专利名称：选择性激酶抑制剂的制作方法蛋白激酶是催化蛋白中特定残基磷酸化的酶家族。通常蛋白激酶分成几组；优先磷酸化丝氨酸和/或苏氨酸残基的组，优先磷酸化酪氨酸残基的组以及磷酸化酪氨酸和Ser/Thr残基的组。因此蛋白激酶是信号转导途径中的关键因素，其负责将包括细胞因子对其受体的作用在内的细胞外信号转导至细胞核，触发各种生物学事件。蛋白激酶在正常细胞生理中具有许多作用，包括细胞周期控制以及细胞生长、分化、凋亡、细胞迁移和分裂。蛋白激酶包括例如但不限于蛋白酪氨酸激酶家族(PTK)成员，PTK又可分为细胞质PTK和受体PTK(RTK)。细胞质PTK包括SRC家族(包括BLK；FGR；FYN；HCK；LCK；LYN；SRC；YES和YRK)；BRK家族(包括BRK；FRK、SAD和SRM)；CSK家族(包括CSK和CTK)；BTK家族(包括BTK；ITK；TEC；MKK2和TXK)；Janus激酶家族(包括JAK1、JAK2、JAK3和Tyk2)；FAK家族(包括FAK和PYK2)；Fes家族(包括FES和FER)；ZAP70家族(包括ZAP70和SYK)；ACK家族(包括ACK1和ACK2)；和Ab1家族(包括ABL和ARG)。RTK家族包括EGF-受体家族(包括EGFR、HER2、HER3和HER4)；胰岛素受体家族(包括INS-R和IGF1-R)；PDGF受体家族(包括PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、KIT、FLK2)；VEGF受体家族(包括FLT1、FLK1和FLT4)；FGF受体家族(包括FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4)；CCK4家族(包括CCK4)；MET家族(包括MET和RON)；TRK家族(包括TRKA、TRKB和TRKC)；AXL家族(包括AXL、MER和SKY)；TIE/TEK家族(包括TIE和TIE2/TEK)；EPH家族(包括EPHA1、EPHA2、EPHA3、EPHA4、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHA8、EPHB1、EPHB2、EPHB3、EPHB4、EPHB5、EPHB6)；RYK家族(包括RYK)；MCK家族(包括MCK和TYRO10)；ROS家族(包括ROS)；RET家族(包括RET)；LTK家族(包括LTK和ALK)；ROR家族(包括ROR1和ROR2)；Musk家族(包括Musk)；LMR家族(包括LMR1、LMR2和LMR3)；和SuRTK106家族(包括SuRTK106)。类似地，丝氨酸/苏氨酸特异性激酶包括许多不同的亚家族，包括细胞外信号调节激酶(p42/ERK2和p44/ERKI)；c-Jun NH2-末端激酶(JNK)；cAMP反应元件结合蛋白激酶(CREBK)；cAMP依赖性激酶(CAPK)；促分裂原活化蛋白激酶(MAPK及其近亲物(relative))；应激活化蛋白激酶p38/SAPK；促分裂原和应激活化激酶(MSK)；蛋白激酶PKA、PKB和PKC等。另外，许多病原生物的基因组具有编码蛋白激酶的基因。例如，疟原虫恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)和病毒如HPV和肝炎病毒显示具有激酶相关基因。多种由细胞功能异常导致的疾病都与不适宜高的蛋白激酶活性有关。这可能由下述原因直接或间接地引起例如因对激酶正常控制机制的失败，例如与酶的突变、过度表达或不适当的激活有关；或者因也参与激酶的上游或下游信号转导的细胞因子或生长因子的过度产生或产生不足。在所有这些情况中，选择性抑制激酶的作用可能期望具有有益的效果。其中与异常激酶活性有关的疾病包括糖尿病；再狭窄；动脉粥样硬化；肝肾纤维化；眼病；骨髓和淋巴增殖性疾病；癌症如前列腺癌、结肠癌、乳癌、头颈癌、白血病和淋巴瘤；和自身免疫性疾病如特应性皮炎、哮喘、类风湿性关节炎、克隆氏病、银屑病、克鲁宗综合征、软骨发育不全和致死性发育异常。JAK家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)在免疫系统的一些重要细胞类型的增殖和终末功能的细胞因子依赖性调节中起着主要的作用。目前已知的哺乳动物的四个JAK家族成员的直接比较揭示存在七个高度保守的结构域(Harpur等，1992)。在为PTK这一家族的高度保守结构域特征寻求命名时，使用的分类参照Pawson及其同事(Sadowski等，1986)在他们处理SRC同源(SH)结构域中的方法。因此，将这些结构域进行计数，靠近C末端的同源性结构域称为JAK同源结构域1(JH1)。与JH1的N-末端紧接的结构域是激酶相关结构域，此处称为JH2结构域。然后计数各结构域直至位于N-末端的JH7。这些JAK同源(JH)结构域的高度保守程度表明它们在这些蛋白操纵的细胞过程中每个都可能起重要的作用。然而JAK同源结构域的界线是不定的，不一定能定义功能结构域。尽管如此，它们的描绘仍是有助于考虑这类蛋白整体结构相似性的有用工具。PTK的JAK家族最典型的特征是具有两个激酶相关结构域(JH1和JH2)(Wilks等，1991)。JAK的推定PTK结构域(JH1)含有PTK结构域典型的高度保守的基序，包括存在位于1022位、距亚结构域VII的C-末端有11个残基的酪氨酸残基，其被认为是酪氨酸特异性蛋白激酶类成员的特征。人JAK1 PTK结构域(225个氨基酸)与PTK类蛋白的其它成员的排比揭示与其它功能性PTK具有同源性(例如与c-fes具有28％的相同性(Wilks and Kuran，1988))，与TRK具有37％的同源性(Kozma，等，1988)。每个JAK家族成员的JH1结构域在高度保守的亚结构域VIII基序(JAK2中的残基1015-1027)中都具有令人感兴趣的特性，认为该高度保守的亚结构域VIII基序与活性位点邻近且决定底物特异性。在该基序中的保守色氨酸两侧的苯丙氨酸和酪氨酸残基对于PTK的JAK家族是独特的。除了这一元件外，JAK家族的每个成员的JH1结构域均是典型的PTK结构域。此外，JAK家族中特别是ATP结合位点内及其周围具有高度的序列同一性(

图1)。
蛋白酪氨酸激酶的JAK家族在一些重要细胞类型的增殖和终末功能的细胞因子依赖性调节中所起的主要作用表明抑制JAK的活性剂在依赖于这些酶的疾病状态的预防和化学治疗中是有用的。目前已知的四类JAK家族成员每类的有效、特异性抑制剂将提供抑制那些引发免疫病理如哮喘的细胞因子的作用的方法并作为免疫抑制剂用于器官移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、I型糖尿病及糖尿病并发症、癌症、特应性皮炎、自身免疫性甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病、阿尔茨海默氏病和白血病/淋巴瘤。
JAK/STAT途径近来已经对非蛋白酪氨酸激酶细胞因子受体下游的信号转导途径进行了极好的描述。在此途径中，关键的组分是(i)一条(或多条)细胞因子受体链如白介素-4受体或干扰素γ受体；(ii)一个(或多个)PTK的JAK家族成员；(iii)一个或多个转录因子STAT家族成员；和(iv)活化的STAT将会与之结合的序列特异性DNA元件。
对JAK/STAT文献的综述为该途径对针对环境损害如病毒和细菌感染的宿主免疫应答中的募集和集结是重要的这一提议提供了有力的支持。这在表1和表2中给出了很好的例证。从基因敲除实验收集的信息强调JAK家族成员对由许多重要的免疫调节细胞因子触发的细胞内信号转导是重要的。因此，源于抑制(或增强)JAK/STAT途径的治疗可能性主要在免疫调节方面，并因此有可能成为治疗该领域中多种病理的有前景的药物。除了表1和表2中列出的疾病外，JAK抑制剂还可以作为免疫抑制剂用于器官移植以及自身免疫性疾病如狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、I型糖尿病、自身免疫性甲状腺疾病、阿尔茨海默氏病和其它自身免疫性疾病。此外，还指出JAK抑制剂治疗癌症如前列腺癌。
表1 各种病理中JAK/STAT途径的激活
表2 通过基于JAK的药物疗法可能治疗的疾病
JAK 3信号转导虽然JAK家族的其它成员几乎在全部组织中都有表达，但JAK3的表达看起来仅限于造血细胞。这与它在通过JAK3与IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15的多链受体共有的γ链非共价结合来通过这些受体进行信号转导中的主要作用相一致。患有X连锁重度联合免疫缺陷症(XSCID)的男性的细胞因子受体共有的γ链(γc)基因存在缺陷，该基因编码白介素2(IL-2)、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15的受体的主要成分。已确定在XSCID综合征中患者的JAK3蛋白发生突变或水平严重下降，其表明免疫抑制应该是由JAK3途径的信号转导受阻而引起。小鼠基因敲除实验表明JAK3不仅在B淋巴细胞和T淋巴细胞的成熟中起关键作用，而且JAK3对于保持T细胞的功能而言也是组成上必需的。结合JAK3参与IL-2和IL-4受体下游信号转导事件的生物化学证据，这些人和小鼠的突变实验表明，通过抑制JAK3调节免疫活性可能在治疗T细胞和B细胞增殖性疾病如移植排斥和自身免疫性疾病中证明是有用的。
只要实现选择性JAK3抑制而不伴有其它激酶依赖性信号转导过程的抑制，那么通过抑制JAK3信号转导来延长免疫调节应具有大的治疗潜能。具体而言，JAK激酶家族成员共有的序列高度同一性使得具有抑制JAK3的化合物也抑制该家族的其它成员的可能性，造成长期有害的后果。例如，由于促红细胞生成素和血小板生成素的受体都仅使用JAK2进行细胞内信号传递，所以延长抑制JAK2可能导致红细胞减少和血小板减少。
选择性且不可逆性抑制PTK催化磷酸基团从ATP分子向位于蛋白质底物上的酪氨酸残基转移。本领域已知的抑制剂通常与ATP或该激酶的蛋白质底物进行竞争(Levitzki 2000)。由于细胞中的ATP浓度通常很高(毫摩尔)，而与ATP竞争的化合物在细胞内不太可能达到将ATP从其结合位点上置换下来的必需浓度，因此所述化合物可能缺乏体内活性。
