专利名称：姜黄色素在药物中的新用途的制作方法目前，国内外对姜黄(Curcuma longa L)提取的姜黄色素，作为食品添加剂是世界公认的食用色素、研究甚多。且世界卫生组织(WHO)联合国粮农组织(FAO)、欧洲共同体、美国、加拿大等国都许可使用。姜黄素作为药用研究的报导甚多，主要涉及降脂、CN143518A、利胆、抗癌、防癌、抗氧化、抗炎及抗菌等作用，但是关于姜黄提取物，包含姜黄素(curcumln)作为抗病毒性肝炎的药理、药效研究和临床应用研究则至今未见报道。
本发明提供的姜黄色素在用于制备急性病毒性肝炎或中毒性肝炎药物中的新用途，其中所述的姜黄色素是指从植物姜黄根茎中提取分离出的姜黄素单体化合物；或70％以上姜黄素单体化合物，与余量为脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素中的一种或两种单体化合物共同构成的一类黄色素总提取物，其结构式分别为 姜黄素 脱甲氧基姜黄素 双脱甲氧基姜黄素本发明姜黄色素的提取分离方法，是通过、确认植物姜黄(curcuma Longa L)品种，经粉碎→有机溶剂提取→粗提物→溶剂精制→纯品(姜黄色素总提取物，含姜黄素在70％以上)用含有姜黄素70％以上的总提取物(以下简称姜黄素)制成口服制剂。如胶囊每粒胶囊含姜黄色素总提取50mg用于治疗急性病毒性(黄疽及非黄疽性)肝炎或中毒性肝炎的用药。本发明为姜黄色素提供了一个新的应用领域，经过多年的基础药理、药效学研究，对姜黄素抗病毒性肝炎的作用，做了深入的研究，其目的是用中国传统的中药姜黄色素总提取物，开发一种用于治疗病毒性肝炎的药物，尤其是对急性病毒性肝炎、中毒性肝炎的有效药物。1、姜黄素在鸭体内鸭肝炎病毒急性感染的治疗效果试验该项试验由中国医学科学院医药生物技术研究所完成。本实验对姜黄素在鸭肝炎病毒感染鸭体内进行治疗试验验证效果。实验采用一日龄北京鸭静脉注射鸭肝炎病毒，7天后开始给鸭口服姜黄素，1天2次，给药10天(Bid×10)，观察药物对鸭的毒性和鸭血清鸭肝炎病毒DNACDHBV-DNA)的影响。实验表明，62.5mg/Kg，125mg/Kg，250mg/Kg组口服，1天2次10天，无毒性。125mg/Kg，250mg/Kg组均能降低DHBV感染鸭血清DHBV-DVA水平，与病毒对照组作统计分析比较，给药第5天(T5)和第10天(T10)，这两个剂量组三批实验重复至少有两批有显著(P＜0.05)或非常显著(P＜0.0)的差异。同时在停药第3天(P3)也有显著(P＜0.05)或非常显著(P＜0.01)的抑制效果。
结果还表明，姜黄素125mg/Kg，250mg/Kg，剂量对鸭血清中DHBV-DNA有明确的抑制作用，且有量效关系。
表1姜黄素在鸭体内对DHBV-DNA OD值的抑制作用
给药后不同时间(T5、T10、P3)OD值与同组给药前(T0)OD值比较(配对t检验)*P＜0.05，**P＜0.01。
表2姜黄素治疗组与病毒对照组在鸭体内对DHBV-DNA抑制率的比较
给药后不同时间DHBV-DNA抑制率分别与病毒对照组相同时间DHBV-DNA抑制率比较(成组t检验)，*P＜0.05，**P＜0.01。
