专利名称：人参皂苷Rd在制备抗抑郁症药物中的应用的制作方法人参皂苷Rd (Ginsenoside Rd)，分子式为C48H82O18 ；分子量为947. 12 ；属于原 人参二醇型皂苷。它的中文化学名为20 —(s) —原人参二醇一 3—20—0—i3—D —吡喃葡萄糖苷。CAS 52705-93-8。其结构式如图5。已有研究表明，人参皂苷Rd能减少乙酰胆碱引起的豚鼠离体子宫的收缩，对大鼠 有减慢心率和双相性血压(先升后降)作用，对猫的行为和脑电图显示中等的抑制，此外， 人参皂苷Rd还有抗疲劳作用。我们可以发现至今未有关于人参皂苷单体Rd的抗抑郁研究。抑郁症(expression)属于情感性精神障碍，是一种以显著而持久的心境低落为主 要特征的综合症。随着现代社会经济的高速发展以及人们精神压力的增强，抑郁症的发病 率逐年提高，已成为“21世纪的流行病”，并且还在以每年113%的增长率逐年递增。世界卫 生组织(WHO)在《2001年世界卫生报告》中指出，抑郁症已成为世界第四大疾患，而到2020 年时可能成为仅次于缺血性心脏病的第二代疾病。我国的抑郁症患病情况也不容乐观约 有20%的人有抑郁症状，有7%的人患有重度抑郁症，抑郁症已成为中国疾病负担的第二位。 从这些数字中可以看出，抑郁症已经给患者和社会造成了巨大危害。因此抗抑郁药物的研 发具有十分重要的意义。目前，临床上所应用的抗抑郁药物依据不同的作用机理，大致分为以下四类(1) 三环类和四环类抗抑郁药。三环类主要有米帕明(imipramine)、地昔帕明(desipramine) 等，四环类有马普替林(maprotiline)。这类药物主要是通过阻断5-HT和去甲肾上腺素 再摄取起作用的。(2)单胺氧化酶(MAO)抑制剂，临床用药主要有苯乙胼(phenelzine)。 MAO抑制剂是通过抑制ΜΑ0，提高神经系统内单胺含量，从而发挥其抗抑郁作用。(3)选 择性5-羟色胺重吸收抑制剂(SSRI)，是临床上抗抑郁的普遍用药。主要药物有氟西汀 (fluoxetine)、帕罗西汀(paroxetine)，这类药物主要通过选择性阻断5-HT的再摄取而发 挥作用。(4)非典型抗抑郁药，这类抗抑郁药无论从化学结构还是从作用机制以及作用特 点，都不能归于上述3类之中。主要包括去甲肾上腺素及多巴胺重吸收抑制剂、5-HT受体拮 抗剂及5-HT重吸收抑制剂。临床上抗抑郁用药种类繁多且作用机理复杂，但是仍有1/3的抑郁症患者对临床 使用的抗抑郁药效果欠佳，比如见效慢，复发率高等。更重要的是，一些抗抑郁药长期使用 后毒副作用明显。因此，研发新型、有效、低毒的抗抑郁药物十分必要。中药是纯天然药物， 有着几千年的临床应用经验，相对毒副作用少并且价格便宜，种种优点使其成为研发抗抑 郁药物的首选。近年来用三七、人参、西洋参预防和治疗抑郁的研究越来越多，如CN200710123530. 5《一组用于治疗抑郁症的药物组合物及制法》中以人参、白芍为原料制成 药物组合物来用于抗抑郁，如CN200810120395. 3《淫羊藿总黄酮与三七总皂苷组合物的用 途》中以三七总皂苷和淫羊藿总黄酮组合来用于抗抑郁，但目前中药治疗抑郁，绝大部分都 只是在组合药物中加入人参属植物，或者加入其总皂苷来抗抑郁。人参属植物确实具有较 好的抗抑郁效果，而其主要抗抑郁成分是其皂苷组分，如CN200310107285. 0《一种治疗失眠 的中药组合物》所述，三七叶总皂苷具有镇静作用，三七叶总皂苷能明显抑制小鼠的自发活 动，对中枢抑制药物氯丙嗪、戊巴比妥钠、硫喷妥钠有协同作用，对中枢兴奋药苯丙胺、咖啡 因所致的小鼠的兴奋有拮抗作用，三七叶总皂苷可用于治疗失眠及抑郁症等，且有较好的 疗效。