专利名称：：植物性饵料培养方法：人工大量培养藻类作为海产动物幼体的活饵料来源，饵料是海水育苗成功的关键之一，它不仅直接影响苗种的生长繁殖，而且在高密度培养条件下残饵伴随排泄物等分解后还可能败坏水质，影响苗种的生长繁殖，造成生产成本的增加。因此，为了进一步解决海产经济动物育苗的饵料问题，有必要改进培养方法、提高培养效果。
有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种在提高出成率的同时降低生产成本的植物性饵料培养方法。为达上述目的，本发明提供了一种植物性饵料培养方法，其中，藻种经一级培养和二级培养，培养用海水经消毒处理，—级培养，710天，每1000毫升加入营养盐康维方的配备步骤配备甲液，该甲液组分的重量比为三氯化铁50克、氯化锰1.8克、硼酸168克、乙二胺四乙酸四钠225克、磷酸二氢钾100克、和硼酸钠500克，配备乙液，该乙液组分的重量比为氯化锌0.5克、氯化钴0.5克、钼酸铵0.25克、和硫酸铜O.5克，将乙液倒入甲液中，再加入维生素Bl和B12;二级培养，半个月至1个月，保持充气，加入培养液母液，该培养液母液的组分重量比为硝酸钠50克、磷酸二氢钾5克、柠檬酸铁铵0.5克、和消毒海水1000毫升。所述二级培养液母液的组分重量比中，还包括硅酸钠210克、尿素1020克、或维生素B1、B12。所述二级培养之后还进行三级培养，每吨水体加入培养液母液的组分重量比为硝酸钠2550克、磷酸二氢钾2.55克、和柠檬酸铁铵0.30.7克；培养57天，在培养初期的11.5小时内充气，或者每天搅拌34次。所述培养用海水消毒处理步骤—级培养用海水加温煮沸，保持12min，冷却后使用；二级培养用海水中，加入次氯酸钠消毒，在一吨水体中加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠1501000卯m，通气810小时，再用硫代硫酸钠中和，用量为14140克/吨水；或者二级培养用海水中，加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠消毒，用量为250500mL/吨水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸钠中和。所述三级培养用海水消毒处理步骤三级培养用海水中，加入次氯酸钠消毒，在一吨水体中加入含有效氯浓度为8310%的次氯酸钠1501000卯m，通气810小时，再用硫代硫酸钠中和，用量为14140克/吨水；或者三级培养用海水中，加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠消毒，用量为250500mL/吨水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸钠中和。由以上技术方案可以看出本发明具有以下有益效果在一级、二级、三级培养中分别加入营养盐康维方、营养盐等，使饵料的营养成分含量相对较高，细胞内蛋白质和总糖含量比较高，作为虾夷扇贝、剌参、大西洋浪蛤等海洋经济动物早期生长所需的饵料，既能达到好的培养效果，又极大地节约生产成本；在一级、二级、三级培养时，对培养用海水分别采用加热消毒、或用药消毒，不仅达到充分消灭原生动物的效果，而且成本低，适于大规模生产；藻种经一级、二级后，经过三级扩充培养，在投喂时还可减少饵料的损失，为规模生产提供充足的饵料；另外，三级扩充培养时的培养液，每吨水体加入硝酸钠2050克、磷酸二氢钾25克、柠檬酸铁铵0.30.7克，饵料的浓度适宜，净化稳定水质的能力好，能抑制有害藻类过度繁殖，提高苗种幼体成活率，出苗整齐，抗病力增强，有明显的增效节约的功效。