关于EGFR曾尝试的另外方法是设计或选择以不可逆的方式与EGFR TK结合的化合物。这些化合物在Fry 1998；Discafani 1999；Smaill 1999；Smaill 2000；Tsou 2001；Smaill 2001；和Wissner 2003中有描述。这些化合物基于以下实事而作为不可逆性抑制剂发挥作用它们可以与位于该酶活性位点的氨基酸残基共价结合，其导致这些化合物的体外效能增强和在体内癌症模型中抑制人肿瘤生长的效能增加。与可逆性抑制剂相比，这些不可逆性抑制剂的另一个益处是不可逆性抑制剂可用于酪氨酸激酶的延长抑制，仅由受体的正常周转率限制。
JAK激酶家族成员的高度同源性为具有可接受的选择性的化合物的设计增加了挑战性。认为利用该家族成员之间氨基酸序列的微小差异可能能够确定选择性抑制剂。将蛋白酪氨酸激酶的JAK家族的四个成员进行排比发现在组成这些激酶的ATP结合口袋的氨基酸内，氨基酸的差异非常小，很难利用氨基酸的差异使潜在抑制剂只靶向一个或另一个家族成员。有趣的是，在该激酶的这一亚家族中，仅JAK3在近ATP结合腔的前缘处具有半胱氨酸残基。假设，通过用具有烷基化基团如迈克尔(Michael)受体的官能团靶向这一半胱氨酸可能为开发高度特异性不可逆性JAK3抑制剂(图2)提供一种方法。


本发明的发明人发现基于二取代杂环骨架、包括烷基化基团如迈克尔受体的一组化合物是酶Janus激酶3的不可逆性选择性抑制剂，还发现它们将作为免疫抑制剂应用于治疗器官移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、I型糖尿病及糖尿病并发症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫性甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病和其它期望进行免疫抑制的适应症。此外，认为这些化合物可能在治疗增殖性疾病和其中JAK3被过度活化的癌症如白血病和淋巴瘤中以及在诸如阿尔茨海默氏病等疾病中有应用。
因此，第一方面，本发明提供通式I的化合物或其药学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶形或非对映体， 其中X1、X2、X3、X4各自是碳，其中一个被Z取代，而其余独立地被Y取代；或者X1、X2、X3、X4之一是N，而其余是碳，其中一个碳被Z取代，而其余独立地被Y取代；A是选自如下的环 其中D选自H、C1-4烷基、卤素、氨基；Q是键、卤素、C1-4烷基、O、S、SO、SO2、CO、CS；W是(i)NR1R2，其中R1和R2独立地是H、C1-4烷基、C1-4烷基CF3、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、C3-8环烷基、C2-6烯基、环杂烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基环杂烷基，或者R1与R2连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR3的原子的3-8元环；且R3选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、COR4，其中R4选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基；
或者(ii)H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C3-8环烷基、环杂烷基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、C3-8环烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基环杂烷基；Y是H、卤素、CN、CF3、硝基、OH、C1-4烷基、C1-4烷基NR5R6、C1-4烷基杂芳基、OC1-4烷基、OC2-4烷基OC1-4烷基、OC1-4烷基NR5R6、OC1-4烷基杂芳基、OC1-4烷基环杂烷基、SC1-4烷基、SC2-4烷基OC1-4烷基、SC1-4烷基NR5R6、NR5R6、NR5COR6、NR5SO2R6；且R5和R6各自独立地是H、C1-4烷基，或者可以连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR7的原子的3-6元环，且R7选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；Z选自 其中R8选自H、C1-4烷基；R9和R10独立地选自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR12R13、C1-4烷基OR12、C1-4烷基杂芳基，或者可以连接形成任选含有选自O、S、SO、SO2、NR14的5-8元环；R11选自OH、OC1-4烷基、NR12R13；n是0-4；
其中R12和R13独立地选自H、C1-4烷基，或者可以连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR14的原子的3-8元环；且R14选自H、C1-4烷基。
第二方面，本发明在于包含载体和至少一种本发明第一方面的化合物的组合物。
第三方面，本发明在于治疗酪氨酸激酶相关疾病状态的方法，所述方法包括给予治疗有效量的至少一种本发明第一方面的化合物或治疗有效量的本发明第二方面的组合物。
另一方面，本发明提供本发明第一方面的化合物或第二方面的组合物在制备用于治疗JAK3相关疾病状态的药物中的用途。
再一方面，本发明提供抑制个体免疫系统的方法，所述方法包括给予治疗有效量的至少一种本发明第一方面的化合物或治疗有效量的本发明第二方面的组合物。
附图简述图1表示选择的JAK激酶的氨基酸序列排比。
图2表示JAK3激酶ATP结合口袋的模型，显示半胱氨酸残基。

因此，第一方面，本发明提供通式I的化合物或其药学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶形或非对映体， 其中；X1、X2、X3、X4各自是碳，其中一个被Z取代，而其余独立地被Y取代；或者X1、X2、X3、X4之一是N，而其余是碳，其中一个碳被Z取代，而其余独立地被Y取代；A是选自如下的环 其中D选自H、C1-4烷基、卤素、氨基；Q是键、卤素、C1-4烷基、O、S、SO、SO2、CO、CS；W是(i)NR1R2，其中R1和R2独立地是H、C1-4烷基、C1-4烷基CF3、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、C3-8环烷基、C2-6烯基、环杂烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基环杂烷基，或者R1与R2连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR3的原子的3-8元环；且R3选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、COR4，其中R4选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基；或者(ii)H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C3-8环烷基、环杂烷基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、C3-8环烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基环杂烷基；Y是H、卤素、CN、CF3、硝基、OH、C1-4烷基、C1-4烷基NR5R6、C1-4烷基杂芳基、OC1-4烷基、OC2-4烷基OC1-4烷基、OC1-4烷基NR5R6、OC1-4烷基杂芳基、OC1-4烷基环杂烷基、SC1-4烷基、SC2-4烷基OC1-4烷基、SC1-4烷基NR5R6、NR5R6、NR5COR6、NR5SO2R6；且R5和R6各自独立地是H、C1-4烷基，或者可以连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR7的原子的3-6元环，且R7选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；Z选自
其中R8选自H、C1-4烷基；R9和R10独立地选自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR12R13、C1-4烷基OR12、C1-4烷基杂芳基，或者可以连接形成任选含有选自O、S、SO、SO2、NR14的5-8元环；R11选自OH、OC1-4烷基、NR12R13；n是0-4；其中R12和R13独立地选自H、C1-4烷基，或者可以连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR14的原子的3-8元环；且R14选自H、C1-4烷基。
在优选的实施方案中，该化合物选自通式II的化合物或其药学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶形或非对映体， 其中X1、X2、X3、X4各自是碳，其中一个被Z取代，而其余独立地被Y取代；或者X1、X2、X3、X4之一是N，而其余是碳，其中一个碳被Z取代，而其余独立地被Y取代；A是选自如下的环 其中D选自H、C1-4烷基、卤素、氨基；Q是键、卤素、C1-4烷基、O、S、SO、SO2、CO、CS；W是(i)NR1R2，其中R1和R2独立地是H、C1-4烷基、C1-4烷基CF3、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、C3-8环烷基、C2-6烯基、环杂烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基环杂烷基，或者R1与R2连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR3的原子的3-8元环；且R3选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、COR4，其中R4选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基；或者(ii)W是H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C3-8环烷基、环杂烷基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基、C3-8环烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基环杂烷基；Y是H、卤素、CN、CF3、硝基、OH、C1-4烷基、C1-4烷基NR5R6、C1-4烷基杂芳基、OC1-4烷基、OC2-4烷基OC1-4烷基、OC1-4烷基NR5R6、OC1-4烷基杂芳基、OC1-4烷基环杂烷基、SC1-4烷基、SC2-4烷基OC1-4烷基、SC1-4烷基NR5R6、NR5R6、NR5COR6、NR5SO2R6；且R5和R6各自独立地是H、C1-4烷基，或者可以连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR7的原子的3-6元环，且R7选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；Z选自
