从植物果仁中提取的果仁油,其提取方法、药物组合物及应用制作方法

李大鹏

2003年3月5日

2002年4月16日

2002年4月16日

李大鹏

C11B1/00GK1400298SQ0210886

果仁 提取 植物

1.一种从植物果仁中提取的果仁油，其特征在于包含甘油三酯90-99.9％，甘油二酯0.01-5％，甘油单酯0.01-3％，谷甾醇0.1-2.5％，环羊毛甾醇0.01-1％2.根据权利要求1所述的果仁油，其特征在于所述果仁油酯解后的脂肪酸组分为十六烷酸5-8％，十八烷酸1-3％，十八碳一烯酸18-30％，十八碳二烯酸50-65％，十八碳三烯酸6-14％3.根据权利要求1所述的果仁油，其特征在于按脂肪油检测其理化常数为相对密度0.920-0.930；折光率1.470-1.480；酸值＜0.80，碘值120.0-155.0；皂化值180.0-200.0，过氧化值＜30.0meq·kg-1；炽灼残渣0.01-0.04％，砷盐＜2ppm；重金属＜10ppm；平均分子量873.964.根据权利要求1-3之一所述的果仁油，其特征在于以酸枣仁、花椒仁或核桃仁为原料5.权利要求1所述果仁油的提取方法，其特征在于包括以下步骤(1)粗提果仁或果仁粉经压榨，有机溶剂提取或超临界流体提取得到粗油；(2)脱色用吸附脱色剂脱色，得到脱色油；(3)碱炼将脱色油溶于石油醚，搅拌下加入化学计量的NaOH溶液，静置分层后，有机层经水洗，得到乳液；(4)破乳于搅拌下在乳液中加入丙酮，分层后取上层油相；(5)吸附、水洗将油相先后用中性氧化铝和白陶土进行吸附、过滤后，滤液在氮气氛围下脱除有机溶剂，再用温水洗涤、干燥，再用中性氧化铝吸附，得到精炼油6.权利要求1所述果仁油的提取方法，其特征在于包括以下步骤(1)粗提果仁或果仁粉经压榨、有机溶剂提取或超临界提取得粗油；(2)脱胶粗油搅拌、加热、加入磷酸，使之充分反应；(3)碱炼脱胶油中加入同温NaOH或Na2CO3溶液，充分反应后静置分层，分离得到碱炼油；(4)水洗用纯化水洗涤碱炼油，得水洗油；(5)脱水水洗油中加入吸附剂脱去水分或在抽真空条件下加热脱去水分，得到澄清脱水油；(6)脱色将脱水油用吸附脱色剂脱色，得脱色油；(7)脱臭将脱色油在抽真空和氮气搅拌下，加热使油温升至120℃-160℃，通纯水蒸汽，继续加热至160℃-260℃，保持0.5-2小时，停止通蒸汽，除去油中的水分，得脱臭油7.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1-4之一所述的果仁油及一种或多种药用辅料8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中还包含选自抗肿瘤药物、抗爱滋病药、免疫调节剂、营养剂的一种或多种其他活性药物9.根据权利要求7所述的药物组合物，其中还包含一种或多种其他植物油10.根据权利要求7所述的药物组合物，所述药物组合物为含权利要求1-4之一所述果仁油的脂肪乳剂，其中所述药用辅料包括选自乳化剂、增溶剂、助溶剂、等渗剂、抗氧化剂和稳定剂的一种或几种11.根据权利要求10所述的脂肪乳剂，其中包含注射用核桃仁油 5-30g注射用卵磷脂 1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水 加至100ml12.根据权利要求11所述的脂肪乳剂，其中包含注射用核桃仁油 20g注射用大豆卵磷脂 1.2g注射用甘油 2.5g注射用水 加至100ml13.根据权利要求8或10所述的药物组合物，其中包含氟尿嘧啶 1.0-5.0g注射用核桃仁油 5-30g注射用大豆卵磷脂 1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水 加至100ml14.根据权利要求8-10之一所述的药物组合物，其中包含紫杉醇 10-60mg椰子油 5-15g注射用核桃仁油 5-15g注射用卵磷脂 1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3gVit E 0-0.15g注射用水 加至100ml15.根据权利要求7所述的药物组合物，所述药物组合物为含权利要求1-4之一所述果仁油的胶囊剂16.权利要求1-4之一所述果仁油在制备用于治疗以下疾病的药物上的应用，所述疾病为肿瘤、性病、艾滋病、免疫功能低下、小儿营养不良、外科术后及需补充脂肪要素的疾病

