专利名称：感染的治疗和预防的制作方法口腔构成感染的主要部位之一。感染可能导致口腔组织的衰竭性疾病，并且已观察到口腔组织感染和其它解剖分区中的疾病或病症之间具有明显的相关性。慢性牙周炎是口腔组织疾病的一个例子。这是一种牙支持组织炎性疾病，其导致牙槽骨吸收并最终导致牙齿脱落。该疾病是所有群体的主要公共健康问题，并且据估计高 达15%的成年人群患病，其中5-6%为重症。慢性牙周炎的出现和发展与龈下菌斑中特定的革兰氏阴性菌有关。龈下菌斑中存在的牙銀叶啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)与该疾病是显著相关的。据报道，治疗(洗牙和牙根平整术)后牙周炎患者龈下菌斑中依然存在牙龈卟啉单胞菌，这与进行性牙槽骨丧失显著相关。此外，已证实龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌细胞数量的增加与通过附着丧失、牙周袋深度和探针出血所检测的疾病严重程度相关。已证实牙龈卟啉单胞菌的口腔感染在小鼠、大鼠和非人的灵长类动物中诱导牙周骨丧失。此外，牙周疾病和牙龈卟啉单胞菌感染与心血管疾病和某些癌症存在渐增的关联。很多其它微生物病原体，包括其它细菌、真菌、病毒和原生动物，与口腔组织疾病相关，并且这些病原体中的一些还通过口腔组织感染引起其它解剖分区的疾病。前者的实例包括齿垢密螺旋体(T. denticola)和福赛斯坦纳菌(T. forsythia)。A族链球菌(Streptococcus)感染是风湿热和风湿性心脏病的发病原因。一个问题是还不清楚，在粘膜组织慢性发炎或起因于手术或其它牙科干预的粘膜组织急性炎症的情况下，如何获得对特定微生物病原体的强保护性应答。说明书中提及的任何现有技术不是且不应当被视为承认或以任何形式暗示，该现有技术形成澳大利亚公知常识或任何其它裁判权的一部分，或者该现有技术能够被合理地预期是本领域技术人员明确的、理解的或视为相关的。发明概述在某些实施方案中，提供了降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度的方法，所述疾病或病症是与个体口腔组织中微生物病原体的存在相关的疾病或病症，所述方法包括-治疗个体，从而提供从所述个体的口腔组织去除几乎所有微生物或其碎片的状态；此后，-为所述个体提供抗体，所述抗体用于保护所述个体免受微生物病原体侵袭，所述微生物病原体在口腔组织中的存在与疾病或病症相关；从而降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度。在一实施方案中，通过给予所述个体免疫原在所述个体中提供抗体，所述免疫原用于保护所述个体免受微生物病原体侵袭。在一实施方案中，提供了降低个体中牙龈卟啉单胞菌相关疾病或病症的发病率或严重程度的方法，所述方法包括-治疗个体，从而从所述个体的口腔组织去除几乎所有微生物或其碎片；此后，-将诱导对牙龈卟啉单胞菌免疫应答的嵌合或融合蛋白给予个体，所述蛋白包含第一肽和第二肽，所述第一肽与第二肽直接连接或通过接头连接，其中(A)所述第一肽包含(i)与SEQ ID No: I所示的序列相同或同源的序列的一部分或全部；或 (ii)与SEQ ID No:2所示的序列相同或同源的序列的一部分或全部；以及(B)所述第二肽包含(i)与牙龈卟啉单胞菌Lys-X-蛋白酶的粘附素结构域的序列相同或同源的序列的一部分或全部；或(ii)与牙龈卟啉单胞菌Arg-X-蛋白酶的粘附素结构域的序列相同或同源的序列的一部分或全部；或(iii)与牙龈卟啉单胞菌HagA粘附素结构域的序列相同或同源的序列的一部分或全部。从而降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度。在其它实施方案中，提供了组合物或试剂盒，其包含-用于从所述个体的口腔组织去除几乎所有微生物或其碎片的抗微生物剂；-用于针对微生物病原体而免疫所述个体的免疫原，所述微生物病原体在口腔组织中的存在与疾病或病症相关； 上文所述的方法中使用所述组合物或试剂盒。