其中R8选自H、C1-4烷基；R9和R10独立地选自H、C1-4烷基、C1-4烷基NR12R13、C1-4烷基OR12、C1-4烷基杂芳基，或者可以连接形成任选含有选自O、S、SO、SO2、NR14的5-8元环；R11选自OH、OC1-4烷基、NR12R13；n是0-4；其中R12和R13独立地选自H、C1-4烷基，或者可以连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR14的原子的3-8元环；且R14选自H、C1-4烷基。
可以理解，在上面的描述中C1-4烷基是指未取代的或任选取代的直链或支链烷基链。
芳基是指未取代的或任选取代的苯基或萘基。
杂芳基是指未取代的或任选取代的含有一个或多个选自O、N、S的杂原子的5元或6元杂芳环。
环烷基是指3-8元饱和环。
环杂烷基是指含有1-3个选自O、S、NR15的杂原子的3-8元饱和环，其中R15是H、C1-4烷基、芳基、杂芳基。
取代基选自卤素、C1-4烷基、CF3、CN、硝基、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR16R17、O芳基、O杂芳基、CO2R16、CONR16R17、硝基、NR16R17、NR16COR17、NR16SO2R17；且R16、R17各自独立地是H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基环杂烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或者可以连接形成任选取代的任选含有选自O、S、NR18的杂原子的3-8元环；且R18选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基。
式I的化合物可以不可逆地抑制JAK3。通常酶的可逆性抑制的结合强度由IC50值度量，IC50值反映抑制剂与酶的活性位点之间相互作用的平衡常数。不可逆性抑制剂具有表观IC50值，因为一旦抑制剂结合它将不与活性位点分离，因此测量的IC50值将随时间而改变(即数字将降低)。例如，实施例20的化合物在与酶温育20分钟后(加入ATP之前)表现的“IC50”是～40nM，而经过90分钟的预温育后“IC50”却降至7nM。
优选式I的化合物相对于JAK1或JAK2而言选择性地抑制JAK3。术语“选择性地抑制”定义为指该化合物对于JAK3的表观IC50值较其对于JAK1或JAK2的IC50值低10倍以上(即效能更高)。
本发明的化合物包括所有的构象异构体(例如顺式和反式异构体)。本发明的化合物具有不对称中心，因此存在不同的对映异构体和非对映异构体。本发明涉及本发明的化合物的所有旋光异构体和立体异构体及其混合物的用途，还涉及可以含有它们的所有药物组合物或可以应用它们的治疗方法。式I的化合物还可以以互变异构体存在。本发明涉及所有这些互变异构体及其混合物的用途。
本发明还包括含有式I的化合物的前药的药物组合物。本发明还包括治疗或预防可以通过抑制蛋白激酶如JAK而治疗或预防的疾病的方法，所述方法包括给予式I的化合物的前药。具有游离氨基、酰氨基、羟基或羧基的式I的化合物可以转化成前药。前药包括其中氨基酸残基或两个或多个(例如两个、三个或四个)氨基酸残基的多肽链通过肽键共价地与式I的化合物的游离氨基、羟基或羧酸基团连接的化合物。氨基酸残基包括20种通常用三个字母符号表示的天然存在的氨基酸，并且还包括4-羟脯氨酸、羟赖氨酸、锁链素(demosine)、异锁链素(isodemosine)、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。前药还包括其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通过羰基碳前药侧链共价地与式I的上述取代基键合的化合物。前药还包括通过磷氧键与式I的化合物的游离羟基键合而连接的式I的化合物的磷酸衍生物(如酸、酸式盐或酯)。
当该化合物具有手性中心时，则该化合物可以作为纯异构体或作为任意比例的异构体的混合物使用。但是优选混合物含有至少70％、80％、90％、95％或99％的优选异构体。
在另一个优选实施方案中，该化合物选自实施例中给出的化合物。更优选该化合物选自表3中给出的化合物。
第二方面，本发明在于包含载体和至少一种本发明第一方面的化合物的组合物。
第三方面，本发明在于治疗酪氨酸激酶相关疾病状态的方法，所述方法包括给予治疗有效量的至少一种本发明第一方面的化合物或治疗有效量的本发明第二方面的组合物。
在另一个优选的实施方案中，所述疾病涉及JAK1、JAK2、JAK3、或TYK2。
在本发明的优选实施方案中，所述疾病状态选自特应性疾病，例如变应性哮喘、特应性皮炎(湿疹)和变应性鼻炎；细胞介导的过敏反应，例如变应性接触性皮炎和过敏性肺炎；风湿性疾病，例如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、青少年型关节炎、干燥综合征、硬皮病、多发性肌炎、强直性脊柱炎、银屑病性关节炎；其它自身免疫性疾病，例如I型糖尿病、自身免疫性甲状腺疾病和阿尔茨海默氏病；病毒性疾病，例如EB病毒(EBV)、乙肝病毒、丙肝病毒、HIV、HTLV1、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、人乳头瘤病毒(HPV)；癌症，例如白血病、淋巴瘤和前列腺癌。
本文使用的术语“酪氨酸激酶相关疾病状态”是指由酪氨酸激酶活性异常，特别是JAK活性异常导致，和/或通过抑制这些酶中的一种或多种而减轻的病症。
在另一方面，本发明提供所述化合物在制备用于治疗JAK3相关疾病状态的药物中的用途。
再一方面，本发明提供抑制个体免疫系统的方法，所述方法包括给予治疗有效量的至少一种本发明第一方面的化合物或治疗有效量的本发明第二方面的组合物。
优选抑制免疫系统的方法用于治疗选自狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、I型糖尿病及糖尿病并发症、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫性甲状腺疾病、溃疡性结肠炎、克隆氏病和阿尔茨海默氏病的疾病状态。
优选抑制免疫系统的方法用于改善免疫系统对进入个体内的移植物的反应。更优选移植物是器官移植物或组织移植物。
本发明提供含有至少一种以其有效量能够治疗JAK3相关病症的式I或II的化合物和药学可接受的载体或稀释剂的组合物。本发明的组合物可以含有以下描述的其它治疗活性剂(agent)，并可以通过使用常规的固体或液体载体或稀释剂以及适用于期望给药方式的药物添加剂(例如赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等)，根据例如药物制剂领域熟知的技术配制。
式I或II的化合物可经任何合适的方法给予，例如以片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂的形式例如经口服给予；舌下；口含；例如以皮下、静脉内、肌内或脑池内注射或输注技术(例如作为无菌可注射用含水或非水溶液或混悬剂)经肠胃外给予；例如以吸入喷雾剂经鼻给予；例如以乳膏或软膏的形式局部给予；或者例如以栓剂的形式直肠给予；以含有无毒的、药学可接受的载体或稀释剂的剂量单元制剂给予。例如所述化合物可以以适合于速释或缓释的形式给予。速释或缓释可以通过使用含有本发明的化合物的合适的药物组合物来实现，或者特别是在缓释的情况下，通过使用诸如皮下植入物或渗透泵等装置来实现。
除了灵长类如人之外，本发明的方法还可以治疗各种其它的哺乳动物。例如，可以治疗的哺乳动物包括但不限于牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、大鼠或其它牛类、羊类、马类、狗类、猫类、啮齿类或鼠类物种。不过，所述方法还可以施用于其它物种如鸟类(例如鸡)。
与炎症和感染有关的疾病和病况可以使用本发明的方法治疗。在优选的实施方案中，所述疾病或病况是指其中为调节炎性反应，嗜酸性粒细胞和/或淋巴细胞的作用将受到抑制或促进的疾病或病症。
上述方法中期望抑制JAK3的治疗个体是哺乳动物，包括但不限于牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、大鼠或其它牛类、羊类、马类、狗类、猫类、啮齿类或鼠类物种，优选人，男性或女性。
术语“治疗有效量”是指将引起研究人员、兽医、医生或其它临床医师所寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的所述主题组合物的量。
本文使用的术语“组合物”意指包括含有特定量的特定成分的产品以及直接或间接由特定量的特定成分组合得到的任意产品。“药学可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中其它成分相容，并且对其接受者无害。
术语“给药”或“给予”化合物应理解为指将本发明的化合物提供给需要治疗的个体。