本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及从植物果仁中提取的果仁油，更具体地涉及从酸枣、花椒和核桃果仁中提取的果仁油，其提取方法，以及含所述果仁油的药物组合物及其医药应用核桃仁是一种药食两用传统中药，具有补肾、温肺和润肠等功效但长期以来普通核桃油只是食用油的一种，未见制成肠胃道外营养剂的报道由于普通核桃油剂型不利于人体吸收，而要想制成供哺乳动物包括人临床使用的静脉乳，又因提取与分离工艺落后致使其中杂质多，酸价等理化值不符合注射用要求，使核桃油在医药上的使用受到了限制现有技术中，用脂肪乳来补充人体营养能量，常见的有大豆油，棉子油、红花油等制成的脂肪乳其中，使用较为广泛的是大豆油制成的脂肪乳但大豆油脂肪乳剂主要起补充人体营养能量的作用，其作用比较单一，有关提高机体免疫功能，升高血清总蛋白，对动物移植肿瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC的抑制作用和补肾、温肺、润肠的功效未见报道因此，本发明的第一个方面是提供一种从植物果仁中提取的可以制备提供人体营养能量、提高机体免疫功能、具有升高血清蛋白等作用的新一代静脉乳剂的果仁油本发明的第二个方面是提供两种提取本发明的植物果仁油的特定工艺方法本发明的第三个方面是提供含有本发明的果仁油的药物组合物，包括静脉乳剂和口服用胶囊等所述静脉乳剂能补充人体营养能量，提高机体免疫功效，具有升高血清蛋白作用，兼有原料药补肾、温肺和润肠的功能，且价格低廉本发明的第四个方面是提供本发明的果仁油在制备治疗肿瘤、AIDS和免疫功能低下等疾病的药物上的应用本发明提供的一种果仁油提取方法包括以下步骤(1)粗提果仁或果仁粉经压榨，有机溶剂提取或超临界流体提取得到粗油；(2)脱色用吸附脱色剂脱色，得到脱色油；(3)碱炼将脱色油溶于石油醚，搅拌下加入化学计量的NaOH溶液，静置分层后，有机层经水洗，得到乳液；(4)破乳于搅拌下在乳液中加入丙酮，分层后取上层油相；(5)吸附、水洗将油相先后用中性氧化铝和白陶土进行吸附、过滤后，滤液在氮气氛围下脱除有机溶剂，再用温水洗涤、干燥，再用中性氧化铝吸附，得到精炼油本发明提供的另一种果仁油提取方法包括以下步骤(1)粗提果仁或果仁粉经压榨、有机溶剂提取或超临界流体提取得粗油；(2)脱胶粗油搅拌、加热、加入磷酸，使之充分反应；(3)碱炼脱胶油中加入同温NaOH或Na2CO3溶液，充分反应后静置分层，分离得到碱炼油；(4)水洗用纯化水洗涤碱炼油，得水洗油；(5)脱水水洗油中加入吸附剂脱去水分或在抽真空条件下加热除去水分，得澄清脱水油； (6)脱色将脱水油用吸附脱色剂脱色，得脱色油；(7)脱臭将脱色油在真空和氮气氛围下搅拌、加热使油温升至120℃-160℃，通纯水蒸汽，继续加热至160℃-260℃，保持0.5-2小时，停止通蒸汽，除去油中的水分，得脱臭油本发明提供的药物组合物包含治疗有效量的从植物果仁中提取的果仁油和药物上可接受的载体本发明提供的果仁油的应用是在制备治疗肿瘤、免疫功能低下等疾病的药物上的应用所述疾病为肿瘤、性病、艾滋病、免疫功能低下、小儿营养不良、外科术后及需补充脂肪要素的疾病发明详述本发明的从植物果仁中提取的果仁油是一种淡黄色透明油状液体，其中包含甘油三酯90-99.9％，甘油二酯0.01-5％，甘油单酯0.01-3％，谷甾醇0.