量泵分散装置便捷给药。