专利名称：冬虫夏草的一种新用途的制作方法脑血管疾病包括出血性脑中风和缺血性脑中风，缺血性脑中风、脑血栓、脑栓塞、 腔隙性缺血性脑中风和多发性缺血性脑中风及小中风都属于缺血性脑中风，是由于脑血管狭窄或闭塞，导致脑血流阻断而使脑组织发生缺血缺氧、软化甚至坏死，致使脑血管功能障碍，引起相关症状。缺血性脑中风是脑血管疾病的主要类型，约85%的脑中风是缺血性的， 动脉粥样硬化是基础，缺血性脑中风存活的患者面临的最大的问题是再发作(五年内的平均复发率高达40%以上)和其他缺血性事件的发生。缺血性脑中风是多病因引起易反复发作的慢性病，饮食等家庭护理康复措施会起到辅助药物治疗的作用，但没针对病因治疗的作用，所以对缺血性脑中风这种慢性病来说， 最关键的康复方法就是科学的针对病因的用药防治，在改善缺血性脑中风症状的同时，降低缺血性脑中风的高复发率。尽管目前对于中风的病理机制已经有诸多说法，但越来越多的证据显示炎症过程不仅是脑缺血病理变化的基础，也被认为是引起中风的触发因素。与缺血性脑损伤相关的炎性反应既包括炎性细胞(包括早期聚集和的嗜中性粒细胞和后期出现的巨噬细胞)和炎性介质(包括白细胞介素、炎症趋化因子、粘附分子以及其他炎性分子)。因此，对炎症有效的药物可能会对脑缺血产生治疗作用。新的抗炎靶点不断被发现，这些成为治疗脑缺血药物的可能应用领域。冬虫夏草性甘、温平、无毒，是著名的滋补强壮药，常用肉类炖食，有补虚健体之效。适用于治疗肺气虚和肺肾两虚、肺结核等所致的咯血或痰中带血、咳嗽。气短、盗汗等， 对肾虚阳痿、腰膝酸疼等亦有良好的疗效，也是老年体弱者的滋补佳品。药理学现代研究结果中，冬虫夏草含有虫草酸约7 %，碳水化合物28. 9%，脂肪约8. 4%，蛋白质约25%，脂肪中82. 2%为不饱和脂肪酸，此外，尚含有维生素B12、麦角脂醇、六碳糖醇、生物碱等。冬虫夏草具有免疫调节作用，既能增加免疫系统细胞、组织数量，促进抗体产生，增加吞噬、杀伤细胞数量、增强其功能，又可以调低某些免疫细胞的功能；是抗癌的活性物质，在体外具有明确的抑制、杀伤肿瘤细胞的作用；能提高细胞能量，减轻疲劳；还能调节心脏功能，降低心脏对氧的消耗，抗心律失常；调节肝脏功能，减轻肝损伤、抗肝纤维化；调节呼吸系统功能，具有扩张支气管、平喘、祛痰、防止肺气肿的作用；调节肾脏功能，减轻毒性物质对肾脏的损害；调节造血功能，增强骨髓生成血细胞的能力；降低血液中的胆固醇和甘油三酯，提高对人体有利的高密度脂蛋白，减轻动脉粥样硬化；此外，还具有直接抗病毒、调节中枢神经系统功能、调节性功能等作用。虽然冬虫夏草具有如此全面的保健功能，甚至被人们成为“仙草”，但至今为止，关于冬虫夏草抗炎和治疗脑缺血方面的作用尚无报道。因此，需要对冬虫夏草的作用进行进一步拓展，以期获得更广泛的应用领域。
本发明的目的在于提供冬虫夏草的一种新用途以及实现这种用途的药物制剂。为了实现上述至少一个发明目的，本发明提供了冬虫夏草在制备具有抗炎作用的药物中的用途。进一步地，这种用途可以用于制备对缺血性脑病具有神经保护作用的药物。申请人:经过大量实验发现，冬虫夏草可以降低髓过氧化物酶(MPO)活性，从而抑制白细胞的浸润；抑制转录因子蛋白家族NF-kB的活性；降低白细胞介素(IL)的水平，降低肿瘤坏死因子(TNF)的水平；降低细胞间粘附分子(ICAM)的水平；以及剂量依赖性地降低前氧化酶，特别是免疫诱导性一氧化氮合成酶(iNOQ和环氧化酶(COX)的表达。已经证实缺血性脑病所造成的脑损伤与炎症反应有关，局部炎症因子、趋化因子及粘附分子的表达上调构成了缺血损伤向炎症性损伤转变的基础，随后白细胞向缺血区的聚集和浸润导致了继发性神经元损伤和梗死面积的扩大。脑缺血区的炎症反应主要表现在白细胞的聚集、氧自由基的产生、溶酶体的破坏、水解酶的生成以及炎症介质的形成等方中性粒细胞(PMN)为缺血部位最初反应的白细胞。炎症介质产生后启动PMN浸润。 PMN通过导致微血管阻塞和释放氧自由基而有助于脑缺血/再灌注后的二次损伤。MPO活性被认为是反应PMN迁移的可靠指标。