1-2.5％，环羊毛甾醇0.01-1％本发明的果仁油酯解后的脂肪酸组分为十六烷酸5-8％，十八烷酸1-3％，十八碳一烯酸18-30％，十八碳二烯酸50-65％，十八碳三烯酸6-14％按脂肪油检测，本发明的果仁油具有如下理化常数相对密度0.920-0.930；折光率1.470-1.480；酸值＜0.80；碘值120.0-155.0；皂化值180.0-200.0，过氧化值＜30.0meq.kg-1；炽灼残渣0.01-0.04％，砷量＜2ppm；重金属＜10ppm；平均分子量873.969本发明果仁油的优选实施方案是以酸枣仁、花椒仁或核桃仁为原料提取的果仁油本发明果仁油的第一种提取方法如下，以核桃仁为例初提核桃仁或核桃粉通过压榨或超临界流体提取方法得到核桃仁粗油；脱色粗油中先加入适量石油醚，搅拌均匀，再加入适量注射用活性炭，保温，过滤，回收石油醚，得脱色油；碱炼将脱色油和适量石油醚投入反应釜，搅拌中加入根据酸值及脱色油的数量计算出的2％NaOH溶液量，搅拌均匀，静置，除去下层废液搅拌中加入2倍量的温蒸馏水，搅拌，静止，除去下层废液再用同样的方法、时间和水温进行第二次洗涤，充分静置，除去下层废液，得上层乳液；破乳将乳液层计量移入分离釜，按乳层量一定比例，搅拌中注入所需丙酮，静置分层，除去下层废水得上层油相；水洗按油量所需比例加入经保温活化的中性氧化铝进行吸附，充分搅拌，静置，过滤得澄明油，计量后投入反应釜预热，搅拌中加入适量经过保温活化的白陶土(高岭土)，搅拌中保温，真空过滤，滤液导入水洗釜加热，在充氮保护下脱除有机溶剂，按油量的适当比例加入温蒸馏水，搅拌，静置，弃下层废水，在充氮保护下加热油层，脱水干燥，至油层澄明清亮，加入适量经活化的中性氧化铝，搅拌均匀，静置，无菌过滤，得精炼油充氮保护主要是为了防止油脂的氧化，控制油脂的过氧化值，以保持油的质量根据需要，将用上述方法制得的核桃仁油分装灭菌，分别注入规定容器内，消毒灭菌，可得注射用核桃仁油本发明果仁油的第二种提取方法如下(1)粗提果仁或果仁粉通过冷榨或超临界流体提取得到粗油，过滤，得澄清毛油；(2)脱胶将毛油置于反应锅内，充氮，搅拌，加热，加入适量磷酸，快速搅拌使充分反应；(3)碱炼在充氮保护下脱胶油混合液中直接加入配制好的同温NaOH或Na2CO3溶液，快速搅拌使游离脂肪酸充分反应，然后在加热、充氮、保温下静置分层，除去下层皂脚，得碱炼油；(4)水洗取碱炼油，在搅拌下加入适量氯化钠溶液，保温下静置分层，弃去下层废液，再用同样的方法、时间和水温，改用纯化水洗涤2遍，静置分层，除去下层废液，即得水洗油；(5)脱水水洗油中加入适量活化氧化铝，充分搅拌，静置、过滤，得澄清脱水油；(6)脱色将脱水油置反应锅内，抽真空、搅拌，加热、加适量活性炭和活化高岭土混合物，继续抽真空，80-90℃下充分搅拌，冷却，过滤，得脱色油；(7)脱臭将脱色油置不锈钢反应锅内，在真空和氮气氛围下，搅拌、加热使油温升至140℃，停止通氮并改通纯水蒸汽，继续加热至190℃并保持恒温，再通蒸汽1.5小时，关闭蒸汽，再通氮气，搅拌，冷却，得脱臭油根据需要，可再进行灭菌将脱臭油置于不锈钢灭菌罐中，抽真空、搅拌，加热至160℃并保持恒温2小时，冷却，无菌过滤，充氮分装于密闭容器，即得注射用果仁油按照本发明的药物组合物包含治疗有效量的用上述方法提取的本发明的果仁油和一种或多种药用辅料本发明的药物组合物中的药用辅料包括选自乳化剂、增溶剂、助溶剂、等渗剂、抗氧化剂和稳定剂的一种或几种本发明的药物组合物还可包含选自抗肿瘤药物、抗爱滋病药、免疫调节剂、营养剂的一种或多种其他活性药物本发明的药物组合物还可包含一种或多种其他植物油，例如椰子油、花生油等本发明的药物组合物可以是脂肪乳剂，如静脉脂肪乳剂和口服脂肪乳剂，也可以是软胶丸、碘油剂等本发明药物组合物的一个优选实施方式是脂肪乳剂，其中所述药用辅料为乳化剂和等渗剂更优选的是核桃仁油静脉脂肪乳剂优选的核桃仁油静脉脂肪乳剂，每100ml