一种含洛伐他汀组织工程支架的制备方法[0002]组织工程支架主要用于组织修复与再生。本发明方法采用高压静电纺丝法制备含洛伐他汀皮肤组织工程支架，是一种利用高压静电场提供的电场力作为驱动力，对目标液体进行拉伸，经收集、干燥后获得纤维网状皮肤组织工程支架的制备方法。这种方法简单、有效，可制备纤维直径从I nm~100 μ m、洛伐他汀携载量从0.1%。~50%的纤维网状皮肤组织工程支架。
[0003]本发明的目的是提供一种含洛伐他汀皮肤组织工程支架的制备方法。该方法适应性强，工艺简单、成本低廉 、重复性好。制得的含洛伐他汀皮肤组织工程支架具有三维纤维网状结构，对洛伐他汀的包封率高、药物活性保持良好。可通过调节制备参数使制得的含洛伐他汀皮肤组织工程支架的纤维直径从I nm~100 μ m、洛伐他汀携载量从0.1 %。~50%范围内可控。[0004]本发明解决其技术问题，所采用的技术方案是:一种含洛伐他汀皮肤组织工程支架的制备方法，其步骤是: A、将洛伐他汀和高分子材料共同溶解制成均一性溶液，洛伐他汀与高分子材料的质量比在1: 9999~I之间，溶液A粘度在I~IO5 mPa.s之间； B、将A步的溶液以高压静电纺丝法进行纺丝、收集、干燥后得到含洛伐他汀皮肤组织工程支架，高压静电纺丝装置喷嘴口径在0.05~5 mm之间、喷射速度在I μ L/min~I mL/min之间、电压在0.5~30 kV之间、收集距离在I~50 cm之间。[0005]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
一、本发明将洛伐他汀和高分子材料共同溶解于挥发性有机溶剂制成均一性溶液，采用高压静电纺丝的方式，制备出含洛伐他汀的皮肤组织工程支架。实验测试证明，本发明制得的含洛伐他汀皮肤组织工程支架可显著性提高血管内皮细胞的增殖；
二、本发明制备的含洛伐他汀组织工程支架中洛伐他汀与高分子材料均匀混合，通过调节高分子材料的种类、分子量与含量可达到调节含洛伐他汀组织工程支架的组成纤维的直径从I nm~100 μ m可控，达到长效、可控、缓慢释放洛伐他汀的目的；
三、本发明与普通组织工程支架制备技术相比具有独特优势:(1)支架具有三维纤维网状结构，与细胞外基质结构相似，有利于组织再生与修复；(2)支架可通过持续释放洛伐他汀，在组织再生与修复过程中促进血管内皮细胞增殖、血管新生；(3)工艺简单、适应性强、无需特殊设备、成本低廉、重复性好；(4)材料选择范围广，很有可能实现工业化生产。
[0006]上述A步中的高分子材料为淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、蛋白质、多糖与杂多糖、丙烯酸类均聚物和共聚物、乙烯基类均聚物和共聚物、环氧乙烷类均聚物和共聚物、聚酯、聚氨基酸、偶氮聚合物、离子交换树脂的一种或一种以上的混合物。
[0007]以上的高分子材料为现有成熟的药用高分子材料，用其制备组织工程支架工艺简单、成本低廉、重复性好、安全性高。



[0008]图1是本发明实施例一的方法制得的洛伐他汀-聚乳酸支架的扫描电镜观察图。
[0009]图2是本发明实施例三的方法制得的洛伐他汀-聚异丁烯支架的扫描电镜观察图。
[0010]图3是本发明实施例四的方法制得的洛伐他汀-聚氧乙烯支架的扫描电镜观察图。
[0011]图4是本发明实施例一的方法制得的洛伐他汀-聚乳酸支架用于皮肤修复过程中的促血管新生实验结果。
[0012]图5是不添加洛伐他汀，但其它条件与参数与实施一完全一样制得的聚乳酸支架作为皮肤修复过程中的促血管新生实验对照实例的结果。

[0013]下面结合附图和对本发明作进一步的详细说明。
