专利名称：胡黄连总苷提取物在制备用于预防和治疗脂肪肝药物中的用途的制作方法肝脏是脂肪代谢的重要器官。正常情况下，脂肪重量占肝脏总重量的3% 5%， 正常人每IOOg肝湿重含4 5g脂类，其中磷脂占50 %以上，甘油三酯占20 %，游离脂肪酸占20%，胆固醇约7%，其余为胆固醇脂等。当肝细胞内脂质蓄积超过肝湿重的5%，或组织学上每单位面积可见1/3以上肝实质脂肪化时即称为脂肪肝。脂肪肝的发病机制至今尚未完全明确，一般认为肝细胞合成甘油三酯及分泌低密度脂蛋白之间的不平衡是形成脂肪肝的主要原因。脂肪肝是破坏肝功能的头号杀手，至今仍为欧美等发达国家肝病致残和死亡的首要病因，也已成为第一大肝病，患者多达约一亿两千万，其作为一种世界性的常见病、多发病，严重危害人类的身心健康和生活质量，并影响人们发挥工作效率。临床根据发病的缓急程度将脂肪肝分为急性和慢性两大类。急性脂肪肝见于药物中毒、妊娠晚期、Reye综合症等，其临床表现及预后类似于急性或亚急性重症病毒性肝炎， 若治疗及时一般不留后遗症；慢性脂肪肝的形成一般与酒精和代谢综合征(糖尿病、高脂血症和肥胖等)有关，因此又可分为酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝。既往认为脂肪肝仅为良性病变，进展缓慢或不进展。但近年的研究发现，酒精性脂肪肝患者中脂肪性肝炎的发病率为约40%，脂肪性肝硬化的发病率达50%以上；另外， 20%的非酒精性脂肪肝发展为脂肪性肝纤维化，进而恶化为肝硬化，其中30% 40%的患者死于这些肝相关性疾病，部分发生亚急性肝衰竭和肝细胞肝癌。目前，国内外尚无专门治疗脂肪肝的特效药物，临床上多采用降脂类药物与保肝类药物联合用药。这些药物多是针对脂肪肝的某个环节或部分的发病机理起作用，缺乏治疗脂肪肝的特异性。有些调血脂药虽然对脂肪肝有短期疗效，但影响肝功能，使血脂更集中于肝脏进行代谢，增加肝脏负担，长期服用具有潜在的肝毒性，反而会加重脂肪肝的病情。 鉴于缺乏治疗脂肪肝的特效药物，因此从中药中寻找新的脂肪肝治疗药物已经成为近年来中药新药研究的热点之一。中药胡黄连是玄参科(Scrophulariaceae)胡黄连(Picrorhiza scrophulariiflora Pennell)的干燥根茎。对胡黄连的化学研究发现，胡黄连主要含有环烯醚萜类、酚苷类、有机芳香酸类成分。药理和临床研究表明，胡黄连以环烯醚萜类为主的苷类成分具有明确的保肝、抗肝损伤作用。近年的研究还表明，胡黄连苷II可通过改善肝功能、抑制脂质过氧化反应、下调TGF-β 1和I型胶原mRNA以及蛋白表达而抑制肝纤维化的形成。
因此，本发明的目的在于基于中药胡黄连总苷提取物来提供一种有效治疗脂肪肝的新型药物。用于实现上述目的的技术方案如下一种胡黄连总苷提取物在制备用于预防和/或治疗脂肪肝或其相关疾病药物中的用途，其中所述胡黄连总苷提取物的制备方法包括以下步骤(1)以浓度为0 95% (体积/体积)WC1-C5脂肪醇水溶液提取胡黄连，除去提取液中Wc1-C5脂肪醇后过滤；(2)滤液通过大孔吸附树脂并以浓度为0 30% (体积/体积)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脱，洗脱液弃去；(3)以浓度为40 100% (体积/体积)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脱，除去洗脱液中的溶剂。在上述用途中，优选地，步骤(1)中采用WC1-C5脂肪醇水溶液的浓度为0 30% (体积/体积)。优选地，步骤O)中采用WC1-C5脂肪醇水溶液为0 20% (体积/体积)。优选地，步骤(3)中采用的C1-C5脂肪醇水溶液为40 60 % (体积/体积)。在上述用途中，大孔吸附树脂可以选自苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯型极性或非极性大孔吸附树脂中的一种或多种。在上述用途中，提取的方法可以选自渗漉、回流和浸泡中的一种或多种，优选为渗滴。在上述用途中，按胡黄连总苷提取物的总重量计，所述胡黄连总苷提取物中，胡黄连总苷的含量不低于60% (重量/重量)，胡黄连苷II的含量不低于21% (重量/重量)， 胡黄连苷I的含量不低于13% (重量/重量)。优选地，所述胡黄连总苷提取物还包含胡黄连苷III、胡黄连苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-异阿魏酰梓醇。