具体实施例方式本发明植物性饵料培养方法适用于虾夷扇贝、剌参、大西洋浪蛤等苗种生产时进行的植物性佴料培养，分一级、二级、三级培养，其中，一级培养也称保种，三级培养也称生产性培养。下面将对本发明植物性饵料培养方法作进一步说明。饵料培养室设在靠近贝类、海产育苗室地势较高、地面平坦、无遮荫、阳光充足和通风好的地方，培育室的屋顶采用透光率70%以上的透明玻璃钢瓦及阳光板为宜，房屋四壁应多建门窗以利于采光和通风。培养室可分保种室和生产室两部分。保种室中放置5000ml三角烧瓶保种架；生产室中建立大小一致的水泥池，池子为长方形，容积约为420立方米，池边高为80IOO厘米。饵料生产池水体与育苗水体的比例为1:2或1:3。饵料藻种，从宏观上观察，藻种颜色正常，藻种细胞上浮和分布状态好，呈云雾状或雾状等；从微观上观察，细胞个体均匀，藻种细胞活力强，藻种纯、干净无杂藻，藻种没有敌害、原生动物。作为饵料藻种，其中三角褐指藻和新月菱形藻属低温性藻类，小球藻、金藻、等边金藻3011、叉鞭金藻、角毛藻、盐藻和扁藻属于高温性藻类。各种饵料培育条件见表1。表1序号藻种最适盐度最适生温度最适光照强度PH值三级密度1三角褐指藻25%030%01822°C40001ux左右7.58.5200万/mL2新月菱形藻25%030%01528°C60001ux左右7.58.5200万/mL3等边金藻301120%。以上2025°C100001ux左右7.58.5100万个/mL4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>其中，单细胞藻类的生长测定，使用血球计数板计算藻的密度。角毛藻和盐藻在海参育苗时，根据情况可不作三级培养；扁藻一般在投喂时采用撇去上层上浮饵料投喂，这种浓縮方法一般密度会达到1000万/毫升。就密度而言，小个体的藻种要达到相同的生长效果需相应加大密度，藻体大密度就要小一些，藻体小密度可以大一些；且在适宜的密度下，饵料培养系统可排斥弧菌，尤其是在微藻细胞密度达到高峰时，排斥弧菌能力最强。在上述密度下，胶状体浓度适宜，幼体摄食能力强，出成率高，而且饵料残留少，极大地减少了对水质的影响。由表1所示参数，可获得各种藻类较佳的培养效果，在较短的繁殖间隔内、较快生长，并获得较高的生物密度，以及较大的生物量，最适光照强度使可溶性蛋白、可溶性糖和叶绿素的含量增加。但是，饵料培养是一个复杂的过程，影响饵料生长繁殖的因素很多，如接种密度、温度、盐度、光照、pH、及非离子氨等各种因子，各因子之间还相互关联，相互影响。其中，在温度适宜其他培养条件相同时，温度条件对培养有明显的影响，即高温季节高峰期短，低温季节的高峰期长。培养用的玻璃瓶在使用前用刷子沾去污粉或1%浓度稀盐酸浸泡祛除脏物，然后用水充分冲洗，加干净纸封口备用。橡皮筋、水泵、塑料桶、塑料勺等，用水洗净后，经过消毒才能使用，消毒时，可用煮沸水冲洗，也可用加次氯酸钠水浸洗，然后用加硫代硫酸钠中和过的水冲净使用，这样可极大地减少对藻种的生长抑制。保种用营养盐最好为试剂级的，生产用的营养盐可以使用化肥级的。一级、二级培养时，加入表2所示的培养液母液，三级培养时，每吨水体加入表2所示的配制液，例如，硝酸钠50克、磷酸二氢钾5克、柠檬酸铁铵0.5克，可选的硅酸钠210克、或维生素Bl、B12、或尿素1020克。表25<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2中营养盐重量在生产上根据当地水中营养盐含量进行季节性调整。