专利名称：低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌及分离培养方法低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌及分离培养方法技术领域本发明属于污水处理领域，涉及一株具有低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌及分离培养方法。低温对生物处理能力产生重大影响的原因是由于温度的降低影响了微生物的生长及代谢。聚磷菌虽是低温耐冷菌，但在温度下降过程中，聚磷菌的释磷和吸磷速率也受到影响，，从而导致污水处理厂冬季出水水质下降。因此亟需一种在低温条件下能强化去除污水中磷的菌株。发明内容本发明的目的是克服现有菌株低温脱磷效果不佳的不足，提供一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌。本发明的第二个目的是提供一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的分离培养方法。本发明的第三个目的是提供一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的用途。一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷 CGMCCNo. 5280，其具有在低温好氧条件下去除污水中磷的能力。一种去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subti 1 is)浅黄聚磷CGMCC No. 5280在低温好氧条件下去除污水中磷的用途。低温优选为8_12°C。
低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的的分离培养方法，包括如下步骤
(1)将富磷培养液放入小试SBR反应器中，将污水处理厂污泥接种所述富磷培养液中，在8 12°C，连续培养20天，运行周期为6小时，其中包括厌氧搅拌2. 5小时，好氧 2. 5小时，静置0. 5小时，排上清液及补充新的富磷培养液共0. 5小时；运行期间保持污泥浓度为3000mg/L ；
(2)取IOmL步骤(1)获得的污泥，加入已装有90mL灭菌蒸馏水和20 30粒灭菌玻璃珠的250mL锥形瓶中，振荡10 30min，使细菌细胞充分释放到上清液中；静置20 40min，取ImL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10_2的菌悬液，按上述方法依次做系列稀释，一直做到10_8为止；
(3)选取梯度为10_5 10_8的菌悬液，分别取ImL接种于富磷固体培养基，每个稀释度做3个平行样，编号；10°C在有氧的条件下保湿培养2 3周；
(4)从步骤(3)中的富磷固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在富磷固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为浅黄聚磷，经鉴定为低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
所述富磷培养液为由下述组分组成=CH3COONa · 3H20 3. 32g、KH2PO4 43. 75mg、CaCl2 · 2H20 25. 68mg、KNO3 485. 94mg、MgSO4 · 7H20 91. 26mg,5mL Tris 缓冲液和 2mL 微量元素；加蒸馏水至IOOOmL,调节pH为7. 2 ；
所述微量元素溶液的组成为EDTA5g、FeSO4 · 7H20 5g、CuSO4 · 5H20 1. 6g、 MnCl2 · 4H20 5g、(NH4)6Mo7O2 · 4H20 50mg、H3BO3 50mg、KI IOmg 禾口 CoCl2 · 6H20 50mg 加蒸溜水至 lOOOmL。
所述富磷固体培养基为由下述组分组成=CH3COONa · 3H20 3. 32g、KH2PO4 43. 75mg、 CaCl2 · 2H20 25. 68mg、KNO3 485. 94mg、MgSO4 · 7H20 91. 26mg,5mL Tris 缓冲液和 2mL 微量元素，琼脂20g,加蒸馏水至IOOOmL,调节pH为7. 2 ；
所述微量元素溶液的组成为EDTA5g、FeSO4 · 7H20 5g、CuSO4 · 5H20 1. 6g、 MnCl2 · 4H20 5g、(NH4)6Mo7O2 · 4H20 50mg、H3BO3 50mg、KI IOmg 禾口 CoCl2 · 6H20 50mg 加蒸溜水至 lOOOmL。
实验结果表明尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCC No. 5280在低温下，特别是在8-12°C的条件下，对磷去除有明显的强化作用，磷去除率提高了 10%，优于一级A的出水标准(水温彡12°C时，一级A标准的控制指标为0. 5mg/L)。


图1为低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷 CGMCCNo. 5280的驯化分离培养流程图。
图2为浅黄聚磷去除磷的试验。
图3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷细菌鉴定方法流程。

下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌的分离培养方法，包括如下步骤
(1)将富磷培养液放入小试SBR反应器中，将天津纪庄子污水处理厂曝气池的污泥接种所述富磷培养液中，在10°c，连续培养20天，运行周期为6小时，其中包括厌氧搅拌 2. 5小时，好氧2. 5小时，静置0. 5小时，排上清液及补充新的富磷培养液共0. 5小时；运行期间保持污泥浓度为3000mg/L ；
(2)取IOmL步骤(1)获得的污泥，加入已装有90mL灭菌蒸馏水和30粒灭菌玻璃珠的250mL锥形瓶中，振荡20min，使细菌细胞充分释放到上清液中；静置30min，取ImL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做系列稀释， 一直做到10_8为止；
(3)选取梯度为10_5 10_8的菌悬液，分别取ImL接种于富磷固体培养基，每个稀释度做3个平行样，编号；10°C在有氧的条件下保湿培养3周；
(4)从步骤(3)中的富磷固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在富磷固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离4次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为浅黄聚磷，经鉴定为低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is)
实施例2
富磷培养液为由下述组分组成
CH3COONa · 3H20 3. 32g, KH2PO4 43. 75mg、CaCl2 · 2H20 25. 68mg、KNO3 485. 94mg、 MgSO4 · 7H20 91. 26mg、5mL Tris缓冲液和2mL微量元素；加蒸馏水至IOOOmL,调节pH为 7. 2 ；
所述微量元素溶液的组成为=EDTA5g、FeSO4 · 7H20 5g、CuSO4 · 5H20 1. 6g、 MnCl2 · 4H20 5g、(NH4)6Mo7O2 · 4H20 50mg、H3BO3 50mg、KI IOmg 禾口 CoCl2 · 6H20 50mg 加蒸溜水至 lOOOmL。
实施例3
富磷固体培养基为由下述组分组成
CH3COONa · 3H20 3. 32g、KH2PO4 43. 75mg、CaCl2 · 2H20 25. 68mg、KNO3 485. 94mg、 MgSO4 · 7H20 91. 26mg、5mL Tris缓冲液和2mL微量元素，琼脂20g，加蒸馏水至lOOOmL，调节PH为7. 2 ；
所述微量元素溶液的组成为=EDTA5g、FeSO4 · 7H20 5g、CuSO4 · 5H20 1. 6g、 MnCl2 · 4H20 5g、(NH4)6Mo7O2 · 4H20 50mg、H3BO3 50mg、KI IOmg 禾口 CoCl2 · 6H20 50mg 加蒸溜水至 lOOOmL。
实施例4
本发明的去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，具有以下微生物学特性
1.形态学特性
在显微镜下观察，为杆状，长1. 6 μ m，宽0. 35 μ m ；在富磷固体培养基上形成透明菌落。
2.培养学特性
在10°C下，在富磷固体培养基中培养时，本发明的去除污水中磷的枯草芽孢杆菌具有以下特性。
表面干燥，边缘整齐，个体微小扁平，菌体透明。
3.生理特性
好氧条件下去除污水中磷的革兰氏阴性细菌，接触酶阴性、甲基红试验阴性、水解淀粉、液化明胶、不产生吲哚、生长PH值为6 8，生长温度5 30°C。


本发明公开了一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌及分离培养方法，一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCC No.5280，其具有在低温好氧条件下去除污水中磷的能力。实验结果表明尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种低温下去除污水中磷的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)浅黄聚磷CGMCCNo.5280在低温下，特别是在8-12℃的条件下，对磷去除有明显的强化作用，磷去除率提高了10％，优于一级A的出水标准(水温≤12℃时，一级A标准的控制指标为0.5mg/L)。