专利名称：一种兽用双黄连制剂及其制备方法传统双黄连是由金银花、黄芩、连翘三味中药组成的复方方剂。双黄连在临床上具有抗菌消炎、清热解毒的功效，常用于防治感冒、发热、咳嗽、咽喉疼痛等。绿原酸、黄芩苷作为处方中金银花、黄芩两味药材中的主要有效成分，具有清热解毒及明显的抗炎作用，而连翘的主要成分连翘苷则有较广的抗菌作用，对流感病毒有明显的抑制作用。《中国兽药典》规定双黄连制剂可以作为兽用药用于鸡、犬和猫等动物的感冒发热疫病，如鸡新城疫等，以此来防止这些动物的感冒发热疫病造成的危害。传统的双黄连处方以金银花、黄芩、连翘三味中药组成，但是以此处方制得的兽用·双黄连制剂在防治鸡、犬和猫等动物的感冒发热疫病时的效果不能达到人们理想的要求，其中以鸡新城疫为典型代表，由于现有兽用双黄连制剂的效果不高，导致鸡的死亡率不能降至最低，对我国养鸡业造成了一定影响。此外，传统双黄连制剂的制备方法普遍为水醇法，然而这种方法对金银花、黄芩、连翘三味中药的主要有效成分(即绿原酸、黄芩苷和连翘苷)提取率较低，这也是影响现有兽用双黄连制剂药效的因素之一。
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种兽用双黄连制剂及其制备方法，使得该兽用双黄连制剂药效得到提高，并在制备过程中提高各中药主要有效成分的提取率。为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案一种兽用双黄连制剂，其原料药以重量份计，由I重量份金银花、I重量份黄芩、2重量份连翘和2重量份黄芪组成。本发明在传统配方基础上引进黄芪，黄芪的有效成份黄芪多糖可显著增强非特异性免疫功能和体液免疫功能。在功效上与传统组方结合起来具有“扶正”与“去邪”的协同增强作用。本发明还提供了一种兽用双黄连制剂的制备方法，包括步骤I、将I重量份金银花、I重量份黄芩、2重量份连翘和2重量份黄芪混合粉碎得原料混合物，接着加入乙醇水溶液浸泡，然后过滤弃上清液得过滤后的原料混合物；步骤2、将过滤后的原料混合物以10_30W/g ·π η强度进行微波处理至温度为80°C停止，当温度降至70°C继续以10-30W/g · min强度进行微波处理至温度为80°C停止，降温至 70 0C ；步骤3、重复步骤21-3次后，向原料混合物加入乙醇水溶液搅拌，然后过滤，滤液备用，滤渣挤压后得榨取液并与滤液合并，然后过滤得粗提液，接着蒸馏、干燥即得兽用双黄连制剂。微波加热使细胞内的极性物质，尤其是水分子吸收微波能，产生大量的热量，使胞内温度迅速升高，液态水汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲破，形成微小的孔洞，进一步加热，导致细胞内部和细胞壁水分减少，细胞收缩，表面出现裂纹，孔洞或裂纹的存在使胞外液容易进入细胞内，溶解并释放胞内产物。本发明先将中药原料浸泡，使得乙醇水溶液能够渗入到细胞内，接着利用微波处理破壁，然后再利用乙醇水溶液将细胞内的有效成分溶解出来，达到提取目的。其中，步骤I所述原料混合物与乙醇水溶液质量比优选为I : 10-20，进一步优选为I : 15;步骤I所述浸泡为在45-50°C浸泡24h;步骤3所述原料混合物与乙醇水溶液质量比优选为I : 1_2 ;步骤3所述搅拌为在70-80°C搅拌2-4h ;乙醇水溶液中乙醇体积百分数为80%。微波对中药提取的作用随中药材的特性不同而有所不同，对中药材细胞内目标产物的释放也有一定的选择性，特别是复方中药，由于组分特性不一，微波处理要求要恰到好处才能使复方中所有组分的有效成分均达到最大提取率。此外，微波强度选择还影响到细胞内水分汽化，过低不会使细胞壁破裂，过高容易使水分过分汽化，损失较多，无法将有效成分带出细胞，影响提取率。因此，根据中药原料的组织特性，选择不同微波提取操作参数是应用微波提取的关键，本发明所述微波强度优选为20W/g ·π η，步骤2重复次数优选为2次。