专利名称：一种苦碟子黄酮苷元的制备方法及应用的制作方法抱茎苦荬菜，俗称苦碟子、满天星等，为菊科苦荬菜属抱茎苦荬菜[Ixeris sonchifolia (Bge)Hance]的两年生干燥地上部分，主产于我国东北、华北等地。《卫生部药品标准内蒙古分册》记载，抱茎苦荬菜味苦、辛，锐、凉，具开胃，解毒，接骨，去痞作用，用于不思饮食，解毒，骨折，牙痛。民间主要用于治疗阑尾炎、扁桃体炎、无名肿痛等症。对苦碟子药材及制剂的研究近几年有了很大的发展，据文献报道抱茎苦荬菜含有黄酮、腺苷、内酯等化学成分。药理研究表明黄酮类成分是其中的主要活性成分类别之一， 化学研究表明抱茎苦荬菜黄酮类成分以木犀草素一 7-0-i3_D —葡萄糖醛酸苷、木犀草素 7-0- β -D葡萄糖苷、芹菜素7-0- β -D葡萄糖醛酸苷、芹菜素7-0- β -D葡萄糖苷以及其他数种黄酮类成分含量较高。目前研究苦碟子有效成分的方法可归纳为以下几种1、先用水或醇提取，将回收溶剂后的提取物混悬于水中，分别用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇提取，划分成几个提取部分。再用硅胶柱或高效液相半制备柱层析、分离成单组分物质。 上述方法是试验室研究单一黄酮成分的常用分析方法，不适合医药工业化生产抱茎苦荬菜总黄酮提取物。2、申请号2005100^836. 1的发明专利“木犀草素-7_0_ β-D吡喃葡萄糖醛酸苷及其提取方法和用途”，公开了从抱茎苦荬菜药材中提取分离木犀草素-7-0-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷的一种方法，先后采用钙-硫法得到粗黄酮提取物，再经过硅胶柱层析法和HPLC分离制备，得黄色无定型粉末。该制备方法仅仅适合实验室分析型工艺，获得的产品数量为毫微克级，且操作复杂，产品收率低，成本大，不适合工业化生产。3、申请号200610072744. X的发明专利申请“苦碟子总黄酮及其制备方法和含它的冻干粉针与质量控制方法”。公开了苦碟子提取物的制备方法，采用反复醇液调酸调碱处理法，由于黄酮类化合物在碱性溶液中不稳定，易发生氧化和开环反应，且苦碟子中的大量弱酸性黄酮类化合物在酸性溶液中不易析出，致使收率低，大量活性成分流失。同时，该专利虽然提供了提取物木犀草素7-0-β -D —葡萄糖醛酸苷含量仅为8%左右。4、申请号200410078168. 0的发明专利“一种含有抱茎苦荬菜提取物的制剂及其制备方法”，公开了一种含总黄酮成分不少于80，其中黄酮木犀草素7 - 0 一葡萄糖醛酸不少于对，腺苷不少于0. 18的抱茎苦荬菜提取物及制剂，采用的是提取液加絮凝剂或直接进行柱层析，一方面絮凝工艺操作复杂，产品收率低，且易带入非药物性杂质，另一方面，简单的水或醇处理的提取液进行柱层析，杂质含量多，影响分离效果，致使生产负荷大，而且成品含量低。5、苦碟子传统用法和理论均认为苦碟子黄酮苷为其主要的有效成分，加工方法多集中于黄酮苷的研究。但随着临床应用和中药药理模型的验证，苦碟子黄酮苷元类物质的药理作用越来越受到重视，如苦碟子主要黄酮苷元芹菜素和木犀草素被证明具有抗菌消炎、 抗病毒、抗感染、抗凝血、清除自由基与抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用，试验证明木犀草素和芹菜素具有抑制裸鼠移植瘤、多种肿瘤细胞体外生长的作用。苦碟子生药中含有大量的黄酮苷类化合物，而苷元类物质天然含量只有不到0.5%，将苦碟子黄酮苷提纯采用酸水解生产苦碟子黄酮苷元的工艺不仅产率很低，且存在不可避免的环保问题，因此寻找一种高效、环保、便捷的苦碟子黄酮苷元生产工艺就具有十分重要的现实意义和应用价值。本研究对水解效率很高的苦碟子自生酶催化水解黄酮苷做了系统的正交试验，结果表明，在试验考察范围内，以药材为水解底物，通过自生酶水解作用，可使苦碟子黄酮苷水解率达到90%以上，且药材在水解过程中未发生霉变的现象，证明与酸水解相比，通过自生酶催化水解苦碟子黄酮苷生产苦碟子黄酮苷元类物质，是一种环保、经济、可行的方法。