中包含5-30g、更优选地包含10-30g、最优选地包含20g注射用核桃仁油本发明中所使用的乳化剂可以是磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂)，普鲁朗立克(Pluronic)，聚甘油棕榈酸二醇酯等在静脉脂肪乳剂中以天然乳化剂如大豆(或蛋黄)卵磷脂为佳，其用量为每100ml乳剂中含1.0-3.0g，更佳为1.0-2.0g，最佳为1.2g本发明中所使用的等渗剂可以是甘油、山梨醇、木糖醇、葡萄糖等，以甘油为佳，其用量为每100ml乳剂中含1.5-3.0g，更佳为2.5g以下用实施例对本发明作更详细的描述然而，这些实施例仅仅是一种例示，决不意味着对本发明的限制粗油中加入粗油量40％的石油醚，搅拌均匀，再加入粗油量1％的注射用活性炭，45℃保温30分钟后，过滤、滤液回收石油醚，得428g脱色油将脱色油和油量50％的石油醚投入反应釜，根据酸值及脱色油的数量，加入2％浓度的NaOH溶液量307ml，在搅拌下细流注入乳层中，继续搅拌10分钟，静置24小时，除去下层废液搅拌中加入2倍量的45℃蒸馏水，搅拌，静置24小时，除去下层废液再用同样的方法、时间和水温进行第二次洗涤，水量为乳层量的1.5倍，然后静置48小时除去下层废液，得上层乳液342g，移入分离釜，在搅拌下快速注入丙酮342ml，静置3小时，除去下层废水得上层油相在油中，按油量的5％加入经过160℃、2小时保温活化的中性氧化铝进行吸附，并充分搅拌后静置30分钟，过滤得澄明油，计量后投入反应釜预热至40℃，边搅拌边加入油量3％的经过160℃、2小时保温活化的白陶土(高岭土)，并继续搅拌，在50℃保温30分钟，真空过滤，滤液导入水洗釜加热至60℃，在充氮保护下脱除有机溶剂，按油量1倍的比例快速注入45℃的蒸馏水，并继续搅拌15分钟，然后静置30分钟，分去下层废水，在真空再充氮状态下，对油层加热至80℃脱水干燥，至油层澄明清亮，加入所需量经活化的中性氧化铝，搅拌均匀，静置，无菌过滤，得精炼油将上述制得的精炼油分别注入规定容器内，消毒灭菌，得328g注射用核桃仁油实施例2(1)粗提取30kg核桃仁通过冷榨法提取得到核桃仁粗油，过滤，得澄清毛油13.1kg(2)脱胶将毛油置于反应锅内，充氮，搅拌，加热，使油温升至30-35℃，加入13.1g浓度为85％的磷酸，快速搅拌半小时(3)碱炼在充氮保护下在脱胶油混合液中直接加入717g配制好的同温5％NaOH溶液，快速搅拌30分钟，然后在慢速搅拌下快速升温至60-65℃，继续慢速搅拌15分钟，停止搅拌，在充氮、保温下静置分层，除去下层皂脚，得碱炼油12.8kg(4)水洗在上述碱炼油中于搅拌下加入1.9kg同温0.2％氯化钠溶液，保温下静置分层，弃去下层废液再用同样的方法、时间和水温，改用蒸馏水洗涤2遍，静置分层，除去下层废液，即得水洗油12.6kg(5)脱水在上述水洗油中加入经160℃活化2小时的氧化铝1.3kg，充分搅拌，静置半小时以上，过滤，得澄清脱水油12.0kg(6)脱色将上述脱水油置于反应锅内，抽真空减压至0.082Mpa，搅拌，加热至80-90℃，停止抽真空，加入22.5g活性炭和经160℃活化2小时的337.5g高岭土混合物，继续抽真空减压至0.082Mpa，80-90℃下继续搅拌20分钟，冷却至40℃，过滤，得脱色油11.0kg(7)脱臭将上述脱色油置于不锈钢反应锅内，抽真空减压至0.082Mpa，同时通氮气，搅拌，加热使油温升至140℃，停止通氮并改通纯水蒸汽，继续加热至190℃并保持恒温1.5小时，关闭蒸汽，再通氮气，搅拌，冷却，得脱臭油10.6kg(8)灭菌分装将脱臭油置于不锈钢灭菌罐中，抽真空减压至0.082Mpa，搅拌，加热至160℃并保持恒温2小时，冷却，无菌过滤，充氮分装于密闭容器，得注射用核桃仁油9.6kg配方例1注射用核桃仁油 