在某些实施方案中，提供了降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度的方法，所述疾病或病症是与个体口腔组织中微生物病原体的存在相关的疾病或病症，所述方法包括-对个体的口腔组织进行手术操作；此后，-治疗个体，从而提供从所述个体的口腔组织去除几乎所有微生物或其碎片的状态；此后，-为所述个体提供抗体，所述抗体用于保护所述个体免受微生物病原体侵袭，口腔组织中所述微生物病原体的存在与疾病或病症相关；从而降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度。在一实施方案中，手术操作是牙科操作。牙科操作的实例包括牙周清理术，洗牙和/或牙根平整术。在一实施方案中，本发明提供了用于降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度的组合物，所述疾病或病症是与个体口腔组织中微生物病原体的存在相关的疾病或病症，所述组合物包含本文所述的抗微生物剂和本文所述的免疫原。另一方面，本发明提供了本发明的组合物在制备用于降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度的药物中的用途，所述疾病或病症是与个体口腔组织中微生物病原体的存在相关的疾病或病症。疾病的非限制性实例包括牙菌斑、牙龈炎、牙周炎、慢性牙周炎、龋齿、骨丧失、牙槽骨丧失和冠状动脉疾病。在另一实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防牙周病(和/或本文确认的适于治疗的其它病症)的由本文所述的抗微生物剂和本文所述的免疫原的活性成分组成的组合物。在另一实施方案中，本发明提供了用于降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度的包含本文所述的抗微生物剂和本文所述的免疫原的组合物，所述疾病或病症是与个体口腔组织中微生物病原体的存在相关的疾病或病症。在另一实施方案中，本发明提供了本文所述的用作药物的组合物。在另一实施方案中，本发明提供了包含有效量的本发明组合物作为主要成分的药物组合物。在一实施方案中，提供了对个体的口腔病原体形成抗体应答或形成Th2应答的方法，其包括以下步骤-提供欲对口腔病原体形成抗体应答或Th2应答的个体；-评价所述个体以确定所述个体的口腔组织是否发炎；-在评价表明所述个体的口腔组织没有发炎的情况下，用口腔病原体免疫个体，从而在所述个体中形成对口腔病原体的抗体应答或Th2应答。在一实施方案中，用于在口腔组织发炎的个体中形成对口腔病原体的抗体应答或形成对口腔病原体的Th2应答的免疫方案中提供了以下步骤，在形成对口腔病原体的抗体应答或Th2应答的个体免疫之前，将抗炎剂给予个体，从而使得口腔组织的炎症最小化或从口腔组织去除炎症。在另一实施方案中，提供了在用口腔病原体免疫时，使口腔组织发炎的个体形成对所述病原体的抗体应答或形成对所述病原体的Th2应答的方法，所述方法包括以下步骤，在用病原体免疫个体用于形成对口腔病原体的抗体应答或形成对口腔病原体的Th2应答之前，将抗炎剂给予个体，从而使得口腔组织的炎症最小化或从口腔组织去除炎症。在另一实施方案中，提供了在口腔组织发炎的个体中形成对口腔病原体的抗体应答或形成对口腔病原体的Th2应答的方法，包括以下步骤-提供口腔组织发炎的个体；-对所述个体实施治疗，从而从口腔组织去除炎症；此后，-用口腔病原体免疫个体，从而在个体中形成对病原体的抗体应答或者形成对病原体的Th2应答。在上述实施方案中，在口腔组织没有发炎或炎症临床症状不显或无临床症状时，提供免疫。通常，免疫所形成的免疫应答主要是Th2应答，尽管其可能含有可检测的Thl应答成分。通常，相关的炎症是慢性牙周炎，尤其是与牙龈卟啉单胞菌感染有关的牙周炎。如果牙周炎与牙龈卟啉单胞菌感染相关，通常，用于免疫的免疫原是牙龈卟啉单胞菌细胞、碎片、代谢物或从其衍生的重组产物，例如本文所述的嵌合肽(尤其是KASl-KsAU KAS2-KLAI)。通常，本文限定的抗炎剂或抗微生物剂包括抗炎化合物、抗生素和抗生物膜剂中的一种或多种，或由抗炎化合物、抗生素和抗生物膜剂中的一种或多种组成，这些的实例将在本文进行更详细的描述。除了上下文指定并非如此，本文所用的术语“包含(comprise) ”以及该术语的变型诸如“包含(comprising) ”、“包含(comprises) ”和“包含(comprised) ”并非意图排除其它添加剂、组分、整数或步骤。