一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法

张涛, 王联结

2012年9月19日

2012年5月11日

2012年5月11日

陕西科技大学

C12Q1/34GK102676635SQ20121014437

纤维素酶 检定 因素 作用 影响

1.一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法，其特征在于所述的检测方法为首先将影响纤维素酶作用的物质和滤纸结合，再加入纤维素酶溶液进行纤维素水解，观察滤纸的崩解速度和检测单糖的生成量2.根据权利要求I所述的一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法，其特征在于所述的影响纤维素酶作用的物质为蛋白质、酶或木质素3.根据权利要求2所述的一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法，其特征在于所述结合的方式为滴加或涂抹

本发明涉及一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法ニ背景技术 迄今为止，纤维素酶总活力的測定方法仍采用滤纸法，滤纸法的好处在于可以从直接观察到的滤纸的崩解和单糖的定量两个方面得到纤维素酶活力的大小变化在研究检定影响纤维素酶作用的因素时，这一方法更是被普遍采用在研究影响纤维素酶作用因素的方法中，通常是将待检定的影响因素物质溶解在含纤维素酶的溶液中，然后用滤纸法检测纤维素酶活力的变化由于待检定的物质在溶液中的溶解性会出现变化，特别是无法直观说明待检定物质是否是因为和纤维素作用，而不是和纤维素酶作用而影响到纤维素酶的活力因为处在纤维素酶溶液中的待检定物质有可 能和纤维素酶结合，也可能是和纤维素结合，也可能同时和纤维素、纤维素酶结合例如无法具体说明从长期存放的秸杆中提取得到蛋白质是否、如何影响纤维素酶水解秸杆中的纤维素在生物质こ醇技术的研究中，需要一种直观、简单、快速、廉价的能够用于掲示生物质中影响纤维素酶作用的物质的检测方法发明内容 本发明为了解决上述背景技术中的不足之处，提供一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法，其缩短测试周期、降低实验成本、操作分析简便、提高实验精确并保障数据重现性为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法，其特征在于所述的检测方法为首先将影响纤维素酶作用的物质和滤纸结合，再加入纤维素酶溶液进行纤维素水解，观察滤纸的崩解速度和检测单糖的生成量所述的影响纤维素酶作用的物质为蛋白质、酶或木质素所述结合的方式为滴加或涂抹与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下 1、本发明可以明确知道何种成分和纤维素结合而影响了纤维素酶作用； 2、本发明可以用于蛋白质、木质素、半纤维素及其它生物质组分对纤维素酶作用的研究; 3、本发明操作方便、准确性较高、可用于实验室快速測定具体实施例方式 一种检定影响纤维素酶作用因素的检测方法，所述的检测方法为首先将影响纤维素酶作用的物质(蛋白质、酶、木质素及其他影响纤维素酶作用的物质)和滤纸结合(结合的方式为滴加或涂抹)，再加入纤维素酶溶液进行纤维素水解，观察滤纸的崩解速度和检测单糖的生成量本发明提取农作物秸杆中的蛋白质，然后将提取得到的蛋白液与纤维素酶共同作用于纯纤维素的水解上述农作物秸杆为采摘后常温下贮存半年的小麦秸杆提取蛋白质的方法是将采摘后常温下贮存半年的小麦秸杆，用高速粉碎机打成粉末，过60目筛，称取5. Og该粉末于研钵中，加入一定量(pH4. 8，50mM醋酸钠缓冲液，30mM抗坏血酸)的研磨缓冲液进行研磨，水洗直至滤液澄清，滤渣即制得的细胞壁组织将处理过的麦杆细胞壁组织放于IOOml小烧杯中，然后按照110添加SDS裂解缓冲液，在30°C条件下浸提过夜(12h)，次日将浸提液4°C，10000转离心15min得到上清液在上清液中缓慢加入等体积预冷(_20°C)的95%こ醇，冰浴搅拌lOmin，然后置于冰箱中2小时4°C, IOOOOrpm离心IOmin获得こ醇沉淀物，将沉淀物中的こ醇挥发干以后加入2到3倍体积PH4. 8的醋酸-醋酸钠缓冲液，再置于冰浴上振荡IOmin后，于冰箱内静置2小吋，最后4°C, 10000转离心15分钟，舍弃不溶性物质，得到的上清液即提取得到的蛋白质SDS裂解缓冲液配方如下__