育苗生产饵料培养过程中，营养盐的添加量一般按照经验配方，这样投喂饵料中未消耗完的营养盐会对养殖动物造成危害的同时，对环境也造成很大的污染，营养盐的含量升高会增加赤潮发生的几率，尤其是为了满足规模生产，进行三级扩充培养时，对环境的影响不容忽视。因此，为了精细化管理和开源节流，降低污染，根据海区营养盐的变化，调整饵料培养中营养盐添加量就显得十分的必要。在跟踪测定营养盐添加量调整后的培养过程中营养盐的消耗情况，数据显示，在不影响饵料密度的情况下，调整饵料中的营养盐，不但能减低对动物的危害，同时也将减少成本。因此，根据当地水中营养盐含量进行季节性调整，例如，三级培养中，每吨水体加入表2所示的部分配制液减半，即硝酸钠25克、磷酸二氢钾2.5克、柠檬酸铁铵0.5克，或者每吨水体加入硝酸钠2050克、磷酸二氢钾25克、柠檬酸铁铵0.30.7克，适当加入可选的硅酸钠210克、或维生素B1、B12、或尿素1020克。接种前先用显微镜检查藻种，看有无敌害生物污染、混种、细菌等。选择好藻种后，进行细胞计数确定投入量。在生产性培养池中，接种密度不宜太低，一般在2040万个细胞/ml左右。—级藻种培养采用三角烧瓶，一级培养7IO天后分瓶，在适宜的条件下，藻种培养7IO天，密度合适，无敌害生物，生长状态良好，就可以进行接种。培养时加入营养盐康维方，每1000毫升水中营养盐康维方的配比如表2所示，按表2分别配备甲液、乙液后，再将乙液倒入甲液中，观察颜色变化，先是苹果绿，后变为深紫色，再加入1支维生素B1、2支B12。然后，接种到二级20升大瓶或100升桶，增大密度，二级高密度培养根据光照强度大小、营养盐等情况培养半个月至20天，或者1个月；二级高密度培养时，始终保持充气，同时加入如表2所示的培养液母液，以硝酸钠替代硝酸铵作为氮源时，观察水体颜色，若颜色发黄、或显黄色，可适当加入尿素。再接种到生产池中，进行三级培养，培养57天，以硝酸钠替代硝酸铵作为氮源时，可适当加入尿素，在培养初期的11.5小时内，进行充气，或者每天搅拌34次。生产池中藻种45天就可以达到最高密度，在此高峰期，饵料新鲜、有活力，无老化现象，这时池内的藻液可以作为饵料用于育苗投喂，投喂后池子经过清洗、消毒后继续使用。培养藻类的海水必须经过严格的消毒处理，一级培养用海水需加热处理，海水经过加温煮沸，保持一段时间，约12min，冷却后使用，这样充分除去水体中的原生动物等有害物质。在二级培养和三级培养时，生产性培养用水用次氯酸钠消毒，在一吨水体中加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠1501000卯m，通气8小时以上，或8IO小时，再用硫代硫酸钠中和，用量为14140克/吨水，中和后的水才能加入肥料进行接种培养；或者消毒时，含有效氯浓度为810%的次氯酸钠，用量为250300mL/吨水、500mL/吨水，然后按l:10的比例用硫代硫酸钠中禾P，例如硫代硫酸钠用量为30克、40克、50克。培养用海水消毒、中和后，观测水体PH值是否在培养适用范围内。这样，可极大地减少对藻种的生长抑制，有效氯浓度为0.5mg/L时，还有轻微的促进作用。接种时还要预先对接种容器进行消毒，操作人员的手进行消毒。培养过程中，如表1所示，保持温度，一般冬季水温在2(TC左右，夏季在28°C以下，在此温度范围，低温藻培养温度稍低些，高温藻培养温度稍高些。在雾天、雨天等采光较差的情况下，用日光灯、大灯连续光照，以增加光源。培养时，可采用半连续培养、连续培养方式。半连续培养，当培养系统达到对数生长期末期开始，按比例一定时间收获含有微藻细胞的培养液，同时补充不含微藻细胞的新培养基。