专利名称：一种β-葡萄糖苷酶活性快速测定试剂盒及其检测方法β -葡萄糖苷酶(β -glucosidase)是一类水解酶(EC 3. 2. 1.21),广泛存在于各种生物体内，在生物体的生理、代谢过程中起着重要作用。近年来，人们对其催化机理、分子结构、基因序列等方面都进行了深入的研究。β -葡萄糖苷酶用途广泛，已被应用于食品、化工、生物等诸多工业生产中，取得了巨大的经济效益。目前，β -D-葡萄糖苷酶活性检测方法有以下几种一是Barush和Swiain法，以水杨苷为酶反应底物，酶解产物用4-氨基安替比林作显色剂，使释放出来的水杨醇显色，再用分光光度计比色测定，或者用DNS试剂测定生成的还原糖量来计算酶的活力；二是荧光法，利用伞形酮(7-羟基香豆素)与4-甲基伞形酮具有强烈荧光的特点，可以计算酶活力；三是比色法，以对-硝基苯基β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物进行酶解，底物水解后释放出来的对-硝基苯酚可用分光光度计比色测定。目前，微生物和植物中糖苷酶活性分析检测以对硝基苯酚-D-葡萄糖苷为酶底物的比色法应用最为广泛和普遍，且该方法操作简单，快速，灵敏度高，重现性好。如何将上述的测定原理通过对吸收波长，缓冲液类型、pH值，反应温度和时间等进行优化，制造出一种机构简单、使用方便的β_葡萄糖苷酶活力测定试剂盒是技术人员要解决的问题。
本发明需要解决的技术问题是提供了一种β -葡萄糖苷酶活性快速测定试剂盒及其检测方法，旨在解决上述问题。一种β -葡萄糖苷酶活性定量检测试剂盒，包括Rl、R2、R3和R4试剂，其中Rl试剂100-300mmol/L醋酸钠缓冲液pH5_6 ；R2试剂10-20mmol/L对硝基苯基-β -D-葡萄糖苷(pNPG)水溶液；R3试剂200-400mmol/L碳酸钠溶液；R4试剂10-30mmol/L对硝基苯酚储备液。其中所述的生色剂为对硝基苯酚；所述的缓冲液为醋酸缓冲液。所述的β -葡萄糖苷酶活性定量检测试剂盒在检测β -葡萄糖苷酶发酵液酶活性中的应用。其中，利用β -葡萄糖苷酶活性定量检测试剂盒检测β -葡萄糖苷酶的活性，包括的步骤如下I)样品制备将发酵液通过3000 5000rpm离心10 20min，所获得的上清液既是或将精制固体酶碾碎定容。2)标准曲线的绘制依次移取一定量的对硝基苯酚标准贮备液，用碳酸钠溶液定容至100_200mL，配成相应浓度的对硝基苯酚标准工作液；吸取l_3mL对对硝基酚标准溶液于试管中，加入l-3mL醋酸钠缓冲液；对照的空白试管中加入l_3mL醋酸钠缓冲液；在所有的试管中加入5-10mL碳酸钠溶液，振荡，在405nm处测定吸光度OD值；绘制标准曲线图。3)样品的检测向制备好的发酵液或精制固体酶制剂样品溶液加入20-40 μ L Rl缓冲液混匀并加20-30 μ L入蒸馏水，在40-60°C下孵育，随即加入20-40 μ L R2试剂，在40-60C下进行酶促反应，最后加入预冷的试剂100-200 μ L R3终止反应，并将反应产物在酶标仪或分光光度计上进行检测；酶活性单位U定义在上述反应条件下，每分钟释放出I μ mo I的对硝基酚所需的酶量定义为一个酶活性单位；样品中β -葡萄糖苷酶活性(本发明公开了一种β-葡萄糖苷酶活性快速定量检测试剂盒及其检测方法，β-葡萄糖苷酶活性定量检测试剂盒包括R1试剂和R2试剂；R1试剂包括一下含量的组分90-110mmol/LpH6.8-7.0缓冲液、1.0-3.0U/L葡萄糖氧化酶、1.0-2.5U/L过氧化酶和0.01-0.1％防腐剂；R2试剂包括以下含量的组分90-11mmol/L pH6.8-7.0缓冲液、100-115mmol/L生色剂、70-100mmol/L麦芽糖、0.2-1.0mmol/L 4-氨基安替比林和0.01-0.1％防腐剂。本发明还公开了该β-葡萄糖苷酶活性定量检测试剂盒在快速检测β-葡萄糖苷酶活性中的应用。本发明仅采用两种液体试剂，试剂种类和用量都减少了许多；才用分光光度法或酶标法，大大缩短了反应时间；简化了反应步骤，节省了试剂，自动化，规模化检测，在提高检测结果准确性和可靠性的同时，大大提高了检测效率。