微生物易感性测试套合制作方法

刘实

2003年10月8日

2002年3月21日

2002年3月21日

刘胜, 刘实

C12Q1/02GK1446922SQ02107278

套合 易感性 微生物 测试

1.一个用于测定微生物对待测因子易感性的试剂套合，包括多个相互隔离的空间，每一空间接受一定量的粘稠液体培养基，其中一些空间接受一定量的待测因子2.权力要求1所指空间可以下列方式存在，其中包括试管、平皿、离心管、多孔板和多室载物片3.权力要求1所指粘稠液体培养基含有一种能增加液体粘稠度的物质，其中包括聚乙烯毗咯烷酮、甲基纤维糖和明胶4.权力要求1所指粘稠液体培养基的粘稠度应达到有效抑制微生物的布朗运动并有利微生物群落形成的水平5.权力要求1所指待测因子包括物理因子、化学因子和生物因子6.权力要求5所指化学因子包括药物、毒物、微量元素和生长因子7.权力要求6所指药物包括抗生素、抗微生物素、抗菌素、抗肿瘤药、和抗癌药8.权力要求1所指待测因子的一定量选自以下范围，其中包括对待测微生物不起任何可观察到的作用的量和对待测微生物起显著的可观察到的作用的量9.权力要求1所指粘稠液体培养基可以下列方式制造和贮存，其中包括脱水粘稠液体培养基和冻干粘稠液体培养基10.权力要求1所指待测因子可以下列方式制造和贮存，其中包括脱水待测因子和冻干待测因子