本发明的目的是提供一种苦碟子总黄酮苷元的制备方法。本发明的另一个目的是提供含有苦碟子总黄酮苷元的中药制剂，用于治疗冠心病、心绞痛、肿瘤和脑梗塞的用途。虽然许多文献报道抱茎苦荬菜用于治疗心脑血管疾病的主要化学成分为总黄酮苷类化合物，但是发明人经过对苦碟子总黄酮苷体内药动学实验证明，抱茎苦荬菜主要用于治疗心脑血管疾病的有效成分为抱茎苦荬菜中黄酮苷元类化合物。药理试验和临床观察研究结果表明，用苦碟子总黄酮苷元提取物制成的苦碟子注射液(简称苦碟子A)与苦碟子总黄酮苷制成的苦碟子注射液(简称苦碟子B)比较，差异非常显著，P<0. 001。本发明在于采用新的酶解工艺以后，获得高纯度苦碟子总黄酮苷元提取物，属于抱茎苦荬菜中新的有效部位群，主要以木犀草素和芹菜素为主，两者总含量超过总固体量的50%以上，质量稳定，疗效确切，安全可控，符合制备中药注射剂的要求。药效学和临床试验结果表明，苦碟子总黄酮苷元类成分制成的苦碟子注射液有明显的治疗冠心病、心绞痛和脑梗塞的药理作用，为进一步提高苦碟子注射液的产品质量，提供了质量更好的，活性更强的，安全性更高的新的物质基础和生产工艺路线。本发明的目的是这样实现的一种苦碟子黄酮苷元的制备方法是将苦碟子粉碎成5—20目后，酶解。对酶解后的药材进行提取得苦碟子黄酮苷元重量百分含量为20%以上的粗提物浸膏，再经大孔树脂柱色谱和溶剂重结晶法对苦碟子黄酮苷元粗提物进行纯化而得到苦碟子黄酮苷元纯品。苦碟子黄酮苷元可作为原料药应用于各种相关疾病的药剂中。所述酶解是依据苦碟子中自身的水解酶酶解，而不需要另外加入水解酶，酶解的条件是⑴水的用量苦碟子药材3 — 15倍；⑵酶解的温度35—50°C; (3)酶解时间为3. 0 — 18 小时。所述的苦碟子黄酮苷元含量为20%以上粗提物浸膏的制备方法，其特征是对酶解后药材的提取方法有两种(1)醇提法将酶解液浓缩，加乙醇配成醇浓度为60—80%溶液；回流提取2小时，滤过，再用60—80%醇水提取2—3次，合并提取液，经减压浓缩得苦碟子黄酮苷元粗提物浸膏；( 渗漉提取法酶解液过滤，乙酸乙酯萃取，得苦碟子黄酮苷元粗提物浸膏(A)，酶解后药材，采用60—80%醇水渗漉，减压回收乙醇，得苦碟子黄酮苷元粗提物浸膏(B)，浸膏(A)和浸膏(B)合并得总苦碟子黄酮苷元粗提取物浸膏，渗漉法的条件是总液量干药材重量的3-6倍；温度25— 35°C ；流量2 — 5L / IOmin0所述的硅胶柱色谱是指一次或多次柱层析，填充材料为大孔树脂AB-8，用量为样品的5—10倍量，洗脱剂为60-95%乙醇溶液。所述重结晶所用的溶剂是乙醇、丙酮和水中的一种或其混合物。所述的苦碟子黄酮苷元可作为原料药应用于各种相关疾病的药剂中，包括口服和注射各种剂型，尤其用于新型苦碟子注射液的制备。所述的苦碟子黄酮苷元的纯度大于或等于50 % (重量比)，收率按药材计算为2 % (重量比)以上。由于苦碟子黄酮苷元具有多方面的药理作用，本专利所得的苦碟子黄酮苷元可以单独或与其它药物组合作为原料药应用于各种相关疾病的药剂中。首先本发明公开了一种利用苦碟子中本身存在的水解酶水解苦碟子苷使之转化为其黄酮苷元的方法。具体过程包括药材的粉碎和酶解两部单元操作，方法操作简单，成本低，易于工业化生产使用。由于酶解条件温和，苦碟子黄酮苷元的内酯环不会开环产生旋光发生改变的产物。图1是对照品木樨草素水解前GPLC图。图2是抱茎苦荬菜酶解前样品HPLC图。图3是抱茎苦荬菜酶解后样品HPLC图。 图4是木犀草素标准曲线图。其次本发明公开了苦碟子黄酮苷元的提取方法。对酶解后的药材可以采用以含水醇提取或二氧化碳超临界流体提取的方法。酶解条件的筛选
试验设计根据预试验结果，选取水量、温度和时间三个因素，各取三个水平，选用 Z9 (3)正交表进行试验。表1是因素水平表


一种苦碟子黄酮苷元的制备方法，其特征在于苦碟子粉碎后，依据自身固有的水解酶酶解，对酶解后的药材进行提取得苦碟子黄酮苷元，重量百分含量为20％以上的粗提物浸膏，再经大孔树脂柱色谱和溶剂重结晶法对苦碟子黄酮苷元粗提物进行纯化而得到苦碟子黄酮苷元提取物，黄酮苷元含量大于80%，苦碟子黄酮苷元可作为原料药应用于各种相关疾病的药剂中。本发明在于采用新的酶解工艺以后，获得高纯度苦碟子总黄酮苷元提取物，属于抱茎苦荬菜中新的有效部位群，主要以木犀草素和芹菜素为主，两者总含量超过总固体量的50%以上，质量稳定，疗效确切，安全可控，符合制备中药注射剂的要求。