但总皂苷中，发挥中枢神经兴奋和抑制作用的组分同时存在，无法说明发挥抗抑郁作 用的具体组分。所以进步明确总皂苷中具体是哪些组分起着抗抑郁作用，对于开发抗抑郁 症药物和了解总皀苷的作用机理有很重要的意义。然而，目前从单体水平进行抗抑郁研究还比较少，目前已研究了的一些单体有 CN200410086457. 5 所述的人参皂苷 Rg2、CN200610027507. 1 中所述的 20 (s) 一原人参二 醇，CN200610116353. 3中所述的20 (s) —原人参二醇衍生物，CN200810043537. 0中所述的 20 (S) 一人参皂苷Rh2及CN201010193222. 1所述的人参皂苷Rb3。尽管CN200610116353. 3所述的那些原人参二醇衍生物，含有特定的衍生基团， 有利于提升抗抑郁效果，但是那些原人参二醇衍生物疗效的有效程度及是否同时带来 他其负面效果，仍是一个未知。而人参皂苷Rd虽然也属于原人参二醇型皂苷，但其与 CN200610116353. 3所限定的20 (s) —原人参二醇衍生物属于两种完全不同的化合物。 CN200610116353.3 ((20 (s) 一原人参二醇衍生物类在制备抗抑郁药物中的应用》中所限定 的20(s) —原人参二醇衍生物类结构式如图6。由式(I)和式(II)的比较，可知虽然人参皂苷Rd在！？和队位上均为氢，这与 CN200610116353. 3所限定的20 (s) —原人参二醇衍生物类一致，但是人参皂苷Rd在Y位 上是个糖基，而不是羟基和氢，这与CN200610116353.3所限定的20(s) —原人参二醇衍 生物类不一致，更不一致的是在与五碳环相连的链烃上基团，CN200610116353. 3所限定的 20 (s) —原人参二醇衍生物类是个羟基，而人参皂苷Rd的氧原子上连的一个大基团，不是 氢。综合所述，人参皂苷Rd是一种天然化合物，其与CN200610116353.3所限定的20(s) — 原人参二醇衍生物不同，其在抗抑郁上的作用仍是一个未知数。
本发明的目的在于针对现有的抗抑郁症药物的缺点，从人参皂苷单体水平提供了 一种能显著预防和治疗抑郁症的天然化合物。发明提供以下方案将人参皂苷Rd应用于制备抗抑郁症药物中。该抗抑郁症药物，可以为单一成分的人参皂苷Rd，也可以为人参皂苷Rd和其它化 合物或者中药组成的复方药物。其中人参皂苷Rd作为主要成分或非主要成分。药物中还可以含有崩解剂、湿润剂、粘合剂、填充剂、吸收促进剂、溶剂、润滑剂、表 面活性剂、香味剂、甜味剂、抗氧化剂、防腐剂和色素中的一种或多种。药物可制备成为不同的剂型，如口服制剂、舌下含化片剂丸剂或针剂；口服制剂可 以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴剂、果汁剂或糖浆剂；针剂可以是注射液、粉针剂、冻干粉针剂。将人参皂苷Rd应用于制备抗抑郁症药物时，药物的应用剂量以人参皂苷Rd重量 计算可为每次5 11 mg/kg体重；也可为每日5 11 mg/kg体重。人参皂苷Rd可以是由人参、三七或者西洋参提取分离而得，或者化学合成而得。 从植物中提取分离时，可以是由人参、三七或西洋参的叶、茎、根提取分离而得。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果。(1)如CN201010193222. 1中所述的人参皂苷诎3在中剂量(75mg/kg(小 鼠体重))单次连续给药3天和4天后可分别显著减少小鼠强迫游泳不动时间和小鼠悬尾 不动时间，在CN200610027507. 