专利名称：用于治疗腱病的血小板衍生生长因子组合物和方法 肌腱是一种坚韧的纤维性结缔组织带，通常将肌肉与骨连接。肌腱的弹性特性调节运动期间的力，在无主动工作的情况下提供额外的稳定性。它们还以高效率储存和恢复能量。正常的健康肌腱主要由紧密压在一起的平行排列的I型胶原纤维组成，但也包括少量弹性蛋白和蛋白聚糖。由其高度特化的超微结构、低水平的血管形成和缓慢的胶原更新所致，肌腱如果受损则痊愈非常缓慢，并且很难恢复其最初的强度。部分撕裂通过快速产生无序的III型胶原而愈合，无序的III型胶原比正常肌腱弱。肌腱受损区域的损伤复发是普遍的。腱病是肌腱的慢性病症或损伤，似乎由分解代谢和合成代谢反应之间的不平衡导致，这种不平衡是由过度使用或老化致使肌腱逐步磨损而引起的。这种不平衡的结果是肌腱变性、衰弱、撕裂和疼痛。相比之下，急性肌腱损伤例如肌腱破裂或从骨上脱落十分突然，通常需要手术修复破裂或使肌腱与骨再附着。任何人都可能发生腱病，但在其工作、运动或常规日常活动中趋于一再进行相同动作的人更可能发生腱病。腱病通常在受累部位引起疼痛、僵硬和丧失强度。术语腱病是指两种类型的肌腱损伤腱退变和腱炎。该术语还包括腱鞘炎，一种发生在某些肌腱例如屈肌腱和跟腱中的肌腱外衬腱病。腱退变是肌腱的非炎性损伤，其特征在于因过度使用引起的通常呈在肌腱中和肌腱周围的组织微撕裂形式的肌腱的肌腱内变性，导致损伤区域周围肌腱修复细胞的数目增力口。肌腱的变性是由肌腱的胶原纤维、细胞和血管成分的损伤或结构破坏引起的，其可降低肌腱的抗张强度，如果不治疗的话，可导致肌腱破裂。胶原组构的变化的特征在于纤维分离/松散/卷曲、平行取向丧失、纤维直径减小和胶原总体密度降低。此外，也可发生被红细胞、血纤蛋白和纤连蛋白沉积物包绕的胶原微撕裂。另一方面，存在III型(修复性)胶原增加。这些基质组构变化可导致在偏振光显微术下双折射降低。除胶原含量和组构以外，腱退变的特征还在于在受累区域粘液样基质(蛋白聚糖)增加和细胞密度改变。一些区域含有异常丰富的肌腱细胞，其有成圆形的核和蛋白聚糖和蛋白质产生增加的超微结构迹象。相比之下，受累肌腱的其它区域可含有比正常少的肌腱细胞，其具有小的固缩核。腱退变的另一个特有特征是毛细血管和微动脉增生。通过电子显微镜术鉴定出腱退变中肌腱变性的若干亚类(1)低氧变性，(2)透明变性，(3)粘液样变性(mucoid或myxoiddegeneration)，(4)纤维蛋白样变性，(5)类脂质变性，(6)钙化，和(7)纤维软骨和骨转化。这些病理可以不同的发生率共存，这取决于解剖部位和引起这些病理的损伤的性质(例如缺氧与机械载荷；急性与慢性损伤)。例如，粘液样变性区域通过光学显微镜术、大的粘液斑和纤维之间的空泡表征。然而，类脂质变性的特征在于肌腱内脂质蓄积异常，导致胶原纤维结构被破坏。在一些情况下，腱退变伴发肌腱局灶性坏死或钙化。它是引起关节周围慢性疼痛的一个十分常见的原因。腱退变的特征还在于缺乏初期炎症反应。炎性细胞被认为是修复过程的早期介质，没有它腱退变可能变成慢性病况。与腱退变有关的含水量的特征性增加和胶原基质的结构破坏可通过超声检查或磁共振成像诊断。症状可从肌腱局部区域的单纯疼痛和僵硬到受损肌腱附近整个关节周围的烧灼感而不同。对于许多患者，疼痛常常在活动期间和活动之后恶化，肌腱和关节区域在次日可能变得更僵硬，因为肿胀对肌腱的活动有重大影响。 腱炎是肌腱的炎性损伤，其特征在于像在腱退变中观察到的变性，但还伴有伴发血管破坏和炎性修复反应的肌腱炎症。腱炎常常伴有成纤维细胞和成肌纤维细胞增殖，以及出血和组织化肉芽组织。腱炎一般通过所涉及的身体部位来命名，例如跟腱炎(影响跟腱)或髌腱炎(亦称为“跳跃膝”，影响髌腱)，但是有某些例外，例如外上髁炎(亦称为“网球肘”，影响桡侧腕短伸肌腱)。症状可从持续性疼痛或疼痛和局部僵硬到发炎肌腱附近整个关节周围的烧灼感而不同。在一些情况下，腱炎的特征在于肿胀，有时伴有发热和发红；在关节周围还可有可见结节。对于许多患者，疼痛通常在活动期间和活动之后恶化，次日肌腱和关节区域可变得僵硬，因为肌肉因肌腱活动而收紧。现行治疗在性质上主要是治标的，治疗在传统上集中在抗炎方法上，包括用非甾体抗炎药(NSAID)治疗、类固醇注射和物理治疗，尽管腱退变往往与炎症反应不相关的事实。最近，测试了冲击波疗法、水平激光疗法、硬化疗法和其它实验性治疗。对于大部分，似乎一些治疗(例如NSAID和可的松注射)提供短期缓解，而现行治疗的长期益处尚不清楚。因此，需要与现有治疗方式相比提供长期益处的治疗腱病的改进方法。TOGF存储于血小板的α-颗粒中，并在组织修复期间由局部活化细胞(包括巨噬细胞、成纤维细胞和内皮细胞)分泌。I3DGF-BB是急性肌腱损伤出血和炎症的主要产物之一。血小板衍生生长因子-BB (I3DGF-BB)是一种伤口愈合蛋白质，已知其对于包括骨(成骨细胞)和肌腱(肌腱细胞)细胞在内的间充质源细胞是趋化性的(细胞迁移)和促有丝分裂的(细胞增殖)。此外，已表明I3DGF-BB增量调节血管内皮生长因子(VEGF)，导致血管生成(血管重建)增加，这是成功再生过程所必需的。跟腱是人体中最厚和最强的肌腱，这允许它支持高载荷。其中跟腱起作用的机械载荷环境使之易于破裂。跟腱破裂可作为各种因素的结果而发生，然而破裂常常与退行性病变有关。(Mafulli N, Wong J, Almekinders L. Types and epidemiologyof tendinopathy (腱病的类型和流行病学)· Clinics in Sports Medicine.2003; 22:675-692) 0在修复过程后，破裂的跟腱显示I型胶原减少，而III型胶原的量相对增加。这种组成的变化导致交联较少和抗张强度降低。甚至在愈合后，破裂的跟腱由于细胞过多、结构破坏和胶原交联减少而仍旧较弱(Maffulli N，Moller HDj Evans CH.Tendon Healing: Can it be Optimized (肌腱愈合可能最优化吗)？ British Journalof Sports Medicine, 2002 ; 36:315-316) 0对于跟腱破裂的最佳治疗存在争论，对保守(非手术)和手术治疗两者有赞成的也有反对的。非手术治疗导致较高的再破裂率且强度降低，但却避免了与手术有关的费用和风险。(Inglis AEj Scott WNj Sculco TP等· Ruptures of the tendo achillis: an objective assessment of surgical andnon-surgical treatment (跟腱破裂手术和非手术治疗的客观评价)· J Bone JointSurg Am. 1976;58:990—993 ;Nistor L. Surgical and Nonsurgical treatment ofAchilles tendon rupture: a prospective randomized trial (足艮鍵破裂的手术和非手术治疗前瞻性随机试验)· J Bone Joint Surg Am 1981 63(3) :394-9 ；Chalmers J.Review Article: Treatment of Achilles tendon ruptures (综述文章跟腱破裂的治疗).Journal of Orthopaedic Surgery 2008 (I) : 97-99)。手术修复伴有手术和麻醉风险；然而它提供增强的强度、较低的再破裂率和较早恢复体育活动。(Nistor L. Surgicaland Nonsurgical treatment of Achilles tendon rupture: a prospective randomizedtrial (跟腱破裂的手术和非手术治疗前瞻性随机试验).J Bone Joint Surg Am 198163(3):394-9 ；Rettig A， Liotta FJj Klootwyk TE， Porter DAj Mieling P. Potential Risk of Rerupture in Primary Achilles Tendon Repair in Athletes Younger than 30years of Age (30岁以下运动员重大跟腱修复中再破裂的潜在风险).Am J of SportsMed 2005:33(1) : 119-123)。不论临床医生对急性跟腱破裂的治疗的偏爱，手术修复在活跃患者群的这些损伤的各种治疗中将继续占有一席之地。与现行的治疗方式相比，强化生物修复过程从而改善肌腱愈合，可能导致更快恢复活动并改进临床结局。有关肌腱愈合的生物学增强已有若干体内和体外研究。参见例如=SeehermanHJj Archambault JMj Rodeo SAj 等.rhBMP-12 accelerates healing of rotatorcuff repairs in a sheep model (rhBMP-12加快绵羊模型的肌腱套修复的愈合)· J Bone Joint Surg Am. 2008; 90 (10) :2206-2219 ；Chan BPj Fu SC，Qin L等.Supplementation-time dependence of growth factors in promoting tendonhealing (促进肌腱愈合中的生长因子的补充-时间依赖性).Clin Orthop Relat Res·2006;448:240-247 ；Uggen JCj Dines J， Uggen CW等· Tendon gene therapy modulatesthe local repair enviroment in the shoulder (肌腱基因治疗调节肩部的局部修复环境)· J Am Osteopath Assoc. 