专利名称：抗原性glp-1类似物的糖链加成物的制作方法GLP-I (类胰高糖素肽-I glucagon-like peptide-1)是ー种源于肠道的肽，其与糖稳态的调控极有关联。GLP-I是作为胰高糖素前驱物的前胰高糖素蛋白原(preproglucagon)经组织特异性转译后修饰作用(post-translational processing),在肠道的L细胞中合成的，其对进食作出反应，并在循环系统中释出。该肽是肠胰岛轴(enteroinsular axis)的首要介体(mediator) ,通过与特定受体(receptor)结合而作用。已知GLP-I主要在胰腺中作用，以与葡萄糖浓度相关的方式促进β细胞释出胰岛素。此外，还教导称，它可抑制胰高糖素分泌，延缓胃排空作用，提高末梢葡萄糖处理。在施用GLP-I时，在非胰岛素依赖型糖尿病患者中可以使其饭后葡萄糖浓度趋于正常，因此显示GLP-I作为治疗药的可能性。GLP-I在胰岛素依赖型糖尿病患者中，对血糖的控制亦具有改善作用。此外，因GLP-I的胰岛素释出促进作用依赖于血浆中葡萄糖浓度，在血浆葡萄糖浓度低吋，由GLP-I介导的胰岛素释出作用降低，因此其具有不会导致严重低血糖症的优点。因此，一般认为其可依照需要控制血液中GLP-I量，故在治疗糖尿病上可能具有高安全性。但GLP-I在血液中的半衰期极短，为2至6分钟，因此在作为治疗剂的可能性上会有受其限制的问题。因此,作为此问题的解决手段，已有各种改变GLP-I的试验。例如,在专利文献I中，已掲示由至少I个聚こニ醇(PEG)分子共轭键合在GLP-I化合物上的聚こニ醇化GLP-I化合物。在该聚こニ醇化GLP-I化合物中，各PEG键合在GLP-I化合物中的Cys或Lys氨基酸、或在其羧基末端氨基酸。该聚こニ醇化GLP-I化合物具有至少I小时的排出半衰期。依照专利文献I中所述，其可比非聚こニ醇化肽延长其半衰期，因此可成为ー种清除(clearance)延迟化的生理活性肽。同时，其中亦掲示，此聚こニ醇化GLP-I化合物及组合物，具有降低糖尿病、肥胖、过敏性肠综合症、降血糖，以及抑制胃和/或肠道运动的作用，抑制胃和/或肠道内容物排泄的作用，及抑制食物摄入的作用等，因此可用于健康状态的治疗(例如非专利文献I)。但由于PEG并非可体内代谢的化合物，持续施用聚こニ醇化GLP-I化合物时，会有PEG蓄积在体内，对身体造成药物引起的损害的风险(非专利文献I)。其次，为延长其半衰期，亦有提议在GLP-I及其改性体中加入糖链的方法(例如专利文献2及3)。另ー方面，在专利文献2中，曾掲示以分子量200KDa左右的透明质酸修饰物键合在GLP-I类似物的方法。然而，此类巨型透明质酸分子在大量制造时，要使其长度及结构均一并不容易，一般所知的实际情形是各透明质酸的结构及长度存在相当程度的差异。然而，在作为医药品时，在肽上加成的糖链须要其长度及结构为均一。另ー方面，在专利文献3中，曾掲示在GLP-I的第26位、第34位、和/或第37位导入糖链加成氨基酸的方法等，但其糖链的种类及糖链加成的位置却未必是最优的。再者，本发明人等亦已开发出改变糖链种类及加成位置，以得到血中半衰期延长、活性高的糖链加成GLP-I (例如专利文献4)。另ー方面，作为具有类似于GLP-I的结构、同样的活性，且血中稳定性高的化合物，在墨西哥希拉毒蜥(Heloderma)的唾液中发现的促胰岛素分泌肽_4 (exendin_4)(非专利文献2)已在美国上市。但该促胰岛素分泌肽_4为非人类型序列，比其他GLP-I类似物具有更高抗原性，因此在长期施用时存在中和抗体及伴随药效减低的顾虑(非专利文献3至5)。另ー方面，已开发在GLP-I上键合脂肪酸的利拉鲁肽(Liraglutide),其亦为GLP-I类似物之一(例如參考非专利文献6至8)。键合脂肪酸时，可提高与白蛋白之亲和性。