此外，在现有的制备方法中，往往忽略了滤渣中所包含的有效成分，由于细胞结构特性，被溶剂溶解的有效成分会有一部分滞留在滤渣内，本发明在微波处理后结合挤压法，将其中的有效成分挤压出来，避免有效成分的损失，提高了有效成分的提取率。本发明所述制备方法与传统水醇法的对比试验结果显示，利用本发明所述制备方法提取的各有效成分的提取率明显高于水醇法各有效成分的提取率13%左右。同时，本发明还提供一种由本发明所述制备方法制备的兽用双黄连制剂。该兽用双黄连制剂可按照《中国兽药典》规定添加适量配料，依次增加患病动物的适口性，比如葡萄糖等。本发明所述兽用双黄连制剂安全性试验结果显示，每天以所述兽用双黄连制剂使用，健康雏鸡未出现任何不良症状，表明本发明所述兽用双黄连制剂配方合理，安全性高。此外，在与现有某兽用双黄连制剂的鸡新城疫对比防治试验中，本发明所述兽用 双黄连制剂明显降低了鸡的死亡率，药效高于现有双黄连制剂。由以上技术方案可知，本发明在传统双黄连配方基础上增加了黄芪，由此制备的兽用双黄连制剂药效更高。同时，所述兽用双黄连制剂的制备方法采用微波和挤压相结合的方式，显著提高各组分的有效成分的提取率。将125g金银花、125g黄芩、250g连翘和250g黄芪混合粉碎后过60目筛，接着按质量比I : 10 (中药原料混合物80%乙醇水溶液)加入80%乙醇水溶液，并保持45°C左右浸泡24h ；用筛网过滤除去为完全吸收的乙醇水溶液，将过滤后的中药原料混合物以IOW/g · min强度进行微波处理至温度为80°C停止，当温度降至70°C继续按照上述要求微波处理,如此方式微波处理共I次；向中药原料混合物中按质量比I : 2 (中药原料混合物80%乙醇水溶液)加入80%乙醇水溶液搅拌浸泡2h，然后筛网过滤，滤液备用，将滤渣通过螺旋挤榨机处理得榨取液，然后与之前的滤液合并再次筛网过滤得到粗提液，接着减压蒸馏回收乙醇得到浓缩液，最后将浓缩液进行喷雾干燥，加适量葡萄糖，混匀即得可溶性粉，即兽用双黄连制剂。实施例2 :制备本发明所述兽用双黄连制剂将375g金银花、375g黄芩、750g连翘和750g黄芪混合粉碎后过60目筛，接着按·质量比I : 15 (中药原料混合物80%乙醇水溶液)加入80%乙醇水溶液，并保持50°C左右浸泡24h ；用筛网过滤除去为完全吸收的乙醇水溶液，将过滤后的中药原料混合物以20W/g · min强度进行微波处理至温度为80°C停止，当温度降至70°C继续按照上述要求微波处理,如此方式微波处理共2次；向中药原料混合物中按质量比I : I (中药原料混合物80%乙醇水溶液)加入80%乙醇水溶液搅拌浸泡4h，然后筛网过滤，滤液备用，将滤渣通过螺旋挤榨机处理得榨取液，然后与之前的滤液合并再次筛网过滤得到粗提液，接着减压蒸馏回收乙醇得到浓缩液，最后将浓缩液进行喷雾干燥，加适量葡萄糖，混匀即得可溶性粉，即兽用双黄连制剂。实施例3 :制备本发明所述兽用双黄连制剂将500g金银花、500g黄芩、IOOOg连翘和IOOOg黄芪混合粉碎后过60目筛，接着按质量比I : 20 (中药原料混合物80%乙醇水溶液)加入80%乙醇水溶液，并保持47°C左右浸泡24h ；用筛网过滤除去为完全吸收的乙醇水溶液，将过滤后的中药原料混合物以30W/g · min强度进行微波处理至温度为80°C停止，当温度降至70°C继续按照上述要求微波处理,如此方式微波处理共3次；向中药原料混合物中按质量比I : 2 (中药原料混合物80%乙醇水溶液)加入80%乙醇水溶液搅拌浸泡3h，然后筛网过滤，滤液备用，将滤渣通过螺旋挤榨机处理得榨取液，然后与之前的滤液合并再次筛网过滤得到粗提液，接着减压蒸馏回收乙醇得到浓缩液，最后将浓缩液进行喷雾干燥，加适量葡萄糖，混匀即得可溶性粉，即兽用双黄连制剂。实施例4 :本发明所述兽用双黄连制剂的安全性试验将七日龄雏鸡随机分成4组，10只/组，第1-3组分别以实施例1-3制备的兽用双黄连制剂(浓度为20mL可溶性粉/IL水)喂食，连用3d;第4组以同等饲养条件饲养，但不给药作为对照，观察I周。I周后将其全部剖杀，观察内脏有无异常变化，确定本发明所述兽用双黄连制剂的安全性，结果显示，第1-3组的鸡内脏与对照组鸡内脏一样正常，无不良症状，表明本发明所述兽用双黄连制剂的安全性较高。