5-30g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml配方例2注射用核桃仁油 20g注射用大豆卵磷脂1.2g注射用甘油 2.5g注射用水加至100ml配方例3氟尿嘧啶1.0-5.0g注射用核桃仁油 5-30g注射用大豆卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.1 5g注射用水加至100ml配方例4紫杉醇 10-60mg椰子油 5-15g注射用核桃仁油 5-15g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml 配方例5紫杉醇 10-60mg聚氧乙烯蓖麻油 1.0-5.0g注射用核桃仁油 5.0-30g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml配方例6高三尖杉酯碱0.05-0.2g注射用核桃仁油 5-30g注射用大豆卵磷脂1.0-3.0gVit E 0-0.15g注射用甘油 1.5-3.0g注射用水加至100ml配方例7环磷酰胺0.2-1.2g注射用核桃仁油 5-30g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml实施例3将大豆卵磷脂1.2g和甘油2.5g加水25ml，在5000转/分速度下搅拌制成均匀的半透明胶体状磷脂分散体系加入注射用核桃仁油20g，加水至100ml制成初乳，并用NaOH溶液调节初乳pH值至6-9然后将初乳转移到匀化桶中，用匀质机分别进行高压和低压匀化匀化压力低压10-20Mpa，高压40-60Mpa匀化温度为60-80℃按上述匀化条件匀化6次，所得乳剂经过过滤、罐装、灭菌即得20％供静脉用核桃仁油脂肪乳实施例4将蛋黄卵磷脂1.0g和甘油1.5g加水20ml，在同上速度下搅拌制成均匀的半透明胶体状磷脂分散体系加入注射用核桃仁油10g，加水至100ml制成初乳再经过调pH值、匀化、过滤、罐装、灭菌即制得10％核桃仁油脂肪乳实施例5将大豆卵磷脂2.0g和甘油3.0g加水30ml，在同上速度下搅拌制成均匀的半透明胶体状磷脂分散体系加入注射用核桃仁油30g，加水至100ml制成初乳再经过调pH值、匀化、过滤、罐装、灭菌即制得30％核桃仁油脂肪乳实施例6按配方3，先用适量水溶解氟尿嘧啶，再按与实施例3同样的操作，得到脂肪乳剂实施例7按配方4，先将紫杉醇溶解在椰子油中，再与注射用核桃仁油混匀，按与实施例3同样的操作，得到脂肪乳剂实施例8按配方5，先将紫杉醇溶解在聚氧乙烯蓖麻油中，再与注射用核桃仁油混匀，按与实施例3同样的操作，得到脂肪乳剂实施例9按配方6，先用适量水溶解高三尖杉酯碱，再按与实施例3同样的操作，得到脂肪乳剂实施例10按配方7，与实施例3同样地操作，得到脂肪乳剂实施例11本发明的口服胶囊制备如下称取维生素E 0.675g作为抗氧化剂，在室温下投于900g酸枣仁油或花椒仁油或核桃仁油中，搅拌溶解成一种澄清、透明溶液按明胶∶水∶甘油∶防腐剂＝1∶1∶0.4∶0.001的比例，将大部分蒸馏水投入反应锅内，加热至50-60℃，开启搅拌，投入明胶、甘油及防腐剂等，容器用剩余蒸馏水荡洗，倒入锅内，逐渐升温，使物料全部溶化均匀关闭反应锅，开启真空泵，使锅内真空度维持在表压0.065-0.080Mpa之间，保持30-60分钟，解除真空，料液经120目筛过滤至料桶内，于50-60℃保温待用在室内温度21-24℃、相对湿度＜40％、胶盒温度50-60℃、分割器电压110-150V、胶带温度10-15℃、胶皮厚度0.8-1.0mm的工艺条件下，用8号模具压制出1000粒软胶丸，定时检测内容物的装量胶丸在压制定型4小时后，揩丸去油，初烘8小时，用石油醚(30-50℃)洗涤后，再烘干，经整理拣去废丸后包装试验例1昆明种小鼠(19-21g)40只，雌雄各半，静脉注射本发明的乳剂0.5ml/20g体重，共三次，间隔4小时，即最大耐受量为75ml/kg，观察七天，实验期间小鼠未出现不良反应和死亡情况，解剖后动物内脏器官未见异常按常规药物溶血方法试验，结果无溶血作用通过对豚鼠全身过敏试验显示，本发现的乳剂对豚鼠无明显的过敏反应家兔耳缘静脉(血管)连续7天分别缓慢注射本发明的乳剂15ml/kg和5ml/kg剂量，结果显示对家兔耳缘静脉无明显的刺激作用试验例2按GB384-81测得能量热值，本发明核桃仁油为37599kJ/kg，和大豆油37243kJ/kg相当，核桃仁油乳剂为6303kJ/kg试验例3 