本发明涉及一种用于测定微生物对待测因子易感性的试剂套合目前对微生物易感性的测定不外乎在以下两种状态的培养基中进行；一是不能自由流动的固体培养基，二是粘稠度很低的液体培养基使用固体培养基测定微生物易感性的时候，微生物一般是接种于培养基的表面，微生物对待测因子的易感性可通过观察培养基表面微生物的群落(如细菌菌落)生长情况而判定使用粘稠度很低的液体培养基测定微生物易感性的时候，微生物一般是接种于培养基内并充分混匀，微生物对待测因子的易感性可由培养基混浊度的变化情况而反应使用固体培养基的一个主要缺点是不便于微量化和自动化这是因为往微小区域的固体培养基表面接种微生物不仅难度高而且接种难以均匀使用粘稠度很低的液体培养基虽然便于微量化和自动化，但不便于对活动的微生物个体进行显微观察和计数此外由于在此种液体培养基中较难形成微生物群落，因此基本不可能以微生物群落的形成情况作为微生物对待测因子易感性的一种标志然而，观察微生物群落的形成不仅是一种最为直接的反映待测因子对微生物生长繁殖有无影响的手段，也是一种很快很准的手段例如，如果能直接观察微生物是否形成群落，则只需等1个生殖周期就可得知待测因子对微生物生长繁殖有无影响而以测定液体培养基透光度或吸光值来反映微生物的生长是否受待测因子影响，即使使用高敏感度的分光光度计一般也要等4个以上的生殖周期才可有定论本发明人最近的研究结果显示通过增加液体培养基的粘稠度，不仅可以减少微生物的布朗运动和主动游动，而且有利于微生物群落的形成这一结果表明，以微生物群落的形成情况作为判断标准的一些检测也完全可以在具有一定粘稠度的液体培养基中进行本发明的目的是提供一种以粘稠液体培养基为基础的试剂套合用于微生物易感性的快速测定本发明的微生物易感性测试套合包括多个相互隔离的空间，每一空间接受一定量的粘稠液体培养基，其中一些空间接受一定量的待测因子这些空间可以下列方式存在，其中包括试管、平皿、离心管、多孔板和多室载物片粘稠液体培养基通过往普通液体培养基中加一种能增加液体粘稠度的物质而形成这种物质包括聚乙烯毗咯烷酮、甲基纤维糖和明胶粘稠液体培养基的粘稠度以达到有效抑制微生物的布朗运动和有利于微生物群落的形成为准，但同时要求加有粘稠物质的培养基仍保持流动性这一液体的基本特征测试套合的多个接受待测因子的空间形成一定范围的浓度或剂量梯度，此范围包括对待测微生物不起任何可观察到的作用的量和对待测微生物起显著的可观察到的作用的量以粘稠液体培养基为基础制备的本微生物易感性测试套合具有以下优点(1)保持了液体培养基易于操作，易于样本成份均匀混合，以及规模大小可灵活调整的特点(2)兼有了固体培养基允许微生物群落形成的功能(3)允许通过观察待测因子系列浓度或剂量梯度对待测微生物群落形成的影响直接得出最小抑制浓度或剂量(4)易于与微生物鉴定等后续试验结合(5)便于微量化和自动化下面以不同的具体实施方式对本发明作进一步详细的说明方式之一是以一多室显微镜载物片作为盛本试剂套合所含成份的容器载物片上一个系列的小室全部加有一定量的粘稠液体培养基，其中一些小室加有一定量的待测因子加待测因子的小室所含待测因子的浓度各不相同而形成一定范围的浓度梯度以这种方式形成的本试剂套合的最大优点是多室显微镜载物片同时起到培养器皿和观察器皿的作用这样不仅减少了操作环节和材料消耗，也有利于保存微生物生长繁殖的原始状态方式之二是以一多孔塑料板作为盛本试剂套合所含成份的容器多孔板上一个系列的小孔全部加有一定量的粘稠液体培养基，其中一些小孔加有一定量的待测因子加待测因子的小孔所含待测因子的浓度各不相同而形成一定范围的浓度梯度以这种方式形成的本试剂套合的最大优点是可根据需要选择不同孔数的多孔板以便于在同一多孔板上对多种待测因子进行测定另外已有许多专为多孔塑料板而开发的加样仪器和测试仪器可供选用，因而便于实行大规模样品的自动化处理方式之三是以多个单独的器皿(如试管和离心管)作为盛本试剂套合所含成份的容器一个系列的单独器皿全部加有一定量的粘稠液体培养基，其中一些器皿加有一定量的待测因子或接受一定剂量的待测因子的作用加待测因子或接受待测因子作用的器皿所含待测因子的浓度或所受待测因子作用的剂量各不相同而形成一定范围的浓度梯度或剂量梯度以这种方式形成的本试剂套合的最大优点是单独的器皿可相互隔离而互不干扰在进行某些待测因子如物理幅射作用的效果测定时，有必要将接受不同幅射剂量的器皿相互隔离另外，本方式允许使用较大量的微生物样本上述试剂套合所含粘稠液体培养基和待测因子可以一开始就配制成粘稠液体并以此形式贮存，也可以开始时配制成粘稠液体然后以冻干形式贮存还可先以脱水方式配制并以此形式贮存但冻干和脱水方式贮存的粘稠液体培养基和待测因子在使用前必须还原成所规定的粘稠液体状态粘稠液体培养基和待测因子可以分别脱水或冻干而独立存在，也可以是一起脱水或冻干而混合存在粘稠液体培养基和待测因子可以直接脱水或冻干于容器之中，也可以是吸附到滤纸片上脱水或冻干而后随滤纸片一起放于容器之中不管套合所含粘稠液体培养基和待测因子以何种方式配制和贮存，其粘稠液体培养基和待测因子的量都以最终使用时所需要的量确定使用上述试剂套合用于微生物易感性的测定时，使用者按试剂套合的使用说明书的规定加法与加量将含待测微生物的样本加入试剂套合的各个相互隔离的培养空间按使用说明书规定的培养条件进行规定时间的培养然后按使用说明书规定的的方式进行检查最适合本试剂套合的一种检查方式是光学显微镜观察如以此种方式检查，试剂套合实施方式之一(即以多室显微镜载物片作为盛本试剂套合所含成份的容器)可在培养完成后直接进行其它实施方式则需将培养的样本取出放在显微镜载物片上进行检查取放时应尽量避免扰动样本以保持样本中微生物生长繁殖的原始状态以上实施方式的例证仅是出于说明本发明的试剂套合所具有的基本特征，但对本试剂套合的考虑不应当局限于此而应以本专利申请的权力要求为准