实施例5 :本发明所述兽用双黄连制剂的药效对比试验试验材料30日龄的海兰褐雏鸡由荥阳某种鸡场购得；新城疫强毒F48E9与标准阳性血清均由中国兽药监察所提供。从30日龄鸡群中取210只健康鸡，随机分为7组，每组30只，其中前三组即第I、第2、第3组分别投喂实施例1-3的兽用双黄连制剂，第4、第5、第6组投喂市售某传统兽用双黄连制剂，第7组为空白对照组。所用双黄连制剂均按Iml可溶性粉/IL水混饮，于3小时内饮完。将新城疫标准毒株F48E9按100倍稀释后，每只鸡颈部皮下注射O. 2ml。每12h观察一次，记录观察结果。并对死亡鸡进行解剖诊断，结果见表I。表I鸡新城疫防治对比试验结果 组接种接种接种后每12h死亡数记录结果鸡子死死亡翁前 φ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^亡翁傘
12 24 36 48 60 72 84 96 108 120
13030012211000O723.3%
23030011111000O516.7%
33030O__I__I__I__I__I__O__0 00516.7%
43030O__I__2__2__I__I__I__1 00930%
53030O__I__2__2__I__I__I__1 00930%
63030O__I__I__2__I__I__I__1 00826.7%
73030023557221I2893.3%由表I可以得知，本发明所述兽用双黄连制剂明显能降低由新城疫致死的鸡死亡率，药效高于现有传统的兽用双黄连制剂。实施例6 :本发明所述制备方法各组分有效成分提取率试验本发明所述制备方法采用实施例2制备方法，传统方法-水醇法如下(采用与实施例2相同规格、质量的中药原材料)黄芩、黄芪切片，粉碎过60目筛，加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各I小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩并在80°C时加入2mol/L盐酸溶液适量调节pH值至I. 0-2. 0，保温I小时，静置12小时，滤过，沉淀加6-8倍量水，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7. 0，再加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用2mol/L盐酸溶液调节pH值至2. 0，60°C保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用乙醇洗至pH值7.0，合并所有滤液挥尽乙醇备用；金银花、连翘加水温浸半小时后，煎煮二次，每次I. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为I. 20-1. 25(70-80°C测)，冷至40°C时缓缓加入乙醇，使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味；加入黄芩、黄芪提取液，并加水适量，以40%氢氧化钠溶液调节pH值至7. 0，搅匀，冷藏(4-8°C ) 72小时，滤过，滤液加水制成1000ml，搅匀，静置12小时，滤过，灌装，灭菌，即得。将上述两种方法以及微波法(与实施例2方法相同，区别在于不挤压)制备的双黄连制剂进行检测，同时分别以这三种方法进行各组分单方的提取作为复方各有效成分提取率高低的参考标准，结果见表2。表2各组分有效成分提取率的比较


本发明涉及兽药领域，公开了一种兽用双黄连制剂及其制备方法。本发明所述兽用双黄连制剂原料药以重量份计，由1重量份金银花、1重量份黄芩、2重量份连翘和2重量份黄芪组成。本发明在传统双黄连配方基础上增加了黄芪，由此制备的兽用双黄连制剂药效更高。同时，所述兽用双黄连制剂的制备方法采用微波和挤压相结合的方式，显著提高各组分的有效成分的提取率。