专利名称：干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂及其制备方法与应用的制作方法土地盐碱化问题与人类活动，特别是农业灌溉密切相关。当今世界人ロ膨胀、土地退化、可利用淡水资源匮乏，这些问题促使人们将注意力转向大片分布的盐碱荒地的开发利用。这样不仅可以扩大可耕地面积，增加单位产量，缓解粮食危机，还可改善生态环境。嗜盐碱细菌长期在盐碱生境下生存和进化，形成了一些极为特殊的结构和生理机制，并可产生ー些独特的代谢产物。其产生的相关酶类和特殊的生物活性物质，在エ业上有重要利用价值，为人类做出了巨大的贡献。嗜盐碱菌的研究起步较晩，上世纪70年代后期，人们从非洲碱湖中分离出极端嗜盐嗜碱菌，其研究才真正开展起来，目前研究正日益深入。我国西北干旱绿洲地区，盐碱地、盐碱滩占全部土地面积的40%，该地区地下水位高，土壤盐碱较重且盐碱地分布广泛，是我国西北干旱地区生物多祥性保护的关键区域，同时具有丰富的嗜盐碱细菌资源。在盐碱地改良方面，利用微生物提高土壌肥力，改善植物根际环境，提高植物的耐盐碱性越来越受到重视。本发明是基于干旱荒漠重盐碱地具有的土著嗜盐碱细菌资源为基础，经过大量的试验筛选，研发出了干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂。
本发明的目的是提供ー种利用微生物提高土壌肥力，改善植物根际环境，提高植物的耐盐性的干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂及其制备方法与应用。本发明的干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂，是由17种微生物菌株组成；所述17种微生物菌株(个/毫升)分别为:1. IXlO8-L 7X IO8产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) CGMCC 1. 1827、7·2Χ107-8·5Χ107 乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus) CGMCC 1. 2004、2. IX 108-2. 7X IO8 巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CGMCC 1.459、 4. 7X 107-6. 2X 107 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CGMCC 1. 1625、7. 4X 107_8. 7X IO7 地衣芽孢杆菌(Bacillus 1 ichen if ormis) CGMCC 1· 91、3· 3X 108_4· 2X IO8 嗜盐盐单胞菌(Halomonas halophila) CGMCC 1. 2316、8. 1 X IO7-L 5 X IO8 棕色固氮菌 (Azotobacter vinelandii)CGMCC 1. 1007、1. 2X IO8-L 9X IO8 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is) CGMCC 1· 1414、5· 3 X 106_6· 1 X IO6 稻黄杆菌(Flavobacterium oryzae) CGMCC 1. 1585、7· 4Χ106-8· 6X106 近平滑假丝酵母(Candida parapsi Ios is) CGMCC 2. 1768、4. 7X 107-6. 4X 107 弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)ACCC 41067、 8. 2X IO7-L 4X IO8 木霉菌(Trichoderma sp. )ACCC 31526、3· 5X 107_6· 8X IO7 土壤芽孢杆菌(Bacillus edaphicus)ACCC 03232、3. 4X 108_6. 1 X IO8 褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)ACCC 01077、2· 2X 108_3· 9X IO8 排硫杆菌(Thiobacillus thioparus)ACCC 1(^88、9·7Χ107-2·5Χ108 胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)ACCC 10095 和7·8Χ10 -9·3Χ107 荧光假单胞杆菌(Pseudomonas f luorescens) ACCC 10040。本发明所述的干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂的制备方法，包括将产碱假单胞胃(Pseudomonas alcaligenes)CGMCC 1.1827、乙 丐ホ云カホ干胃(Acinetobacter calcoaceticus) CGMCC 1. 2004、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium) CGMCC1. 459、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CGMCC 1. 1625、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) CGMCC 1.91、嗜盐盐单胞菌(Halomonas halophila)CGMCC1. 2316、棕色固氮菌 (Azotobacter vinelandii) CGMCC 1. 1007、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is) CGMCC 1.1414、稻黄杆菌(Flavobacterium oryzae)CGMCC 1· 1585、近平滑假丝酵母(Candida parapsiIosis)CGMCC 2. 