图I显示了重组Kgp蛋白的SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色。泳道1=KAS2_KLA1、泳道2=KLA1、泳道3=KsAl、泳道4=KASl_KsAl。分子量标记表示为kDa。图2显示了 KAS2肽和福尔马林杀死的牙龈卟啉单胞菌W50细胞的抗体识别。(A)在ELISA中，用针对福尔马林杀死的牙龈卟啉单胞菌W50细胞产生的抗血清(FK-W50)、重 组蛋白KASl-KsAl、KAS2-KLA1和合成的KAS2-DT缀合物以及PBS探测KAS2肽。(B)在ELISA中，用针对福尔马林杀死的牙龈卟啉单胞菌W50细胞产生的抗血清(FK-W50)、重组蛋白KASl-KsAl、KAS2-KLA1、KLAl和PBS探测福尔马林杀死的牙龈卟啉单胞菌W50细胞。将抗体应答表示为减去背景水平的两倍而获得的ELISA滴度OD415,每个滴度代表3个值的平均值土标准差。图3显示了牙龈卟啉单胞菌诱导的、用重组蛋白和重组嵌合蛋白、福尔马林杀死的牙龈卟啉单胞菌和单独的佐剂(PBS，IFA)免疫的小鼠或未经口感染的(未激发的)小鼠的上颌骨臼齿的水平骨丧失。在本图中，将KAS2-KLA1表示为AS2-LA1、KLAl表示为LA1、KASl-KsAl表示为ASl_sAl、KsAl表示为sAl。骨丧失的检测结果是从左上颌骨和右上颌骨的每个上颌骨白齿的颊侧的牙骨质釉质界(CEJ)至牙槽嵴(ABC)以平方毫米(mm2)为单位测量的面积的平均值。通过Levene方差齐性检验数据为正态分布并表示为平均值(n=12)、单位为mm2，并用单因素方差分析和Dunnett T3检验进行分析。*表明该组的骨丧失显著少于对照组(感染的)(P〈0. 001)，f表明该组的骨丧失显著多于AS2-LA1组(P〈0. 001)。图4显示了牙周炎模型中被免疫的小鼠的血清抗体亚类应答。在ELISA中使用来自用重组蛋白KsAl、KLA1、KASl-KsAl和KAS2-KLA1及福尔马林杀死的牙龈卟啉单胞菌菌株W50免疫的小鼠的血清(A为口腔接种之前、B为口腔接种之后)，用福尔马林杀死的牙銀卟啉单胞菌菌株W50作为吸附抗原。将抗体应答IgG (黑色柱)、IgGl (灰色柱)、IgG2a(白色柱)、IgG2b (横条纹柱)、IgG3(斜条纹柱)表示为减去背景水平而获得的ELISA滴度(log2)，每个滴度代表3个值的平均值土标准差。图5显不了对于代表KAS2肽序列433-468的重叠(overlapping)肽的肽特异性抗体反应性的PEPSCAN分析。(A)用KASl-KsAl (白色柱)抗血清、KAS2-KLA1 (黑色柱)抗血清探测的KAS2重叠肽(步移为1，重叠为7)。(B)用KAS2-DT缀合物抗血清探测的KAS2重叠肽(步移，重叠为7)。每个柱显示抗体反应性(在415nm处的光密度)。图6.嵌合体AS2-LA1在远交系小鼠中诱导识别牙龈卟啉单胞菌全细胞和RgpA-Kgp复合物的抗体应答。用嵌合体AS2-LA1 (50mg/小鼠)免疫CDl远交系小鼠，并将收集的血清用在ELISA中，用AS2-LA1(A)、福尔马林杀死的牙龈卟啉单胞菌菌株W50 (B)和RgpA-Kgp复合物(C)作为吸附抗原。在本图中，将KAS2-KLA1表示为AS2-LA1。测定对于每种抗原的每种免疫球蛋白同型的滴度，并将数据表示为减去背景水平的两倍而获得的ELISA滴度(‘000)，每个滴度代表3个值的平均值土标准差。图7. Kgp 蛋白酶的蛋白模型。KAS2[Asn433-Lys468] (A)、KAS4[Asp388_Val395](B)、KAS5[Asn510-Asp516] (C)和 KAS6[Ile570-Tyr580](D)。发明详述下面将详细提及本发明的一些实施方案。尽管本发明将结合实施方案进行描述，但是应当理解，本发明并非将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明意图覆盖所有可选方案、修改和等同项，这些可以包括在如权利要求所限定的本发明的范围内。