专利名称：杭白菊多倍体优良品种的培育和一步成苗快繁技术的制作方法菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat的干燥头状花序。菊花入药历史悠久，为常用大宗中药材品种，同时又是药食两用，国内外市场需求量越来越大，目前药用的四大名菊有杭白菊、贡菊、滁菊和毫菊，分布于大江南北，其中杭白菊的生产量，市场需求量最大。但是目前杭白菊品种退化严重，为解决菊花品种退化问题、提高菊花药材的产量和质量，我们应用组织培养技术首先对杭白菊进行了茎尖培养脱病毒技术的研究，接着在无菌离体条件下，进行了杭白菊多倍体的诱导和选育研究，并对诱导获得的株系的产量性状，化学成分含量和若干生理指标进行了測定，前后经过8年的不懈努力，最终选育出了高产优质的杭白菊多倍体优良品种，同时为了加快优良品种的生产应用推广工作，研究成功了诱导杭白菊产生大量丛生芽的培养基，研究成功了试管苗一歩法培育技术，为杭白菊优良品种的大面积推广应用，降低生产成本，提高经济效益提供了技术的可行性。
本专利包括以下4个方面的技术创新1.杭白菊改良热处理脱病毒技术杭白菊是药食两用经济作物，各地发展很快，但是杭白菊很容易感染多种病毒病， 感染了病毒病的杭白菊品种退化，叶子皱縮，生长缓慢，花一年比一年小、畸形，品质差，一般减产30-80%。并逐年加重。杭白菊的经济效益大幅度下降，严重地阻碍了杭白菊生产的发展。目前对病毒病还没用有效的农药进行防治，即使有一些农药可用，但是病毒病防治效果很差，还往往引起农药残留超标，病毒病已经成为杭白菊生产的“癌症”。对于杭白菊病毒病，我们研究成功了本专利的第一项技术一杭白菊改良热处理脱病毒技术；应用本专利技术脱病毒效果可以达到90%以上，培育出来的脱毒杭白菊在各地生产试验中均表现出明显的增产效果，增产效果达到30-50%左右，一般杭白菊感病毒愈严重，应用脱病毒苗后的增产效果愈明显。2.杭白菊多倍体的诱导和选育技术在杭白菊脱病毒技术成功的基础上，为了进一步提高杭白菊的产量和质量，进行了培育杭白菊优良品种的研究，我们进行了无菌条件下的杭白菊多倍体的诱导和选育，形成了本专利技术的第2项技术一杭白菊多倍体的诱导和选育技木，研究结果表明菊花从生芽经0. 2%秋水仙碱溶液处理3 后接入培养基中诱导多倍体的效率最高，达到13. 3%0 通过根尖染色体显微鉴定；通过3年的田间试验选育工作，成功地选育出了高产，优质的杭白菊多倍体优良品种，产量可以比二倍体脱病毒苗进ー步提高30-50%。可以提供生产上示范推广应用。3.诱导杭白菊产生大量从生芽的培养基配方杭白菊脱病毒，多倍体优良品种培育成功后，为了在生产上尽快推广应用，需要解决优良品种种苗的快速繁殖的技术问题，才能够在短时间内繁殖才大量优质种苗提供生产上推广应用，为此经过大量的培养基筛选试验，得到了杭白菊试管苗大量丛生芽诱导培养基，得到了最佳杭白菊繁殖培养基配方，(MS+BA0. 2-1. 0mg/L+IAA0. 05-0. 5mg/L)；应用该培养基配方，毎月杭白菊的繁殖速度可以达到20-30倍，为杭白菊优良品种大面积生产奠定/ ^fl LD O4.试管苗一歩法培育技术在以上研究工作的基础上，杭白菊优良品种试管苗可以在实验室达到エ厂化生产水平，但是每一株试管苗还是需要经过2-3次培养，经过2-3个月的培养才能够生产出来， 为了进一歩降低成本，提高生产应用的可行性，提高杭白菊优良品种推广应用的经济效益， 我们进ー步进行了培养基的简化试验，探讨能否进行一歩法(一次接种培养技木)快速繁殖出大量的杭白菊优良品种试管苗，经过大量试验，最后建立了一歩法培养技术，试管苗仅仅通过一次接种在ー步法培养基上(MS+IAA0. 2-1. 0mg/L+PP333 0. 1-1. Omg/L)，就能够在30天内先后完成繁殖和生根两个培养过程。应用一歩法培养技木，可以降低生产成本 50%，同时在时间上进一歩加快了繁殖速度，在生产中具有很好的应用前景，必将进ー步提高了杭白菊优良品种推广应用的经济效益。本发明的有益效果对于杭白菊病毒病，我们研究成功了本专利的第一项技木---杭白菊改良热处理脱病毒技术；应用本专利技术脱病毒效果可以达到90%以上，培育出来的脱毒杭白菊在各地生产试验中均表现出明显的增产效果，增产效果达到30-50% 左右，一般杭白菊感病毒愈严重，应用脱病毒苗后的增产效果愈明显。本专利技术的第2项技木--杭白菊多倍体的诱导和选育技木，诱导多倍体的效率最高达到13. 3%。并得到了最佳杭白菊繁殖培养基配方，应用该培养基配方，毎月杭白菊的繁殖速度可以达到20-30倍， 同时应用一歩法培养技术，可以降低生产成本50 %。图1为本发明的二倍体杭白菊的染色体2η =れ=40图2为本发明的四倍体杭白菊的染色体2n = 4x = 80图3为本发明诱导杭白菊多倍体的秋水仙处理时间和效果试验数据统计图

7.在无菌条件下，将生长点置于最优化的细胞启动培养基上进行培养40天。获得无病毒愈伤组织。8.在无菌条件下，将无病毒愈伤组织转移到最佳杭白菊繁殖培养基上，培养30天获得大量丛生芽。9.在无菌条件下，将获得大量丛生芽转移到杭白菊生长培养基上，经过30天的培养，丛生芽生长成为无根试管苗。10.在无菌条件下，将无根试管苗转移到杭白菊生根培养基上培养20天，生长成为可以移栽的试管苗。11.在无菌条件下，将无病毒愈伤组织转移到一歩法培养基上，培养30天获得大量有根的试管苗，提供苗床育苗。12.将杭白菊试管苗移植到育苗苗床，经过1-2月的培育，成为脱毒杭白菊原种小
田ο13.脱毒杭白菊原种小苗移植到苗圃中进行正常气候条件下的繁殖，当年可以繁殖出50-100倍的脱毒杭白菊原种大苗，提供进行生产示范推广和繁殖。


一种杭白菊多倍体优良品种的培育和一步成苗快繁技术，对有病毒的杭白菊芽需要进行脱病毒处理，取出生长点，置于最优化的细胞启动培养基上进行培养40天，获得无病毒愈伤组织，经数次移栽，获得大量丛生芽。杭白菊丛生芽经0.2％秋水仙碱溶液处理36h后接入培养基中诱导多倍体的效率最高，达到13.3％。本发明同时建立了一步法培养技术，试管苗仅仅通过一次接种在一步法培养基上，就能够在30天内先后完成繁殖和生根二个培养过程。应用一步法培养技术，可以降低生产成本50％，同时在时间上进一步加快了繁殖速度在生产中具有很好的应用前景，必将进一步提高了杭白菊优良品种推广应用的经济效益。