2005; 105 (I) : 20-21 ；Gelberman R，ThomopoulosSj Sakiyama-EIbert S 等.The early effects of sustained platelet-derivedgrowth factor administration on the functional and structural properties ofrepaired intrasynovial flexor tendons: an in vivo biomechanic study at 3 weeksin canines (持续给予血小板衍生生长因子对经修复的滑膜内屈肌腱的功能和结构性质的早期作用犬中三周的体内生物力学).J Hand Surg Am. 2007; 32 (3) :373-379 ；Thomopoulos S， Das Rj Silva MJ 等.Enhanced flexor tendon healing throughcontrolled delivery of PDGF-BB (通过受控递送 PDGF-BB 加快屈肌腱愈合)· J OrthopRes· 2009; 27 (9) : 1209-1215 ;Thomopoulos S，Zaegel M，Das R等· PDGF-BB releasedin tendon repair using a novel delivery system promotes cell proliferation andcollagen remodeling (采用新的递送系统在肌腱修复中释放的F1DGF-BB促进细胞增殖和胶原重建)· J Orthop Res. 2007; 25 (10) : 1358-1368 ；Dines J, Grande D, Dines D.Tissue Engineering and Rotator Cuff Tendon Healing (组织工程学和肌腱套肌腱愈合)· J Shoulder Elbow Surg, 2007 年 9 月 /10 月204S-206S。以足够的剂量并在合适的时程内将rhTOGF-BB递送至修复部位在实现所需临床效果中很重要。若干研究描述了用生物成分(biologies)涂覆的缝线。参见例如RickertM, Jung M, Adiyaman M, Richter ff, Wimank HG. Growth and differentiation factor5coated suture stimulates tendon healing in an Achilles tendon model inrats (生长和分化因子5涂覆的缝线刺激大鼠跟腱模型的肌腱愈合).Growth Factors2001; 19: 115-126 ；ffeiler A, Forster C, Hunt P, Falk R, Jung T, UnterhauserFN, Bergmann V, Schmidmaier G, Haas NP. The Influence of Locally AppliedPlatelet-Derived Growth Factor-BB on Free Tendon Graft Remodeling AfterAnterior Cruciate Ligament Reconstruction (前十字韧带重建后局部施用血小板衍生生长因子-BB对游离肌腱移植物重建的影响).American Journal of Sports Medicine 2004; 32(4):881-891 ；Dines J, Weber L, Razzano P 等· The Effect of GrowthDifferentiation Factor-5-Coated Sutures on Tendon Repair in a Rat Model (大鼠模型中生长分化因子-5涂覆的缝线对肌腱修复的作用).J Shoulder Elbow Surg2007; 16:215S-221S ；Uggen C，Dines J, McGarry M 等· The effect of RecombinantHuman Platelet Derived growth Factor BB coated sutures on Rotator cuff Healingin a Sheep Model (绵羊模型中重组人血小板衍生生长因子BB涂覆的缝线对肌腱套愈合的作用)· Arthroscopy: 2010:26(11) : 1456-1462。所需要的是用于将TOGF递送至肌腱以用于例如修复破裂的肌腱(例如破裂的跟腱)的改良缝线。概述 一方面，本文提供治疗腱病的方法，所述方法包括给予受累部位有效量的包含TOGF和缓冲液的组合物。在一些实施方案中，腱病是腱退变。在一些实施方案中，腱病是腱炎。在一些实施方案中，腱病是腱鞘炎。在一些实施方案中，PDGF选自TOGF-AA、TOGF-BB、TOGF-AB、TOGF-CC和TOGF-DD。在一些实施方案中，TOGF是TOGF-BB。在一些实施方案中，TOGF是重组人(rh) PDGF-BB0在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约75 yg和约7，500 μ g之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约500μ g-约1，000 μ g之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约5，000 μ g至约7，500 μ g之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约450 μ g-约3000 μ g之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约400 μ g-约1000 μ g之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约500 μ g-约900 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约600 μ g-约800 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约650 μ g-约750 yg之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含每剂量约700 μ g的TOGF-BB。在一些实施方案中，组合物的体积为约I. O-约2. O ml/剂量。在一些实施方案中，组合物的体积为约I. 5 ml/剂量。在一些实施方案中，缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液(“PBS”)、乙酸钠、乙酸铵、乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羟乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3_(N_吗啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(“MES”)、N-(2-乙酰氨基)亚氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’ -双(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)_2_氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些实施方案中，缓冲液是乙酸钠。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度介于约10 mM和约100 mM之间。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度约为20禮。在一些实施方案中，组合物的pH介于约4. O和约7. O之间。在一些实施方案中，组合物的pH约为6。在一些实施方案中，通过直接注射至受累部位来给药。在一些实施方案中，受累部位是骨-肌腱连接处。在一些实施方案中，受累部位是肌腱。在一些实施方案中，腱病选自跟腱病、髌腱病、外上髁炎、内上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些实施方案中，腱病是外上髁炎。在一些实施方案中，以单剂量给予组合物。在一些实施方案中，通过单次注射给予组合物。在一些实施方案中，以不止一个剂量给予组合物。在一些实施方案中，通过单次注射一周一次给予组合物达4周。在一些实施方案中，与基线相比，该方法导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约60%。在一些实施方案中，与基线相比，该方法导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约65%。在一些实施方案中，与基线相比，该方法导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约70%。