连续培养，把新培养基连续供给均匀混合的培养系统，同时以相同速度把含有细胞和产物的培养液抽出，保证微藻对营养物质的需要，使微藻保持较长高速生长，排出部分有害代谢物；连续培养可縮短培养周期，提高设备利用率，节省出料和设备灭菌的时间，便于饵料工厂化培养、自动化管理。接种时，所加入的培养液中的常量元素对藻类的生长非常重要，氮、磷是藻类生长的必须元素，硅是硅藻生长所必需的，碳在光合作用中起着重要的作用，因此，培养液中常量元素的组成对藻类生长的影响显得尤为重要。表2所示的培养液，提供藻生长所需的常量元素的较佳配方，其营养丰富，含有生物活性物质，是双壳贝类、海参等幼体的优质饵料。表2中作为氮源的硝酸钠，也可用硝酸钾、氯化铵和硝酸铵、尿素等替代，其中以硝酸钠、尿素效果好，可获得更高的生长速率；在富含氮、磷的培养液可使细胞始终保持旺盛生长和富含多不饱和脂肪酸(EPA)的状态，而且藻生长迅速、细胞颗粒小、营养比较全面，同时具有较薄细胞壁。培养时，避免使用培养废液，一方面会造成产量显著降低，另一方面培养液的循环使用会引起细胞聚合物的形成、培养物逐渐退化。经过一级、二级、三级培养，分别培养出一级饵料、二级饵料、三级饵料，输送到育苗池中。投喂前，可将饵料进行离心处理，将鲜藻液浓縮，投喂水产动物能减少水质污染，投喂方便，可全年保证对虾、扇贝、鲍鱼等苗种的饵料供应，一方面除去部分藻液，另一方面还可去除有害指标。投喂量，根据苗种种类、幼体大小、密度、以及摄取情况，适时调整饵料的投喂量，投喂一种饵料，也可以混合投喂多种饵料。投喂饵料在一段时间内，进行搅拌，保持饵料悬浮在水体内，使苗种幼体充分摄取饵料，还可进行微充气，使饵料继续悬浮在水体内，提高饵料的利用率，促进动物生长，还可提高机体抗病能力和免疫力，减少沉入水底的饵料还可避免浪费、减少水质污染，从而保持水质，降低生产成本。另外，进行如下日常管理。温度的调节注意气温和室温变化。春季气温低时，对高温种类加强升温保温措施；夏季室温较高时将低温种类移至阴凉通风处，开窗通风降温。光照的调节三角褐指藻、新月菱形藻应避免太阳直射。中午光线过强时要遮光；阴天光线过暗时，可以设碘钨灯等补充光照。盐度的调节角毛藻对盐度比较敏感，当海水盐度超过32%。时，应用适量淡水降低盐度。生长情况的检查每天巡池检查生长情况。观察水色接种后，随着藻类细胞数量的增加，水色由浅逐渐变深。如果水色不变或发灰、混浊，很可能受到原生动物的污染。镜检取一滴培养液，在显微镜下观察藻体游动情况、有无原动物、有无其它藻类混入等。若有原生动物，视情况可在培育池内加入盐酸进行酸化处理。采用本发明，在一级、二级、三级培养中分别加入营养盐康维方、营养盐等，饵料的营养成分含量相对较高，细胞内蛋白质和总糖含量比较高，作为虾夷扇贝、剌参、大西洋浪蛤等海洋经济动物早期生长所需的饵料，另外，例如硅藻，附着能力相对较强，附着能力越强其分泌的胞外粘液就越多，这是苗种幼体早期生长所需的重要食物来源；苗种幼体吸收、利用藻细胞的胞内物质，所以摄食饵料的个体生长良好；饵料培养液中营养盐含量适宜，使用浓度适宜，净化稳定水质的能力好，能抑制有害藻类过度繁殖，提高苗种幼体成活率，体长增加10%以上，出苗时间縮短12天，出苗整齐，抗病力增强，有明显的增效节约的功效；在一级、二级、三级培养时，分别加热消毒、或用药消毒，充分消灭原动物，成本低，适于大规模生产；藻种经一级、二级后，根据藻种和所投喂幼体的种类、饵料生产、生产规模等实际情况，选择进行三级培养，经过三级扩充培养，在投喂时还可减少饵料的损失，为规模生产提供充足的饵料；本发明植物性饵料培养方法，成本低、出成率高，具有易培养、繁殖迅速、营养丰富的特点，适用于虾夷扇贝、剌参、大西洋浪蛤苗种生产时进行的植物性饵料工厂化培养；而且培养方式和培养液，为无公害的，扩充的饵料安全。