发明人经过反复实验后发现冬虫夏草可以降低脑缺血发生时MPO的活性，因而实际上抑制了 PMN的浸润。脑缺血时很多脑细胞均可以产生细胞因子。细胞因子是一种小型糖蛋白，在对一种抗原发生相应的时候而产生，最初被认为是一种调整先天免疫和后天免疫的调节因子。 细胞因子会在很多疾病的时候在大脑中的表达上调，包括缺血性脑损伤。在所有炎症介质中，IL，特别是IL-I β和TNF，特别是TNF-α尤为重要，因为它们在引起前炎症反应的协调机制中扮演重要角色。IL-I β不仅能协调其他细胞因子促进Β、Τ细胞活化，而且能够诱导其他炎性介质的产生，加强白细胞与内皮细胞的粘附，调节TNF-α的产生。发明人发现冬虫夏草能够降低脑缺血时IL-I β的含量，因而具有保护急性脑缺血再灌注损伤的作用。TNF-α主要与炎症及免疫反应有关，在脑缺血早期TNF-α分泌或合成的增加是脑梗死形成的主要原因，它具有增加血管内皮细胞的通透性，诱导细胞粘附因子表达等作用。发明人发现冬虫夏草能够明显降低急性缺血脑组织中TNF-α的含量，通过阻断TNF-a 的表达而减少缺血引起的神经元损伤。细胞因子能快速诱导粘附分子，例如ICAM-1、VCAM_1、E-选择素等的表达。粘附分子是一类能介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质相互粘附的糖蛋白，血液中的白细胞通过与血管内皮细胞粘附而外渗是启动炎症反应的关键步骤，而白细胞在血管内皮细胞上的滚动、结合及转运等都需要粘附分子的参与。在免疫球蛋白家族中，细胞间粘附分子-I(ICAM-I)在皮层缺血组织中得到了广泛地表达。在中风发生后几小时之内，ICAM-I表达由于细胞因子的刺激而增加。而发明人发现冬虫夏草能显著降低ICAM-I的表达，从而减轻白细胞与血管内皮细胞的粘附作用，从而抑制炎症的发生与发展，减轻脑缺血再灌注损伤。花生四烯酸(AA)代谢系统与脑缺血及再灌注损伤有密切关系。环氧酶(COX)是催化AA生成前列腺素和血栓素的限速酶。其中C0X-2为诱导型，正常情况下不表达，仅在某些细胞如神经元中低水平表达，与炎症的关系密切。近年来的研究表明，COX参与了缺血性脑损伤，是核因子信号转导的靶目标之一。脑缺血再灌注后C0X-2在神经元、脑血管内皮细胞和脑组织其它细胞中的表达均增强，C0X-2抑制剂可有效保护脑组织。发明人发现冬虫夏草能显著降低C0X-2的表达，可有效减轻脑缺血再灌注损伤。一氧化氮(NO)是体内发现的第一个气体信息分子，在脑缺血中有非常重要的作用。催化NO生物合成的酶称为一氧化氮合酶(N0Q。脑缺血后神经末梢释放大量的谷氨酸，使NMDA受体依赖的Ca2+通道过度激活，大量Ca2+内流并与CaM结合，因此受到Ca2+-CaM 直接调节的NOS被大量激活，导致合成过量的NO。过多的NO使细胞生理过程遭到破坏，参与了兴奋性毒性作用。诱导型一氧化氮合酶(iNOQ在正常生理情况下不表达，但在脑缺血损伤的炎症反应诱导下产生，并维持在高水平，从而加重了炎症反应和细胞毒性作用。发明人发现冬虫夏草能显著降低iNOS的表达，降低了脑缺血损伤后兴奋性氨基酸的兴奋性毒性作用，抑制炎症反应，减轻脑缺血再灌注损伤。NF-κ B包括一个转录因子家族，参与免疫反应的早期和炎症反应各阶段的许多分子都受 NF-κ B 的调控，包括TNF-α ,IL-I β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、iN0S、C0X_2、趋化因子、粘附分子、集落刺激因子等。已经发现在皮层缺血/再灌注后，NF- κ B的活化与IL-I β 和TNF-α的mRNA水平的显著增加相关。发明人证实冬虫夏草具有降低NF-κ B表达的效果，通过此效果而产生上述有益效果。综上，使用冬虫夏草后对脑缺血性损伤显示出神经保护作用，这种作用是通过抑制炎症相关的反应而起作用的。本发明所述冬虫夏草的应用，最好是采用天然采摘的冬虫夏草，药效最佳；但也可以采用人工培育的虫草菌粉。