由干与白蛋白键合的利拉鲁肽可向血液中缓释，因此期待具有半衰期约10小时的长时 间作用。由于I日I次皮下注射即足够，故便利性亦高。同时，其不仅可并用亦可用在単独疗法。然而，由于利拉鲁肽具有与天然型不同之结构，其与促胰岛素分泌肽_4同样有抗原性之顾虑。特别由于利拉鲁肽所施用量的约99%与白蛋白结合，须增加其施用量，因此在这点上必须先尽量降低该化合物之抗原性。专利文献I日本特表2006-520818号公报专利文献2日本再表2006-095775号公报专利文献3国际公开第2007/063907号小册子专利文献4国际公开第2008/155900号小册子非专利文献I Bendele, A. et al. Toxicological Science, 1998，42 :152-157非专利文献2 Journal of Biological Chemistry, 1992, 267 :7402-7405非专利文献3 Schnabel, C. A. et al. Vascular Health and Risk Management,2006,2 :69-77非专利文献4 Amori, R. E. et al. The Journal of the American MedicalAssociation,2007, 298 194-206非专利文献5 ffajchenberg, B. L. Endocrine Reviews, 2007, 28 :187-218非专利文献6 Marre, M. et al. =Diabetic Medicine, 2009, 26 (3) :268-278非专利文献7 Deacon, C. F. Vascular Health and Risk Management, 2009, 5 199-211非专利文献8 Larsen, P. J. et al. :Diabetes, 2001, 50 :2530-2539
本发明所要解决的问题本发明的目的在于提供ー种GLP-I类似物，该GLP-I类似物是通过改良高抗原性GLP-I类似物，以在不降低其血糖值抑制活性的情况下降低抗原性而获得的。解决问题之手段本发明人为解决上述问题，经再三研究，结果发现通过在例如促胰岛素分泌肽_4等具有抗原性的GLP-I类似物中加成糖链，可在不降低血糖值抑制活性的情况下降低抗原性，因此完成了本发明。亦即，本发明涉及[I]具有GLP-I活性的抗原性GLP-I类似物的糖链加成物，其中，所述抗原性GLP-I类似物中的至少I个氨基酸被糖链加成氨基酸所取代；[2]如上述[I]中所述的抗原性GLP-I类似物的糖链加成物，其中，前述糖链加成氨基酸为糖链加成Asn或糖链加成Cys ；[3]如上述[I]或[2]中所述的抗原性GLP-I类似物的糖链加成物，其中，在前述糖链加成氨基酸中，所述糖链与所述氨基酸是经由连接子(linker)键合的；[4]如上述[I]至[3]中任I项所述的抗原性GLP-I类似物的糖链加成物，其中，前述糖链为由4个或多于4个的糖所构成的糖链；[5]如上述[I]至[4]中任I项所述的抗原性GLP-I类似物的糖链加成物，其中，前述糖链为双股链复合型糖链；[6]如上述[5]所述的抗原性GLP-I类似物的糖链加成物，其中，前述糖链为从由ニ唾液酸糖链、单唾液酸糖链、去唾液酸糖链、diGlcNAc糖链及ニ甘露糖链所组成的组中选择的糖链；[7]如上述[5]所述的抗原性GLP-I类似物的糖链加成物，其中，前述糖链为如下所示的糖链本发明公开了一种GLP-1类似物，该GLP-1类似物是通过改良高抗原性GLP-1类似物以在不降低其血糖值抑制活性的情况下降低其抗原性而获得的。具体地说，本发明公开了一种具有GLP-1活性的抗原性GLP-1类似物的糖链加成物，其通过使抗原性GLP-1类似物中至少1个氨基酸被糖链加成氨基酸取代而获得。