专利名称：一种冬凌草甲素类成分干粉吸入剂及其制备方法和用途的制作方法冬凌草，又名冰凌草(Rabdosia rubescens (Hamst))，系唇形科香茶菜属植物，味 甘苦，性微寒。全草为民间常用草药，具有清热解毒、消炎止痛、健胃活血等功效。现代药理 学、毒理学研究表明，该植物抗肿瘤作用良好，毒性不明显，被誉为“紫杉醇第二”。从冬凌草 叶的提取物中分离出五种二萜类化合物，即冬凌草甲、乙、丙、丁及戊素，为其主要抗癌活性 成分，对食管癌、肺癌、白血病等具有很好的治疗效果。目前临床用药主要有冬凌草片剂、胶 囊剂、糖浆剂、注射剂及粉针剂等传统剂型，但是冬凌草甲素等抗癌成分在水中溶解度很小 且生物半衰期短等不足限制了其在临床中的应用。经口腔给药的吸入剂有很多优点药物经吸入可以快速沉降在食管、气管和肺部， 能避免或减少身体其他部位的毒副作用，肺部吸收面积大，膜通透性高，血流丰富，药物吸 收迅速，无肝脏首过效应，有利于提高药物的生物利用度和在肺部的药物浓度，而且肺部 给药可用于肺部疾病的治疗，目前已经有很多肺部治疗药物的吸入剂上市。干粉吸入剂 (drypowderinhalers, DPIs)不使用抛射剂和溶剂，依靠气流使药物粉末雾化，进而使药物 粉末传递到肺部，具有应用方便、吸收迅速、靶向定位的特点，是一种新型给药系统。目前冬 凌草甲素类成分干粉吸入剂的研究未见报道。此外目前已上市的干粉吸入剂一般以乳糖为辅料载体，然而乳糖中的杂蛋白有可 能引起严重的过敏反应，因此亟需开发非乳糖载体的干粉吸入制剂。
本发明的目的是提供一种冬凌草甲素类成分干粉吸入剂及其制备方法。本发明的 另一个目的是提供本发明所述干粉吸入剂在制备治疗食管癌、肺部肿瘤和白血病药物中的应用。针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案—种冬凌草甲素类成分的干粉吸入剂，其特征在于它是由冬凌草甲素类成分与药 学上可接受的辅料组成的药物组合物，通过口腔吸入给药。所述的冬凌草甲素类成分由冬凌草甲素、冬凌草乙素、冬凌草丙素、冬凌草丁素、 冬凌草戊素中的一种或多种组成。冬凌草甲素类成分与所述的辅料的质量比为1 0.01-1 100，优选为 1 0.1-1 50。所述的干粉吸入剂，其特征在于粉末的粒径(以D5tl计)在0. 1-1000微米之间，优 选为粉末的粒径(以D5tl计)在1-500微米之间所述的干粉吸入剂，其特征在于所述的辅料选用糖类、醇类、氨基酸类、磷脂类、肺源性表面活性物质、环糊精类、高分子物质、助流剂、抗氧剂、柠檬酸及其盐、磷酸盐中的一 种或几种。所述的糖类，选自乳糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖中的一种或 几种；所述的醇类，选自甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇、山梨醇中的一种或几种；所述的氨基酸 类，选自甘氨酸、门冬氨酸、丙氨酸、色氨酸、苏氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、 胱氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸中的一种或几种；所述的磷脂，选自大豆磷脂、卵磷脂、磷 脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、合成磷脂中的一种或几种；所述的肺源性表面活性物质，选自二 棕榈酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、胆固醇中的一种或几种；所述的环糊精类，选自 α-环糊精、β-环糊精、Y-环糊精、大环糊精、各种取代度的α-环糊精衍生物、各种取 代度的β-环糊精衍生物，各种取代度的Y-环糊精衍生物、羟丙基-β-环糊精、磺丁基 醚-β -环糊精、支链环糊精、甲基化环糊精、二甲基β -环糊精、羟乙基环糊精、低分子量 β -环糊精聚合物(分子量为3000 6000)、乙基环糊精、乙酰基环糊精、离子性环糊精衍 