用于给予本发明的化合物的药物组合物可以方便地以剂量单元的形式提供，并可以通过药学领域熟知的任何方法制备。所有的方法都包括将活性成分和包含一种或多种辅助成分的载体混合的步骤。通常，该药物组合物如下制备将活性成分与液体载体或微细固体载体或与两者一起均匀、充分地混合，然后如果必要，将产品制成所期望的制剂。在药物组合物中，包含足以对疾病的过程或状况产生所期望的效果的量的活性目标化合物。本文使用的术语“组合物”意指包括含有特定量的特定成分的产品以及直接或间接由特定量的特定成分组合得到的任意产品。
本发明的含有活性成分的药物组合物可以是适合于口服使用的形式，例如作为片剂、锭剂、糖锭、水或油混悬剂、可分散性散剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂、糖浆剂或酏剂。用于口服使用的组合物可以根据本领域已知的任何制备药物组合物的方法制备，并且这些组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的活性剂以提供精美可口的药物制剂。片剂含有活性成分和适合于制备片剂的药学可接受的无毒赋形剂。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶和阿拉伯树胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣或者使用已知技术进行包衣以延迟在胃肠道内的崩解和吸收并从而提供较长时间内的持续作用。例如，可以使用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们还可以被包衣形成渗透性控释治疗片剂。
用于口服使用的制剂还可以以其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的硬胶囊剂，或者以其中活性成分与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软胶囊剂提供。
水混悬剂含有活性物质和适合于生产水混悬剂的赋形剂。这些赋形剂是助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以是天然磷脂，例如卵磷脂，或者环氧烷与脂肪酸的缩合物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合物，例如十七烷乙烯氧基鲸蜡醇醚，或者环氧乙烷与衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或者环氧乙烷与衍生于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯、或对羟基苯甲酸丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂如蔗糖或糖精。
油混悬剂可以通过将活性成分悬浮于植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中或矿物油如液体石蜡中制成。该油混悬剂可以含有增稠剂如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。还可以加入如上所述的甜味剂和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂如抗坏血酸保存。
适合于通过加入水而制备水混悬剂的可分散性散剂和颗粒剂提供与分散剂或润湿剂、助悬剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和助悬剂的实例以上已经提及。还可以含有其它赋形剂例如甜味剂、调味剂和着色剂。
本发明的药物组合物还可以是水包油型乳剂的形式。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油，或矿物油如液体石蜡，或者它们的混合物。合适的乳化剂可以是天然树胶例如阿拉伯树胶或黄蓍树胶、天然磷脂如大豆磷脂、卵磷脂和衍生于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如脱水山梨糖醇单油酸酯和所述偏酯与环氧乙烷的缩合物如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳剂还可以含有甜味剂和调味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制。这些制剂还可以含有缓和剂(demulcent)、防腐剂、调味剂和着色剂。
药物组合物可以是无菌可注射用水或油混悬剂的形式。该混悬剂可以根据已知技术使用上述已提及的合适的分散剂或润湿剂和助悬剂配制。无菌可注射用制剂还可以是在无毒肠胃外途径可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射用溶液或悬浮液，例如作为在1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油通常用作溶剂或悬浮介质使用。为此目的，可以使用包括合成的单酸甘油酯或甘油二酯在内的任何温和的固定油。此外，脂肪酸如油酸也可用于注射剂的制备中。
本发明的化合物还可以以供直肠给药的栓剂形式给予。这些组合物可以通过将药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在常温下是固体，但在直肠温度下为液体，因此在直肠内熔化释放出药物。这样的材料有可可脂和聚乙二醇。
对于局部应用，可以使用含有本发明的化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液剂或混悬剂等。(对于该项应用，局部施用应包括漱口剂和含漱剂。)本发明的化合物还可以以脂质体的形式给予。正如本领域已知的那样，脂质体通常衍生于磷脂或其它脂类物质。脂质体通过分散于水介质中的单层或多层水合液晶形成。任何生理学可接受的且可代谢的能够形成脂质体的无毒脂质均可以使用。本发明的脂质体形式的组合物除了本发明的化合物之外还可以包含稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然的和合成的磷脂和磷脂酰胆碱。形成脂质体的方法是本领域中已知的。
本发明的药物组合物和方法还可以包括本文提及的通常用于治疗上述病症的其它治疗活性化合物。本领域技术人员可以根据常规药学原理选择用于联合治疗的合适的活性剂。治疗活性剂的联合可以协同作用以影响上述各种病症的治疗或预防。使用这种方法，用每种活性剂的较低剂量可能能够达到治疗效果，从而减轻潜在的副作用。
其它治疗活性剂的实例包括以下活性剂环孢菌素(例如环孢菌素A)，CTLA4-Ig，抗体如ICAM-3、抗IL-2受体(Anti-Tac)、抗CD45RB、抗CD2、抗CD3(OKT-3)、抗CD4、抗CD80、抗CD86、阻断CD40与gp39之间相互作用的活性剂如CD40和/或gp39(即CD154)特异性抗体、由CD40和gp39(CD401g和CD8gp39)构建的融合蛋白，抑制剂如NF-κB功能的核转运抑制剂，如脱氧精胍菌素(DSG)，胆固醇生物合成抑制剂如HMG CoA还原酶抑制剂(洛伐他丁和辛伐他丁)，非甾族抗炎药(NSAID)如布洛芬、阿司匹林、对乙酰氨基酚、来氟米特、脱氧精胍菌素、硫唑嘌呤和环氧合酶抑制剂如罗非考昔和塞来考昔、甾族化合物如氢化泼尼松或地塞米松、金化合物、抗增殖剂如甲氨喋呤、FK506(他克莫司、Prograf)、麦考酚酸吗乙酯、细胞毒药物如硫唑嘌呤、VP-16、足叶乙甙、氟达拉滨、顺铂和环磷酰胺，TNF-α抑制剂如替尼达普，抗TNF抗体或可溶性TNF受体以及雷帕霉素(西罗莫司或Rapamune)或它们的衍生物。
当其它治疗活性剂与本发明的化合物联合使用时，它们可以例如以在Physician Desk Reference(PDR)中所描述的用量或者以本领域普通技术人员确定的量使用。
对于治疗或预防需要抑制蛋白酪氨酸激酶的病况，适当的剂量水平通常是约0.01-500mg/kg患者体重/日，可以以单剂量或多剂量给药。优选剂量水平为约0.1-约250mg/kg/日；更优选约约0.5-约100mg/kg/日。合适的剂量水平可以是约0.01-250mg/kg/日，约0.05-100mg/kg/日，或者约0.1-50mg/kg/日。在此范围内，剂量可以是0.05-0.5、0.5-5或5-50mg/kg/日。对于口服给药，所述组合物优选以含有1.0-1000毫克活性成分，特别是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分的片剂形式提供，根据要治疗的患者的症状调整剂量。该化合物可以以每日1-4次，优选每日一次或两次的方案给药。
但是，应理解，对于任何具体的患者，特定的剂量水平和给药频率可以不同，并且将取决于包括所使用的具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间、患者的年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速率、药物联合、具体病症的严重性和正在接受治疗的对象在内的各种因素。
为更清晰地理解本发明的本质，现在将参考以下非限制性实施例描述本发明的优选形式。
实施例材料和方法化合物的合成通式I的化合物通常从二卤代杂环制备。
当Q是键且W是氨基时，可以从亲核性芳香取代开始以产生单氨基-单卤代中间体。
亲核性芳香取代通常通过将胺加入在溶剂如乙醇、异丙醇、叔丁醇、二噁烷、THF、DMF、甲苯或二甲苯中的二卤代杂环中来进行。反应通常在升高的温度下在过量胺或非亲核碱如三乙胺或二异丙基乙胺或无机碱如碳酸钾或碳酸钠存在下进行。
或者，可以通过过渡金属催化氨化反应引入氨基取代基。用于这些转化的典型催化剂包括Pd(OAc)2/P(t-Bu)3、Pd2(dba)3/BINAP和Pd(OAc)2/BINAP。这些反应通常在碱如碳酸铯或叔丁醇钠或叔丁醇钾存在下、在室温至回流的温度下在溶剂如甲苯或二噁烷中进行。
合成这些化合物的第一步中使用的胺商业获得或通过本领域技术人员熟知的方法制备。