1中所述的20(s) —原人参二醇在高剂量(15mg/kg (小鼠体 重))单次连续给药10天后可显著减少小鼠不动时间。而本发明提供的人参皂苷Rd无论低 剂量(50mg/kg (小鼠体重))还是高剂量(100mg/kg (小鼠体重))在单次给药2天后就可显 著减少小鼠悬尾不动时间和强迫游泳不动时间及逃避失败次数。与这些单体相比，可知人 参皂苷Rd抗抑郁效果也很好很稳定。而且，在强迫游泳和获得性无助实验中，测试剂量下 的Rd可达到接近帕罗西汀、马普替林这两种阳性药物的抗抑郁效果。这更加表明人参皂苷 Rd作为一种抗抑郁药，其前景很大。(2)如CN200810096148. 4中所说，人参皂苷Rd在三七中的含量为IOmg/ g，在西洋参中为5. 88mg/g，在人参中为1. 35mg/g，相对来讲人参皂苷Rd在人参植物或人参 科其它种中含量是较高的，尤其是其在三七中的含量，这样就保证了人参皂苷Rd可从三七 中提取，而不用从昂贵的人参中提取，另外，人参皂苷Rd提取工艺也发展得很成熟，如CN 200810200086. 7已经提供了一种利用微生物转化高效高产量制备人参皂苷Rd的方法。因 此，人参皂苷Rd有充足的来源，保证了抗抑郁药物原料的供应。(3)如CN 200410086457. 5所述的人参皂苷Rg2，属于人参三醇型皂苷， 其虽也具有一定的抗抑郁作用，但是其有显著兴奋中枢神经系统的作用，而抑郁症是一种 长期慢性的疾病，其治疗也将是个长期过程，若长期服用，长期使中枢神经系统处于兴奋状 态，这种后果将会非常严重。而本发明提供的人参皂苷Rd (人参二醇型皂苷)在高剂量下 没显著影响中枢神经系统的兴奋性，所以其不仅疗效好，而且安全性也高。(4)如CN200610027507. 1中所述的20 (S) 一原人参二醇衍生物，虽然其 也有较好的疗效，但是，如CN(^820659. 2所说，原人参二醇衍生物是皂苷的苷元，它不像人 参皂苷Rd —样天然存在于人参植物或人参科其它种，它只能通过由达玛烷皂苷类的裂解 和/或半合成的化学结构修饰来获得。另外在皂苷类酸性条件下裂解时，原人参二醇性质 不太稳定，易由S型变为R型，而半合成的其与天然化合物相比，其安全性有待进步研究。而 本发明提供的人参皂苷Rd，是一种皂苷单体，可天然存在于人参植物或人参科其它种中，且 含量也相对较高，目前的制备工艺也很成熟，故来源充足，不存在稳定性差的问题，适宜于 制备成为药物。(5)如CN200610116353. 3所限定的20(s) —原人参二醇衍生物，尽管这些原人参二醇衍生物与原人参二醇相比，含有特定的衍生基团，有利于提升抗抑郁效果，但 是那些原人参二醇衍生物的疗效的有效程度及是否同时带来他其负面效果，仍是一个未 知。但本发明提供人参皂苷Rd，是一种天然化合物，其安全性高，副作用少。(6)在总皂苷水平上，胡靖，付宝忠在《三环类药物及人参皂甙抗抑郁作用的研究》有说明人参茎叶皂苷和人参根皂苷均在低剂量(50mg/kg (小鼠体重))，高剂量 (200mg/kg (小鼠体重))多次给药后可显著减少小鼠强迫游泳不动时间。而本发明中，人参 皂苷Rd无论低剂量(50mg/kg (小鼠体重))还是高剂量(100mg/kg (小鼠体重))在单次给药 2天后就可显著减少小鼠悬尾不动时间、强迫游泳不动时间和逃避失败次数，且对强迫游泳 不动时间和逃避失败次数的效果接近两种阳性药物。可见总皂苷和本发明提供的人参皂苷 Rd都有较好的抗抑郁效果，但是总皂苷中发挥中枢神经兴奋和抑制作用组分同时存在，具 体的抗抑郁组分不明确，而本发明提供的人参皂苷Rd作为一种单体，其疗效不仅好，而且 更确切。(7)如0拟00810043537.0所述的20(5)—人参皂苷诎2，也属于人参二醇类，是鲜人参在加工成红参时，由某些二醇组皂苷受热降解后生成的一种次生苷，其天然含 量低，提取工艺复杂。而本发明提供人参皂苷Rd的天然含量相对较高，提取制备工艺也已 成熟。总的来说，人参皂苷可通过多系统、多层次、多靶点发挥抗抑郁作用，疗效好，副作 用少，而本发明提供的人参皂苷单体Rd其抗抑郁疗效更确切、更高，毒副作用小，且制备工 艺也成熟，适合工业化生产。另外本发明也为进一步明确总皂苷中具体抗抑郁成分提供了 依据。