在一些实施方案中，该方法导致肌腱在给药约7天内达到其最终强 度的至少约80%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，该方法导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约85%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，该方法导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约90%，其中在给药后约21天测量最终强度。另一方面，本文提供治疗腱病的方法，所述方法包括给予受累部位有效量的由TOGF和缓冲液组成的组合物。在一些实施方案中，腱病是腱退变。在一些实施方案中，腱病是腱炎。在一些实施方案中，腱病是腱鞘炎。在一些实施方案中，I3DGF选自TOGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB, PDGF-CC 和 PDGF-DD。在一些实施方案中，PDGF 是 PDGF-BB。在一些实施方案中，I3DGF是重组人(rh) PDGF-BB0在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约75 μ g和约7，500 yg之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约500 μ g-约1，000 μ g之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约5，000 μ g至约7，500 μ g之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约450 μ g-约3000 μ g之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约400 μ g-约1000 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约500 μ g-约900 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约600 μ g-约800 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约650 μ g-约750 μ g之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含每剂量约700 yg的TOGF-BB。在一些实施方案中，组合物的体积为约I. O-约2. O ml/剂量。在一些实施方案中，组合物的体积为约I. 5ml/剂量。在一些实施方案中，缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液(“PBS”)、乙酸钠、乙酸铵、乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基乙烷(“廿匕”)、^2-羟乙基哌嗪4’-2_乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_(N_ 吗啉代)乙磺酸(“MES”)、N_(2_ 乙酰氨基)亚氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’-双(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些实施方案中，缓冲液是乙酸钠。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度介于约10 mM和约100 mM之间。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度约为20 mM。在一些实施方案中，组合物的pH介于约4. O和约7. O之间。在一些实施方案中，组合物的pH约为6。在一些实施方案中，通过直接注射至受累部位来给药。在一些实施方案中，受累部位是骨-肌腱连接处。在一些实施方案中，受累部位是肌腱。在一些实施方案中，腱病选自跟腱病、髌腱病、外上髁炎、内上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些实施方案中，腱病是外上髁炎。在一些实施方案中，以单剂量给予组合物。在一些实施方案中，通过单次注射给予组合物。在一些实施方案中，以不止一个剂量给予组合物。在一些实施方案中，通过单次注射一周一次给予组合物达4周。在一些实施方案中，与基线相比，该方法导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约60%。在一些实施方案中，与基线相比，该方法导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约65%。在一些实施方案中，与基线相比，该方法导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约70%。在一些实施方案中该方法导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约80%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施 方案中，该方法导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约85%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，该方法导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约90%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，该方法由给予受累部位有效量的由I3DGF和缓冲液组成的组合物组成。另一方面，本文提供用于治疗腱病的包含有效量的I3DGF和缓冲液的组合物。在一些实施方案中，腱病是腱退变。在一些实施方案中，腱病是腱炎。在一些实施方案中，腱病是腱鞘炎。在一些实施方案中，PDGF 选自 PDGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB, PDGF-CC 和 PDGF-DD。在一些实施方案中，I3DGF是TOGF-BB。在一些实施方案中，I3DGF是重组人(rh) PDGF-BB0在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约75 μ g和约7，500 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约500 μ g-约1,000 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约5，000 yg至约7，500 μ g之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约450 μ g-约3000 μ g之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约400 μ g-约1000 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约500 μ g-约900 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约600 μ g-约800 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含介于每剂量约650 μ g-约750 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量包含每剂量约700 μ g的TOGF-BB。在一些实施方案中，组合物的体积为约I. O-约2. Oml/剂量。在一些实施方案中，组合物的体积为约1.5 ml/剂量。在一些实施方案中，缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液(“PBS”)、乙酸钠、乙酸铵、乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羟乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3_(N_吗啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(“MES”)、N_(2_乙酰氨基)亚氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N, N，-双(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)_2_氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些实施方案中，缓冲液是乙酸钠。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度介于约10 mM和约100 mM之间。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度约为20禮。在一些实施方案中，组合物的pH介于约4. O和约7. O之间。在一些实施方案中，组合物的pH约为6。在一些实施方案中，治疗包括通过直接注射到受累部位来给予组合物。