当Q是键且W是芳基、杂芳基或其它类似的碳连接系统时，合成通常从二卤代杂环与适当官能化的偶联配偶体之间的交叉偶联反应开始。典型的偶联配偶体是硼酸或酯(Suzuki偶联参见例如Miyaura和Suzuki 1995)、锡烷类(Stille偶联参见例如Stille 1986)、Grignard试剂(Kumada偶联Kumada、Tamao和Sumitani 1988)或有机物质(Negishi偶联Negishi 2002)。Suzuki偶联是优选的偶联方法，通常在碱如碳酸钾、氢氧化锂、碳酸铯、氢氧化钠、氟化钾或磷酸钾存在下在溶剂如DME、THF、DMF、乙醇、丙醇、甲苯或1，4-二噁烷中进行。反应可以在升高的温度下进行，使用的钯催化剂可以选自Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2、[PdCl2(dppf)]、Pd2(dba)3/P(t-Bu)3。
当Q是CO时，合成从必须的带有卤素基团的杂芳基羧酸开始。该酸的酰胺衍生物可以通过使用偶联试剂如二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或羰基二咪唑在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃或1，4-二噁烷中使胺与该酸偶联而容易地形成。或者，可以通过本领域技术人员熟知的方使用亚硫酰氯、草酰氯、双(三氯甲基)碳酰氯或氰尿酰氯法将该酸转化为相应的酰氯，或者使用例如叔丁基氯甲酸酯将该酸转化为混合酐种类。然后可以优选在碱如三乙胺、二异丙基乙胺或固相等同物存在下在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、二噁烷或乙酸乙酯中、在室温或升高的温度下使酰氯或混合酐衍生物与期望的胺反应生成酰胺。该酰氯还可以与需要的胺在含水条件下优选在无机碱如氢氧化钠、氢氧化钾或碳酸钠存在下反应生成期望的酰胺。
硫代酰胺可以通过本领域技术人员熟知的方法从以上形成的酰胺制备，其中包括在升高的温度下酰胺与Lawesson试剂在溶剂如甲苯中反应。
合成的第二步包括单卤代中间体与苯并咪唑或氮杂苯并咪唑的亲核性芳香取代反应。该反应通常使用苯并咪唑或氮杂苯并咪唑的盐在溶剂如THF、DMF、DMA、NMP、甲苯或二甲苯中在室温至回流的温度下进行。苯并咪唑或氮杂苯并咪唑盐通过与金属氢化物如氢化钠或氢化钾反应或通过与碳酸铯反应来制备。或者，可以通过金属催化的偶联反应引入苯并咪唑或氮杂苯并咪唑环。典型的金属催化剂包括Pd(OAc)2/dppf、PdCl2/dppe、Pd2(OAc)2/P(t-Bu)3、(CuOTf)2·PhH。该反应通常使用碱如碳酸铯、碳酸铷、碳酸钾、叔丁醇钠或磷酸钾在溶剂如二甲苯、甲苯或DMF中在室温至回流的温度下进行。该反应中也可以使用助剂如相转移剂(例如十六烷基三甲基溴化铵)或铜络合剂(例如邻二氮杂菲)。
或者，可以将上述反应顺序反过来，通过上述方法从苯并咪唑或氮杂苯并咪唑与二卤代杂环偶联开始，然后通过上述方法将第二个取代基引入该杂环核上。
通式I的化合物的另外路线包括铜介导的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑与有机金属试剂的反应(参见例如Finet，2002)。优选的有机金属试剂是硼酸。
本发明的通式I的化合物中存在的硫醇反应基团(被描述为取代基Z的一部分)可以已经存在于上述合成方法中所使用的官能团中，或者可以在合成方法的最后阶段引入。例如，可以通过与合适的酸偶联而在带有游离羟基或氨基取代基的化合物中引入硫醇反应基。这通常通过偶联试剂如二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或羰基二咪唑在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃或1，4-二噁烷中来完成。或者，可以在室温或升高的温度下在碱如三乙胺、二异丙基乙胺或或固相等同物存在下在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、二噁烷或乙酸乙酯中将通过本领域技术人员熟知的方法使用例如叔丁基氯甲酸酯制备的该酸的合适混合酐种类或者合适的酰氯衍生物与胺基团或醇基团反应生成期望的化合物。
本领域技术人员将会理解，上述合成反应的顺序在某些情况下可以改变，在某些情况下为使上述反应实现合理的收率和效率，某些官能团可能需要衍生化(即被保护)。保护官能团的类型对于本领域技术人员而言是熟知的，例如在Greene(Greene，1999)中有描述。上述反应顺序生成的产物可以使用本领域技术人员熟知的技术进一步衍生化。
以下给出代表性的合成。
实施例16-氯-N-[(1R)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺
将R-α-甲基苄胺(0.57g，4.7mmol)和2，6-二氯吡嗪(0.6388g，4.29mmol)在二噁烷(2.5mL)中的溶液在氮气下加热回流48小时。除去溶剂，将产物从甲苯-己烷(0.82g，82％)中结晶。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.58(d，J＝6.6Hz，3H，CH3)，4.88(m，1H，CH)，5.07(d，1H，NH)，7.24-7.36(m，5H，Ar-H)，7.61(s，1H，吡嗪-H)，7.79(s，1H，吡嗪-H)。
实施例2N-(叔丁基)-6-氯吡嗪-2-胺 将叔丁胺(14.9g，20mmol)、2，6-二氯吡嗪(6.0g，40mmol)、Hünig碱(10mL)和乙氧基乙醇(6mL)在130℃下于密封试管中加热18小时。真空除去溶剂，用二氯甲烷(10mL)吸收残余物，并过滤。用水(2×20mL)、盐水(20mL)洗涤滤液，并干燥(Na2SO4)。经色谱法用二氯甲烷洗脱分离产物，为白色固体(5.4g，72％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.44(s，9H，CH3)，4.68(br，1H，NH)，7.71(s，1H，吡嗪-H)，7.72(s，1H，吡嗪-H)。
实施例36-氯-N-[(1R)-1-(3-甲氧基苯基)乙基吡嗪-2-胺
使用与实施例1相似的方法，R-α-甲基苄胺(1.0g，6.6mmol)和2，6-二氯吡嗪(0.440g，2.95mmol)反应生成产物(517mg，67％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.59(d，J＝6.9Hz，3H，CH3)，3.81(s，3H，OCH3)，4.87(m，1H，CH)，5.47(br s，1H，NH)，6.79-7.30(m，4H，Ar-H)，7.66(s，1H，吡嗪-H)，7.79(s，1H，吡嗪-H)。
实施例46-氯-N-苯基吡嗪-2-胺 将2，6-二氯吡嗪(1g，6.7mmol)和苯胺(1.25g，13.4mmol)在含有DIPEA(2.5mL，13.4mmol)的乙氧基乙醇(20mL)中的溶液在氮气下加热回流3天。减压浓缩溶液，将残余物溶于乙酸乙酯(50mL)中。依次用水(50mL)、1M HCl(2×50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。干燥(Na2SO4)后减压除去溶剂。将残余物经色谱法用乙酸乙酯-己烷(20∶80-50∶50)洗脱从低级部分中分离出产物(230mg，17％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ6.62(br s，1H，NH)，7.11-7.20(m，1H，ArH)，7.38(br s，2H，ArH)，7.40(s，2H，ArH)，7.98(s，1H，吡嗪-H)，8.11(s，1H，吡嗪-H)。
实施例56-氯-N-[(1R)-1-(4-甲基苯基)乙基]吡嗪-2-胺
使用与实施例1相似的方法，α-(R)-4-二甲基苄胺(250mg，1.85mmol)和2，6-二氯吡嗪(0.251g，1.67mmol)反应生成产物(199.5mg，48％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.56(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，2.33(s，3H，CH3)，4.84(m，1H，CH)，5.05(br s，1H，NH)，7.15(AA’XX’，2H，Ar-H)，7.24(AA’XX’，2H，Ar-H)，7.60(s，1H，吡嗪-H)，7.78(s，1H，吡嗪-H)。
实施例66-氯-N-(4-吗啉-4-基苯基)吡嗪-2-胺 使用与实施例1相似的方法，4-吗啉代苯胺(2.15g，12.1mmol)和2，6-二氯吡嗪(0.756g，5.03mmol)反应生成产物(0.54g，37％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ3.25(br s，4H，CH2)，3.99(br s，4H，CH2)，7.05-7.17(m，2H，ArH)，7.42-7.54(m，2H，ArH)，7.94(s，1H，吡嗪-H)，8.04(s，1H，吡嗪-H)，8.06(s，1H，NH)。
实施例76-氯-N-(2-呋喃基甲基)吡嗪-2-胺
使用与实施例1相似的方法，糠胺与2，6-二氯吡嗪反应生成产物(98％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ4.57(d，J＝5.7Hz，2H，NCH2)，5.01(s，宽，1H，NH)，6.30(d，J＝3.3Hz，1H，呋喃基-H)，6.35-6.33(m，2H，呋喃基-H)，7.81(s，1H，吡嗪-H)，7.84(s，1H，吡嗪-H)。
实施例86-氯-N-(吡啶-3-基甲基)吡嗪-2-胺 将2，6-二氯吡嗪(0.671mmol)和3-吡啶甲胺(2.014mmol)在二甲苯(25mL)中的混合物加热回流过夜。将蒸发溶剂后得到的残余物在二氯甲烷(100mL)和水(100mL)之间分配。分离有机层，用二氯甲烷(3×50mL)萃取水层。合并有机萃取液，用盐水(1×100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，真空除去溶剂。然后将残余物经柱色谱法用己烷∶乙酸乙酯梯度混合物洗脱，得到期望的产物(93％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ4.61(d，J＝5.7Hz，2H，NCH2)，5.29(s，宽，1H，NH)，7.27(m，1H，吡啶-H)，7.30(m，1H，吡啶-H)，7.71(d，J＝7.8Hz，1H，吡啶-H)，7.85(s，1H，吡啶-H)，8.54(s，宽，1H，吡嗪-H)，8.61(s，宽，1H，吡嗪-H)。