本领域技术人员应当认识到，与本文所述方法相似或等同的很多方法和材料都可以用于实施本发明。本发明并没有以任何方式受限于所述的方法和材料。应当理解，本说明书中所公开和定义的发明适用于所提及的或从全文或附图中显 而易见的两个或更多个单独特征的所有可选的组合。所有这些不同的组合构成本发明各个可选方面。除了上下文指定并非如此，本文所用的术语“包含(comprise) ”以及该术语的变型诸如“包含(comprising) ”、“包含(comprises) ”和“包含(comprised) ”并非意图排除其它添加剂、组分、整数或步骤。发明人已经发现，可以在组织中提供免疫力过继转移之前或在组织中激发免疫应答的同时，通过从口腔组织去除几乎所有的炎性刺激物来获得提高对感染的应答，尤其是提高抗体应答。当它提供用于口腔组织疾病的预防和/或治疗的情况下，甚至用于由微生物病原体的口腔组织感染而在其它解剖分区出现的疾病的预防和/或治疗的情况下，该发现尤其有用。因此，在某些实施方案中，提供了降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度的方法，所述疾病或病症是与个体口腔组织中微生物病原体的存在相关的疾病或病症，所述方法包括-治疗个体，从而提供从所述个体的口腔组织去除几乎所有微生物和其碎片的状态；此后，-为所述个体提供抗体，所述抗体用于保护所述个体免受微生物病原体侵袭，口腔组织中所述微生物病原体的存在与疾病或病症相关；从而降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度。在一实施方案中，通过给予所述个体免疫原在所述个体中提供抗体，所述免疫原用于保护所述个体免于微生物病原体侵袭。在一实施方案中，以协同有效量提供用于治疗个体的抗微生物组合物和免疫原，从而提供从所述个体的口腔组织去除几乎所有微生物或其片段的状态。通常，本文提及的个体是动物，尤其是哺乳动物。在一实施方案中，哺乳动物是人。在某些实施方案中，哺乳动物可以是驯养动物或养殖动物。驯养动物或养殖动物的实例包括马、山羊、猪以及诸如牛和绵羊的家畜。在某些实施方案中，动物是诸如狗、猫、兔或豚鼠的伴生动物。I.定义短语‘从口腔组织去除几乎所有微生物和其碎片’通常是指提供这样的状态，在该状态中，以足以从组织清除炎性刺激物的量清除微生物或其碎片或代谢物，进而基本上减弱或最小化所述组织中炎症的一种或多种症状。如果相关个体患有由慢性感染造成的慢性组织炎症，情况尤其如此。通常，焦点在于最小化组织炎症。因此，应当理解，在相关处理步骤之后仍然保留一些微生物或其碎片或代谢物。在其它实施方案中，如果个体没有发炎的组织，则短语‘从口腔组织去除几乎所有微生物和其碎片’是指提供这样的状态，其将微生物或其碎片和代谢物的累积基本上阻止在会引起炎症的量内。如果用于治疗的个体是正常的或在其它方面对于疾病或病症是无临床症状的，情况尤其如此。同样应用于手术或牙科干预已去除微生物且其目标是确保提供这样的状态，在该状态中，将微生物的累积基本上阻止在会引起炎症的量内。在这些实施方案中，当焦点是阻止可能引起炎症的微生物的量的累积时，应当理解，一些微生物或其碎片和由其产生的代谢物在相关处理步骤之后仍可能累积。短语‘降低疾病或病症的发病率’通常是指使个体发展至完全活性形式的疾病或病症的可能性最小化，所述个体可以是正常的或无临床症状的个体，或具有早期形式的疾病或病症的个体。在某些实施方案中，所述短语是指预防特定个体发展至完全活性形式的疾病或病症。 短语‘降低疾病或病症的严重程度’通常是指使疾病或病症的一种或多种症状或表现最小化。在某些实施方案中，所述短语是指治疗患有疾病或病症的个体。‘免疫原’通常是指能够激发或引发对抗原的免疫应答，优选体液或抗体应答，例如Th2应答的分子。免疫原的实例包括肽和相关的蛋白。短语‘协同有效量’通常是指提供的治疗或预防或保护效应大于组合物或免疫原单独使用时每种可达到的效应的抗微生物组合物和免疫原的量。在一实施方案中，抗微生物组合物和免疫原的协同有效量加强了所述组合物和免疫原之间的新的作用关系，进而所述免疫原的保护或治疗效应远大于向发炎组织单独施加免疫原时可以达到的效应。通常，微生物组合物和免疫原的协同有效量提供了比单独使用免疫原可以实现的对微生物病原体更高的滴度和/或更高亲和力的抗体应答。