在一些实施方案中，受累部位是骨-肌腱连接处。在一些实施方案中，受累部位是肌腱。在一些实施方案中，腱病选自跟腱病、髌腱病、外上髁炎、内上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些实施方案中，腱病是外上髁炎。在一些实施方案中，以单剂量给予组合物。在一些实施方案中，通过单次注射给予组合物。在一些实施方案中，以不止一个剂量给予组合物。在一些实施方案中，通过单次注射一周一次给予组合物达4周。在一些实施方案中，与基线相比，治疗导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约60%。在一些实施方案中，与基线相比，治疗导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约65%。在一些实施方案中，与基 线相比，治疗导致在给药约7天内肌腱强度提高至少约70%。在一些实施方案中，治疗导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约80%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，治疗导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约85%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，治疗导致肌腱在给药约7天内达到其最终强度的至少约90%，其中在给药后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，组合物由有效量的I3DGF和缓冲液组成。另一方面，本文提供与本文所述方法关联的本文所述I3DGF组合物的用途，除非另有说明或如从具体的上下文来看是显然的。本文所述TOGF组合物还可用于制备用于本文所述方法的药物。附图简述 图I表示rhroGF-BB治疗对肌腱细胞细胞迁移的作用。图2表示rhH)GF-BB治疗对肌腱细胞细胞增殖的作用，通过BrdU掺入测定。图3表示右腿肌腱-跟骨(calcaneous)连接处的注射部位。用使用28. 5G针的胰岛素注射器进行注射。图4表示在处理用于生物力学测试的试验动物后大鼠趾-跟-腓肠肌复合体的代表性图像。图5表示跟骨(C)-跟腱⑴附着部位侧边矢状切面的代表性图像。图6A表示治疗后7天胶原酶诱导的大鼠跟腱损伤模型中，肌腱内施用重组人血小板衍生生长因子同种型BB (“rhroGF-BB”)的总体观察的肌腱生长的剂量反应研究结果。rhPDGF-BB治疗后7天，单次注射中等(10. 2 μ g)或高(102 μ g)剂量的rhH)GF-BB引起肌腱大小显著增加。图6B表示rhH)GF-BB治疗后21天同一研究的结果。治疗后21天，单次注射高(102 μ g)剂量的rhroGF-BB对肌腱大小的作用与仅用乙酸钠缓冲液注射的作用相当。图7是与图6A和图6B相同的数据的不同图示，表示在rhH)GF-BB治疗后7天和21天总体肌腱大小(O =无生长至3 =强烈生长)。图8表示在rhH)GF-BB治疗后7天和21天跟骨附着部的肌腱宽度(μ m 土 SEM)。图9表示在rhH)GF-BB治疗后7天和21天肌腱体处的肌腱宽度(μ m 土 SEM)。图10表示在rhH)GF-BB治疗后7天和21天rhH)GF-BB对细胞增殖速率(细胞计数土 SEM)的作用。
图11表示跟腱的机械性质在rhH)GF-BB治疗后7天和21天的最大破裂载荷(N土 SEM)。
图12表不IV给药后的平均血清rhFOGF-BB浓度-时间值(concentration-timevalue)。
图13表示在IT给药后的平均血清rhH)GF-BB浓度-时间值。
图14A表示在各个时间点从Vicryl缝线释放的rhTOGF-BB的量的体外释放概况。
图14B表示在48小时内体外从4_0 Vicryl缝线累积释放的rhTOGF-BB (平均值土 SEM)。
图14C表示rhroGF-BB的估计体内累积剂量对比缝线涂覆溶液中的起始rhPDGF-BB 浓度。
图14D表示植入的4-0 Vicryl缝线长度。详述
本文引用的所有参考文献，包括而不限于专利、专利申请和科技参考文献，均在此通过引用以其整体结合到本文中。 本发明的组合物和方法出人意料地导致腱病治疗得到改进。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法导致肌腱的强度提高和肌腱强度复原的速度加快。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法导致肌腱的强度提高。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法导致肌腱强度复原的速度加快。例如，随着肌腱在损伤后愈合，肌腱的生物力学强度随着肌腱愈合的过程而提高。给予本发明的组合物可导致更快地提高肌腱强度。虽不希望受理论束缚，但强度的这种更快速的提高可能有助于促进肌腱的愈合；只要承载不进一步加大肌腱损伤，肌腱上的承载一般提高肌腱的愈合反应，因为它一般引起组织重建和重构改进。肌腱强度的较快的初始提高(例如因给予本发明的组合物引起)可导致更快地在肌腱上开始承载的能力，因此进一步提高肌腱愈合反应。虽不希望受理论束缚，可通过细胞增殖和/或胞外基质的产生增加，和/或通过组织的组构改进(例如胞外基质组构的改进)引起肌腱强度的改善。此外，虽不希望受理论束缚，但本发明人出人意料地发现当将本发明的组合物直接给予肌腱(例如通过注射)时，PDGF保持定位于给药部位(例如在注射部位)。例如，如在下面的实施例5中的进一步详述，预料不到的是给予由缓冲液中的TOGF组成的组合物可引起I3DGF保持定位于注射部位。定义
本文所用术语“治疗”是指设计以改变待治疗病症(例如腱病，例如腱退变、腱炎或腱鞘炎)的临床病理的天然进程的临床干预。所需治疗效果包括例如以下的一种或多种减轻受累关节或肢体的疼痛或僵硬、提高受累关节或肢体的活动性和强度、减缓腱病进展的速率、减轻炎症、提高肌腱强度、提高肌腱强度恢复的速率、改善或减轻病症状态和缓解或改善预后。例如，如果与腱病相关的一种或多种症状减轻或消除，则个体被成功“治疗”。本文所用术语“有效量”是指对达到所需治疗或预防效果有效(以剂量计且持续所需的时间)的最低限度的量。可以一次或多次给药来提供有效量。本文提及的值或参数前的“约”也包括(和描述)涉及该值或参数本身的实施方案。本文和随附权利要求书中所用的单数形式包括复数所指物，除非文中另明确说明。例如，提及“roGF同二聚体”是提及一个或多个roGF同二聚体，并包括其本领域技术人员已知的等同物等。要理解的是，本文所述本发明的所有方面和实施方案包括“包含”、“包括”各方面和实施方案及“基本由各方面和实施方案组成”。要理解的是，“基本由所述要求组成的”的方法或组合物只包括规定的步骤或材料和不会在实质上影响所述方法和组合物的基本特征和新的特征的步骤或材料(例如给予受累部位有效量的基本上由roGF和缓冲液组成的组合物或基本上由有效量的缓冲溶液中的roGF组成的组合物)。血小板衍生生长因子及其组合物
本文所用术语“血小板衍生生长因子”或“roGF”是指4种不同的TOGF同种型的任一种，其通过两种不同的受体激活细胞反应。所述同种型包括A (观察到作为同二聚体(命名为PDGF-AA)并作为与B同种型的异二聚体(命名为TOGF-AB)的一部分)、B (观察到作为同二聚体(命名为TOGF-BB)并作为与A同种型的异二聚体(命名为TOGF-AB)的一部分)、C(观察到为同二聚体，其命名为I3DGF-CC)和D (观察到为同二聚体，其命名为TOGF-DD)。在 本文中总的来说，术语“roGF” 一般是指已知的TOGF同二聚体和异二聚体(例如roGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC 和 PDGF-DD)。本文提供治疗个体的腱病的方法和用于这些方法的组合物。总体来说，治疗方法包括将包含F1DGF的组合物给予患有腱病的个体的受累部位。准确地讲,治疗方法包括将包含TOGF和缓冲液的组合物给予腱病的部位。在一些实施方案中，组合物包含I3DGF和缓冲液(例如I3DGF的缓冲溶液)。在一些实施方案中，组合物包含I3DGF和缓冲液。在一些实施方案中，PDGF包括选自 PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC、PDGF-DD 的 PDGF 二聚体及其混合物和衍生物。在一些实施方案中，PDGF 二聚体是同二聚体。在一些实施方案中，PDGF同二聚体选自H)GF-AA、PDGF-BB、PDGF-CC和PDGF-DD。在一些实施方案中，PDGF同二聚体是PDGF-BB。在一些实施方案中，PDGF 二聚体是异二聚体。在一些实施方案中，PDGF异二聚体是TOGF-AB。在一些实施方案中，PDGF可获自天然来源。在一些实施方案中，PDGF可通过重组DNA技术产生。在一些实施方案中，可采用本领域技术人员已知的肽合成技术例如固相肽合成，来产生I3DGF或其片段。当从天然来源获得时，TOGF可来源于生物流体。在一些实施方案中，生物流体可包括与活体有关的任何处理或未处理的流体(包括血液)。生物流体还可包括血液成分，包括血小板浓缩液、单采血液成分提取的血小板、富集血小板的血浆、血浆、血清和新鲜冷冻的血浆。生物流体可包括从血浆分离并重新悬浮于生理液体或缓冲液的血小板。当通过重组DNA技术产生时，可将编码单一单体(例如TOGF B链或A链)的DNA序列插入培养的用于表达的原核细胞或真核细胞中，以便随后产生同二聚体(例如PDGF-BB或TOGF-AA)。