实施例9
N-苄基-6-氯-N-甲基吡嗪-2-胺 使用与实施例1相似的方法，N-甲基苄胺和2，6-二氯吡嗪反应生成产物(70％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ3.11(s，3H，NCH3)，4.78(s，2H，ArCH2N)，7.24(d，J＝6.9Hz，2H，ArH)，7.37-7.28(m，4H，ArH)，7.81(s，1H，吡嗪-H)，7.88(s，1H，吡嗪-H)。
实施例101H-苯并咪唑-5-胺 将5-硝基苯并咪唑(10.0g，61.3mmol)在甲醇(250mL)中的溶液在大气压下在10％Pd/C(0.40g)存在下氢化20小时。将混合物用Celite?过滤，减压除去溶剂，得到纯产物(8.1g，100％)。
1H-n.m.r.(CD3OD)δ6.75(dd，1H，J＝8.4和2.0Hz，苯并咪唑-H)，6.92(d，1H，J＝2.0Hz，苯并咪唑-H)，7.36(d，1H，J＝8.4Hz，苯并咪唑-H)，7.92(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例111-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-胺和1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-胺
将1H-苯并咪唑-5-胺(2.93g，22mmol)、N-(叔丁基)-6-氯吡嗪-2-胺(3.71g，20mmol)和碳酸铯(9.12g，28mmol)在DMF(20mL)中的混合物在氮气下加热48小时。冷却至室温，将混合物过滤，真空浓缩滤液。用三氯甲烷萃取残余物，减压除去溶剂。将残余物经色谱法用二氯甲烷-甲醇(98∶2-93∶7)洗脱，从极性较低的部分中得到1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-胺(1.38g)1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.51(s，9H，C(CH3)3)，3.80(br s，2H，NH2)，4.84(br s，1H，NH)，6.74(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.21(d，1H，J＝2.0Hz，苯并咪唑-H)，7.62(d，1H，J＝9.2Hz，苯并咪唑-H)，7.79(s，1H，吡嗪-H)，8.07(s，1H，吡嗪-H)，8.17(s，1H，苯并咪唑-H)。
从极性较高的部分中得到1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-胺(1.54g)1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.51(s，9H，C(CH3)3)，3.48(br s，2H，NH2)，4.86(s，1H，NH)，6.79(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.14(d，1H，J＝2.0Hz，苯并咪唑-H)，7.70(d，1H，J＝8.6Hz，苯并咪唑-H)，7.78(s，1H，吡嗪-H)，8.07(s，1H，吡嗪-H)，8.47(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例121-(6-([(1S)-1-苯基乙基]氨基)吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-胺和1-(6-([(1S)-1-苯基乙基]氨基)吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺
向5-氨基-苯并咪唑(290mg，2.2mmol)在无水DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(980mg)。将所得混合物在70℃下搅拌60分钟。向其中加入6-氯-N-[(1S)-1-苯基乙基]吡嗪-2-胺(470mg)在DMF(5mL)中的溶液，然后将所得混合物加热回流48小时。减压除去DMF，用氯仿稀释残余物。用碳酸钠水溶液洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，并减压除去溶剂，得到粗产物。经柱色谱法用二氯甲烷-甲醇(95∶5-92∶8)作为洗脱液从未反应的原料中分离出两部分。Rf较高部分为6-异构体(276mg，42％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.64(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，2.90(br s，2H，NH2)，5.05(m，1H，CH)，5.21(d，1H，NH)，6.70(dd，1H，J＝8.7，2.1Hz，苯并咪唑-H)，6.97(d，1H，J＝1.8Hz，苯并咪唑-H)，7.28-7.43(m，5H，Ph-H)，7.58(d，1H，J＝8.4Hz，苯并咪唑-H)，7.84(s，1H，吡嗪-H)，8.08(s，1H，吡嗪-H)，8.21(s，1H，苯并咪唑-H)。m/z(ES)331(M++H)。
低级部分为5-异构体(170mg，26％)，1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.64(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，2.85(br s，2H，NH2)，5.01(m，1H，CH)，5.19(d，1H，NH)，6.70(dd，1H，J＝8.7，2.1Hz，苯并咪唑-H)，7.11(d，1H，J＝1.8Hz，苯并咪唑-H)，7.29-7.40(m，5H，Ph-H)，7.51(d，1H，J＝8.7Hz，苯并咪唑-H)，7.81(s，1H，吡嗪-H)，8.10(s，1H，吡嗪-H)，8.32(s，1H，苯并咪唑-H)。
m/z(ES)331(M++H)。
实施例131-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-胺和1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺 将1H-苯并咪唑-5-胺(0.8g，6mmol)、2，6-二氯吡嗪(0.9g，6.0mmol)和碳酸铯(2.73g，8.4mmol)在DMF(6mL)中的混合物在氮气下加热6小时。冷却至室温，将混合物用二氯甲烷-甲醇(6∶1，30mL)稀释，过滤，真空浓缩滤液。将残余物用二氯甲烷-甲醇(98∶2-94∶6)进行色谱从极性较低的部分中得到1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺(398mg)1H-n.m.r.(CDCl3)δ6.74(dd，1H，J＝8.2，2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.40(d，1H，J＝2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.51(d，1H，J＝8.2Hz，苯并咪唑-H)，8.40(s，1H，吡嗪-H)，8.48(s，1H，吡嗪-H)，8.83(s，1H，苯并咪唑-H)。
从极性较高的部分中得到1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-5-胺(435mg)1H-n.m.r.(CDCl3)δ6.79(dd，1H，J＝8.2，2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.03(d，1H，J＝2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.86(d，1H，J＝9.0Hz，苯并咪唑-H)，8.44(s，1H，吡嗪-H)，8.52(s，1H，吡嗪-H)，8.82(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例14
1-(6-[(环丙基甲基)氨基]吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺 将1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺(100mg，0.41mmol)和环丙基甲胺(424μL，4.1mmol)在含有DIPEA(140μL)的乙氧基乙醇(2mL)中的溶液在氮气下加热回流过夜。将溶液减压蒸发，将残余物溶于乙酸乙酯(20mL)中，依次用水(20mL)、1M HCl(2×20mL)、水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。干燥(Na2SO4)后减压除去溶剂，将残余物经色谱法用二氯甲烷-甲醇(9∶1-94∶6)洗脱从低级部分中分离出纯产物(98mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ0.28-0.36(m，2H，CH2)，0.57-0.66(m，2H，CH2)，1.08-1.22(m，1H，CH)，3.27-3.34(m，2H，CH2)，3.79(br s，2H，NH2)，5.02(m，1H，NH)，6.74(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.33(d，1H，J＝2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.61(d，1H，J＝9.2Hz，苯并咪唑-H)，7.84(s，1H，吡嗪-H)，8.10(s，1H，吡嗪-H)，8.35(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例151-[6-(异丙氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-胺 将1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺(100mg，0.41mmol)和异丙胺(350μL，4.1mmol)在含有DIPEA(140μL)的乙氧基乙醇(2mL)中的溶液在氮气下于密闭试管中加热。