[0014]实施例一
A、将洛伐他汀与高分子材料聚乳酸共同溶解于氯仿中形成均一性溶液，洛伐他汀与聚乳酸比例为1:500，溶液粘度为100 m.Ps ;
B、将洛伐他汀与聚乳酸的混合溶液A以高压静电纺丝法进行喷射，喷嘴直径为0.4 mm,喷射速度为0.05 mL/min,电压强度为20 kV，接收距离为15 cm,收集干燥后得到的含洛伐他汀组织工程支架为洛伐他汀-聚乳酸支架。
[0015]实施例二
本实施例与实施例一相同，所不同的仅仅是，步骤A中的高分子材料为聚异丁烯；步骤B中的高压静电纺丝法喷嘴直径为0.5 mm,喷射速度为0.10 mL/min,电压强度为15 kV，接收距离为18 cm，得到的含洛伐他汀组织工程支架为洛伐他汀-聚异丁烯支架。
[0016]实施例三
本实施例与实施例一相同，所不同的仅仅是，步骤A中的高分子材料为聚氧乙烯，溶液A粘度为500 m.Ps ;步骤B中的高压静电纺丝法喷嘴直径为0.9 mm,喷射速度为0.15 mL/min,电压强度为13 kV，接收距离为10 cm，得到的含洛伐他汀组织工程支架为洛伐他汀-聚氧乙烯支架。
[0017]本发明方法中的洛伐他汀与高分子材料之间的比例也无特殊要求，只要洛伐他汀的量足以产生疗效且不致于产生毒性即可。其数值根据现有洛伐他汀的临床使用量确定。
[0018]本发明方法A步中的溶剂不局限于以上实施例中所使用的溶剂，只要是能够溶解所选高分子材料的溶剂均可。
[0019] 以下实验证明，采用本发明方法可以制备组成纤维从I nm~100 μ m范围内可控的含洛伐他汀组织工程支架，且含洛伐他汀组织工程支架可在组织修复过程中促进血管新生。[0020]一、含洛伐他汀组织工程支架扫描电镜观察实验
使用实施例一、二、三的方法分别制得的含洛伐他汀组织工程支架进行扫描电镜观察实验。实验方法:将I mg含洛伐他汀组织工程支架粘于扫描电镜专用铜靶，喷金后以扫描电镜观察含洛伐他汀组织工程支架的组成纤维直径。
[0021]扫描电镜观察含洛伐他汀组织工程支架的组成纤维直径结果分别见图1、2、3。其中图1、2、3分别为洛伐他汀-聚乳酸支架、洛伐他汀-聚异丁烯支架、洛伐他汀-聚氧乙烯支架的扫描电镜观察组成纤维直径结果。
[0022]从图1可以看出:实施例一的洛伐他汀-聚乳酸支架的组成纤维直径为469.8±37.8 nm。从图2可以看出:实施例二的洛伐他汀-聚异丁烯支架的组成纤维直径为185.6±33.8 nm。从图3可以看出:实施例三的洛伐他汀_聚氧乙烯支架的组成纤维直径为 2.85±0.51 μ mo
[0023]二、含洛伐他汀组织工程支架促皮肤修复过程中血管新生实验
使用实施例一中的方法制得的洛伐他汀-聚乳酸支架用于皮肤修复过程中的促血管新生实验；同时，不添加洛伐他汀，但其它条件与参数与实施一完全一样制得的聚乳酸支架作为对照实例。实验方法:分别将10 mg洛伐他汀-聚乳酸支架与聚乳酸支架覆盖于大鼠全层皮肤缺损处，以手 术线三点缝合固定，3天后麻醉大鼠，取皮肤缺损处新生组织，多聚甲醛固定后，石蜡包埋，组织切片，以免疫组织化学染色法鉴定新生组织处血管内皮细胞增殖标志蛋白⑶105的表达情况。
[0024]促皮肤修复过程中血管新生结果见图3与图4，其中红圈标出的棕黄色部位显示血管内皮细胞增殖标志蛋白CD105阳性表达。
[0025]从图4可以看出:实施例一的洛伐他汀-聚乳酸支架在用于皮肤缺损修复时，修复组织中有大量血管内皮细胞增殖标志蛋白CD105阳性表达，显示出明显的促血管新生作用。从图5可以看出:未添加洛伐他汀的聚乳酸支架在用于皮肤缺损修复时，修复组织中没有血管内皮细胞增殖标志蛋白⑶105阳性表达，表明没有新生血管产生。