在一些实施方案中，PDGF包括I3DGF同二聚体(例如I3DGF-AA、PDGF-BB, PDGF-CC或TOGF-DD)。在一些实施方案中，PDGF异二聚体可如下产生将编码异二聚体的两个单体单元的DNA序列插入培养的原核细胞或真核细胞中，使翻译的单体单元通过细胞加工产生异二聚体(例如H)GF-AB)。在一些实施方案中，I3DGF包含TOGF异二聚体(例如I3DGF-AB)。市售的重组人I3DGF-BB可获自许多商业来源，包括但不限于LeincoTechnologies, Inc. (St. Louis, MO)和 R&D Systems, Inc. (Minneapolis, MN) 0在本文描述的一些实施方案中，PDGF包含重组人TOGF (“rhTOGF”)。在一些实施方案中，重组人 PDGF ( “rhPDGF” )是选自 rhPDGF_AA、rhPDGF-BB、rhPDGF_AB、rhPDGF_CC、rhPDGF-DD的I3DGF 二聚体及其混合物和衍生物。在一些实施方案中，重组人I3DGF是rhPDGF同二聚体。在一些实施方案中，重组人I3DGF同二聚体选自rhH)GF-AA、rhPDGF-BB,rhPDGF-CC和rhTOGF_DD。在一些实施方案中，重组人TOGF同二聚体是rhTOGF_BB。在一些实施方案中，重组人I3DGF是rhTOGF异二聚体。在一些实施方案中，重组人I3DGF异二聚体是 rhPDGF-AB。在一些实施方案中，PDGF-B包含一个或多个下列片段完整人B链的氨基酸1_31、1-32、33-108、33-109和/或1-108。美国专利号5，516，896的
图15中提供人PDGF B链的完整氨基酸序列(氨基酸1-109)。要理解的是，本发明的TOGF-BB组合物可包含完整人TOGF-B (氨基酸1-109)及其片段的组合。可使用I3DGF的其它片段，例如美国专利号5，516，896中公开的片段。在一些实施方案中，PDGF-BB包含全长人TOGF-B (氨基酸1-109)的至少65%。在一些实施方案中，PDGF-BB包含全长人TOGF-B (氨基酸1-109)的至少75%、80%、85%、90%、95% 或 99%。在一些实施方案中，组合物包含选自PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC和PDGF-DD的TOGF 二聚体(例如rhTOGF 二聚体)，且组合物包含以下浓度范围的I3DGF 二聚体约O. 01 mg/ml-约 10. O mg/ml、约O. 05 mg/ml-约 5. O mg/ml、约O. I mg/ml-约 I. O mg/ml 或约 O. I mg/ml-约 2. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约 3. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约 4. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约 O. 4 mg/ml、约 O. I mg/ml-约 5. O mg/ml、约 O. 9 mg/ml-约 I. 5 mg/ml。在一些实施方案中，组合物包含浓度为约3.4 mg/ml的TOGF 二聚体。在一些实施方案中，组合物包含浓度为约1.0 mg/ml的I3DGF 二聚体。在一些实施方案中，组合物包含浓度为约
O.34 mg/ml的I3DGF 二聚体。在一些实施方案中，组合物包含任一以下浓度的I3DGF 二聚体约 O.05 mg/ml、约 O.I mg/ml、约 O.15 mg/ml、约 O.2 mg/ml、约 O.25 mg/ml、约 O.3 mg/ml、约 O.35 mg/ml、约O.4 mg/ml、约O.45 mg/ml、约 O.5 mg/ml、约O.55 mg/ml、约 O.6 mg/ml、约 O.65 mg/ml、约O.7 mg/ml、约O.75 mg/ml、约O.8 mg/ml、约O.85 mg/ml、约 O.9 mg/ml、约 O. 95 mg/ml、约 I. O mg/ml、约 I. 5 mg/ml、约 2. O mg/ml、约 2. 5 mg/ml、约 3. O mg/ml、约3. 5 mg/ml、约4. O mg/ml、约4. 5 mg/ml或约5. O mg/ml。要理解的是,这些浓度只是具体实施方案的实例，PDGF 二聚体的浓度可落入上述任何浓度范围内。在一些实施方案中，PDGF 二聚体(例如rhTOGF 二聚体)是TOGF-BB。在一些实施方案中，组合物包含以下浓度范围的I3DGF-BB :约O. 01 mg/ml-约10. O mg/ml、约O. 05 mg/ml-约 5. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约 I. O mg/ml 或约 O. I mg/ml-约 2. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约 3. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约 4. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约 5. O mg/ml、约 O. I mg/ml-约O. 4 mg/ml、约O. 9 mg/ml-约1.5 mg/ml。在一些实施方案中，组合物包含浓度为约3. 4 mg/ml的TOGF-BB。在一些实施方案中，组合物包含浓度为约I. O mg/ml的TOGF-BB。在一些实施方案中，组合物包含浓度为约O. 34 mg/ml的TOGF-BB。在一些实施方案中，组合物包含任一种下列浓度的 PDGF-BB :约 O. 05 mg/ml、约 O. I mg/ml、约 O. 15 mg/ml、约 O. 2 mg/ml、约O.25 mg/ml、约O.3 mg/ml、约O.35 mg/ml、约O.4 mg/ml、约 O.45 mg/ml、约O.5 mg/ml、约O.55 mg/ml、约 O.6 mg/ml、约O.65 mg/ml、约O.7 mg/ml、约O.75 mg/ml、约O.8 mg/ml、约 O. 85 mg/ml、约 O. 9 mg/ml、约 O. 95 mg/ml、约 I. O mg/ml、约 I. 5 mg/ml、约 2. O mg/ml、约 2. 5 mg/ml、约 3. O mg/ml、约 3. 5 mg/ml、约 4. O mg/ml、约 4. 5 mg/ml 或约 5. O mg/ml。要理解的是，这些浓度只是具体实施方案的实例，且rhH)GF-BB的浓度可落入上述任何浓度范围内。
在一些实施方案中，PDGF选自 PDGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB, PDGF-CC 和 PDGF-DD。不同量的roGF可用于本发明的组合物。可采用的roGF的量包括但不限于以下范围的量约 I Ug-约 50 mg、约 10 μ g-约 25 mg、约 100 μ g-约 10 mg、约 250 μ g-约 5 mg 和约450 Ug-约3 mg。在一些实施方案中，PDGF是TOGF-BB。不同量的I3DGF-BB可用于本发明的组合物。可采用的I3DGF-BB的量包括但不限于以下范围的量约I μ g_约50 mg、约10μ g-约 25 mg、约 100 μ g-约 10 mg、约 250 μ g-约 5 mg 和约 450 μ g-约 3 mg。在本发明的一些实施方案中，可通过采用例如美国专利号6，221，625,5, 747，273和5，290，708中描述的酶联免疫测定法或本领域已知的用于测定TOGF浓度的任何其它测定法，来测定 PDGF (例如 rhPDGF)(包括 PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC 和 PDGF-DD)的浓度。当提供于本文中时，rhTOGF的摩尔浓度根据TOGF同二聚体的分子量(例如PDGF-BB, MW 约 25 kDa)确定。在本发明的一些实施方案中，PDGF (例如rhTOGF)可以是高度纯化的形式。在加到本发明的溶液中之前，本文使用的纯化I3DGF包括具有大于约95% (重量)TOGF的组合物。溶液可采用任何药学上可接受的缓冲剂或稀释剂制备。在一些实施方案中，PDGF可以 是基本纯的。在加入本发明的溶液中之前，本文使用的基本纯化的I3DGF包括具有约5%-约95% (重量)TOGF的组合物。在一个实施方案中，在加入本发明的溶液中之前，基本纯化的I3DGF包括具有约65%-约95% (重量)roGF的组合物。在一些实施方案中，在加入本发明的溶液中之前，基本纯化的I3DGF包括具有约70%-约95%、约75%-约95%、约80%-约95%、约85%-约95%或约90%-约95% (重量)PDGF的组合物。可将纯化的I3DGF和基本纯化的PDGF加入组合物中。在又一个实施方案中，I3DGF可以是部分纯化的。在富集血小板的血浆、新鲜冷冻的血浆或需要收集和分离以产生roGF的任何其它血液产品的情况下，本文使用的部分纯化的roGF包括具有roGF的组合物。本发明的实施方案预期，本文提供的任何roGF同种型(包括同二聚体和异二聚体)可以是纯化的或部分纯化的。本发明的包含roGF混合物的组合物可以部分纯化的比例包含roGF同种型或TOGF片段。在一些实施方案中，可按照美国申请顺序号11/159，533 (美国专利公布号2006/0084602 Al)中披露的方法制备部分纯化的和纯化的H)GF。在本文所述的任何实施方案中，高度纯化的或部分纯化的I3DGF选自TOGF-AA、PDGF-BB,PDGF-AB,PDGF-CC和TOGF-DD。在本文所述的任何实施方案中，高度纯化的或部分纯化的 I3DGF 是 I3DGF-BB。缓冲液