将溶液减压浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯(20mL)中，依次用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。干燥(Na2SO4)后减压除去溶剂，将残余物经色谱法用二氯甲烷-甲醇(9∶1-94∶6)洗脱从低级部分中分离出纯产物(102mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.33(d，6H，J＝6.4Hz，CH3)，3.79(br s，2H，NH2)，4.05-4.21(m，1H，CH)，4.72(m，1H，J＝7.2Hz，NH)，6.75(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.32(d，1H，J＝2.0Hz，苯并咪唑-H)，7.61(d，1H，8.4Hz，苯并咪唑-H)，7.79(s，1H，吡嗪-H)，8.09(s，1H，吡嗪-H)，8.35(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例161-[6-(二乙氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-胺 将1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺(100mg，0.41mmol)和二乙胺(430μL，4.1mmol)在含有DIPEA(140μL)的乙氧基乙醇(2mL)中的溶液在氮气下于密闭试管中加热。将溶液减压浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯(20mL)中，依次用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。干燥(Na2SO4)后减压除去溶剂，将残余物经色谱法用二氯甲烷-甲醇(9∶1-94∶6)洗脱从低级部分中分离出纯产物(110mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.28(t，6H，J＝7.1Hz，CH3)，3.61(q，4H，J＝7.1Hz，CH2)，3.78(br s，2H，NH2)，6.74(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz，苯并咪唑-H)，7.32(d，1H，J＝2.4Hz，苯并咪唑-H)，7.61(d，1H，J＝8.8Hz，苯并咪唑-H)，7.91(s，1H，吡嗪-H)，8.06(s，1H，吡嗪-H)，8.36(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例171-(6-吡啶-4-基吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺 在氮气氛下，用2M碳酸钠水溶液(0.14mL，0.84mmol)处理1-(6-氯吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺(50mg，0.20mmol)、4-吡啶基硼酸(30mg，0.24mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(23mg，0.02mmol)在甲苯-正丙醇(2mL，3∶1)中的混合物。在剧烈搅拌下将所得混合物加热回流过夜。冷却后用乙酸乙酯(10mL)稀释混合物，用水(1×10mL)洗涤。用乙酸乙酯(10mL)萃取水相，合并有机层，用0.5M碳酸钠、盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂，得到粗产物，经柱色谱法用二氯甲烷-甲醇(98∶2-91∶9)作为洗脱液纯化，得到产物(32mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ3.88(s，宽，2H，NH2)，6.80(dd，1H，J＝8.6和2.0Hz，苯并咪唑-H)，7.46(d，1H，J＝2.0Hz，苯并咪唑-H)，7.67(d，1H，J＝8.6Hz，苯并咪唑-H)，7.98-8.01(m，2H，吡啶-H)，8.49(s，1H，吡嗪-H)，8.84-8.87(m，2H，吡啶-H)，8.99(s，1H，吡嗪-H)，9.05(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例18N-{1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]}-1H-苯并咪唑-6-基}丙-2-炔酰胺 在氮气下，向1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-胺(70mg，0.25mmol)在无水二氯甲烷(2.5mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(86μL)、EDAC HCl(60mg)、4-(1-吡咯烷)吡啶(4mg)和丙酸(18.5μL)。然后将所得混合物在室温下搅拌过夜，用二氯甲烷(10mL)稀释，用水(2×10mL)、0.5M Na2CO3(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，将残余物经柱色谱法用二氯甲烷-甲醇(99∶1-91∶9)作为洗脱液纯化，分离出产物(1.8mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.52(s，9H，CH3)，4.76(br s，1H，NH)，5.78(br s，1H，CH)，6.75(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz，ArH)，7.22(d，1H，J＝2.2Hz，ArH)，7.63(d，1H，J＝8.0Hz，Ar-H)，7.79(s，1H，吡嗪-H)，8.08(s，1H，吡嗪-H)，8.37(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例19N-[1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-基]丙烯酰胺 向1-(6-{[(1S)-1-苯基乙基]氨基}吡嗪-2-基)-1H-苯并咪唑-6-胺(67mg，0.2mmol)在无水THF(2mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(67μL，0.48mmol)、EDAC HCl(46mg，0.24mmol)、4-(1-吡咯烷)吡啶(cat.)和丙烯酸(17mg，0.24mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌过夜，用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层用饱和Na2CO3水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，并真空除去溶剂。将残余物经柱色谱法用二氯甲烷-甲醇(98∶2-94∶6)作为洗脱液纯化，分离出产物(25mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.62(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，5.01-5.13(m，1H，CH)，5.38(d，1H，J＝6.4Hz，NH)，5.78(dd，1H，J＝9.8，2.0Hz，CH)，6.24-6.52(m，2H，2×CH)，7.29-7.44(m，6H，ArH)，7.70-7.74(m，2H，Ar-H)，7.82(s，1H，吡嗪-H)，8.11(s，1H，吡嗪-H)，8.33(s，1H，苯并咪唑-H)，8.42(s，1H，CONH)。
实施例20N-{1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-基}丙烯酰胺 在氮气下，向1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-胺(22mg，0.08mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(33μL，0.24mmol)、EDAC HCl(22mg，0.12mmol)、4-(1-吡咯烷)吡啶(cat.)和丙烯酸(8μL，0.12mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌3天，用水(10mL)稀释，分离有机相，用二氯甲烷(10mL)萃取水相。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，并真空除去溶剂。将残余物经柱色谱法用二氯甲烷-甲醇(98∶2-93∶7)作为洗脱液纯化，分离出产物(10mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.50(s，9H，CH3)，4.89(br s，1H，NH)，5.77(dd，1H，J＝10.0，2.0Hz，CH)，6.24-6.51(m，2H，2×CH)，7.25(dd，1H，J＝8.6，2.0Hz，ArH)，7.76(d，1H，J＝8.8Hz，Ar-H)，7.83(s，1H，吡嗪-H)，7.88(br s，1H，CONH)，8.13(s，1H，吡嗪-H)，8.52(s，1H，苯并咪唑-H)，8.56(s，1H，ArH)。