在上述用途中，药物可以为口服剂型或注射剂型。口服剂型可以为片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂或口服液。注射剂型可以为水针剂或粉针剂。在上述用途中，脂肪肝可以为酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪肝；也可以为急性脂肪肝或慢性脂肪肝。脂肪肝的相关疾病具体为脂肪肝引起的肝纤维化。本发明经研究发现经本发明的提取方法制得的胡黄连总苷提取物中胡黄连总苷含量高达60% (重量/重量)以上，其中富含环烯醚萜类等有效成分。采用急、慢性脂肪肝动物模型的研究表明，该胡黄连总苷提取物具有清肝脂、降血脂、降低转氨酶、清除自由基、 抗脂质过氧化、增强免疫、保护肝脏的作用。因此，以本发明的提取方法制备的胡黄连总苷提取物可以制成药物，用于预防和/或治疗治疗酒精性和非酒精性脂肪肝，以及急性脂肪肝或慢性脂肪肝，进而防止肝纤维化的形成。与现有技术相比，本发明至少存在以下有益效果1、本发明采用水或低醇提取，并采用大孔树脂法进行纯化，得到的总苷提取物的成分及含量与现有技术不同，本发明胡黄连总苷提取物中，总苷含量>60% (重量/重量)，胡黄连苷(重量/重量)，胡黄连苷I > 13% (重量/重量)，此外，还含有胡黄连苷III、胡黄连苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-异阿魏酰梓醇；现有技术主要为胡黄连环烯醚萜总苷提取物，其中，胡黄连苷I和胡黄连苷II HPLC含量总计>20% (重量/重量)；2、脂肪肝中肝脂大量堆积的成因包括肝脂输出相对不足和肝脂输出绝对不足。肝脂输出相对不足是由进入肝脏的血液中脂肪酸增多或肝脏自身合成脂肪酸增多、加速肝脏合成TG所致，药效研究中通常采用高脂饲料诱发的慢性脂肪肝模型；与现有技术相比，本发明除了选择上述模型对胡黄连总苷提取物进行药效研究外，还针对脂肪肝的另一成因， 即肝脂输出绝对不足，设计了乙硫氨酸诱发的急性脂肪肝模型和CCl4诱发的脂肪肝/肝纤维化模型，分别反映了肝脏VLDL合成、分泌障碍及脂肪肝氧化抑制。根据脂肪肝发病的多种成因，设计了多种动物模型，从而综合考察了胡黄连总苷提取物对脂肪肝的治疗作用。3、本发明在乙硫氨酸诱发的小鼠急性脂肪肝模型中，连续3次灌胃给予胡黄连总苷提取物15、30、60mg/kg ；其他试验给药剂量20、40、80mg/kg，胡黄连总苷提取物治疗脂肪肝的大鼠的起效剂量为20mg/kg/天，有效剂量范围为40 80mg/kg/天。4、尽管现有技术中有将胡黄连提取物用于治疗和预防肝病的报道，但是其中胡黄连提取物的成分和含量与本发明不同，而且由于肝病的种类很多，不同肝病的形成机理差别很大，对于不同形成机理的肝病需要针对性使用不同的药物，本发明通过大量研究发现， 本发明制备的特定组成的胡黄连提取物在治疗脂肪肝中效果尤佳。对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。实施例1将20公斤胡黄连药材粉碎成粗粉，以60L水浸泡2小时，装入渗漉筒，以水渗漉， 收集MOL渗漉液，浓缩至相当于Ig药材/mL的浓缩液。通过DlOl大孔吸附树脂，以水洗去杂质，再以60% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，浓缩洗脱液，减压干燥制得胡黄连总苷提取物2. 8公斤，其中总苷含量达70% (重量/重量)，胡黄连苷II为22.5% (重量/重量)，胡黄连苷I为13. 9% (重量/重量)，此外，还含有胡黄连苷III、胡黄连苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-异阿魏酰梓醇。取上述胡黄连总苷提取物1. 2公斤，加淀粉1. 6公斤，微晶纤维素400g，制粒，装胶囊，每粒含总苷30mg。实施例2 将20公斤胡黄连药材粉碎成粗粉，以60L的30 % (体积/体积)乙醇水溶液浸泡 12小时，装入渗漉筒，以30% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉，收集MOL渗漉液，浓缩至相当于Ig药材/mL的浓缩液。