生物、羧甲基环糊精、硫酸酯环糊精中的一种或多种；所述的高分子物质，选自可生物降解 的高分子物质例如白蛋白、糊精、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素衍生物、淀粉衍生物、聚乳酸、聚 乳酸-羟基乙酸、聚乙二醇、泊洛沙姆、透明质酸、透明质酸钠、海藻酸钠、Solutol HS 15中 的一种或几种；所述的助流剂，选自微粉硅胶、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸、硬酯富马酸钠中 的一种或几种；所述的抗氧剂，选自维生素C、维生素C棕榈酸酯、维生素C各类衍生物、辅 酶Q10、维生素Ε、聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯、维生素E各类衍生物中的一种或几种。所述冬凌草甲素类成分干粉吸入剂的辅料优选的方式为乳糖，或者是亮氨酸和苯 丙氨酸，亮氨酸和苯丙氨酸的重量比为1 50-50 1。所述的冬凌草甲素类成分干粉吸入剂的制备方法，其制备步骤如下将冬凌草甲素类成分通过粉碎或喷雾干燥制成粉末，粉末与辅料混合均勻制成吸 入用粉末，包装入胶囊或泡罩或干粉吸入器内；或者将冬凌草甲素类成分与辅料混合均勻， 通过粉碎或喷雾干燥制成吸入用粉末，包装入胶囊或泡罩或干粉吸入器内；或者将冬凌草 甲素类成分和处方中部分辅料混合均勻，通过粉碎或喷雾干燥制成粉末，粉末与处方中剩 余辅料混合均勻制成吸入用粉末，包装入胶囊或泡罩或干粉吸入器内。所述的冬凌草甲素类成分干粉吸入剂在制备治疗食管癌、肺部肿瘤和白血病药物 中的应用。本发明中所述的D5tl是一个样品的累计粒度分布百分数达到50%时所对应的粒 径。它的物理意义是粒径大于它的粉末颗粒占50%，小于它的粉末颗粒也占50%，用来表 示粉体的平均粒度。本发明中所述的D9tl是一个样品的累计粒度分布数达到90%时所对应的粒径。它 的物理意义是粒径小于它的粉末颗粒占90%，用来表示粉体粗端的粒度指标。本发明的有益效果主要是1、所述的冬凌草甲素类成分干粉吸入剂应用方便、吸收迅速、无肝脏首过效应，肺 部药物浓度高，与口服给药相比大大提高了冬凌草甲素类成分治疗食管癌、肺部肿瘤和白 血病的效果。2、冬凌草甲素类成分与辅料混合成为干粉吸入剂，在实际研究中发现，药物易于 结块，因此需要与辅料进行配比，克服提取物易结块的难题，申请人经过大量实验获知，将药物与辅料配比控制在特定范围内，特别是辅料选用亮氨酸和苯丙氨酸或是不同粒径的乳 糖，可以做成吸入性能优良的干粉吸入剂。3、通过本发明的研究，冬凌草甲素类成分干粉吸入剂可以采用亮氨酸和苯丙氨酸 为辅料，而不使用乳糖，避免了乳糖中的杂蛋白有可能引起的严重过敏反应，亮氨酸和苯丙 氨酸联合使用，可以较好的避免冬凌草甲素类成分结块，并且粉末密度小，流动性好，不吸 湿，具有良好的粉末分散性和肺部沉积性，肺部沉积率达到了 30 %以上。冬凌草甲素、海藻糖、甘氨酸、大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、泊洛沙姆188、 硬酯富马酸钠、聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯、维生素C棕榈酸酯的处方质量比为 10 1 1 1 1 1 1 1 1，分散于95%的乙醇中，喷雾干燥，得到粒径D9tl = 4. 3微米的粉末，再与粉末8倍量的德国美剂乐;[nhaLac 120乳糖进行混合，混合均勻，在 通氮气保护的条件下，粉末包装入胶囊或泡罩或干粉吸入器内，获得干粉吸入剂。实施例8冬凌草甲素、乳糖、柠檬酸三钠、磷酸二氢钠的处方质量比为10 10 1 1，研 磨得到D9tl = 4. 5微米的粉末，再与粉末8倍量的德国美剂乐；[nhaLac 70乳糖进行混合， 混合均勻，在通氮气保护的条件下，粉末包装入胶囊或泡罩或干粉吸入器内，获得干粉吸入 剂。实施例9将冬凌草甲素采用羟丙基-β -环糊精包合，喷雾干燥至D9tl = 3. 9微米，粉末与D5tl =130微米的甘露醇、D5tl = 60微米的亮氨酸按质量比1 5 2的比例进行混合，混合均 勻后包装入胶囊或泡罩或干粉吸入器内，获得吸入剂。