1768>^ffi, ^(Thermomonospora curvata)ACCC 41067、 8· 2Χ107-1· 4X108 木霉菌(Trichoderma sp. )ACCC 31526、土壤芽孢杆菌(Bacillus edaphicus)ACCC03232、褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)ACCC 01077 排硫杆菌 (Thiobacillus thioparus)ACCC 1(^88、胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)ACCC 10095和荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens) ACCC 10040在无菌条件下分别接种于各自的基础培养基中，接种量为2 % -5 %，振荡培养，100-120r/min,温度观_32°C， 18-24h培养后，分别获得17种菌株的菌液，所述17种菌液等比例混合，经观_32で、18_24h 的通气搅拌发酵培养，形成了干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂；所述发酵培养的培养基包含 (NH4)2S04l-2g, H3PO4O. 5-lml 质量百分量为 2% 的淀粉水 1L，pH 至 7. 5-9. O。其中，所述各自的基础培养基分别为(1)产碱假单胞菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、弯曲高温单孢菌、土壌芽孢杆菌、排硫杆菌、荧光假单胞杆菌的基础培养基包含蛋白胨10g，牛肉提取物 3g，NaCl 5g，琼脂 15g，蒸馏水 1L，pH 7. O ；(2)乙酸钙不动杆菌的基础培养基包含酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，琼脂 15g，蒸馏水 lL，pH 7.0 ；(3)棕色固氮菌、褐球固氮菌的基础培养基包含KH2PO4 0. 2g, K2HPO4 0. 8g, MgSO4 ·7Η20 0. 2g, CaSO4 ·2Η20 0. lg，FeCl3 0. 005g, Na2MoO4 ·2Η20 0. 02g，酵母提取物 0. 5g, 甘露醇20g,琼脂15g，蒸馏水1L，pH 7. 2 ；(4)枯草芽孢杆菌的基础培养基包含牛肉提取物5g，蛋白胨10g，酵母提取物5g， 葡萄糖5g, NaCl 5g，琼脂15g，蒸馏水1L，pH 7. O ；(5)稻黄杆菌的基础培养基包含蔗糖 15g，K2HPO4 0. 8g，KH2PO4 0. 2g，MgSO4 · 7H20 0. 2g, NaCl 0. 2g, CaCl2 0. 05g, MnSO4 0. 0005g, FeSO4 0. 025g,钨酸钠 0. 0005g,钼酸钠 0. 0005g，琼脂15g，蒸馏水IL ；(6)近平滑假丝酵母的基础培养基包含麦芽汁1L，琼脂15g ；(7)木霉菌的基础培养基包含马铃薯提取液1L，葡萄糖20g，琼脂15g ；(8)胶冻样芽胞杆菌的基础培养基包含蔗糖5g，豆粕粉0.5g，Na2HPO4 2g， MgSO4 · 7H20 0. lg, FeCl3 0. 005g, K2HPO4 0. 05g, CaCO3 0. lg,琼脂 15g,蒸馏水 1L, pH 7. 5 ；(9)嗜盐盐单胞菌的基础培养基包含NaCl 80g，酵母提取物lg，蛋白胨5g，牛肉膏 lg, FePO4 0. Olg,琼脂 16g，蒸馏水 1L，pH 7. 4-7. 6。本发明干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂中的菌种能更好的适应盐碱土壌；本发明的干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂是一种多菌群复合菌剂，经大量试验优选的17种菌种不仅没有菌种间的拮抗效应，而且互相协同，菌种稳定；本发明的干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂能很好地适应来源不同、批次不同的发酵原料，且质量稳定，适合于商品化生产；本发明的干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂产酸，可以降低根际土壤的碱度，从而减少土壤碱度对植物的抑制作用，促进植物良好生长；本发明的菌剂在土壌内的生命活动过程中产生生物激素刺激作物生长，产生大量的赤霉素和細胞激素类等物质，这些物质在与植物根系接触后，能调节作物的新陈代谢，刺激植物的生长；本发明的有益活菌在土壌中大量繁殖，溶解土壌中被固定的元素，达到解钾、释磷、固氮的目的，使土壌得到迅速改良。(8)胶冻样芽胞杆菌的基础培养基包含蔗糖5g，豆粕粉0.5g，Na2HPO4 2g， MgSO4 · 7H20 0. lg, FeCl3 0. 005g, K2HPO4 0. 05g, CaCO3 0. lg,琼脂 15g,蒸馏水 1L, pH 7. 5 ；(9)嗜盐盐单胞菌的基础培养基包含NaCl 80g，酵母提取物lg，蛋白胨5g，牛肉膏 lg, FePO4 0. Olg,琼脂 16g，蒸馏水 1L，pH 7. 4-7. 6。分别将这17种菌液按等比例混合，并置于同一个发酵罐，经观_32で、18-24h的通气搅拌发酵培养，形成了干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂。 发酵培养基的制备(NH4)2S04lg,H3PO4O. 5ml加入IL含量为2%的淀粉水中，用1 % 的石灰水调节PH至7. 5，以瓶子容量的1/4装入500ml锥形瓶中，密封后在121°C高压灭菌 15min，冷却备用；或(NH4)2S042g，H3PO4Iml加入IL质量百分含量为2%的淀粉水中，用的石灰水调节PH至9. 0，以瓶子容量的1/4装入500ml锥形瓶中，密封后在121°C高压灭菌15min，冷却备用。ニ、干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂质量稳定性测试取不同生产批次的微生物菌剂，对其中各菌种进行培养鉴定，结果见表1，表明微生物菌剂中每种菌种均有存活，没有不同菌种间的拮抗效应，而且批次间各菌种数量基本 fe、/b。
本发明公开了一种干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂及其制备方法与应用，是由17种微生物菌株组成；分别为产碱假单胞菌、乙酸钙不动杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜盐盐单胞菌、棕色固氮菌、枯草芽孢杆菌、稻黄杆菌、近平滑假丝酵母、弯曲高温单孢菌、木霉菌、土壤芽孢杆菌、褐球固氮菌、排硫杆菌、胶冻样芽胞杆菌和荧光假单胞杆菌。本发明还公开了该菌剂的制备方法。本发明的干旱荒漠嗜盐碱微生物菌剂产酸，可以降低根际土壤的碱度，从而减少土壤碱度对植物的抑制作用，促进植物良好生长。