在一些实施方案中，组合物包含roGF和缓冲液，优选药学上可接受的缓冲液。适用于本发明的roGF溶液的缓冲液可包括但不限于碳酸盐、磷酸盐(例如磷酸缓冲盐溶液)、盐水、组氨酸、乙酸盐(例如乙酸钠或乙酸铵)、酸性缓冲液(例如乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠和HCl)和有机缓冲液例如赖氨酸、TriS缓冲液(例如三(羟甲基)氨基乙烷)、N-2-羟乙基哌嗪-N’ -2-乙磺酸(HEPES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)、2_(N_吗啉代)乙磺酸(MES)、N-(2-乙酰氨基)亚氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’-双(2-乙磺酸)(PIPES)和N-(2-乙酰氨基)_2_氨基乙烧磺酸(ACES)。可根据与TOGF的生物相容性及缓冲液阻止不良蛋白质修饰的能力来选择缓冲液。另外，可根据与宿主组织的相容性和药学上的可接受性来选择缓冲液。在一些实施方案中，PDGF组合物包含乙酸钠缓冲液中的H)GF。在一些实施方案中，乙酸钠缓冲液中的I3DGF选自PDGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB, PDGF-CC和PDGF-DD。在一些实施方案中，乙酸钠缓冲液中的 PDGF 是 rhPDGF-BB。可以不同的摩尔浓度使用缓冲液，例如约O. I mM-约100 mM、约I mM_约100 mM、约 10 mM-约 100 mM、约 I mM-约 50 mM、约 5 mM-约 40 mM、约 10 mM-约 30 mM 或约 15mM-约25 mM或这些范围内的任何摩尔浓度。在一些实施方案中，以约20 mM的摩尔浓度使用乙酸盐缓冲液。可以不同的浓度使用缓冲液，例如约O. 01 mg/ml-约10 mg/ml、0. 05mg/ml-约 5 mg/ml、约 O. 5 mg/ml-约 5 mg/ml>O. I mg/ml-约 I mg/ml 和约 O. 5 mg/ml-约I mg/ml或这些范围内的任何浓度。在另一个实施方案中，包含I3DGF的溶液可通过将冻干的I3DGF溶于水中制备，其中在溶解前，将roGF从合适的缓冲液中冻干。
按照本发明的一些实施方案，包含I3DGF和缓冲液的组合物的pH的范围可为约3. O-约8. O或约4. O-约7. O。在一些实施方案中，包含I3DGF和缓冲液的组合物的pH的范围为约5. O-约8. 0，更优选约5. 5-约7. 0，最优选约5. 5-约6. 5或这些范围内的任何值。在本文描述的一些实施方案中，PDGF组合物的pH介于约4. O和约7. O之间。在本文描述的一些实施方案中，I3DGF组合物的pH介于约5. O和约7. O之间。在本文描述的一些实施方案中，PDGF组合物的pH为约4. O、约5. O、约6. O或约7. O。在一些实施方案中，包含I3DGF和缓冲液的组合物的PH可与I3DGF或任何其它所需要的生物活性剂的持久稳定性和功效相容。TOGF —般在酸性环境中更稳定。因此，按照一些实施方案，本文提供I3DGF组合物的酸性贮存制剂。按照一些实施方案，包含I3DGF和缓冲液的组合物的pH优选为约3. O-约7. 0，更优选约4. O-约6. 5。然而，在具有中性pH范围的溶液中可使TOGF的生物活性最佳。因此，在一些实施方案中，本文提供包含I3DGF和缓冲液的组合物的中性pH制剂。按照该实施方案，组合物的PH优选为约5. O-约8. 0，更优选约5. 5-约7. 0，最优选约5. 5-约6. 5。在一些实施方案中，可通过本文所述缓冲液控制包含I3DGF的溶液的pH。不同的蛋白质显示不同的PH范围，在此范围内蛋白质是稳定的。蛋白质稳定性主要受蛋白质的等电点和电荷影响。PH范围可影响蛋白质的构象结构以及蛋白质对蛋白水解降解、水解、氧化和可引起蛋白质结构和/或生物活性改变的其它过程的敏感性。在一些实施方案中，本文提供的I3DGF组合物包含选自TOGF-AA、PDGF-BB,PDGF-CC、PDGF-DD和PDGF-AB的PDGF和选自PBS、乙酸钠、乙酸铵、乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基乙烷、HEPES, MOPS、MES、ADA、PIPES和ACES的缓冲液。在一些实施方案中，本文提供的I3DGF组合物包含rhH)GF-BB和选自PBS、乙酸钠、乙酸铵、乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基乙烷、HEPES, MOPS、MES、ADA、PIPES和ACES的缓冲液。在一些实施方案中，I3DGF组合物包含rhH)GF-BB和PBS。在一些实施方案中，I3DGF组合物包含rhH)GF-BB和乙酸钠。在一些实施方案中，I3DGF组合物包含rhPDGF-BB和乙酸铵。在一些实施方案中，I3DGF组合物包含rhH)GF-BB和乙酸。在一些实施方案中，I3DGF组合物包含rhH)GF-BB和柠檬酸。在一些实施方案中，I3DGF组合物包含rhH)GF-BB和柠檬酸钠。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhH)GF-BB和三(羟甲基)氨基乙烷。在一些实施方案中，rhPDGF组合物包含I3DGF-BB和HEPES。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhH)GF-BB和MOPS。在一些实施方案中，roGF组合物包含rhroGF-BB和MES。在一些实施方案中，I3DGF组合物包含rhH)GF-BB和ADA。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhH)GF-BB和PIPES。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhH)GF-BB和ACES。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度介于I mM和1000 mM之间。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度介于10 mM和1000 mM之间。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度介于100 mM和1000 mM之间。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度介于5 mM和500 mM之间。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度介于50 mM和500 mM之间。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度介于10 mM和100 mM之间。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度介于20 mM和200 mM之间。在本文描述的一些实施方案中，缓冲液的浓度为10 mM、20 mM、30 mM、40 mM、50 mM、60 mM、70 mM、80mM、90mM 或 100 mM。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhH)GF-AA和约pH=6. O的20 mM乙酸钠。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhPDGF-AB和约pH=6. O的20 mM乙酸钠。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhH)GF-BB和约pH=6. O的20 mM乙酸钠。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhH)GF-CC和约pH=6. O的20 mM乙酸钠。在一些实施方案中，PDGF组合物包含rhPDGF-DD和约pH=6. O的20 mM乙酸钠。剂量和给药方案
可根据肌腱治疗面积的相对大小，由在大鼠肌腱模型中鉴定的roGF的有效剂量推算用于其它个体(例如人)的有效量。例如，人跟腱的治疗面积约为大鼠跟腱治疗面积的69倍，因此用于人患者的roGF的有效量或剂量可约为在大鼠肌腱模型中确定的roGF的有效量或剂量的69倍。通过给予本文提供的roGF组合物递送的示例性有效量或剂量包括但不限于约450 μ g-约3，000 μ g/剂量、约I μ g_约10，000 μ g/剂量，包括例如以下的任一种约Iμ g-约 7，500 μ g/剂量、约 I μ g-约 5，000 Ug/剂量、约 I μ g-约 2，500 yg/剂量、约