实施例10将冬凌草乙素采用羟丙基-β -环糊精包合，喷雾干燥至D9tl = 3. 5微米，与德国美 剂乐InhaLaC 230乳糖按质量比1 9的比例进行混合，混合均勻后包装入胶囊或泡罩或 干粉吸入器内，获得吸入剂。实施例11将冬凌草甲素采用磺丁基醚-β -环糊精包合，喷雾干燥至D9tl = 3. 9微米，与德国 美剂乐hhaLaC 70乳糖按质量比1 9的比例进行混合，混合均勻后包装入胶囊或泡罩或 干粉吸入器内，获得吸入剂。实施例12冬凌草甲素、半乳糖、山梨醇、脯氨酸、白蛋白、聚乙二醇6000、滑石粉、辅酶QlO的 处方质量比为10 :1:1:1:1:1:1: 1，在通氮气保护的条件下，研磨得到D9tl = 4. 7微米的粉末，再与粉末8倍量的D5tl = 130微米的乳糖进行混合，混合均勻，粉末包装入 胶囊或泡罩或干粉吸入器内，获得干粉吸入剂。实施例13将冬凌草甲素采用气流粉碎至D9tl = 3. 5微米，与D9tl = 4. 7微米的亮氨酸、D50 = 130微米的苯丙氨酸按质量比为1 2 6进行混合，混合均勻后，粉末包装入胶囊或泡罩 或干粉吸入器内，获得干粉吸入剂。干粉吸入剂的粉体学性质考察按照堆密度测定法，测得堆密度为0. 26g/ml。干粉吸入剂肺部沉积率考察按照中华人民共和国2010年版药典规定方法考察，制剂的肺部沉积率达到 33. 95%,室温条件下放置到M个月后，制剂的肺部沉积率没有显著变化。实施例14抗肺部肿瘤药效实验方法苯并芘经皮穿刺肺内注射的方法建立大鼠肺肿瘤动物模型，取建模大鼠150只，随机分为15组，每组10只。每天1次，用药7天。给药方式第1-13组为吸入剂 吸入给药，分别按照实施例1-13获得吸入剂，给药剂量为IOmg冬凌草甲素类成分/kg ；第 14组口服冬凌草甲素，给药剂量10mg冬凌草甲素/kg;第15组为生理盐水对照组。停药 次日处死大鼠，解剖大鼠肺脏，观察肺脏病变情况。实验结果吸入剂给药各组的大鼠的肺部出现肿块或结节病变的发生率最低为 10%，最高为30%，冬凌草甲素口服给药组大鼠的肺部出现肿块或结节病变的发生率为 90%，生理盐水组为100%，吸入剂给药各组与冬凌草甲素口服给药组、尘理盐水组有显著 性差异(P < 0. 05)，治疗效果最好的为按实施例13制备的吸入剂。实施例15抗食管癌药效实验方法用6周龄的Wistar大鼠饲以N-亚硝基肌氨酸乙酯的前体盐酸肌氨酸乙酯 和亚硝酸钠诱发食管鳞癌动物模型，取建模大鼠150只，随机分为15组，每组10只。每天1 次，用药7天。给药方式第1-13组为吸入剂吸入给药，分别按照实施例1-13获得吸入剂， 给药剂量为IOmg冬凌草甲素类成分/kg ；第14组口服冬凌草甲素，给药剂量10mg冬凌草 甲素/kg;第15组为生理盐水对照组。停药次日处死大鼠，解剖大鼠，观察病变情况。实验结果吸入剂给药各组的大鼠的癌抑制率最低为53%，最高为86%，冬凌草 甲素口服给药组大鼠的癌抑制率为13 %，生理盐水组为0，吸入剂给药各组与冬凌草甲素 口服给药组、生理盐水组有显著性差异(P < 0. 05)，治疗效果最好的为按实施例13制备的 吸入剂。实施例16抗白血病药效实验方法将小鼠粒单白血病细胞系TOHI-3尾静脉接种于BALB/c小鼠建立动物模型。 取建模小鼠150只，随机分为15组，每组10只。每天1次，用药7天。给药方式第1-13 组为吸入剂吸入给药，分别按照实施例1-13获得吸入剂，给药剂量为IOmg冬凌草甲素类成 分/kg ；第14组口服冬凌草甲素，给药剂量10mg冬凌草甲素/kg ；第15组为生理盐水对照 组。停药次日处死小鼠，通过光镜、荧光显微镜、电镜观测骨髓多项指标。实验结果吸入剂给药各组给药后小鼠的骨髓白血病细胞凋亡率显著升高，冬凌 草甲素口服给药组和生理盐水组小鼠的骨髓白血病细胞凋亡率没有显著变化。本发明涉及一种冬凌草甲素类成分干粉吸入剂及其制备方法和用途。它是以冬凌草甲素类成分为活性成分，与药学上可接受的辅料混合形成的药物组合物，按照本发明提供的技术方案开发的干粉吸入剂，与口服给药相比大大提高了冬凌草甲素类成分治疗治疗食管癌、肺部肿瘤和白血病的效果。