图1为人参皂苷Rd对小鼠悬尾实验不动时间的影响，*表示P<0. 05，即与空白对照组 相比有显著性差异；
图2为人参皂苷Rd对小鼠开场实验活动路程的影响，*表示P<0. 05，即与空白对照组 相比有显著性差异；
图3为人参皂苷Rd对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响，*表示P<0. 05，即与空白对 照组相比有显著性差异；
图4为人参皂苷Rd对小鼠获得性无助实验中逃避失败次数的影响，*表示P<0. 05，即 与空白对照组相比有显著性差异； 图5为人参皂苷Rd的结构式； 图6为20 (s) —原人参二醇衍生物类结构式； 图7为人参皂苷Rd对小鼠悬尾实验不动时间的影响结果； 图8为人参皂苷Rd对小鼠开场实验活动路程的影响结果； 图9为人参皂苷Rd对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响结果； 图10人参皂苷Rd对小鼠逃避失败次数的影响结果。

SPF级昆明小鼠，雄性，体重18-22g，购自中山大学医学院实验动物中心，许可证号 SCXK (粤)2009-0011。标准饲料及垫料均购自中山大学医学院实验动物中心。1.2药品与仪器
药品人参皂苷Rd，购自云南植物药业有限公司；阳性药帕罗西汀购自广州市健民药房。小鼠悬尾实验自动摄影分析系统，实验用小鼠灌胃针头等，购自淮北正华生物仪 器设备有限公司。1. 3药液制备
取人参皂苷Rd溶于蒸馏水，分别配置成低、高两种浓度(5mg/ml、10mg/ml)的溶液。帕 罗西汀(Paroxetine)药物片剂研磨成粉，按有效成分的比例取所需用量。加入蒸馏水配制 成0. 6mg/ml的悬浊液，灌胃前摇勻。1.4实验方法
小鼠40只，分成4组，每组10只，分别为空白对照组(生理盐水)，Rd-低剂量组(Rd 50mg/kg (小鼠体重))、Rd-高剂量组(Rd 100mg/kg (小鼠体重))、帕罗西汀组(6mg/kg (小 鼠体重))。按小鼠体重0.1 ml/10 g灌胃给药，每日一次，灌胃给药1天，第二天给药Ih后 进行悬尾测试。将小鼠倒挂，距尾端约1 cm处用绝缘胶固定于悬尾架的尾端，前肢距离底面约10 cm。悬尾测试过程为6 min，开始阶段小鼠均会挣扎，一段时间后会放弃挣扎，保持不动，分 析记录后4 min小鼠的不动时间，作为判断小鼠抑郁样行为的指标。1. 5统计学方法
实验结果使用软件0rigin7.5进行统计作图，数据表示为“平均值士标准偏差”， P<0. 05表示具有显著性差异。2、实验结果
在小鼠悬尾实验中，人参皂苷Rd可以显著地降低小鼠的悬尾不动时间与空白对照组 相比，Rd在低剂量时可将不动时间降低17%，在高剂量时可将不动时间降低18%。阳性药帕 罗西汀具有更加显著的抗抑郁作用，其将小鼠悬尾的不动时间降低至25.1。总体结果说 明人参皂苷Rd在试验剂量下对小鼠悬尾抑郁样行为有显著改善效果，结果如图7和图1所
7J ο
见图1所示，为人参皂苷Rd对小鼠悬尾实验不动时间的影响示意图，其中，X轴表示各 给药组，Y轴表示小鼠的悬尾不动时间(单位“秒”)；*表示P<0.05，即与空白对照组相比
