一种高、中、低聚茶褐素及其制备方法[0002]在普洱茶发酵过程中，普洱茶中的物质发生了很大的变化，特别是色素物质变化很大。茶褐素是普洱茶中主要成分，也是普洱茶区别于其他茶类饮料的重要成分，受到了很大的关注。茶褐素的结构复杂，其极性也很大，不溶于绝大多数有机试剂，关于茶褐素的研究也较少。[0003]目前人们对于茶褐素研究报道中大多使用的是有机溶剂萃取法。普洱茶先磨碎后用水提取，用三氯甲烷或者二氯甲烷萃取除去咖啡因，再用乙酸乙酯与正丁醇除去茶黄素与茶红素，最后得到茶褐素。流程大致如下:茶叶一粉碎一无水乙醇浸泡一过滤一茶渣一热水提取一过滤一减压浓缩一二氯甲烷萃取3次一乙酸乙酯萃取3次一正丁醇萃取3次一水相减压浓缩一茶褐素粗品一无水乙醇洗涤一茶褐素。[0004]普洱茶中茶褐素为特征性成分，普洱茶发酵过程中，随着发酵程度不同茶褐素聚合度逐渐加大，所以区分不同聚合度茶褐素可以评价普洱茶品质，并且可以从不同聚合度茶褐素的比例，判断普洱茶发酵年份。另外不同聚合度茶褐素在体内的吸收分布各不相同，所以结合药理试验筛选不同聚合度茶褐素的药理作用，并且可以作为特殊功效普洱茶的质量控制指标。不同聚合度茶褐素含量可以作为普洱茶品质评价的重要指标。[0005]茶褐素是一种分 子量差异大的高聚合物，本发明经过研究发现，根据分子量的不同，茶褐素可以分为高聚合的茶褐素和低聚合的茶褐素，为研究方便，分子量分布小于I万(其中在2000左右和6000左右有集中分布)定义为低聚茶褐素；分子量分布在f 5万(其中在I万和3万左右有比较明确的集中分布)定义为中聚茶褐素；分子量大于5万定义为高聚茶褐素。[0006]现有技术中有制备茶褐素的报道，但没有制备不同聚合度的茶褐素的方法的报道，本发明经过研究，发现一种制备不同聚合度的茶褐素的方法，该方法简单易行，可同时制备不同聚合度的茶褐素。
[0007]本发明提供一种不同聚合度的茶褐素的制备方法，该方法包括以下步骤:
[0008]步骤1，普洱熟茶用水提取得到提取液，提取液浓缩后离心得到上清液；
[0009]步骤2，上清液加入乙醇，得到沉淀物，沉淀物加水溶解，离心得到离心液，干燥后得到茶褐素干粉；
[0010]步骤3，茶褐素干粉用水溶解，用滤膜过滤法得到不同聚合度的茶褐素。
[0011]其中步骤I所述用水提取是用5-20倍量的水，80-100°C提取2_5次，每次0.5-2小时；合并提取液后，减压浓缩到相对密度1.05^1.10，然后再离心。
[0012]其中步骤2中所述加入乙醇是加入90%以上的乙醇，使加入后的乙醇浓度达到70%-80%，加入乙醇后，常温或冷却放置12-36小时，析出沉淀物，分离上清液得到沉淀物，沉淀物用水溶解至比重1.05^1.10，离心收集离心液，干燥后得到茶褐素干粉。
[0013]其中步骤3中所述用水溶解是将茶褐素干粉用水溶解到0.5_2g/L，然后用孔径
0.45 μ m和0.22 μ m的微孔滤膜过滤。
[0014]滤出的溶液再经过截流分子量为5万的纳滤膜过滤，过滤采用自然压力；其中，没有滤出的溶液称为膜上溶液，收集该膜上溶液并进行干燥得到高聚合度的茶褐素。
[0015]滤出的溶液再截流分子量为I万的纳滤膜过滤采用自然压力；其中，没有滤出的溶液称为膜上溶液，收集该膜上溶液并进行干燥得到中聚合度的茶褐素，收集滤出的溶液并进行干燥得到低聚合度的茶褐素。
[0016]本发明优选的制备方法如下:
[0017]茶褐素制备工艺
[0018]取普洱熟茶适量，加10倍量水加热80°C提取2次，每次I小时，过滤，茶渣加8倍量水，加热80°C提取0.5小时，过滤，茶渣弃去，合并提取液，过300目滤布，滤液70°C减压真空浓缩至相对密度1.05-1.10，管式离心，得离心上清液，加95%乙醇醇沉至含醇量80%，静置过夜，离心，得醇沉沉淀，加热水复溶至比重1.05-1.10,管式离心，得上清液，喷雾干燥，得茶褐素干粉。
[0019]不同聚合度茶褐素制备工艺
[0020]取茶褐素干粉水复 溶(5g — 5L)，依次过0.45 μ m和0.22 μ m的微孔滤膜，滤过液先用截流分子量为5万的纳滤膜过滤，膜上截流溶液减压浓缩至比重1.l(Tl.15，冻干得高聚茶褐素；5万膜透过液再用截流分子量为I万的纳滤膜进行膜截流，膜上未通过溶液检验浓缩至1.l(Tl.15，冻干得中聚茶褐素；1万膜下透过液浓缩后冻干得低聚茶褐素。
[0021]本发明得到的茶褐素经过检测得到其分子量分布，检测方法如下:
[0022]GPC方法:分析采用凝胶渗透色谱法在十八角激光光散射仪和示差检测器联用。以0.lmol/L硝酸钠溶液加0.2%叠氮化钠为流动相，柱温40°C;示差折光检测器；温度40°C;激光检测波长658nm ;流速为0.5mL/min ;进样体积:200 μ L。
[0023]试验处理样品:
[0024]取茶褐素样品适量，分别配置成5mg/ml的溶液，溶液过0.45 μ m微孔滤膜过滤，进样检测，结果如下表: