专利名称：防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法的制作方法目前，鸡传染性法氏囊病Qnfectious bursal disease，IBD)是一种由双股RNA 病毒引发的破坏鸡的免中枢器官法氏囊的病毒性传染病。该病一方面由于鸡只死亡率、淘汰率增加，影响鸡体增重，造成直接经济损失；另一方面由于IBDV诱发免疫抑制，使鸡群对多种疫苗(如鸡新城疫活疫苗、鸡传染性支气管炎活疫苗、鸡马立克氏病活疫苗等)的免疫应答能力下降或无免疫应答。同时由于机体免疫机能下降，病鸡对病原体易感性增加，容易并发或继发多种其他疾病，如大肠菌病等。对此病所采取的措施是进行疫苗的免疫接种，但免疫效果并不理想，经常出现免疫失败的现象。一旦出现免疫失败的鸡群，则主要依靠被动免疫的方法，对鸡群注射免疫球蛋白。现在所使用的免疫球蛋白主要是卵黄免疫球蛋白。这种免疫球蛋白在体内很快被破坏，半衰期短，作用时间短。
本发明为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白(IgY)纳米脂质体的制法。本发明的目的是提供一种利用脂质体制药技术，将卵黄免疫球蛋白包封，从而提高疗效，具有工艺简单，经济实用，制剂性能稳定，治疗效果好，应用范围广等特点的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法。脂质体是由亲油和亲水的双亲分子所构成的，在分子中亲油性的尾端部分位于膜的中间，而亲水首端部分形成膜的内外表面，药物被包容于双分子层中；囊壁是由双分子膜组成。因而，脂质体是一种具有类似生物膜结构的囊泡，可与细胞发生吸附、融合、脂交换将包封的药物直接带入细胞，使药物具有细胞靶向性而提高治疗指数或提高生物利用度。 通过脂质体包被药物可以免受各种生物酶的破坏，延长药物在血液循环中停留的时间，从而提高药物的生物利用度，故对药物具有保护作用，使药物免受生物酶类的破坏和各种因素的干扰，有利于药物在体内的运输。本发明利用脂质体制药新技术，将卵黄免疫球蛋白包封，从而达到提高疗效的目的。本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特征是黄免疫球蛋白纳米脂质体的制备包括以下工艺过程，1)卵黄抗体的制备采用多次、交替的免疫方法，对鸡进行疫苗接种；当鸡卵黄抗体 AGPT检测效价在1 :64以上时，收集卵黄；2)分离免疫球蛋白用乙酸一乙酸钠缓冲液，将卵黄悬液进行稀释，搅拌、静置、离心， 保留上清液；3)制备脂质体采用薄膜分散法，制成脂质体薄膜；加入卵黄免疫球蛋白经旋转、搅拌，形成卵黄免疫球蛋白脂质体囊体；用勻浆机对形成的脂质体进行重整，得到纳米级的脂质体。本发明防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法还可以采用如下技术方案所述的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特点是分离免疫球蛋白时，用PH 4. 0 - 6. 0的乙酸一乙酸钠缓冲液，将卵黄悬液进行6 - 12倍稀释，得到的上清液进行浓缩处理。所述的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特点是上清液采用超滤法进行浓缩处理。所述的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特点是分离免疫球蛋白时，静置条件为2 — 6°C、12小时以上；离心条件为800 - 2000XgUO 一 30mirio所述的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特点是疫苗为弱毒疫苗、灭活疫苗和油乳剂疫苗；基础免疫选用弱毒疫苗和灭活疫苗；加强免疫选用灭活疫苗和油乳剂疫苗。所述的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特点是制成脂质体薄膜时，卵磷脂和胆固醇的比例为6 - 8:1，维生素E为稳定剂，用量3 — 7 %。，加工步骤为混合、有机溶剂溶解、旋转蒸发、减压、成膜。所述的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特点是 制备脂质体时，加入卵黄免疫球蛋白到脂质体薄膜的旋转蒸发瓶中进行旋转，时间10 -35min，形成卵黄免疫球蛋白脂质体囊体。所述的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，其特点是制备脂质体时，用勻浆机对形成的脂质体进行重整包括切分、重整、再包裹得到纳米级的脂质体；勻浆机速度为8000 - 20000rpm,时间为5 — 20min。本发明具有的优点和积极效果是
防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法由于采用了本发明全新的技术方案，与现有技术相比，防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法，利用脂质体制药技术，将卵黄免疫球蛋白包封，从而达到提高疗效的目的，具有工艺简单，经济实用，产品性能稳定，治疗效果好，应用范围广等优点。