实施例21N-{1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-基}丙烯酰胺
在氮气下，向1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-胺(20mg，0.08mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(33μL，0.24mmol)、EDAC HCl(22mg，0.12mmol)、4-(1-吡咯烷)吡啶(cat.)和丙烯酸(8μL，0.12mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌3天，用水(10mL)稀释，分离有机相，并用二氯甲烷(10mL)萃取水相。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，并真空除去溶剂。将残余物经柱色谱法用二氯甲烷-甲醇(98∶2-92∶8)作为洗脱液纯化，分离出产物(10mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.52(s，9H，CH3)，4.87(br s，1H，NH)，5.77(dd，1H，J＝9.8，2.0Hz，CH)，6.31(dd，1H，J＝16.6，9.8Hz，＝CH(H))，6.48(dd，1H，J＝16.6，2.0Hz，＝CH(H))，7.73-7.81(m，2H，吡嗪-H+ArH)，7.89(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.01(s，1H，ArH)，8.10(s，1H，吡嗪-H)，8.55(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例22N-{1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-基}-2-甲基丙烯酰胺 根据与实施例21相同的方法，但是使用甲基丙烯酸代替丙烯酸，从1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-5-胺(57mg)得到N-{1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-基}-2-甲基丙烯酰胺(54mg)。
1H-n.m.r.(CDCl3+d4-MeOD)δ1.43(s，9H，CH3)，2.00(br s，3H，CH3)，5.42(br s，1H，＝CH(H))，5.77(br s，1H，＝CH(H))，7.32(dd，1H，J＝8.2，2.0Hz，ArH)，7.67(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，7.74(s，1H，吡嗪-H)，7.99(s，1H，吡嗪-H)，8.38(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，8.46(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例231-{6-[(2-甲基苯基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-苯并咪唑-6-胺 向该氯吡嗪(100mg，0.40mmol)在甲苯(2mL)中的搅拌溶液中加入邻甲苯胺(0.1mL，0.93mmol)，Pd[P(t-Bu)3]2(10mg)和叔丁醇钠(58mg，0.6mmol)。将溶液在80℃下加热过夜，冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)稀释。收集有机层，用乙酸乙酯(20mL)萃取水层，合并有机层，用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂得到油状残余物，经色谱法用二氯甲烷-甲醇(98∶2-94∶6)分离出期望的产物，为淡黄色油状物(52mg，41％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ2.34(s，3H，CH3)，3.70(s，2H，NH2)，6.61(s，1H，NH)，6.71(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz，ArH)，7.19-7.36(m，4H，ArH)，7.53-7.60(m，2H，ArH)，7.99(s，1H，吡嗪-H)，8.27(s，1H，吡嗪-H)，8.36(s，1H，苯并咪唑-H)。
实施例24(2Z)-N-{1-[6-(叔丁氨基)吡嗪-2-基]-1H-苯并咪唑-6-基}-3-吡啶-3-基丙烯酰胺 向该炔(30mg，0.07mmol)在无水乙醇(5mL)中的搅拌溶液中加入Lindlar催化剂(3mg)。然后用氢气净化混合物，在氢气和大气压下搅拌3小时。经Celite?过滤除去催化剂，真空除去溶剂。经闪蒸色谱法用乙酸乙酯-甲醇(9∶1)洗脱分离出纯产物，为粘稠半固体(13mg，43％)。
1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.50(s，9H，C(CH3)3)，4.93(s，1H，NH)，6.26(d，1H，J＝12.6Hz，C＝CH)，6.82(d，1H，J＝12.6Hz，C＝CH)，7.14(dd，1H，J＝8.7，2.1Hz，ArH)，7.25-7.29(m，1H，吡啶-H)，7.74(d，1H，J＝8.7Hz，ArH)，7.82(s，1H，吡嗪-H)，8.07(br s，1H，CONH)，8.09(s，1H，吡嗪-H)，8.13-8.16(m，1H，吡啶-H)，8.47(d，1H，J＝1.8Hz，吡啶-H)，8.50(s，1H，苯并咪唑-H)，8.51-8.53(m，1H，吡啶-H)，8.63(d，1H，J＝2.1Hz，ArH)。
m/z(EI)413(M+)。
实施例25N-(叔丁基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺
将亚硫酰氯(1mL，13.7mmol)加入该酸(315mg，2mmol)在甲苯(5mL)中的悬浮液中。然后滴入一滴DMF，在室温下搅拌10分钟后，将混合物加热回流1小时。将反应物冷却至室温，减压除去甲苯和过量的亚硫酰氯。然后向残余物中加入甲苯(1mL)，并减压将其除去。重复这一步骤，然后加入二氯甲烷(10mL)，将所得溶液冷却至0℃。然后加入叔丁胺(0.45mL，4.3mmol)和三乙胺(1.1mL，8.0mmol)，将溶液在室温下搅拌过夜。用二氯甲烷(10mL)和水(10mL)稀释溶液，收集有机相，用碳酸钠水溶液洗涤，然后干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂，将残余物用二氯甲烷-甲醇(95∶5)经闪蒸色谱法分离出纯化合物，为油状物(290mg，68％)1H-n.m.r.(CDCl3)δ1.49(s，9H，C(CH3)3)，7.48(br s，1H，NH)，8.72(s，1H，吡嗪-H)，9.27(s，1H，吡嗪-H)。
m/z(EI)413(M+)。
实施例261-(6-甲氧基吡啶-3-基)-5-硝基-1H-苯并咪唑和1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-硝基-1H苯并咪唑 将5-硝基苯并咪唑(650mg，4mmol)、2-甲氧基-5-吡啶基硼酸(420mg，2.6mmol)、乙酸铜(II)(1.09g，6mmol)和4?筛粉末的混合物在含有吡啶(0.65mL)的二氯甲烷(40mL)中剧烈搅拌。然后将混合物用Celite?过滤，用二氯甲烷-甲醇(4∶1)洗涤滤垫。合并滤液和洗涤液，真空浓缩，将残余物用二氯甲烷-甲醇(100∶0-95∶5)经色谱法分离出产物(为1∶1区域异构体的混合物)，为白色固体(272mg，37％)。
m/z(EI)270(M+)。
实施例271-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1H-苯并咪唑-5-胺和1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1H苯并咪唑-6-胺 将实施例26中得到的区域异构体的混合物(270mg，1mmol)根据实施例10中描述的方法氢化。将粗产物经色谱法用二氯甲烷-甲醇(92∶2-95∶5)洗脱从极性较低的部分中分离出6-异构体(84mg)，从极性部分中分离出5-异构体(122mg)。
6-异构体1H-n.m.r.(CDCl3)δ3.88(br s，2H，NH2)，4.01(s，3H，OCH3)，6.64(d，1H，J＝2.1Hz，苯并咪唑-H)，6.72(dd，1H，J＝8.7，2.1Hz，苯并咪唑-H)，6.92(d，1H，J＝9.0Hz，苯并咪唑-H)，7.61-7.68(m，2H，吡啶-H)，7.82(s，1H，苯并咪唑-H)，8.30(d，1H，J＝2.7Hz，吡啶-H)。
5-异构体1H-n.m.r.(CDCl3)δ3.11(br s，2H，NH2)，4.01(s，3H，OCH3)，6.75(dd，1H，J＝8.4，2.1Hz，苯并咪唑-H)，6.92(d，1H，J＝8.7Hz，苯并咪唑-H)，7.15(d，1H，J＝2.1Hz，苯并咪唑-H)，7.18(d，1H，J＝8.7Hz，吡啶-H)，7.68(dd，1H，J＝8.7，2.7Hz，吡啶-H)，7.91(s，1H，苯并咪唑-H)，8.31(d，1H，J＝2.7Hz，吡啶-H)。
实施例281-(5-溴吡啶-3-基)-1H-苯并咪唑-6-胺和7-(5-溴吡啶-3-基)-1H苯并咪唑-5-胺 将3，5-二溴吡啶(2.37g，10mmol)、5-氨基苯并咪唑(1.60g，12mmol)和碳酸铯(4.9g，15mmol)在DMSO(10mL)中的溶液在150℃下加热18小时。将溶液冷却至室温，用CHCl3(40mL)稀释，用Celite?过滤，真空浓缩滤液。将残余物经色谱法(预吸附于硅胶上)用乙酸乙酯-甲醇(100∶0-95∶5)洗脱从极性较低的部分中分离出6-异构体，从极性较高的部分中分离出5-异构