短语‘治疗有效量’通常是指能够⑴治疗特定疾病、病症或失调，( )减弱、减轻或消除特定疾病、病症或病症的一种或多种症状，或(iii)延迟本文所述的特定疾病、病症或失调的一种或多种症状发作的本发明化合物的量。词语‘治疗(treat) ’或‘治疗(treatment) ’是指治疗性处理，其目的是减慢(减轻)不希望的生理学变化或失调。为了本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于，无论可检测地或不可检测地，缓解症状、减轻疾病的程度、稳定(即不恶化)疾病的状态、延迟或减慢疾病进程、改善或缓和疾病状态以及暂时康复(不管是部分还是全部)。‘治疗(treatment) ’还可以表示，与没有接受治疗的预期存活相比，延长存活。治疗可以并不必然导致感染的完全清除，但是可以降低或最小化感染的并发症和副作用以及感染进程。可以通过个体的体检、细胞生理学、血清学DNA或mRNA检测技术来监测治疗是否成功。词语‘预防(prevent) ’和‘预防(prevention) ’通常是指用于保护或阻止患有特定感染相关并发症的个体免于发展成该并发症的预防(prophylactic)或阻止(preventative)措施。需要预防的个体包括具有感染的个体。短语‘药学上可接受的’表示物质或组合物必须在化学和/或毒理学上与制剂包含的其它组分和/或随之进行治疗的哺乳动物相容。术语‘药品说明书’用来指治疗产品的商业包装中常规包含的说明书，其含有与适应症、使用、剂量、给予、有关这类治疗产品使用的禁忌和/或警告的信息。，Thl应答通常是指涉及细胞因子如Y干扰素和TNF的应答。Th2应答通常是指涉及细胞因子如白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素_10、白介素-13等的应答。 2.治疗方法本发明的方法广泛适用于个体，包括对于所述疾病或病症无临床症状的个体。这些个体的口腔或其它组织中没有疾病症状。具体而言，这些个体可以未出现粘膜或其它口腔组织的炎症。在一实施方案中，在随机选择的一群个体的情况下，这些个体的口腔中可以具有正常的相对多的微生物病原体。在其它实施方案中，个体显示出口腔组织或其它解剖分区的疾病或病症的亚临床或临床症状。所述疾病或病症的症状可以显示在所述个体的口腔组织中。可以出现急性炎症的标志包括血浆和白细胞从血液进入受损组织的移动增加。还可以出现牙龈急性感染的临床征象，包括发红(红)、灼热(热度增加)、肿胀(膨胀)、痛(dolor)(疼痛)和机能丧失(功能丧失)。慢性炎症可以由白细胞细胞(单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞)浸润表征。可以观察到组织和骨丧失。炎症的实例包括，唇炎、牙龈炎、舌炎和口炎。在一实施方案中，个体可以具有发炎的粘膜组织或其它口腔组织。例如，个体可以出现口腔组织的急性炎症。这些个体的实例包括已经进行了牙科手术或口腔手术的个体，包括牙周清理术、洗牙和牙根平整术.在其它实施方案中，个体可以出现口腔组织的慢性炎症。在一个实例中，个体可以出现牙龈炎，牙槽骨吸收和基于牙齿与牙槽骨的胶原蛋白连接的进行性丧失的最终的牙齿脱落。粘膜组织或相关口腔组织的其它损伤是可能的。在一实施方案中，疾病或病症是口腔组织的疾病或病症。慢性牙周炎是特别重要的一个实例。其它包括以正如猩红热、口疮性口炎、脓性肉芽肿、白喉、结核病、梅毒、放射菌病、念珠菌病、疱疹性口炎中的口腔粘膜的损伤表征的疾病或病症。应当理解，疾病或病症可以是除口腔组织之外的组织的疾病或病症，诸如器官或系统，例如心血管系统。在一实施方案中，疾病或病症是心血管疾病。本发明适用于一系列的微生物病原体，尤其是感染口腔组织的微生物病原体。在一实施方案中，病原体选自细菌、病毒和真菌。特别优选的细菌选自牙銀B卜啉单胞菌、齿垢密螺旋体(Treponema denticola)、福赛斯坦纳菌(Tannerella forsythia)。病原体的其它实例如以下表A所示。表A


本发明涉及降低个体中疾病或病症的发病率或严重程度的方法，所述疾病或病症是与个体口腔组织中微生物病原体的存在相关的疾病或病症，并且包括抗微生物病原体的抗微生物剂和免疫原形成的组合物的使用。