图1是本发明的工艺流程示意图。

4实施例1 参阅附图1。本发明防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制备方法，包括以下工艺步骤
1、卵黄抗体的制备采用多次、交替的免疫方案，对实验鸡进行疫苗接种。当实验鸡卵黄抗体AGPT检测效价在1 :64以上，收集卵黄。2、分离免疫球蛋白用pH 5.0的乙酸一乙酸钠缓冲液，将卵黄悬液进行9倍稀释， 搅拌、静置、离心、保留上清液。将上清液进行浓缩处理。3、制备脂质体采用薄膜分散法，制成脂质体薄膜；加入卵黄免疫球蛋白经旋转、 搅拌，形成卵黄免疫球蛋白脂质体囊体。再用高速勻浆机对已经形成的脂质体进行重整，得到纳米级的脂质体。本实施例的具体工艺流程包括 1、卵黄抗体的制备
采用多次、交替的免疫方案，对实验鸡进行疫苗接种。所用疫苗为弱毒疫苗、灭活疫苗和油乳剂疫苗。基础免疫选用弱毒疫苗和灭活疫苗；加强免疫选用灭活疫苗和油乳剂疫苗； 为保持高水平的免疫效价而进行的维护性免疫采用上述3种疫苗的交替使用，对不同疫苗的使用是根据抗体水平的不同作为依据来确定的。当实验鸡卵黄抗体AGPT检测效价在1 :64以上，即可收集鸡蛋，对其进行浸泡消毒，无菌分离卵黄和蛋清，将卵黄勻浆并加入适量防腐剂，保存备用。2、分离免疫球蛋白
取上述卵黄悬液，用0.05 mol / L，pH 5. 0的乙酸一乙酸钠缓冲液，将卵黄悬液进行9 倍稀释，充分搅拌后，4°C条件下静置12小时以上。1 OOOXg离心20 min，弃去沉淀，保留上清液。将上清液采用超滤法对其进行浓缩处理，超滤后的体积与原卵黄悬液相同。3、制备脂质体
脂质体制备采用薄膜分散法，卵磷脂和胆固醇的比例为7:1左右，以维生素E为稳定剂，用量为5 %。左右。经混合、有机溶剂溶解、旋转蒸发、减压、成膜等步骤初步制成脂质体薄膜。将上述分离得到的卵黄免疫球蛋白加入到初步制成的脂质体薄膜的旋转蒸发瓶中进行旋转，使脂质体薄膜对卵黄免疫球蛋白充分接触并将其包裹，旋转时间大约20分钟左右，此时液体呈现均勻的乳白色，初步形成卵黄免疫球蛋白脂质体囊体。将初步形成的卵黄免疫球蛋白脂质体囊体转移的高速勻浆机中，用高速勻浆机对已经形成的脂质体进行切分、重整、再包裹等过程，以得到纳米级的脂质体。勻浆速度为 IOOOOrpm,时间为10分钟左右。本实施例制备的防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体具有所述的优点和积极效果。


本发明涉及一种防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制法。本发明属于动物药品制剂技术领域。防治鸡传染性法氏囊病卵黄免疫球蛋白纳米脂质体的制备过程1、卵黄抗体的制备多次、交替免疫方法对鸡进行疫苗接种；当鸡卵黄抗体AGPT检测效价在164以上时，收集卵黄；2、分离免疫球蛋白用乙酸—乙酸钠缓冲液，将卵黄悬液进行稀释，搅拌、静置、离心，保留上清液；3、制备脂质体采用薄膜分散法，制成脂质体薄膜；加入卵黄免疫球蛋白经旋转、搅拌，形成卵黄免疫球蛋白脂质体囊体；用匀浆机对形成的脂质体囊体进行重整，得到纳米级的脂质体。本发明将卵黄免疫球蛋白包封，具有工艺简单，经济实用，制剂性能稳定，治疗效果好等优点。