小鼠耐缺氧、抗疲劳试验选健康雄性小鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只核桃仁油乳剂的三个剂量组分别为25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg，另设生理盐水组给予同体积的生理盐水每天尾静脉注射一次，连续给药7天，末次给药后2小时进行试验耐缺氧试验将各受试小鼠分别放入装有10克钠石灰的250ml无色透明密闭的广口瓶内，自小鼠放入瓶内开始计时，直至小鼠停止呼吸计算平均存活时间(分钟)，比较各给药组和生理盐水组之间差异的显著性抗疲劳试验小鼠分别称体重，按体重的5％在鼠尾根部负重，放入水温25℃、水深40cm的大水缸中，强迫小鼠持续游泳直至沉入水底而死亡，记录各鼠持续游泳时间(分钟)，用t测验作数据的统计学分析，比较各给药组和生理盐水组之间差异的显著性表1 核桃仁油乳剂不同剂量静脉给药对小鼠耐缺氧、抗疲劳的影响 与生理盐水组比较，*p＜0.05，**p＜0.01如上表1所示，耐缺氧试验统计处理表明，核桃仁油乳剂中、高剂量组的小鼠平均存活时间与生理盐水组的小鼠平均存活时间之间差异非常显著(p＜0.01)试验结果提示，样品核桃仁油乳剂对小鼠有一定的耐缺氧作用，能增强机体非特异性抵抗能力，量效关系明显负重游泳试验统计分析表明，核桃仁油乳剂中、高剂量组的小鼠持续游泳时间与生理盐水组比较差异非常显著(p＜0.01)上述试验结果证明，核桃仁油乳剂在25ml/kg剂量下能明显延长小鼠的游泳时间，增强小鼠抗疲劳作用，量效关系明显试验例4 对小鼠免疫功能的影响对淋巴细胞增殖的影响C57BL/6小鼠30只，随机分为5组，每组6只，即核桃仁油乳剂25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg，生理盐水组(0.5ml/只)，Intralipid(大豆油脂肪乳)12.5ml/kg，静脉注射每天一次，共7天末次给药结束后处死动物，无菌条件下取脾，制备脾细胞悬液计数脾细胞，并调整浓度为1％107个细胞/ml，在96孔培养板上每孔加细胞悬液100μl，ConA 50μl和RPMI-1640培养液50μl，各组均设三复孔，37℃，5％CO2条件下培养48小时，加入3H-TdR 0.5μci/孔，继续培养18小时用多头细胞收集器收集细胞，在液闪仪上测CPM值，将给药组与对照组的数据进行比较对小鼠NK细胞活性的影响C57BL/6小鼠30只，随机分为5组，每组6只，即核桃仁油乳剂25、12.5、6.25ml/kg，Intralipid 12.5ml/kg，生理盐水组(0.5ml/只)，均静脉注射每天一次，共7天末次给药结束后处死动物，无菌条件下取脾，制备脾细胞悬液，用RPMI-1640培养基(Difco产品，内含15％小牛血清，巯基乙醇，Hepes等)调整细胞浓度为1×106个/ml作效应细胞，另取已培养24小时的YAC-1细胞，调整细胞浓度为1×104个/ml作为靶细胞，分别取效应细胞和靶细胞各100μl加在96孔细胞培养板的孔中，加入3H-TdR0.5μci/孔，每组均设三复孔，37℃，5％CO2条件下培养24小时后收集细胞，测CPM值，计算特异性抑制百分率(Pi)表示NK细胞活性 