通过AB-8大孔吸附树脂，以水洗去杂质，再以50% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，浓缩洗脱液，减压干燥制得胡黄连总苷提取物2. 6公斤，其中总苷含量达75% (重量/重量)，胡黄连苷II为22. 8% (重量/重量)，胡黄连苷I为14. 6% (重量/重量)，此外，还含有胡黄连苷III、胡黄连苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-异阿魏酰梓醇。取上述胡黄连总苷提取物1. 1公斤，加淀粉1. 6公斤，微晶纤维素400g，制粒，压片，每片含总苷30mg。实施例3将20公斤胡黄连药材粉碎成粗粉，以60L的20% (体积/体积)乙醇水溶液回流 3次，每次2小时，每次80L，合并提取液，浓缩至相当于Ig药材/mL的浓缩液。通过HPD100大孔吸附树脂，以水及20% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再以40% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，浓缩洗脱液，减压干燥制得胡黄连总苷提取物3公斤，其中总苷含量达60% (重量/重量)。胡黄连苷II为21. 6% (重量/重量)，胡黄连苷I为13. 5% (重量/重量)，此外，还含有胡黄连苷III、胡黄连苷IV、6-阿魏酰梓醇和6-异阿魏酰梓醇。实施例4将20公斤胡黄连药材粉碎成粗粉，以MOL的10% (体积/体积)乙醇水溶液浸泡M小时，减压浓缩浸泡液，至Ig药材/mL。通过NKA大孔吸附树脂，以10% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再以50% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，浓缩洗脱液，减压干燥制得胡黄连总苷提取物1公斤，其中总苷含量达65% (重量/重量)，胡黄连苷II为21. 9% (重量/重量)，胡黄连苷I为13.7% (重量/重量)，此外，还含有胡黄连苷III、胡黄连苷 IV、6-阿魏酰梓醇和6-异阿魏酰梓醇。试验例试验的目的在于验证胡黄连总苷提取物在预防和/或治疗脂肪肝中的效果。为了证明本发明的胡黄连总苷提取物的治疗效果和安全性，其药效学、药理学、毒理学研究过程及结果如下一、主要药效学试验1.对乙硫氨酸诱发的急性脂肪肝模型的影响 ICR小鼠70只，雄性，体重20. 3 士 1. 2 (18. 2 22. 5) g，随机分为7组，每组10只。 采用乙硫氨酸制备急性脂肪肝模型，乙硫氨酸能抑制肝脏合成载脂蛋白，从而使脂质代谢中甘油三酯(TG)运出肝脏出现障碍，导致TG蓄积于肝脏而形成脂肪肝。小鼠禁食过夜后， 除正常对照组灌服蒸馏水外，其余各组灌服DL-乙硫氨酸Q50mg/kg，20mL/kg)造模，Ih后， 正常对照组和模型对照组灌服0. 5% (g/ml) CMC，受试药组灌服实施例1制备的胡黄连总苷提取物，剂量分别为15、30、60mg/kg/次，阳性药物组分别灌服强肝颗粒或凯西莱，剂量分别为1700、100mg/kg/次(均相当于临床日用量的3倍)，给药体积均为10ml/kg。每日给药2次，共给药3次。于末次给药后Ih处死小鼠，摘取肝脏，称取左叶边缘200mg，以2ml丙酮-乙醇混合液(体积比=1 1)研磨制备勻浆，抽提脂质，离心后，取上清液用比色法测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)。结果如表1所示。 表1胡黄连总苷提取物对肝脏TG、TC的影响(F土 S, η= 10)

本发明提供一种胡黄连总苷提取物在制备用于预防和/或治疗脂肪肝或其相关疾病药物中的用途，其中所述胡黄连总苷提取物的制备方法包括以下步骤以浓度为0～95％(体积/体积)的C1-C5脂肪醇水溶液提取胡黄连，除去提取液中的C1-C5脂肪醇后过滤；滤液通过大孔吸附树脂并以浓度为0～30％(体积/体积)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脱，洗脱液弃去；以浓度为40～100％(体积/体积)的C1-C5脂肪醇水溶液洗脱，除去洗脱液中的溶剂。本发明制备的胡黄连总苷提取物可以制成药物用于预防和/或治疗酒精性和非酒精性脂肪肝，以及急性脂肪肝或慢性脂肪肝，进而防止肝纤维化的形成。