Iμ g-约1,000 μ g/剂量、约I μ g-约500 Ug/剂量、约I μ g_约250 Ug/剂量、约Iμ g_ 约 100 μ g/剂量、约 10 μ g-约 10，000 Ug/剂量、约 10 μ g_ 约 7，500 μ g/剂量、约 10 μ g-约 5，000 μ g/剂量、约 10 μ g-约 2，500 μ g/剂量、约 10 μ g-约 1,000 μ g/剂量、约10 μ g-约500 μ g/剂量、约10 μ g-约250 μ g/剂量、约10 μ g_约100 μ g/剂量、约 25 μ g-约 10，000 μ g/剂量、约 25 μ g-约 7，500 μ/剂量、约 25 μ g-约 5，000μ g/剂量、约 25 μ g-约 2，500 μ g/剂量、约 25 μ g-约 1，000 μ g/剂量、约 25 yg-约500 μ g/剂量、约25 μ g-约250 μ g/剂量、约25 μ g-约100 μ g/剂量、约50 Ug-约
10.000μ g/剂量、约 50 μ g-约 7，500 Ug/剂量、约 50 μ g-约 5，000 Ug/剂量、约 50μ g-约 2，500 μ g/剂量、约 50 μ g-约 1,000 μ g/剂量、约 50 μ g_ 约 500 Ug/剂量、约50 μ g-约250 μ g/剂量、约50 μ g-约100 μ g/剂量、约50 μ g-约100 Ug/剂量、约75 μ g-约 10，000 μ g/剂量、约 75 μ g-约 7，500 Ug/剂量、约 75 μ g-约 5，000 μ g/剂量、约 75 μ g-约 2，500 μ g/剂量、约 75 μ g-约 1，000 μ g/剂量、约 75 μ g-约 500μ g/剂量、约 75 μ g-约 250 μ g/剂量、约 75 μ g-约 125 μ g/剂量、约 100 μ g-约 200μ g/剂量、约200 μ g-约300 μ g/剂量、约300 μ g-约500 μ g/剂量、约500 yg-约
1.000μ g/剂量、约 1,000 μ g-约 2，500 yg/剂量、约 1,000 μ g-约 5，000 μ g/剂量、约 1,000 μ g-约 7，500 μ g/剂量、约 1,000 μ g-约 10，000 yg/剂量、约 2，500 μ g-约
5,000μ g/剂量、约 2，500 μ g-约 7，500 Ug/剂量、约 5，000 μ g-约 7，500 μ g/剂量、约 10，000 μ g-约 50，000 μ g/剂量、约 50,000 μ g-约 100，000 μ g/剂量、约 100，000μ g-约 200，000 μ g/剂量、约 200,000 μ g-约 300，000 μ g/剂量、约 300，000 μ g-约400, 000 μ g/剂量或约 400，000 μ g-约 500，000 μ g/剂量。在一些实施方案中，以约400 μ g-约1000 μ g/剂量、约500 μ g-约900 μ g/剂量、约600 μ g-约800 μ g、约650 μ g-约750 μ g/剂量、约700 Ug/剂量给予TOGF。在一些实施方案中，以50 μ LUOO μ LU50 μ L、200 μ L、250 μ L、300 μ L、 350μ L、400 μ L、450 μ L、500 μ L、550 μ L、600 μ L、650 μ L、700 μ L、750 μ L、800 μ L、850 uL,900 yL、950 μ LU000 μ L或更大的体积给予本文提供的剂量。在一些实施方案中，以 100 μ L>200 μ L、300 μ L、400 μ L、500 μ L、600 μ L、700 μ L、800 μ L、900 μ L、1000 μ LUlOO μ LU200 μ LU300 μ LU400 μ LU500 μ LU600 μ LU700 μ LU800uLU900 uL,2000 μ L或更大的体积给予本文提供的剂量。在一些实施方案中，以约1000μ L-约 2000 μ L、约 1250-约 1750 μ L、约 1300 μ L-约 1600 μ L 或约 1500 μ L 的体积给予本文提供的剂量。本文提供的TOGF组合物可以单次日剂量给予，或者总日剂量可以分开的剂量给予，例如每日2次、3次或4次。在一些实施方案中，本文提供的I3DGF组合物的单次日剂量可一天一次给予达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天或更多天。PDGF组合物还可以低于每日的频率给予，例如一周6次、一周5次、一周4次、一周3次、一周2次、一周I次、每两周一次、每3周一次、每月一次、每两月一次、每3月一次、每4月一次、每5月一次或每6月一次。在一些实施方案中，在一定时间内间隔给予I3DGF组合物。在一些实施方案中，一周一次给予I3DGF组合物达1、2、3、4、5、6或更多个月。在一些实施方案中，一月两次给予I3DGF组合物达1、2、3、4、5、6或更多个月。在一些实施方案中，每月一次给予TOGF组合物达1、2、3、4、5、6或更多个月。治疗腱病的方法
本文所用术语“腱病”是指慢性肌腱损伤，例如腱退变、腱炎和腱鞘炎。示例性腱病包括但不限于跟腱病、髌腱病、外上髁炎即“网球肘”、内上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。本文所用术语“腱退变”是指肌腱的非炎性损伤，其特征在于因过度使用引起的通常呈在肌腱中和肌腱周围的组织微撕裂形式的肌腱的肌腱内变性，导致损伤区域周围肌腱修复细胞数目增加。肌腱的变性由肌腱的胶原纤维、细胞和血管成分的损伤或结构破坏引起，其可降低肌腱的抗张强度，如果不治疗的话，可导致肌腱破裂。在一些情况下，腱退变伴发肌腱的局灶性坏死或钙化。本文所用术语“腱炎”是指肌腱的炎性损伤，其特征在于像在腱退变观察到的变性，但还伴有肌腱炎症、血管破坏和炎性修复反应。腱炎常常与成纤维细胞和成肌纤维细胞增殖以及出血和组织化肉芽组织有关。一般腱炎通过所涉及的身体部位来命名，例如跟腱炎(影响跟腱)或髌腱炎(亦称为“跳跃膝”，影响髌腱)，但是有某些例外，例如外上髁炎(亦称为“网球肘”，影响桡侧腕短伸肌腱)。可通过本发明的方法治疗的腱病包括人体或哺乳动物体中任何肌腱的腱病。在一些实施方案中，腱病是腱退变。在一些实施方案中，腱病是腱炎。在一些实施方案中，腱病是腱鞘炎。可通过本发明的方法治疗的肌腱包括人体或哺乳动物体的任何肌腱。肌腱的非限制性实例包括髌腱、胫骨前肌腱、跟腱、胭绳肌腱、半腱肌腱、股薄肌腱、外展肌腱、内收肌腱、冈上肌腱、R下肌腱、肩胛下肌腱、小圆肌腱、屈肌腱、股直肌腱、胫骨后肌腱和股四头肌膜。在一些实施方案中，肌腱是足或踝的肌腱。在一些实施方案中，足或踝的肌腱选自蹲长伸肌、蹲长屈肌、趾长伸肌、趾短伸肌、腓骨长肌、腓骨短肌、跗短屈肌、趾长屈肌、胫骨后肌、跟腱和跖腱膜。 在一些实施方案中，肌腱是腿部肌腱。在一些实施方案中，腿部肌腱选自髌腱、胫骨前肌腱、跟腱、胭绳肌腱、半腱肌腱、股薄肌腱、外展肌腱和内收肌腱。在一些实施方案中，肌腱选自屈肌腱、股直肌腱、胫骨后肌腱和股四头肌腱。在一些实施方案中，肌腱是肩部肌腱。在一些实施方案中，肩部肌腱选自R上肌 腱、冈下肌腱、肩胛下肌腱和小圆肌腱(肌腱套复合体)。在一些实施方案中，肌腱是肘部肌腱。在一些实施方案中，肘部肌腱选自二头肌腱、三头肌腱、桡侧腕短伸肌腱、伸肌总腱、指伸肌腱、小指伸肌腱、尺侧腕伸肌腱、旋后肌腱、屈肌总腱、旋前圆肌腱、桡侧腕屈肌腱、掌长肌腱、尺侧腕屈肌腱和屈指浅肌腱。在一些实施方案中，肌腱是腕部肌腱。在一些实施方案中，腕部肌腱选自二头肌腱、三头肌腱、桡侧腕短伸肌腱、伸肌腱总腱、指伸肌腱、小指伸肌腱、尺侧腕伸肌腱、旋后肌腱、屈肌腱总腱、旋前圆肌腱、桡侧腕屈肌腱、掌长肌腱、尺侧腕屈肌腱、屈指浅肌腱、拇短屈肌腱、拇长屈肌腱、拇短展肌腱、拇长展肌腱、指深屈肌腱、指浅屈肌腱、拇短伸肌腱和拇长伸肌腱。在一些实施方案中，肌腱是手部肌腱。在一些实施方案中，手部肌腱选自拇短屈肌腱、拇长屈肌腱、拇短展肌腱、拇长展肌腱、指深屈肌腱、指浅屈肌腱、拇短伸肌腱和拇长伸肌腱。在一些实施方案中，腱病是肌腱套腱病。在一些实施方案中，肌腱套腱病选自冈上肌腱病、R下肌腱病、肩胛下肌腱病和小圆肌腱病。在一些实施方案中，腱病是在肱骨外髁附着部的伸肌肌群起点、主要在桡侧腕短伸肌(ECRB)肌腱中的外上髁炎即“网球肘”。在一些实施方案中，患有外上髁炎的受试者患有相关疼痛(例如持续至少约6个月)，如经视觉模拟评分法(Visual Analog Score, VAS)报告为=50的疼痛所证明。在一些实施方案中，患有外上媒炎的受试者患有相关疼痛例如持续至少约6个月，该疼痛随外上髁上的压力和/或腕伸展受阻而加重。在一些实施方案中，腱病是位于旋前圆肌和肱骨内髁的桡侧腕屈肌起点之间界面上的内上髁炎即“高尔夫球员肘”。在一些实施方案中,腱病是館腱病。在一些实施方案中，腱病是跟腱病。在一些实施方案中，腱病是足底筋膜炎。在一些实施方案中，腱病是足底内侧筋膜炎。在一些实施方案中，腱病是足底外侧筋膜炎。另一方面，本文提供治疗腱病的方法，所述方法包括将有效量的包含I3DGF和缓冲液的组合物给予受累部位。在一些实施方案中，I3DGF选自roGF-AA、PDGF-BB, PDGF-AB,PDGF-CC和TOGF-DD。在一些实施方案中，I3DGF是TOGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约75 μ g和约7，500 yg之间的H)GF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约500 μ g-约1，000 μ g之间的roGF-BB。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约450 μ g至约3，000 μ g之间的H)GF。