对小鼠IL-2的影响C57BL/6小鼠30只，随机分为5组，每组6只，即核桃仁油乳剂25、12.5、6.25ml/kg，Intralipid 12.5ml/kg，生理盐水组(0.5ml/只)，均静脉注射7天末次给药结束后处死动物，无菌条件下取脾，用RPMI-1640培养基(Difco产品，内含15％小牛血清，巯基乙醇，Hepes等)制备脾细胞悬液，并调整细胞浓度为1×107个/ml，24孔板上每孔加2ml细胞及ConA 5μg/ml，37℃、5％CO2条件下培养24小时后收集上清液，用IL-2依赖性细胞株CTLL以3H-TdR掺入法测定IL-2活性在96孔培养板的每个孔中加入CTLL细胞悬液(1×105个/ml)100μl、3H-TdR 20μl、上清液100μl，测定CPM值，并比较给药组和对照组的差异试验结果见表2表2 核桃仁油乳剂不同剂量静脉给药对小鼠免疫功能的影响 *P＞0.5，Intralipid(大豆油脂肪乳)与生理盐水比较**P＜0.01，核桃仁油乳剂组与生理盐水组及Intralipid静脉乳剂组比较上述结果表明，核桃仁油乳剂在25、12.5、6.25ml/kg剂量连续静脉注射7天后，均能明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用，显著地激活自然杀伤细胞(NK)活性，和明显地促进白介素-2(IL-2)的生成即本发明的乳剂在提高机体免疫功能，如机体脾淋巴细胞增殖，提高NK活性和促进IL-2的生成等方面，其效果明显大于大豆油脂肪乳试验例5小鼠40只，随机分为四组，分别静脉注射生理盐水10ml/kg，核桃仁油乳剂6.25、12.5和25ml/kg，连续7天，末次注射后处死，采血，测定血清总蛋白结果见表3表3 核桃仁油乳剂对小鼠血清总蛋白的影响 与生理盐水组比较，*p＜0.05，**p＜0.01试验例6抑制小鼠肝癌HAC和Lewis肺癌的作用取生长良好的HAC腹水，用生理盐水以1∶4稀释制备成细胞悬液，每只小鼠腋皮下接种0.2ml，随机分组，设生理盐水组及核桃仁油乳剂3个剂量组，分别为25、12.5和6.25ml/kg，次日起给药，连续静脉注射7天接种后10日颈椎脱臼处死动物，解剖取瘤块，比较各剂量组的瘤重用以下公式计算肿瘤抑制率 结果见表4表4 桃仁油乳剂对小鼠肝癌HAC的抑制作用 与生理盐水组比较，**p＜0.01取生长良好的Lewis肺癌瘤块，用生理盐水以1∶4匀浆制备成细胞悬液，每只小鼠腋皮下接种0.2ml，随机分组，设生理盐水组，核桃仁油乳剂设3个剂量组，分别为25、12.5和6.25ml/kg，次日起给药，连续静脉注射7天接种后14日颈推脱臼处死动物，解剖取瘤块，比较各剂量组的瘤重用以下公式计算肿瘤抑制率 结果见表5表5 桃仁油乳剂对小鼠Lewis肺癌抑制作用 与生理盐水组比较，**P＜0.01从表4、表5可见，核桃仁油乳剂在上述剂量时，有一定的抑制小鼠肝癌HAC和Lewis肺癌生长的作用进一步研究发现，从核桃仁中提取的核桃仁油所制成的乳剂在用作能量乳的同时，也发现有上述相似的功能，可能与核桃仁具有补肾、温肺和润肠的作用有关产业上利用的可能性本发明所述的核桃仁油静脉乳剂，乳化剂安全可靠、配方合理除了能补充机体营养能量、抗疲劳、耐缺氧，显著提高人体免疫功能、升高血清总蛋白外，它还对动物移植性肿瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC有一定的抑制作用，并兼有原料药补肾、温肺和润肠的功能，价格又低廉，是一种具有多功效的能量型乳剂而且，可用于治疗肿瘤、性病、艾滋病、免疫功能低下、小儿营养不良、外科术后及需补充脂肪要素的疾病等用本发明方法提取的果仁油，具有质量好、收率高且疗效确定的优点，特别是引入了充氮保护工艺，大大降低了油脂的氧化，有效地提高了果仁油的质量用第二种方法的最大优点是不使用有机溶剂，从而避免了污染该方法提取的果仁油中的过氧化值可以＜6.0(meq·kg-1)