实际应用时可以根据临床需要，将上述原料药单独使用，或按照一定比例混合应用。在实际应用时，冬虫夏草可以单独直接使用，还可以包括与药学上可以接受的载体和辅料一起制成各种制剂。具体地，可以被制成，但不限于，滴丸剂、片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂等。实验例药材制备冬虫夏草为市场采购。粗冬虫夏草菌丝(IOOg)采用800ml蒸馏水提取并在37°C 时振摇72小时。溶液在40°C时12000g离心30分钟。收集上清液并冻干形成粉末。实验前，冬虫夏草冻干粉末溶解于PBS缓冲液并用0. 2 μ m滤器过滤，制成所需给药浓度。实验动物采用成年健康雄性Wistar大鼠O个月大，体重225 士 25克)。随机挑选15只大鼠为假手术组(Siam组，η = 15)，剩余75只大鼠按照文献方法进行大脑中动脉闭塞缺血 2 小时后再灌注 22 小时，进行造模。(Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, CumminsR Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy inrats. Stroke51989,20 84-91)经激光多普勒血流仪证实，筛选出脑血流量减少87-90 %的动物作为手术成功阻塞大脑中动脉的个体。整个造模手术过程中，动物体温始终保持在37°C左右。造模后剔除不合格模型动物，得到45只合格模型，随机分为脑缺血模型组(MCA0 组，η = 15)，冬虫夏草低剂量(1. Og/kg)组(CSM-1组，n = 15)，冬虫夏草高剂量(2. Og/kg) 组WSM-2组，η = 15)。两个冬虫夏草给药组分别在缺血2小时后再灌注之前灌胃给予冬虫夏草1. Og或2. Og/kg体重。假手术组和模型组同时给予同等体积的PBS缓冲液。统计分析数据表示为平均数士标准差，结果用ANOVA中的Durmett ’ s检验统计。P < 0. 05 为显著性差异。神经功能行为评分在模型大鼠大脑中动脉阻塞后M小时进行神经功能行为评分以评价感觉运动的完整性。评分标准如下0，没有神经缺陷；1，前肢屈曲；2，前肢屈曲且侧向推力的抵抗力下降；3，前肢屈曲且侧向推力的抵抗力下降且单向绕圈；4，前肢屈曲且不能或者难以走动。 表现出较高分值的动物同时也会具有较低分值所述的所有症状。行为学评分是用以评估损伤是否符合已知的大鼠脑部功能结构。实验结果见图1。大鼠接受MCAO手术后M小时，MCAO组神经功能行为评分显著高于Siam组。在 CSM治疗组大鼠则比MCAO组评分显著降低了。Siam组神经功能评分平均为0. 9 (0. 6-1. 1)， MCAO 组为 3. 7 (2. 6-5. 3)，CSM-2 组为 1. 2 (0. 8-4. 1)，CSM-I 组为 2. 1 (1. 0-4. 9)。显然 MCAO 组与假手术组相比较出现了明显的行为学异常。与此相比，CSM组则显著抑制了行为学异常的发生。炎性物质测定神经评分结束后，立即处死动物，取脑，通过生化测定、ELISA、免疫组化等方法测定相关炎症介质。中性粒细胞浸润测定测量脑组织中有髓过氧化物酶(MPO)活性，以评估在缺血脑皮质中中性粒细胞浸润的程度。取出右侧大脑中动脉(MCA)皮层，存储于_70°C。MPO活性的测量方法根据测量试剂盒进行(南京建成生物工程有限公司，中国)。实验结果如表1所示。表1冬虫夏草对MPO活性的影响

本提供了冬虫夏草的一种新用途。冬虫夏草在制备具有抗炎作用的药物中具有新的用途，这种用途可以用于制备对缺血性脑病具有神经保护作用的药物。冬虫夏草的这种新用途是通过抑制转录因子蛋白家族NF-κB的活性进而降低白细胞介素、肿瘤坏死因子、细胞间粘附分子的水平，降低一氧化氮合成酶和环氧化酶的表达而实现的。本发明还提供了以冬虫夏草为主药或主药之一的对缺血性脑病具有治疗作用的药物组合物。