有显著性差异。实施例2小鼠强迫游泳实验 1材料与方法
1.1实验动物
SPF级昆明小鼠，雄性，体重18-22g，购自中山大学医学院实验动物中心，许可证号 SCXK (粤)2009-0011。标准饲料及垫料均购自中山大学医学院实验动物中心。
1. 2仪器与药品
药品人参皂苷Rd，购自云南植物药业有限公司；阳性药帕罗西汀，马普替林均购自广 州市健民药房。仪器ZH-QPT强迫游泳装置及分析系统，ZH-QPT开场实验装置及分析系统，实验 用小鼠灌胃针头，均购自淮北正华生物仪器设备有限公司；温度计。1.3药液制备
取人参皂苷Rd溶于蒸馏水，分别配置成低、高两种浓度(5mg/ml、10mg/ ml)的单体溶 液。帕罗西汀(Paroxetine)、马普替林(Maprotiline)药物片剂研磨成粉，按有效成分的比 例取所需用量。加入蒸馏水分别配制成0. 6mg/ml和1. 8mg/ml的悬浊液，灌胃前摇勻。1.4实验方法
在进行抑郁动物强迫游泳行为模型的实验时，必须同时检验药物对实验动物自主活动 水平的影响。只有当药物不增强小鼠自主活动强度时，才能认为绝望行为实验中不动时间 的减少是由抑郁症状的改变所导致的。小鼠60只，分成5组，分别为空白对照组(生理盐水)，Rd-低剂量组(Rd 50mg/kg (小鼠体重))、Rd-高剂量组(Rd 100mg/kg (小鼠体重))、帕罗西汀组(6mg/kg (小鼠体重))， 马普替林组(18mg/kg (小鼠体重))。按小鼠体重0. lml/10g灌胃给药，每日一次，灌胃给药 1天，第二天给药Ih后进行开场实验和强迫游泳测试。开场实验是用于检测动物自主活动强度的常用方法。开场试验箱长30cm、宽 30cm、高20cm。灌胃Ih后，将动物放置于开场试验箱中，记录其在5min内的活动路程。强迫游泳实验是将小鼠置于圆柱形的水箱内，最初小鼠会迅速游动，挣扎，企图逃 离这个环境。当发现此环境不可避免时，就会放弃挣扎，以一种不动状态漂浮在水面上。一 般以小鼠的不动状态模拟人类的抑郁行为。当开场实验结束后，将小鼠放置在直径为19cm 高为25cm的圆柱形透明水箱中，水深18cm，水温保持在23_25°C。记录小鼠6min的游泳状 态，分析后4min小鼠的不动时间。1. 5统计学方法
实验结果使用软件0rigin7.5进行统计作图，数据表示为“平均值士标准偏差”。 P<0. 05表示具有显著性差异。2、实验结果
2. 1开场实验
在开场实验中，人参皂苷Rd在低剂量时可增加小鼠的自发活动，与已有文献结果一 致，即有文献报道Rd可显著增加小鼠被迫行走的自主活动，其机制有待进一步分析。但人 参皂苷Rd在高剂量时对小鼠的自主活动影响与空白组无差异，仍可说明在以下的强迫游 泳实验中，Rd使小鼠游泳的不动时间减少并非由于神经中枢亢奋导致。满足绝望实验行为 的要求。结果如图8和图2所示。见图2所示，为人参皂苷Rd对小鼠开场实验活动路程的影响示意图，其中
X轴表示各给药组，Y轴表示小鼠的开场活动路程(单位“厘米”)；*表示p<0. 05，即与 空白对照组相比有显著性差异。2. 2强迫游泳实验结果
在强迫游泳实验中，人参皂苷Rd在低剂量和高剂量时均可显著性的将小鼠游泳的不动时间减少。低剂量和高剂量的不动时间都降低到与帕罗西汀、马普替林组的值接近。结 果说明，人参皂苷Rd在试验剂量下可显著改善小鼠强迫游泳抑郁样行为。且效果可接近帕 罗西汀、马普替林。结果如图9和图3所示。见图3所示，为人参皂苷Rd对小鼠强迫游泳不动时间的影响示意图。其中X轴表 示各给药组，Y轴表示小鼠的强迫游泳不动时间(单位“秒”);*表示p<0. 05，即与空白对照 组相比有显著性差异。实施例3获得性无助实验 1材料与方法