2、姜黄素对乙肝病毒抗原产生的抑制作用方法Hep G2T1，细胞的生长条件，培养基为DMEM(Glbco)含10％胎牛血清(Glbco)，G-418(400ug/ml)青链毒素各100μg/ml，5％CO2，37℃条件下培养，姜黄素则溶于二甲基亚砜中，使用时可稀释在细胞生长液中，将细胞接种于48孔培养板3天后，换不同浓度含姜黄素的生长液，继续培养3天，然后取出培养上清液置-20℃保存，重复实验后，用ELISA法检测HBV抗原，检测HBsAg和HBeAg的试验盒由华美生物工程公司提供测定结果见表3。
表3姜黄素对HBsAg及HBeAg产生的抑制作用(％)
结果证实姜黄素在10μg/ml时对HepG2T1细胞，不产生细胞毒作用，而对HBsAg和HBeAg的抑制率可分别达66.1％和20％。
3、姜黄素对HBV-DNA聚合酶活性的抑制作用采用的方法是用HBV-DNAP阳性血清+抗HSB→离心沉淀HBV颗粒→加开壳剂使HBV-DNPA暴露→加姜黄素37℃30分钟→加酶作用底物→测定HBV-DNAP活性，结果见表4。
表4姜黄素对HBV-DNAP活性的抑制作用
结果显示姜黄素抑HBV抗原的表达可能与其有抑制HBV-DNAP的活性作用相关。
4、姜黄素的降酶退黄作用试验。
(1)姜黄素对D-氨基半乳糖胺所致小鼠肝损伤保护作用。
姜黄素口服给药3天，剂量20，100mg/Kg，对D-氨基半乳糖胺(800mg/Kg，ip)所致小鼠肝损伤的SGPT升高有一定的降低作用。(见表5)
表5姜黄素对小鼠Ga/N所致肝损伤的保护作用
(2)姜黄素对异硫氰酸(APIT)所致大鼠肝损伤的保护作用。
姜黄素口服药4天，剂量100、200mg/Kg，可使APIT(po，100mg/Kg)所致的大鼠肝损伤有明显的保护作用，可明显降低谷丙转氨酶，血清总胆红质和肝重系数。结果见表6。
表6姜黄素对大鼠实验性黄疸模型的作用
*与对照组比较P＜0.015、姜黄素的利胆作用试验方法，姜黄素对小鼠口服给药7次，剂量250，500mg/Kg，或对大鼠单次十二指肠给药，剂量100，250mg/Kg，显示有较好的利胆作用，如果见表7、8。
表7姜黄素对小鼠的利胆作用试验
表8姜黄素对大鼠的利胆作用试验
*与给药前胆汁分泌量比较P＜0.05，**P＜0.01括弧内数字为与给药前比较胆汁分泌量增加的％比。
6、姜黄素的毒性试验(A)急性毒性试验小鼠单次口服姜黄素10g/Kg，未见出现任何中毒症状。故推测其LD50应＞10g/Kg。
(B)长期毒性试验大鼠口服姜黄素500mg/Kg，共12周，狗口服姜黄素200mg/Kg，14周，对动物行为，毛色、食欲、血色素、红、白细胞、血小板数、白细胞分类、凝血时间、SGPT、SGOT、BUN、Cr、AKP、BLS、Ch、TP、A、SB、尿液检查(尿糖、尿蛋白、镜检)ECK、器官系数，等指标的检测，均未发现异常，仅雄性大鼠体重增长稍有影响，其余未见变化。


姜黄色素在药物中的新用途，特别是用于制备急性病毒性肝炎或中毒性肝炎的药物中。本发明的目的是拓展姜黄色素的用途，本发明所述的姜黄色素是指从植物姜黄根茎中提取分离出的姜黄素单体化合物；或70％以上姜黄素单体化合物，与余量为脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素中的一种或两种单体化合物共同构成的一类姜黄色素总提取物制成口服制剂，如胶囊用于治疗急性病毒性(黄疽及非黄疽性)肝炎或中毒性肝炎的用药。本发明为姜黄色素提供了一个新的应用领域，经过多年的基础药理、药效学研究，对姜黄素抗病毒性肝炎的作用，做了深入的研究，其目的是用中国传统的中药姜黄色素总提取物，开发一种用于治疗急性病毒性肝炎、中毒性肝炎的有效药物。