专利名称：一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种及应用的制作方法近年来，随着公众对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注，以及一些危险性化学农药的禁用，促使人们寻求安全有效的植物病害控制新途径，利用有益微生物防治植物病害日趋受到重视。它是向被打破了的植物自然生态系中引入对植物有益的外源拮抗菌、或通过调节环境促使自然的有益微生物群体增长，并表现出生防活性，通过微生物之间的相互作用达到防病目的。目前，植物病害的生防已成为各国研究重点。自然界潜在的微生物资源种类丰富，在微生物农药的产品开发方面有明显优势，因此世界各国都投入大量的人力和财力，研究、开发具有自主知识产权的新型微生物农药，并以此带动其他高科技产业的全面发展。我国也把微生物农药的研制和开发列为国家重点科技攻关和闻新技术发展计划。生物农药(biopesticides),按照Copping和Menn的定义包含了活体微生物(真菌、细菌和病毒)，昆虫植病线虫，植物源农药，微生物农药，微生物次生代谢物(抗生素)等，用于防治各种昆虫和病害，生物农药(特别是微生物农药)具有独特的优点是对人类健康威胁小，对环境安全，这正是全社会最关心的问题之一。因此，进入21世纪以来，各国政府和民众更加重视生物农药的开发和应用，已成为研究热点。微生物农药的特性赋予了农业可持续发展战略，为保护农业生态环境，保障食品安全提供物质基础和技术支撑；同时微生物农药产业也是未来经济中具有发展潜力的新增长点之一。研究微生物农药产业发展对于政府部门科学制定促进微生物农药产业发展的政策体系，实现农药产业结构调整，促进循环经济和可持续社会发展战略，保障我国经济建设和农业生态环境的协调发展，以及建设我国农产品安全体系等都将具有十分重要的理论意义和实践意义。草莓(Fragaria ananassa Duchesne)是一种集栽培和观赏于一体的宿根性、多年生草本资源植物。在草莓栽培区，炭疽病、灰霉病和黄萎病是阻碍草莓产业发展瓶颈。其中草莓炭疽病(Colletotrichum fragariae A. N. Brooks)的危害最严重,在每年的草莓生长期危害茎、叶柄、叶片，托叶，在后期危害花和果实，直接影响到草莓产量，造成很大经济损失。对该病害的传统防治大多采用化学药剂喷洒植株表面，造成土壤不同程度的农药残留和污染问题，影响产品质量和人们的身体健康。从保护生态环境和食品安全的角度出发，草莓生产需要有低毒、污染少，对人体安全的微生物制剂来控制草莓病害，已达到草莓安全食用的目的。也符合生物农业发展和政府、社会与生物农药产业的发展。
发明目的为了克服现有技术的不足，本发明的第一目的在于提供一种对草莓炭疽菌具有拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌植物亚种。本发明的第二目的在于提供一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种B203在防治草莓炭疽病中的应用。本发明的第三目的在于提供一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种在抑制微生物生长中的应用。技术方案为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp. Plantarum) B203,在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)保藏，保藏单位地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，其保藏编号为CGMCC No. 6156，保藏日期为2012年05月25日。解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp. pl·antarum)B203的生理活性特征如下所述解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)B203在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌落较大，乳白色，直径一般4_6mm,表面隆起，干燥，有皱褶，边缘较规则，菌体杆状，两端钝圆，大小为I. 23-1. 87 X 0. 62-0. 80 u m,平均1.48X0. 68iim ;芽孢两端生，椭圆形，大小为1.01-1.41X0. 62-0. 75 u m,平均I. 14X0. 67 u mD革兰氏染色表现为阳性；酪蛋白水解、淀粉水解、明胶液化为阳性，V. P反应可变，吲哚反应阴性；糖类产酸发酵。所述解淀粉芽孢杆菌植物亚种的16SrDNA序列如SEQ ID No. I所示。将所测16SrDNA序列通过BLAST比对，鉴定其为解淀粉芽孢杆菌植物亚种。所述的解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum) B203是在防治草莓炭疽病中的应用。所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种是在抑制草莓炭疽菌生长中的应用。所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种是在抑制草莓灰霉菌生长中的应用。所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种是在抑制可可球二孢生长中的应用。所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种是在抑制聚生小穴壳生长中的应用。所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种是在抑制杨拟茎点霉菌生长中的应用。所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种是在抑制不高双孢菌生长中的应用。具体应用为将解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum) B203接种于发酵培养基中，在28°C _35°C下发酵培养48-72小时，得到的发酵液作为防治草莓炭疽菌的菌剂。本发明中所述发酵培养基的配方为1000mL蒸馏水，牛肉膏2_5g，蛋白胨5-10g，氯化钠 4-5g，pH6. 5-7.5。有益效果与现有技术相比，本发明的优点是(I)解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum)B203对多种植物病原菌具有抑制作用，在拮抗细菌对植物病害生物防治中起到非常重要的作用，例如种类和数量众多；对病原菌的作用方式多样化；繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用；抗逆能力强等优点，尤其是对真菌引起的草莓炭疽病的防治具有重要意义；也是控制鲜食水果安全的有效措施。(2)解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp. plantarum)B203培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。 图Ia 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum)B203 形态图；图Ib 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum)B203芽抱形态图；图2a 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum)B203 对草莓炭疽菌 Colletotrichum fragariae A. N. Brooks 的抑制作用；图2b 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum) B203 对草莓灰霉菌 Botrytis cinera Pers. ex Fr.)的抑制作用；图2c 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum) B203 对可可球二抱[Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & MaubI.的抑制作用；图2d 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum)B203 对聚生小穴壳(Dothiorella gregaria Sacc.)的抑制作用；图2e 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum)B203对杨拟莖点霉菌(Phomopsis sp.)的抑制作用；图2f 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum) B203 对不高双抱菌[Apiocarpella macrospore (Speg.) H. & P. Syd.]的抑制作用；图3a 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum)B203对草莓炭疽病的防治作用；图3b 为解淀粉芽抱杆菌植物亚种(Bacillus amyIoliquefaciens subsp.plantarum)B203菌液处理过的草莓植株。


本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)B203，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.6156，保藏日期为2012年05月25日。所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种主要用于草莓炭疽病的生物防治。本发明解淀粉芽孢杆菌植物亚种B203对草莓炭疽病菌、草莓灰霉病菌和多种杨树溃疡病原真菌具有显著抑制作用，该拮抗细菌对其他多种植物病害也有很好的防治效果；繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用；抗逆能力强等优点，尤其是对真菌引起的草莓炭疽病的防治具有重要意义；培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。