专利名称：亚油酸在制备抗hpv药物中的应用的制作方法人类乳突病毒(Human Papillomavirus，简称HPV)是一种嗜上皮性病毒，有高度的特异性，长期以来，已知HPV可引起人类良性的肿瘤和抚，如生长在生殖器官附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。像乙肝病毒一样，HPV也是一种DNA病毒。它原是多瘤空泡病毒科的一员，1999年国际病毒分类委员会(ICTV)取消多瘤空泡病毒科，代之以乳头瘤病毒科，因此，HPV便归属此门下。人类乳头状瘤病毒(HPV)引起的性传染极为普遍，单是美国就有两千万人染得此病。HPV(人乳头瘤病毒)是继“世纪绝症”艾滋病后的一种无药可救的性病，不论男女都有可能感染HPV，女性染病后甚至可引致子宫颈癌。由于HPV通过皮肤直接传染，使用安全套也无法预防。全世界有四亿四千万的人口受到HPV的感染，每年至少有五十万的妇女被诊断有子宫颈癌，这些大部分发生在开发中的国家。HPV是引起子宫颈癌与生殖器疣，俗称“菜花” 的元凶，在一百多种的HPV类型当中，已经知道有37种靠性接触传染，能够导致性病。它们广泛存在于成年人族群，来无影去无踪，没有任何症状。第6和第11类型可以引起男女两性的生殖器疣。这种疣本身并非癌症，但是它造成的疼痛和心理创伤非言语所能形容。但是，迂回感染了高风险的HPV类型就可以导致子宫颈癌、其它生殖器癌或肛门癌。这些高风险的类型大约有19种之多，其中以造成子宫颈癌的第16和第18类型最为常见。子宫颈癌是一个感染性疾病，它是可以预防，可以治疗、治愈和消灭的。子宫颈癌是由于人乳头瘤病毒感染引起的。如果能够预防HPV感染，就可以说能够预防子宫颈癌；如果没有HPV感染，可以说不会得宫颈癌。这是已有定论的，这是在会上得到公认的。这里讲的宫颈癌，就是指子宫颈的浸润癌，简称CC。一般来讲，宫颈癌就是浸润癌；其他的癌前病变，就叫CIN，包括宫颈的原位癌，把它归在CIN3里面。如果是浸润癌，就叫子宫颈癌了。亚油酸，英文名称=Iinoleic acid，学名顺，顺_9，12-十八(碳)二烯酸，是含有18个碳原子和2个双键的不饱和脂肪酸，分子式=C18H32O2,分子结构简式CH3(CH2)4CH = CHCH2CH = CH(CH2) 7C00Ho亚油酸具有降低血脂、软化血管、降低血压、促进微循环的作用，可预防或减少心血管病的发病率，特别是对高血压、高血脂、心绞痛、冠心病、动脉粥样硬化、 老年性肥胖症等的防治极为有利。但是，对于亚油酸的抗HPV作用未见报道。
本申请的发明人意外发现，亚油酸具有抗HPV的作用。因此，本发明提供亚油酸在制备抗HPV药物中的应用。本发明还提供亚油酸在制备预防或治疗HPV相关疾病的药物中的应用。本发明中，亚油酸是通过抑制角质形成细胞增殖来预防或治疗HPV相关疾病的。本发明中，亚油酸是通过抑制成纤维细胞增殖来预防或治疗HPV相关疾病的本发明所述的HPV相关疾病包括但不限于子宫颈癌、其它生殖器癌或肛门癌或生殖器疣。本发明所述的亚油酸优选是药学上可接受的纯亚油酸，也可以是重量百分含量为 0. 45% 99. 9%的亚油酸溶液。本发明的亚油酸可以从市场购置，也可以按照现有技术的方法获得，例如可以以大豆油为原料，经皂化、水解、初馏、精馏制备亚油酸；还可以以红花油为原料制备亚油酸， 具体如下在反应器中，按配比为红花油、水、氢氧化钠=2.0 1. 1 1.0，先加入红花油和水，搅拌均勻后，慢慢升温至80°C，再缓慢地滴加氢氧化钠溶液，滴加时间为30min，保温反应乩。反应完毕，静置30mln，分去下层的水，再用20min加入硫酸，加酸温度为95 士 3°C， 硫酸加入量为氢氧化钠的1. 2倍，水解时间4h。水解结束后，使水解物降至常温，静置分水。 然后进行水洗，水洗次数6 8次.每次加水量为红花油量的2倍，洗至pH = 7，先沉降分水，再用离心机分离有机相和水相。将分离好的有机相，进行冷冻结晶，冷冻降温速度为每小时5°C，冷冻结晶温度为-8 -10°C，时间为48h，再用抽滤法将结晶物滤去，底部滤液为亚油酸产品。本发明的亚油酸溶液可以是用亚油酸配置的溶液，也可以是从天然植物中提取出来的提取物，例如可以是从鸦胆子提取出来的含亚油酸的鸦胆子脂溶性成分(鸦胆子油)。含亚油酸的鸦胆子油可以按照任何现有技术的方法获得，优选地，可以按照如下方法获得(1)鸦胆子油的提取鸦胆子破碎果壳后，用体积为鸦胆子重量5倍量的石油醚提取2次，每次1小时，以70°C水浴加热挥尽石油醚至恒重；(2)鸦胆子油的纯化取步骤(1)的鸦胆子油加入石油醚稀释，再加入活性炭，水浴回流，滤过，回收石油醚得无色鸦胆子油，以95%乙醇萃取3 5次，得95%乙醇萃取物。本发明发现亚油酸对Hacat细胞增殖有抑制作用的趋势，且随药物的作用时间延长，抑制的趋势增大。表明亚油酸可以通过对人角质形成细胞的增殖抑制作用而抑制 HPV-DNA的复制，从而起到治疗CA的作用。 图1药理学PCR实验工艺流程2HPV-DNA定量回归直线图3HPV-DNA扩增阳性标本结果4HPV-DNA扩增阴性标本结果5亚油酸回归曲线图6MTT法亚油酸对成纤维细胞的增殖影响作用图7MTT法亚油酸对Hacat细胞的增殖影响作用图8MTT法亚油酸对Hacat细胞的不同时间作用增殖影响图A-以不同浓度为横坐标，每一组柱图从左向右分别是培养M小时、48小时和472小时的A值；图B-以不同作用时间为横坐标1-1% DMS0, 2-0. 00156g/ml 亚油酸，3-0. 00312g/ml 亚油酸，4-0. 00625g/ml 亚油酸，5-0. 0125g/ml 亚油酸，6_0. 025g/ml 亚油酸，7_0. 05g/ml 亚油酸



本发明提供了一种亚油酸在制备治疗抗HPV药物中的应用。本发明的亚油酸溶液可以是用亚油酸配置的溶液，也可以是从天然植物中提取出来的提取物。本发明的亚油酸对Hacat细胞增殖有抑制作用的趋势，且随药物的作用时间延长，抑制的趋势增大。从PCR实验和细胞学实验，证明具有抗HPV作用，能起到治疗CA的作用。