人核黄素激酶在制备抗辐射损伤的药物中的用途[0002]RFK是分子量约为17KD的蛋白酶，由155个氨基酸组成，隶属于转移酶家族，是核黄素在体内转化为核黄素单核苷酸(FMN)的催化酶，FMN迅速转化为核黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。核黄素只有转化为FMN、FAD才能被机体利用。人RFK氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示(数据来源于NCBI，蛋白编号GI =269973877)[0003]文献报道(EstrelaJM, Ortega A, Obrador E.Glutathione in cancer biologyand therapy.Crit Rev Clin Lab Sci, 2006,43 (2): 143-181.), RFK 过表达使细胞内谷胱甘肽含量增加，从而增加细胞抗氧化能力。目前人RFK在抗辐射损伤领域的应用尚未见报道。
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供人RFK的一种新的医药领域的应用，从而拓展其应用范围。[0005]本发明涉及人RFK在制备抗辐射损伤的药物中的应用。其中，所述的人RFK的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。所述的抗辐射损伤作用，包含为预防或治疗辐射损伤的药物。所述的抗辐射损伤的药物中，可以仅含有人RFK作为唯一活性成分，也可以还含有除人RFK以外的其他活性成分。所述的其他活性成分为对人RFK的抗辐射损伤作用没有不良影响的、可联合使用的其他活性成分，如其他抗辐射损伤的活性成分。[0006]所述的抗辐射损伤的药物中，人RFK的含量为治疗有效量以上，具体可根据需要选择。所述的抗辐射损伤的药物可为本领域常规使用的适用于人RFK的各种剂型。根据所选择的剂型，可按本领域常规知识，选择合适的辅料，按常规方法制得。[0007]本发明所用的试剂和原料均市售可得。
[0008]本发明的积极进步效果在于:本发明提供了人RFK在制备抗辐射损伤的药物中的新应用，从而拓展了其应用范围，也为辐射损伤领域提供了新治疗途径。



[0009]图1人RFK对大鼠辐射后30天存活率的影响。

[0010]通过以下实施例对本发明作进一步说明，但并不限制本发明的保护范围。
[0011]实施例1
[0012] 人RFK蛋白的表达和纯化参考文献:Riboflavin kinase couples TNFreceptorlto NADPH oxidase[J](Yazdanpanah B, Wiegmann K, Tchiko, V, Krut 0,Pongratz C, Schramm M, Kleinridders A, Wunderlich T, Kashkar H, Utermohlen 0,Briining JC, Schiitze S, and Kr5nke M.Nature2009,460:1159-1163.),基本工艺流程如下:
[0013](I)分子克隆:
[0014]A.提取QSG-7701 (人肝细胞)细胞株RNA，RT-PCR法获得目的基因RFK的cDNA ；
[0015]B.构建真核质粒载体(GE Healthcare):构建 pGEX_4T_3-RFK ;
[0016]C.表达筛选。
[0017](2)中试发酵。
[0018](3)蛋白纯化:发酵上清液层析，条件为50mM Tris-HCl, pH8.0/glutathione-Sepharose4B (GE Healthcare)。将洗脱液进行蛋白电泳，切取相应分子量位置条带，并进行质谱分析，以确保合成的是人RFK蛋白。
[0019]所获得的RFK蛋白溶液浓度为0.31mg/ml。
[0020]雄性SD大鼠20只，体重200_220g，由上海西普尔必凯公司提供。大鼠饲养于金属笼中，5只/笼。大鼠饲养于温度为23±3°C、湿度为55±15%的房间中。自由摄食摄水。20只大鼠随机分为对照组、RFK组共2组，每组10只。RFK组大鼠每天尾静脉注射人RFK100nmol/kg(人RFK蛋白溶液稀释至40nmol/ml),连续给药10天。对照组大鼠每天尾静脉注射同体积生理盐水。所有大鼠于第3天注射后30min，全身暴露于6tlCo Y射线电离辐射。辐射剂量为6.5Gy，剂量率为1.625Gy/min。以大鼠辐照后30天存活率作为评价抗电离辐射损伤功效的指标。
[0021 ] 表1RFK对大鼠辐射后30天存活率的影响[0022]