1.1实验动物
SPF级昆明小鼠，雄性，体重18-22g，购自中山大学医学院实验动物中心，许可证号 SCXK (粤)2009-0011。标准饲料及垫料均购自中山大学医学院实验动物中心。1. 2仪器与药品
药品人参皂苷Rd，购自云南植物药业有限公司；阳性药帕罗西汀购自广州市健民药房。仪器BA-200小鼠避暗仪，购自成都泰盟科技有限公司；实验用小鼠灌胃针头，购 自淮北正华生物仪器设备有限公司。1.3药液制备
取人参皂苷Rd溶于蒸馏水，分别配置成低、高两种浓度(5mg/ml、10mg/ml)的溶液。帕 罗西汀(Paroxetine)药物片剂研磨成粉，按有效成分的比例取所需用量。加入蒸馏水分别 配制成0. 6mg/ml的悬浊液，灌胃前摇勻。1.4实验方法
小鼠40只，分成4组，每组10只，分别为空白对照组(生理盐水)，Rd-低剂量组(Rd 50mg/kg (小鼠体重))、Rd-高剂量组(Rd 100mg/kg (小鼠体重))、帕罗西汀组(6mg/kg (小 鼠体重))。按小鼠体重0. lml/10g灌胃给药，每日一次。实验分两天进行。第一天为建模期将小鼠放在避暗箱中进行电击，电压调至 36V，每次电击15s，中间间隔20-60s不等。如此反复电击小鼠60次。第二天为测试期。小 鼠给药Ih后放进暗室中，先给予3s的光刺激，再给予3s的电刺激，如果小鼠不能从暗箱中 逃离出来，则记为一次逃避失败。给予30次刺激，统计分析空白组小鼠与给药组小鼠逃避 失败的次数。1. 5统计学方法
实验结果使用软件0rigin7.5进行统计作图，数据表示为“平均值士标准偏差”。 P<0. 05表示具有显著性差异。2、实验结果
在获得性无助实验中，与空白对照组相比，人参皂苷Rd在低剂量和高剂量时均可把小 鼠的逃避失败次数显著降低。其中，Rd低剂量可达到与阳性药帕罗西汀相同的抗抑郁效果。 结果如图10和图4所示。见图4所示，为人参皂苷Rd对小鼠获得性无助实验中逃避失败次数的影响示意 图。其中，X轴表示各给药组，Y轴表示小鼠的逃避失败次数(单位“次”)；*表示P<0.05，即与空白对照组相比有显著性差异。本实验得出了以下几个结论
1、在小鼠悬尾实验中，与空白对照组相比，人参皂苷Rd可明显地减少小鼠的不动时间。2、在小鼠强迫游泳实验中，人参皂苷Rd可显著性减少小鼠的不动时间，且在开场 实验中，高剂量的人参皂苷Rd对小鼠自主活动没有显著影响，说明Rd使小鼠强迫游泳实验 中不动时间减少并不是由于活动水平的提高所致。游泳实验的结果可信。3、通过获得性无助的实验发现，人参皂苷Rd可以显著减少小鼠的逃避失败次数。通过上述3种动物行为学实验的综合分析可知，人参皂苷Rd具有较好的抗抑郁效 果。本实验中采用的阳性药物帕罗西汀、马普替林主要是通过阻断5-HT和去甲肾上腺素再 摄取起作用的。这两种药是目前临床上应用较广泛的，但是仍有抑郁症患者对其临床使用 的抗抑郁药效果欠佳，如见效慢，复发率高等，更重要的是长期使用后毒副作用明显。而本 发明提供的人参皂苷Rd，作为一种中药，其安全性高，毒副作用少，且在强迫游泳和获得性 无助实验中试验浓度下的Rd可达到接近这两种阳性药物的抗抑郁效果。所以将人参皂苷 Rd做成制剂，用于工业化生产，具有很好的抗抑郁作用及临床前景。


本发明属于医疗卫生领域，具体涉及一种天然化合物，即人参皂苷Rd在制备抗抑郁症药物中的应用。人参皂苷Rd在试验剂量下能显著减少小鼠悬尾实验中的不动时间，显著减少小鼠强迫游泳实验中的不动时间及显著减少小鼠在获得性无助实验中逃避失败的次数。这些都表明人参皂苷Rd具有较好的抗抑郁效果，可用于预防和治疗抑郁。