以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。9权利要求一种植物性饵料培养方法，其特征在于，藻种经一级培养和二级培养，培养用海水经消毒处理，一级培养，7～10天，每1000毫升加入营养盐康维方的配备步骤配备甲液，该甲液组分的重量比为三氯化铁50克、氯化锰1.8克、硼酸168克、乙二胺四乙酸四钠225克、磷酸二氢钾100克、和硼酸钠500克，配备乙液，该乙液组分的重量比为氯化锌0.5克、氯化钴0.5克、钼酸铵0.25克、和硫酸铜0.5克，将乙液倒入甲液中，再加入维生素B1和B12；二级培养，半个月至1个月，保持充气，加入培养液母液，该培养液母液的组分重量比为硝酸钠50克、磷酸二氢钾5克、柠檬酸铁铵0.5克、和消毒海水1000毫升。2.根据权利要求1所述的植物性饵料培养方法，其特征在于，所述二级培养液母液的组分重量比中，还包括硅酸钠210克、尿素1020克、或维生素B1、B12。3.根据权利要求1或2所述的植物性饵料培养方法，其特征在于，所述二级培养之后还进行三级培养，每吨水体加入培养液母液的组分重量比为硝酸钠2550克、磷酸二氢钾2.55克、和柠檬酸铁铵0.30.7克；培养57天，在培养初期的11.5小时内充气，或者每天搅拌34次。4.根据权利要求1所述的植物性饵料培养方法，其特征在于，所述培养用海水消毒处理步骤一级培养用海水加温煮沸，保持12min，冷却后使用；二级培养用海水中，加入次氯酸钠消毒，在一吨水体中加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠1501000卯m，通气810小时，再用硫代硫酸钠中和，用量为14140克/吨水；或者二级培养用海水中，加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠消毒，用量为250500mL/吨水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸钠中和。5.根据权利要求3所述的植物性饵料培养方法，其特征在于，所述三级培养用海水消毒处理步骤三级培养用海水中，加入次氯酸钠消毒，在一吨水体中加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠1501000卯m，通气810小时，再用硫代硫酸钠中和，用量为14140克/吨水；或者三级培养用海水中，加入含有效氯浓度为810%的次氯酸钠消毒，用量为250500mL/吨水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸钠中和。全文摘要本发明涉及一种植物性饵料培养方法，藻种经一级、二级培养，培养用海水经消毒处理，一级培养7～10天，每1000mL所加入营养盐康维方的步骤配备甲液，其组分的重量比为三氯化铁50克、氯化锰1.8克、硼酸168克、乙二胺四乙酸四钠225克、磷酸二氢钾100克和硼酸钠500克，配备乙液，其组分的重量比为氯化锌0.5克、氯化钴0.5克、钼酸铵0.25克和硫酸铜0.5克，将乙液倒入甲液中，加入维生素B1和B12；二级培养0.5～1个月，保持充气，所加入培养液母液的组分重量比为硝酸钠50克、磷酸二氢钾5克、柠檬酸铁铵0.5克和消毒海水1000毫升。采用本发明植物性饵料培养方法，既能降低生产成本又能提高出成率。文档编号C12N1/12GK101781622SQ20091001327公开日2010年7月21日申请日期2009年8月17日优先权日2009年8月17日发明者张芸,王诗欢申请人:大连獐子岛渔业集团股份有限公司