在一些实施方案中，有效量的组合物包含介于每剂量约5，000 μ g至约7，500 μ g之间的TOGF-BB。在一些实施方案中，缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液(“PBS”)、乙酸钠、乙酸铵、乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基乙烷(“廿匕”)、^2-羟乙基哌嗪4’-2_乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_(N_ 吗啉代)乙磺酸(“MES”)、N_(2_ 乙酰氨基)亚氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’ -双(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2_氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些实施方案中，缓冲液是乙酸钠。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度介于约10 mM和约100 mM之间。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度约为20禮。在一些实施方案中，乙酸钠的pH介于约4. O和约7. O之间。在一些实施方案中，乙酸钠处于约pH 6。在一些实施方案中，通过直接注射至受累部位来给药。在一些实施方案中，采用在有或没有超声引导的“密击技术(peppering technique) ”完成直接注射。“密击技术”是 在把针插入触痛区域后，在不使针露出皮肤的情况下，通过抽拉、重新定向针并将针重新插入来进行多次少量注射的注射方法。在一些实施方案中，受累部位是骨-肌腱连接处。在一些实施方案中，受累部位是肌腱。在一些实施方案中，腱病选自跟腱病、髌腱病、外上髁炎、内上髁炎、足底筋膜炎和肌腱套腱病。在一些实施方案中，通过单次注射给予组合物。在一些实施方案中，通过单次注射一周一次给予组合物达4周。在一些实施方案中，腱病是腱退变。在一些实施方案中，腱退变选自跗长伸肌腱退变、K长屈肌腱退变、趾长伸肌腱退变、趾短伸肌腱退变、腓骨长肌腱退变、腓骨短肌腱退变、歸短屈肌腱退变、趾长屈肌腱退变、胫骨后肌腱退变、跟腱腱退变和跖腱膜腱退变。在一些实施方案中，腱退变选自髌骨腱退变、胫腓前腱退变、胭绳肌腱退变、半腱肌腱退变、股薄肌腱退变、展肌腱退变和收肌腱退变。在一些实施方案中，腱退变选自屈肌腱退变、股直肌腱退变、胫骨后肌腱退变和股四头肌腱退变。在一些实施方案中，腱退变选自R上肌腱退变、R下肌腱退变、肩胛下肌腱退变和小圆肌腱退变。在一些实施方案中，腱退变选自二头肌腱退变、三头肌腱退变、桡侧腕短伸肌腱退变、伸肌总腱腱退变、指伸肌腱退变、小指伸肌腱退变、尺侧腕伸肌腱退变、旋后肌腱退变、屈肌总腱腱退变、旋前圆肌腱退变、桡侧腕屈肌腱退变、掌长肌腱退变、尺侧腕屈肌腱退变和屈指浅肌腱退变。在一些实施方案中，腱退变选自二头肌腱退变、三头肌腱退变、桡侧腕短伸肌腱退变、伸肌总腱腱退变、指伸肌腱退变、小指伸肌腱退变、尺侧腕伸肌腱退变、旋后肌腱退变、屈肌总腱腱退变、旋前圆肌腱退变、桡侧腕屈肌腱退变、掌长肌腱退变、尺侧腕屈肌腱退变、屈指浅肌腱退变、拇短屈肌腱退变、拇长屈肌腱退变、拇短展肌腱退变、拇长展肌腱退变、指深屈肌腱退变、指浅屈肌腱退变、拇短伸肌腱退变和拇长伸肌腱退变。在一些实施方案中，腱退变选自拇短屈肌腱退变、拇长屈肌腱退变、拇短展肌腱退变、拇长展肌腱退变、指深屈肌腱退变、指浅屈肌腱退变、拇短伸肌腱退变和拇长伸肌腱退变。在一些实施方案中，腱病是腱炎。在一些实施方案中，腱炎选自_长伸肌腱炎、长屈肌腱炎、趾长伸肌腱炎、趾短伸肌腱炎、腓骨长肌腱炎、腓骨短肌腱炎、Pf短屈肌腱炎、趾长屈肌腱炎、胫骨后肌腱炎、跟腱腱炎和跖腱膜腱炎。在一些实施方案中，腱炎选自髌腱炎、胫腓前腱炎、胭绳肌腱腱炎、半腱肌腱炎、股薄肌腱炎、展肌腱炎和收肌腱炎。在一些实施方案中，腱炎选自屈肌腱炎、股直肌腱炎、胫骨后肌腱炎和股四头肌腱炎。在一些实施方案中，腱炎选自网上肌腱炎、网下肌腱炎、肩胛下肌腱炎和小圆肌腱炎。在一些实施方案中，腱炎选自二头肌腱炎、三头肌腱炎、桡侧腕短伸肌腱炎、伸肌总腱腱炎、指伸肌腱炎、小指伸肌腱炎、尺侧腕伸肌腱炎、旋后肌腱炎、屈肌总腱炎、旋前圆肌腱炎、桡侧腕屈肌腱炎、掌长肌腱炎、尺侧腕屈肌腱炎和屈指浅肌腱炎。在一些实施方案中，腱炎选自二头肌腱炎、三头肌腱炎、桡侧腕短伸肌腱炎、伸肌总腱腱炎、指伸肌腱炎、小指伸肌腱炎、尺侧腕伸肌腱炎、旋后肌腱炎、屈肌总腱炎、旋前圆肌腱炎、桡侧腕屈肌腱炎、掌长肌腱炎、尺侧腕屈肌腱炎、屈指浅肌腱炎、拇短屈肌腱炎、拇长屈肌腱炎、拇短展肌腱炎、拇长展肌腱炎、指深屈肌腱炎、指浅屈肌腱炎、拇短伸肌腱炎和拇长伸肌腱炎。在一些实施方案中，腱炎选自拇短屈肌腱炎、拇长屈肌腱炎、拇短展肌腱炎、拇长展肌腱炎、指深屈肌腱炎、指浅屈肌腱炎、拇短伸肌腱炎和拇长伸肌腱炎。本发明的方法可导致以下一种或多种的改善减轻受累关节或肢体的疼痛、减少 受累关节或肢体的僵硬、增加受累关节或肢体的活动性、提高受累关节或肢体的强度、降低腱病进展的速率、减轻炎症、提高肌腱强度或提高肌腱强度恢复的速率。用于测量治疗的疗效的各种方法包括但不限于臂肩手失能评分(Arm, Shoulder and Hand Score, DASH)、视觉模拟评分法(VAS)和握力测试。在一些实施方案中，治疗导致DASH的治疗前评分降低至少25%。在一些实施方案中，治疗导致VAS的治疗前评分降低至少25%。在一些实施方案中，治疗导致随施加压力和/或关节屈曲的疼痛减轻。在一些实施方案中，治疗导致随施加压力和/或关节屈曲的疼痛减轻且关节活动性增加。在一些实施方案中，治疗不会导致任何异常的骨生长。在一些实施方案中，治疗不会导致任何异常的肌腱生长。在一些实施方案中，治疗是安全的，且为受试者所耐受。在一些实施方案中，通过由以下的一种或多种方法鉴定的不良事件或异常情况的缺乏来评价组合物的安全性和耐受性身体检查、生命体征测定、实验室测试、X射线和/或MRI成像。在一些实施方案中，治疗导致肌腱的强度提高。在一些实施方案中，治疗导致更快速的肌腱强度恢复速率。在一些实施方案中，与基线相比，治疗导致在给予本发明的组合物约 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或 21 天内，肌腱强度提高至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%。在一些实施方案中，与基线相比，治疗导致在给予本发明的组合物约7天内肌腱强度提高至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%。在一些实施方案中，与基线相比，治疗导致在给予本发明的组合物约7天内肌腱强度提高至少约60%。在一些实施方案中，与基线相比，治疗导致在给予本发明的组合物约7天内肌腱强度提高至少约65%。在一些实施方案中，与基线相比，治疗导致在给予本发明的组合物约7天内肌腱强度提高至少约70%。在一些实施方案中，在给予本发明的组合物约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天内，肌腱达到其最终强度的至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%，其中在治疗后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，肌腱在给予本发明的组合物约7天内达到其最终强度的至少约80%，其中在治疗后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，肌腱在给予本发明的组合物约7天内达到其最终强度的至少约85%，其中在治疗后约21天测量最终强度。在一些实施方案中，肌腱在给予本发明的组合物约7天内达到其最终强度的至少约90%，其中在治疗后约21天测量最终强度。可在例如动物模型中，例如在大鼠胶原酶模型中测量肌腱强度，其中肌腱强度为测定的破裂载荷。实施例3中更详细地描述了测量肌腱强度的实例。药盒
另一方面，本文提供包括装有包含I3DGF和缓冲液的组合物的药盒。在一些实施方案中，药盒包括装有冻干I3DGF的第一容器和装有用于溶解冻干I3DGF的缓冲液的第二容器。在一些实施方案中，药盒包括装有冻干I3DGF和缓冲液的第一容器，和装有用于溶解冻干I3DGF和缓冲液的水的第二容器。在一些实施方案中，缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液(“PBS”)、乙酸钠、乙酸铵、乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基乙烷(“tris”)、N-2-羟乙基 哌嗪-N’ -2-乙磺酸(“HEPES”)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(“MOPS”)、2_(N-吗啉代)乙磺酸(“MES”)、N-(2-乙酰氨基)亚氨基二乙酸(“ADA”)、哌嗪-N，N’ -双(2-乙磺酸)(“PIPES”)和N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸(“ACES”)。在一些实施方案中，缓冲液是乙酸钠。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度介于约10 mM和约100 mM之间。在一些实施方案中，乙酸钠的浓度约为20 mM。在一些实